BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI VŨ AN PHƢỢNG NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ THUỐC TIÊM GINKGO BILOBA LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC HÀ NỘI 2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI VŨ AN PHƢỢNG NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ THUỐC TIÊM GINKGO BILOBA LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGHÀNH: CÔNG NGHỆ DƯỢC PHẨM & BÀO CHẾ MÃ SỐ : 60720402 Người hướng dẫn khoa học: TS. Nguyễn Trần Linh HÀ NỘI 2013 LỜI CẢM ƠN Với lòng biết ơn sâu sắc, tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS. Nguyễn Trần Linh – người thầy trực tiếp hướng dẫn, người đã dành nhiều thời gian chỉ bảo và giúp đỡ tôi hoàn thành luận văn này. Tôi xin chân thành cảm ơn PGS. TS. Nguyễn Văn Long, các thầy cô giáo, các kỹ thuật viên Bộ môn Bào chế, các bạn và các em sinh viên đã nhiệt tình giúp đỡ và tạo điều kiện thuận lợi cho tôi hoàn thành luận văn này. Tôi xin chân thành cảm ơn PGS. TS. Nguyễn Đình Luyện, các thầy cô giáo, các kỹ thuật viên Bộ môn Công nghiệp dược đã giúp đỡ tôi trong quá trình học tập và hoàn thành luận văn này. Tôi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo Công ty TNHH MTV Dược Khoa- trường Đại học Dược Hà Nội, toàn thể anh chị em phòng Nghiên cứu phát triển và các bạn đồng nghiệp trong công ty đã tạo điều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt quá trình học tập và nghiên cứu. Tôi xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu, phòng sau đại học cùng các thầy cô, các cán bộ nhân viên trường Đại học Dược Hà Nội – những người đã dạy bảo và giúp đỡ tôi trong suốt quá trình học tập và nghiên cứu tại trường. Cuối cùng, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn đối với người thân trong gia đình, bạn bè, những người luôn dành cho tôi sự quan tâm, chia sẻ và giúp đỡ tận tình. Hà Nội, ngày 10 tháng 10 năm 2013 Học viên Vũ An Phượng MỤC LỤC DANH MỤC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Trang ĐẶT VẤN ĐỀ 1 Chƣơng 1. TỔNG QUAN 2 1.1. Đại cương về thuốc tiêm và độ ổn định của thuốc tiêm 2 1.1.1. Định nghĩa 2 1.1.2. Các yếu tố ảnh hưởng đến độ ổn định của thuốc tiêm 2 1.2. Đại cương về cao Ginkgo biloba 5 1.2.1. Nguồn gốc 5 1.2.2. Thành phần 6 1.2.3. Tác dụng dược lý 9 1.2.4. Công dụng/ chỉ định 11 1.2.5. Tác dụng không mong muốn và độc tính 12 1.2.6. Phương pháp định lượng 1 số thành phần cao Ginkgo biloba 12 1.2.7. Một số dạng bào chế chứa cao Ginkgo biloba 14 1.3. Độ ổn định của cao Ginkgo biloba trong thuốc tiêm ginkgo biloba 15 1.3.1. Thành phần flavonoid 16 1.3.2. Thành phần terpenoid 16 1.3.3. Thành phần khác 16 1.4. Một số phương pháp làm tăng độ ổn định của thuốc tiêm ginkgo biloba 16 1.4.1. Phương pháp hạn chế sự thủy phân 17 1.4.2. Phương pháp hạn chế sự oxy hóa 18 1.5. Công trình nghiên cứu đã công bố về ginkgo biloba 20 1.5.1. Nghiên cứu trong nước 20 1.5.2. Nghiên cứu nước ngoài 20 Chƣơng 2. ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1. Nguyên vật liệu 26 2.2. Phương tiện, thiết bị nghiên cứu 27 2.3. Nội dung nghiên cứu 27 2.4. Phương pháp nghiên cứu 28 2.4.1. Phương pháp bào chế thuốc tiêm ginkgo biloba 28 2.4.2 Phương pháp đánh giá chất lượng thuốc tiêm ginkgo biloba 28 2.4.3. Phương pháp khảo sát độ tan của ginkgo biloba 30 2.4.4. Phương pháp khảo sát các yếu tố ảnh hưởng trong xây dựng công thức và phương pháp khảo sát các yếu tố ảnh hưởng trong quá trình bào chế thuốc tiêm ginkgo biloba 30 2.4.5. Phương pháp thiết kế công thức 31 2.4.6. Phương pháp phân tích, xử lý số liệu 32 2.4.7. Phương pháp nghiên cứu độ ổn định và dự đoán tuổi thọ của dung dịch thuốc tiêm Ginkgo biloba 32 Chƣơng 3. THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 34 3.1. Thẩm định phương pháp định lượng thuốc tiêm Ginkgo biloba 34 3.1.1. Khảo sát tính tương thích của hệ thống sắc ký 34 3.1.2. Thẩm định quy trình định lượng 34 3.2. Sơ bộ đánh giá một số yếu tố ảnh hưởng đến độ ổn định của thuốc tiêm ginkgo biloba 38 3.2.1. Ảnh hưởng của hệ dung môi 38 3.2.2. Ảnh hưởng của pH và loại đệm 43 3.2.3. Ảnh hưởng của chất chống oxy hóa 45 3.2.4. Ảnh hưởng của các loại đường 46 3.3. Tối ưu hóa công thức thuốc tiêm ginkgo biloba 47 3.3.1. Thiết kế thí nghiệm 47 3.3.2. Tiến hành thí nghiệm 49 3.3.3. Ảnh hưởng của các biến đầu vào đến các biến đầu ra 50 3.3.4. Lựa chọn công thức tối ưu 56 3.4. Ảnh hưởng của các yếu tố khác đến độ ổn định của thuốc tiêm ginkgo biloba. 57 3.4.1. Ảnh hưởng của bao bì 57 3.4.2. Ảnh hưởng của sục khí nitrogen 58 3.4.3. Ảnh hưởng của chất bảo quản alcol benzylic 58 3.4.4. Ảnh hưởng của phương pháp tiệt khuẩn 59 3.5. Dự thảo qui trình và tiêu chuẩn thành phẩm thuốc tiêm ginkgo biloba 61 3.5.1. Dự thảo qui trình pha chế thuốc tiêm ginkgo biloba 62 3.5.2. Dự thảo tiêu chuẩn kiểm nghiệm 62 3.6. Theo dõi độ ổn định của thuốc tiêm pha theo công thức tối ưu 65 3.7. Dự đoán tuổi thọ của thuốc tiêm ginkgo biloba 66 Chƣơng 4. BÀN LUẬN 67 4.1. Về phương pháp định lượng 67 4.2. Về xây dựng công thức bào chế tiêm thuốc tiêm ginkgo biloba 67 4.3. Về dự thảo tiêu chuẩn thành phẩm thuốc tiêm ginkgo biloba và theo dõi độ ổn định của thuốc 69 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 70 KẾT LUẬN 70 KIẾN NGHỊ 71 TÀI LIỆU THAO KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT EGb 761 : Ginkgo biloba extract (Cao bạch quả) HPLC : High performace liquid chromatography (Sắc ký lỏng hiệu năng cao) PG : Propylen glycol PEG : Polyethylen glycol Rongalite : Natri formaldehyd sulfoxylat DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU Tên bảng, biểu Trang Bảng 1.1 Thành phần của lá ginkgo biloba 6 Bảng 1.2 Giới hạn định lượng các thành phần trong cao Ginkgo biloba 12 Bảng 1.3 Một số chế phẩm chứa cao Ginkgo biloba 14 Bảng 2.4 Các nguyên vật liệu sử dụng trong quá trình thực nghiệm. 26 Bảng 3.5 Kết quả kiểm tra tính thích hợp của hệ thống sắc ký 34 Bảng 3.6 Kết quả kiểm tra tính đặc hiệu của hệ thống sắc ký 34 Bảng 3.7 Mối tương quan giữa nồng độ quercetin và S pic 36 Bảng 3.8 Bảng kết quả kiểm tra độ lặp lại của phương pháp. 37 Bảng 3.9 Bảng kết quả kiểm tra độ đúng của phương pháp 38 Bảng 3.10 Khảo sát độ tan của cao ginkgo biloba 39 Bảng 3.11 Khảo sát độ tan của cao ginkgo biloba trong dung môi 40 Bảng 3.12 Khảo sát độ tan của cao ginkgo biloba trong hệ dung môi 42 Bảng 3.13 Ảnh hưởng của giá trị pH 43 Bảng 3.14 Ảnh hưởng của loại đệm 44 Bảng 3.15 Ảnh hưởng của chất chống oxy hóa 45 Bảng 3.16 Ảnh hưởng của các loại đường 46 Bảng 3.17 Bảng ký hiệu và mức cần đạt được của các biến đầu ra. 48 Bảng 3.18 Bảng ký hiệu và yêu cầu của