BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN MINH THU NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CAO ĐẶC BÀI THUỐC TESTIN II KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Hà Nội - 2015 LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS.Vũ Văn Điền, người thầy đã tận tình dìu dắt và hướng dẫn tôi hoàn thành tốt khóa luận này. Đồng thời tôi cũng xin chân thành cảm ơn NCS Nguyễn Thị Phương Thảo, các anh chị kỹ thuật viên bộ môn Dược học cổ truyền và bộ môn Vi sinh- sinh học đã tạo điều kiện giúp đỡ tôi hoàn thành khóa luận này. Tôi xin gửi tới các thầy cô và cán bộ Trường đại học Dược Hà Nội lời cảm ơn chân thành vì đã dạy dỗ, chỉ bảo, giúp đỡ tôi trong suốt thời gian học tập dưới mái trường Đại học Dược Hà Nội. Cuối cùng tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới gia đình và bạn bè, những người đã luôn động viên, khích lệ tôi trong suốt quá trình học tập và nghiên cứu. Hà Nội, ngày 14 tháng 5 năm 2015 Sinh viên NGUYỄN MINH THU MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ 1 Phần1: TỔNG QUAN 2 1.1Thông tin về bài thuốc testin II 2 1.2.Tóm tắt thông tin các vị thuốc trong bài thuốc 3 1.2.1. Ba kích 3 1.2.2. Bá bệnh 4 1.2.3. Bạch tật lê 5 1.2.4. Câu kỉ tử 6 1.2.5. Đương quy 7 1.2.6. Hoàng kỳ 8 1.2.7. Xà sàng tử 9 1.2.8. Dâm dương hoắc 10 1.3. Tóm tắt đặc điểm cao thuốc từ dược liệu 11 1.3.1. Định nghĩa 11 1.3.2. Phân loại cao thuốc 11 1.3.3. Phương pháp bào chế cao thuốc 11 1.3.4. Tiêu chuẩn kiểm nghiệm 12 Phần 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1. Nguyên vật liệu, thiết bị 14 2.2. Nội dung nghiên cứu: 15 2.3. Phương pháp nghiên cứu 16 Phần 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 18 3.1. Điều chế cao đặc 18 3.1.1. Xác định độ ẩm dược liệu 18 3.1.2. Điều chế cao đặc 18 3.1.3. Tính hiệu suất điều chế cao 21 3.2. Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm cao đặc 22 3.2.1. Khảo sát các chỉ tiêu hóa lý 22 3.2.1.1. Hình thức, cảm quan 22 3.2.1.2. Mất khối lượng do làm khô 22 3.2.1.3. Xác định chất chiết được bằng nước trong cao 23 3.2.1.4. Xác định pH của dung dịch cao đặc nồng độ 1% (kl/tt) 24 3.2.1.5. Xác định tro toàn phần của cao đặc 25 3.2.2. Định tính các nhóm chất hữu cơ trong cao đặc 25 3.2.3. Kiểm tra các vị thuốc trong cao đặc bằng SKLM 33 3.2.3. 1. Bá bệnh 34 3.2.3. 2. Bạch tật lê 34 3.2.3. 3. Xà sàng tử 34 3.2.3. 4. Ba kích 34 3.2.3. 5. Đương quy 35 3.2.3. 6. Dâm dương hoắc 35 3.2.3.7 . Hoàng kỳ 35 3.2.3. 8. Câu kỷ tử 35 3.2.4. Kiểm tra giới hạn nhiễm khuẩn 38 3.2.5. Định lượng flavonoid toàn phần 38 3.3. Bàn luận 39 3.3.1. Điều chế cao đặc 39 3.3.2.Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn 40 Phần 4. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 44 Kết luận 44 Đề xuất 44 PHỤ LỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT STT Ký hiệu viết tắt Ý nghĩa 1 BB Bá bệnh 2 BK Ba kích 3 BT Bạch tật lê 4 CĐ Cao đặc chiết ethanol 40% 5 CK Câu kỷ tử 6 DD Dâm dương hoắc 7 Đ Đương quy 8 H Hoàng kỳ 9 SKLM Sắc kí lớp mỏng 10 XS Xà sàng tử DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Số trang Bảng 2.1 Hóa chất, dung môi 14 Bảng 2.2 Trang thiết bị sử dụng 15 Bảng 3.1 Độ ẩm của dược liệu 18 Bảng 3.2 Độ ẩm của cao đặc 21 Bảng 3.3 Hiệu suất điều chế cao đặc 22 Bảng 3.4 Độ ẩm cao đặc 40% điều chế theo phương pháp chiết hồi lưu 23 Bảng 3.5 Hàm lượng chất chiết được bằng nước trong cao đặc 24 Bảng 3.6 pH của cao đặc 24 Bảng 3.7 Tro toàn phần của cao đặc 25 Bảng 3.8 Tóm tắt kết quả định tính một số nhóm chất của cao đặc bài thuốc 32 Bảng 3.9 Kết quả thử nghiệm đối với vi khuẩn, vi nấm 40 Bảng 3.10 Giới hạn nhiễm khuẩn cao đặc 40 Bảng 3.11 Kết quả định lượng flavonoid trong cao đặc chiết ethanol 40% 41 DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Số trang Hình 3.1 Sơ đồ điều chế cao đặc chiết ethanol 40% 20 Hình 3.2 Sắc ký đồ bá bệnh và cao đặc 36 Hình 3.3 Sắc ký đồ bạch tật lê và cao đặc 36 Hình 3.4 Sắc ký đồ xà sàng tử và cao đặc 36 Hình 3.5 Sắc ký đồ ba kích và cao đặc 36 Hình 3.6 Sắc ký đồ đương quy và cao đặc 37 Hình 3.7 Sắc ký đồ dâm dương hoắc và cao đặc 37 Hình 3.8 Sắc ký đồ hoàng kỳ và cao đặc 37 Hình 3.9 Sắc ký đồ câu kỷ tử và cao đặc 37 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Cùng với các chứng bệnh khác, chứng suy giảm chức năng sinh dục ở nam giới và các chứng bệnh liên quan đến mãn dục nam, ngày càng gia tăng. Nguyên nhân có thể do tác động của mặt trái sự phát triển công nghiệp hóa, hiện đại hóa đất nước mà ta chưa kiểm soát được, gia tăng như: Ô nhiễm môi trường, ô nhiễm thực phẩm do sử dụng thuốc trừ sâu, thuốc bảo quản, thuốc kích thích sinh trưởng không đúng nguyên tắc, các cơ sở sản xuất thải nhiều khí độc, chất độc hại ra môi trường và cường độ làm việc cao dẫn tới stress, tiếp xúc với các thiết bị máy móc có từ trường kéo dài v v. [1] Thuốc điều trị các chứng này còn hạn chế, thuốc tây y chủ yếu là dùng liệu pháp hormon thay thế, nhưng hiệu quả chưa cao và có rất nhiều tác dụng bất lợi; thuốc có nguồn gốc thảo dược hầu như rất ít, mà chủ yếu là thực phẩm chức năng giá lại rất đắt. Chính vì vây mà PGS.TS Vũ Văn Điền đã xây dựng bài thuốc Testin II, với hy vọng tạo ra sản phẩm hỗ trợ điều trị sự suy giảm chức năng sinh dục nam. Đây là bài thuốc được phát triển trên công thức bài thuốc Testin I, bài thuốc này bước đầu nghiên cứu dược lý đã có tác dụng và đã xây dựng dạng bào chế dạng viên nang mềm. Cao đặc là sản phẩm trung gian cho các nghiên cứu về độc tính, tác dụng dược lý và bào chế nên cần được chuẩn hóa, nếu không chuẩn hóa thì các kết quả nghiên cứu tiếp theo sẽ không có ý nghĩa . Do đó chúng tôi tiến hành đề tài: “ Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn cao đặc bài thuốc Testin II” với 2 mục tiêu: Điều chế cao đặc từ dịch chiết ethanol 40% Bước đầu nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn cao dặc 2 Phần1: TỔNG QUAN 1.1. Thông tin về bài thuốc testin II + Cấu trúc của bài thuốc gồm các vị thuốc sau: Bá bệnh ( Radix Eurycomae) 10g Xà sàng tử (Fructus Cnidii) 12g Dâm dương hoắc (Herba Epimedii) 10g Đương