các biến đầu vào 48 Bảng 3.19 Kết quả thực nghiệm giá trị các biến đầu ra 50 Bảng 3.20 Kết quả luyện mạng neuron nhân tạo 51 Bảng 3.21 Ảnh hưởng của biến độc lập đến biến phụ thuộc 51 Bảng 3.22 Giá trị tối ưu cho các biến đầu vào trong xây dựng công thức thuốc tiêm ginkgo biloba 56 Bảng 3.23 Ảnh hưởng của bao bì 57 Bảng 3.24 Ảnh hưởng của sục khí nitrogen 58 Bảng 3.25 Ảnh hưởng của phương pháp tiệt khuẩn 59 Bảng 3.26 Kết quả kiểm tra độ vô khuẩn 60 Bảng 3.27 Kết quả theo dõi độ ổn định của thuốc tiêm ginkgo biloba 66 Bảng 3.28 Phương trình hồi qui tuyến tính biểu diễn mối quan hệ giữa hàm lượng flavonoid glycosid còn lại (C) và thời gian bảo quản (t) của mẫu 67 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Tên hình vẽ, đồ thị Trang Hình 1.1 Công thức cấu tạo một số flavonoid chính trong cao ginkgo biloba 7 Hình 1.2 Công thức cấu tạo các terpenoid trong cao Ginkgo biloba 8 Hình 3.3 Đồ thị biểu diễn mối tương quan giữa nồng độ quercetin và S pic 36 Hình 3.4 Mặt đáp của ΔpH theo nồng độ natri metabisulfit và pH (Y 1 , X 1 , X 4 ) khi natri edetat là 0,03% và sorbitol là 12,5%. 52 Hình 3.5 Mặt đáp của hàm lượng flavonoid glycosid còn lại theo nồng độ dinatri edetat và pH (Y 2 , X 1 , X 2 ) khi dinatri metabisulfit là 0,2% và sorbitol là 12,5% 52 Hình 3.6 Mặt đáp của hàm lượng flavonoid glycosid còn lại theo nồng độ natri metabisulfit , pH (Y 2 , X 1 , X 4 )khi natri edetat là 0,03% và sorbitol là 12,5%. 53 Hình 3.7 Mặt đáp của hàm lượng flavonoid glycosid còn lại theo nồng độ natri metabisulfit và dinatri edetat (Y 2 , X 2 , X 4 ) khi pH=6,75 và sorbitol là 12,5% 54 Hình 3.8 Mặt đáp của hàm lượng flavonoid glycosid còn lại còn lại theo nồng độ sorbitol, pH (Y 2 , X 1 , X 3 ) khi dinatri edetat là 0,03% và natri metabisulfit là 0,2% 55 Hình 3.9 Sơ đồ quá trình pha chế thuốc tiêm ginkgo biloba dự thảo 62 [...]... cứu bào chế thuốc tiêm Ginkgo biloba với các mục tiêu sau: 1 Xây dựng và tối ưu hóa công thức thuốc tiêm ginkgo biloba chứa 17,5 mg cao ginkgo biloba / 5 ml 2 Dự thảo tiêu chuẩn chất lượng và theo dõi độ ổn định của chế phẩm thuốc tiêm ginkgo biloba pha theo công thức tối ưu 1 Chƣơng 1 TỔNG QUAN 1.1 Đại cƣơng về thuốc tiêm và độ ổn định của thuốc tiêm 1.1.1 Định nghĩa Thuốc tiêm là những chế phẩm... tiêm ginkgo biloba Theo phân tích mục 1.3, để tăng độ ổn định của thuốc tiêm ginkgo biloba thì quá trình xây dựng công thức và qui trình bào chế cần hạn chế phản ứng thủy phân, hạn chế 16 phản ứng oxy hóa Dưới đây là một số biện pháp hạn chế phản ứng thủy phân, hạn chế phản ứng oxy hóa có thể sử dụng khi pha chế thuốc tiêm ginkgo biloba 1.4.1 Phương pháp hạn chế sự thủy phân Sự phân hủy ginkgo biloba do... đến 4,0 Nhƣ vậy: Các nghiên cứu về thuốc viên chỉ ra rằng sự hấp thu thuốc qua đường uống có sinh khả dụng không cao.Điều này mở ra 2 hướng nghiên cứu mới gồm có: bào chế dạng nguyên liệu ginkgo biloba tránh sự phân hủy của thuốc trong đường tiêu hóa như dạng nano hoặc nghiên cứu thuốc tiêm nhằm mục đích tăng sinh khả dụng Hầu hết các bằng sáng chế về thuốc tiêm ginkgo biloba có nguồn gốc nước ngoài,... bào chế thuốc tiêm ginkgo biloba [4] Kết quả nghiên cứu đã xây dựng công thức chế phẩm thuốc tiêm ginkgo biloba với thành phần: Cao ginkgo biloba (CP 2005) 17,5 mg Dung môi A 1,0 ml Dung môi B 0,5 ml