quy (Radix Angeliace sinensis) 14g Bạch tật lê (Fructus Tribuli terrestris) 12g Hoàng kì (Radix Astragali membrancei) 14g Câu kỉ tử (Fructus Lycii) 16g Ba kích (Radix Morindae officinalis) 10g Tổng 98g + Xuất xứ bài thuốc: Bài thuốc do PGS.TS Vũ Văn Điền thiết kế + Cơ sở thiết kế bài thuốc: - Dựa vào lý luận của Y học cổ truyền về các bệnh do thận hư gây ra, trong đó đi sâu vào các chứng liên quan đến suy giảm sinh sản, sinh dục nam. - Dựa vào tính năng của các vị thuốc để chọn vị thuốc kê đơn cho phù hợp với điều trị bệnh suy giảm chức năng sinh sản nam. - Dựa vào tác dụng dược lý và thành phần hoá học của các vị thuốc đã được chứng minh có tác dụng điều trị bệnh suy giảm chức năng sinh dục, sinh sản. - Trong bài thuốc có 5 vị thuốc là Bá bệnh, Bạch tật lê, Xà sàng tử , Dâm dương hoắc và Ba kích đã chứng minh có tác dụng cải thiên sự suy giảm chức năng sinh sản, sinh dục nam, phối hợp thêm Hoàng kì, Đương quy và Câu kỉ tử để bổ khí huyết, bổ can thận. Như vậy khi có cả thuốc cải thiên chức năng sinh dục lẫn thuốc bồi bổ cơ thể thì tác dụng cải thiện sự suy giảm chức năng sinh sản, sinh dục sẽ tốt hơn + Tác dụng của bài thuốc: Bổ thận sinh tinh, ích khí huyết + Công dụng: Chữa suy giảm sinh dục nam [...]... -Sinh học 2.2 Nội dung nghiên cứu a Điều chế cao: - Sơ chế, bào chế các vị thuốc thành thuốc phiến phơi hay sấy khô - Xác định độ ẩm của các vị thuốc - Tiến hành chiết dịch chiết bài thuốc, để lắng, lọc - Tiến hành cô chân không và cô cách thủy để được cao đặc - Xác định độ ẩm của cao đặc - Điều chế 5 mẻ để tính hiệu suất trung bình b Xây dựng tiêu chuẩn cao đặc - Khảo sát các tiêu chuẩn hóa lí - Định... khuẩn: Theo phương pháp đĩa thạch, tiến hành theo DĐVN IV phụ lục 13.6 – DĐVN IV c Dự kiến tiêu chuẩn cao đặc Dựa vào kết quả nghiên cứu và căn cứ vào quy trình xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm cao thuốc để dự kiến tiêu chuẩn kiểm nghiệm cao thuốc 18 Phần 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Điều chế cao đặc 3.1.1 Xác định độ ẩm dược liệu Áp dụng phương pháp mất khối lượng do làm khô ( DĐVN IV PL... vị thuốc trong cao đặc - Kiểm tra độ nhiễm khuẩn -Định lượng flavonoid toàn phần 16 c Sơ bộ dự kiến tiêu chuần cao đặc 2.3 Phương pháp nghiên cứu a Điều chế cao đặc Qua thăm dò tác dụng dược lí của cao chiết bằng nước, chiết bằng ethanol 40%, ethanol 70%, thấy rằng cao điều chế từ ethanol 40% và 70% có tác dụng rõ rệt , cho nên trong đề tài này chọn cao đặc chiết với ethanol 40% để tiến hành nghiên cứu. .. tôi đã lấy mẫu cây và nhờ Viện tài nguyên sinh thái Viện Hàn lâm khoa học Việt Nam xác định tên cây và lấy rễ sơ chế thành thuốc phiến để nghiên cứu và xây dựng tiêu chuẩn cơ sở dược liệu - Cao đặc: Đã được điều chế theo quy trình ổn định, dùng cao này để nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn +Các hóa chất, dung môi Các hóa chất, dung môi sử dụng trong thí nghiệm được mua tại thị trường Hà Nội, nguồn gốc được... suất điều chế cao đặc với độ ẩm 17,34% là 34,71% tính theo dược liệu khô tuyệt đối 3.2 Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm cao đặc 3.2.1 Khảo sát các chỉ tiêu hóa lý 3.2.1.1 Hình thức, cảm quan - Độ đồng nhất: Cho một ít cao và dàn đều trên lam kính, đặt lamen ép sát Đem soi dưới kính hiển vi (vật kính 40) nhận thấy cao thuốc đồng nhất, không có kết tủa, phân lớp - Độ tan: Lấy 1g cao đặc hòa với... phương pháp chiết hồi lưu với dung môi là ethanol 40% + Cô dịch chiết thành cao đặc bằng phương pháp cô cách thủy + Xác định độ ẩm của cao đặc và các vị dược liệu bằng phương pháp mất khối lượng do làm khô theo Phụ lục 9.6- DĐVN IV Tính được hiệu suất điều chế cao đặc theo khối lượng khô tuyệt đối b Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn cao - Xác định độ ẩm: Tiến hành theo phương pháp mất khối lượng do làm khô... ứng yêu cầu theo Phụ lục 13.6 – DĐVN IV 14 Phần 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị + Nguyên liệu - Các vị thuốc trong bài thuốc Testin II: được mua tai chợ Ninh Hiệp Hà Nội về sơ chế, kiểm tra đạt tiêu chuẩn DĐVN IV mới đưa vào bào chế thành thuốc phiến để điều chế cao đặc; riêng vị thuốc Bá bệnh chưa có trong DĐVN IV chúng tôi đã lấy mẫu cây và nhờ Viện tài nguyên... ngược dòng [2] 1.3.2 Phân loại cao thuốc Cao thuốc được chia làm 3 loại: Cao lỏng: Là chất lỏng hơi sánh, có mùi vị đặc trưng của dược liệu sử dụng, trong đó cồn và nước đóng vai trò làm dung môi chính (hay chất bảo quản hoặc cả hai) Nếu không có chỉ dẫn khác, quy ước 1ml cao lỏng tương ứng với 1g dược liệu dùng để chế cao thuốc Cao đặc: Là khối đặc quánh Độ ẩm không quá 20% Cao khô: Là khối hoặc bột khô,... được bằng nước trong cao đặc là 73,88 % 3.2.1.4 Xác định pH của dung dịch cao đặc nồng độ 1% (kl/tt) Thử theo Phụ lục 6.2 – DĐVN IV - Pha thành dung dịch cao đặc 1% (kl/tt): Cân chính xác 1,000g cao đặc bài thuốc cho vào cốc có mỏ, hòa tan, chuyển dần cao ở trong cốc bằng nước cất vào bình định mức 100ml, thêm nước cất đến vạch Hiệu chỉnh máy đo pH lần lượt bằng các dung dịch đệm chuẩn có pH = 7, pH... hòa với 25 ml ethanol 40%, cao tan hoàn toàn - Màu sắc: Lấy khoảng 1 g cao lên tờ giấy trắng, quan sát thấy cao thuốc có màu nâu đen - Mùi (xác định bằng khứu giác): Cao thuốc có mùi thơm đặc trưng của dược liệu - Vị (xác định bằng vị giác): Cao thuốc có vị cay nhẹ, hơi ngọt 3.2.1.2 Mất khối lượng do làm khô Tiến hành theo Phụ lục 9.6 – DĐVN IV Cân chính xác khoảng 1,000 g cao đặc cho vào bát sứ (đã cân . nếu không chuẩn hóa thì các kết quả nghiên cứu tiếp theo sẽ không có ý nghĩa . Do đó chúng tôi tiến hành đề tài: “ Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn cao đặc bài thuốc Testin II với 2 mục tiêu: Điều. Điều chế cao đặc từ dịch chiết ethanol 40% Bước đầu nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn cao dặc 2 Phần1: TỔNG QUAN 1.1. Thông tin về bài thuốc testin II + Cấu trúc của bài thuốc gồm. đã xây dựng bài thuốc Testin II, với hy vọng tạo ra sản phẩm hỗ trợ điều trị sự suy giảm chức năng sinh dục nam. Đây là bài thuốc được phát triển trên công thức bài thuốc Testin I, bài thuốc