Natri edetat 0,5 mg Đường C 0,5 mg Dung dịch đệm phosphat pH=6,0 Nước cất pha tiêm vđ 5,0 ml Nghiên cứu sử dụng phương pháp định lượng flavonoid glycosid là HPLC theo tiêu chuẩn CP 2005, nghiên cứu đã theo... chuyển cao ginkgo biloba dạng bột sau chiết xuất thành dạng nano hoặc dạng microencapsul để bảo vệ dược chất tránh sự phân hủy do men tiêu hóa Tuy nhiên, hiệu quả chưa cao 1.5.2.3 Các nghiên cứu về thuốc tiêm chứa cao ginkgo biloba Với mong muốn tăng sinh khả dụng của thuốc, các nhà bào chế đã nghiên cứu đưa cao dược liệu vào thuốc tiêm Tuy nhiên, với yêu cầu tiêu chuẩn rất cao của thuốc 23 tiêm, không phải... các chế phẩm chứa cao ginkgo biloba dùng qua đường uống (dạng viên) có sinh khả dụng thấp [10], đây là lý do ra đời thuốc tiêm ginkgo biloba trên thế giới Hiện nay, Việt Nam đang sử dụng thuốc tiêm ginkgo biloba nhập khẩu chủ yếu từ Hàn Quốc, trong nước đã có hai cơ sở đăng ký sản xuất thuốc tiêm này nhưng thực tế gặp khó khăn về công thức bào chế Vì vậy, chúng tôi chọn thực hiện đề tài Nghiên cứu bào. .. pha tiêm trước và trong khi pha chế, hàn ống trong bầu khí trơ - Hạn chế sự tác động của ánh sáng trong quá trình bảo quản, sử dụng ống đóng có màu hổ phách và bao bì ngoài tránh sáng - Hạn chế sự tác động của nhiệt độ trong quá trình pha chế, bảo quản [1], [14] 1.5 Một số nghiên cứu đã công bốvề ginkgo biloba 1.5.1 Nghiên cứu trong nước Năm 2008, Đỗ Thị Thu Hương đã tiến hành đề tài Nghiên cứu bào chế. .. liệu cho thuốc tiêm có chất lượng cao, Chunjian Zhao và cộng sự đã nghiên cứu phương pháp chiết xuất ginkgo biloba bằng carbon dioxyd lỏng siêu tới hạn - Năm 2012, sáng chế về quá trình tạo dung dịch ginkgo biloba sử dụng cho thuốc tiêm ra đời [71] Theo sáng chế này, dung dịch ginkgo biloba trong nước dùng làm thuốc tiêm được chuẩn bị như sau: Pha dung dịch gelatin 0,1 – 0,3 %, hòa cao ginkgo biloba. .. C15 và C17 1.2.7 Một số dạng bào chế chứa caoGinkgo biloba Dạng thuốc uống: chủ yếu bào chế theo dạng viên như viên bao phim, viên bao đường, viên nang mềm với hàm lượng hoạt chất cao ginkgo biloba là 40 mg/viên, 60 mg/viên, 120 mg/viên Dạng thuốc tiêm có hàm lượng hoạt chất cao ginkgo biloba là 3,5 mg/ml Bảng 1.3.Một số chế phẩm chứa cao ginkgo biloba Biệt dược Dạng bào chế Hãng sản xuất Thành phần... ginkgo biloba một mặt tạo ra tác dụng điều trị của chế phẩm, mặt khác lại là mối đe dọa độ ổn định cho chế phẩm Muốn chế phẩm thuốc tiêm chứa cao ginkgo biloba tăng được độ ổn định, yêu cầu bắt buộc là cần hạn chế sự thủy phân, hạn chế sự oxy hóa, đồng thời tăng được độ tan của hoạt chất mà không làm tủa các thành phần khác trong dung dịch thuốc tiêm 1.4 Một số phƣơng pháp làm tăng độ ổn định của thuốc tiêm . 2.3. Nội dung nghiên cứu 27 2.4. Phương pháp nghiên cứu 28 2.4.1. Phương pháp bào chế thuốc tiêm ginkgo biloba 28 2.4.2 Phương pháp đánh giá chất lượng thuốc tiêm ginkgo biloba 28 2.4.3 công thức bào chế. Vì vậy, chúng tôi chọn thực hiện đề tài Nghiên cứu bào chế thuốc tiêm Ginkgo biloba với các mục tiêu sau: 1. Xây dựng và tối ưu hóa công thức thuốc tiêm ginkgo biloba chứa. DƢỢC HÀ NỘI VŨ AN PHƢỢNG NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ THUỐC TIÊM GINKGO BILOBA LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGHÀNH: CÔNG NGHỆ DƯỢC PHẨM & BÀO CHẾ MÃ SỐ : 60720402 Người hướng