Đang tải... (xem toàn văn)
ĐẶT VẤN ĐỀ Trong vài năm gần đây các dạng thuốc probiotics đang rất đƣợc quan tâm nghiên cứu và phát triển bởi nhiều lợi ích mà nó mang lại cho sức khỏe của con ngƣời. Trong đó, Lactobacillus acidophilus là một trong những chủng vi sinh vật probiotics phổ biến nhất hiện nay bởi nhiều lợi ích mà nó mang lại. L. acidophilus xuất hiện từ rất sớm trong những thực phẩm truyền thống nhƣ sữa tƣơi, sữa chua, cũng nhƣ các sản phẩm bổ sung dinh dƣỡng23. Ở nƣớc ta, việc phát triển các sản phẩm probiotics đang trong giai đoạn đầu. Dạng bào chế probiotics thông dụng hiện nay là bột và cốm. Việc đảm bảo độ sống sót của vi sinh vật và bảo vệ vi sinh vật khi sử dụng qua đƣờng uống là vấn đề lớn còn mắc phải, do khi sử dụng theo đƣờng uống thuốc phải chịu tác động của các yếu tố nhƣ: pH acid, enzym tiêu hóa, acid mật…23 là các yếu tố làm suy giảm số lƣợng sống sót của vi sinh vật đi rất nhiều. Trên thế giới, các nƣớc đã và đang tập trung nghiên cứu phát triển nhiều loại chế phẩm probiotics dạng pellet, bởi dạng pellet có nhiều ƣu điểm lớn nhƣ: rút ngắn thời gian lƣu thuốc ở dạ dày, ít bị rã ở dạ dày; mặt khác do pellet hình cầu, bề mặt nhẵn thuận tiện cho quá trình bao màng nhằm mục đích bảo vệ vi sinh vật, bao tan trong ruột…2, 3. Từ các lí do trên chúng tôi thực hiện đề tài “Khảo sát ảnh hƣởng của tá dƣợc lên khả năng sống sót của Lactobacillus acidophilustrong pellet probiotic” nhằm 3 mục tiêu sau: 1. Khảo sát một số thông số trong quá trình tạo pellet probiotics chứa Lactobacillus acidophilustừ nguyên liệu đông khô tự tạo. 2. Đánh giá ảnh hƣởng của một số giai đoạn trong quá trình tạo pellet đến sự sống sót của vi sinh vật và theo dõi độ ổn định của pellet probiotics. 3. Khảo sát ảnh hƣởng của tỉ lệ dƣợc chất và tá dƣợc lactose đến số lƣợng vi sinh vật trong pellet thu đƣợc.
BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGÔ XUÂN BÁCH KHẢO SÁT ẢNH HƢỞNG CỦA TÁ DƢỢC LÊN KHẢ NĂNG SỐNG SÓT CỦA Lactobacillus acidophilus TRONG PELLET PROBIOTIC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ HÀ NỘI – 2015 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGÔ XUÂN BÁCH KHẢO SÁT ẢNH HƢỞNG CỦA TÁ DƢỢC LÊN KHẢ NĂNG SỐNG SÓT CỦA Lactobacillus acidophilus TRONG PELLET PROBIOTIC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Ngƣời hƣớng dẫn: ThS. Nguyễn Khắc Tiệp Nơi thực hiện: BM Công nghiệp dược HÀ NỘI – 2015 LỜI CẢM ƠN Với sự kính trọng và lòng biết ơn sâu sắc, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy giáo,ThS Nguyễn Khắc Tiệp,người thầy đã tận tình hướng dẫn em trong suốt quá trình thực hiện khóa luận. Em cũng xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến TS. Đàm Thanh Xuân và DS. Lê Ngọc Khánh, cùng các thầy cô giáo trong Bộ môn Công nghiệp Dược, những người đã giúp đỡ, đóng góp ý kiến quý báu và hỗ trợ tạo mọi điều kiện thuận lợi giúp em hoàn thành khóa luận này. Em xin chân thành cảm ơn sự giúp đỡ nhiệt tình của các anh chị kỹ thuật viên trong bộ môn Công nghiệp Dược. Em cũng xin trân trọng cảm ơn Ban giám hiệu nhà trường và các thầy cô giáo trong trường đã dạy dỗ và dìu dắt em trongnăm năm học tại trường. Cuối cùng, em xin cảm ơn gia đình, bạn bè đã luôn ủng hộ, khích lệ và hết lòng giúp đỡ em trong suốt quá trình học tập và nghiên cứu. Em xin chân thành cảm ơn!!! Hà Nội, tháng 5 năm 2015 Sinh viên Ngô Xuân Bách MỤC LỤC Danh mục các chữ viết tắt Danh mục các bảng Danh mục các hình ĐẶT VẤN ĐỀ 1 CHƢƠNG I. TỔNG QUAN 2 1.1. Đại cƣơng về probiotics 2 1.2. Tình hình nghiên cứu và sử dụng probiotics trên thế giới và Việt Nam 3 1.3. Lactobacillus acidophilus 5 1.3.1. Đặc điểm hình thái, sinh lí, điều kiện nuôi cấy 5 1.3.2. Tác dụng của Lactobacillus acidophilus với sức khỏe 6 1.4. Kỹ thuật sản xuất pellet bằng phƣơng pháp đùn – tạo cầu 8 1.4.1. Định nghĩa pellet 8 1.4.2. Ƣu – nhƣợc điểm của pellet 8 1.4.3. Thành phần của pellet 9 1.4.4. Các phƣơng pháp bào chế pellet 10 CHƢƠNG II. ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.1. Nguyên vật liệu và thiết bị nghiên cứu 13 2.1.1. Nguyên vật liệu 13 2.1.2. Môi trƣờng sử dụng trong nghiên cứu 14 2.1.3. Thiết bị 14 2.2. Nội dung nghiên cứu 15 2.2.1. Khảo sát một số thông số trong quá trình tạo pellet probiotics chứa Lactobacillus acidophilustừ nguyên liệu đông khô tự tạo. 15 2.2.2. Đánh giá ảnh hƣởng của một số giai đoạn trong quá trình tạo pellet đến sự sống sót của vi sinh vật và theo dõi độ ổn định của pellet probiotics 15 2.2.3. Khảo sát ảnh hƣởng của tỉ lệ dƣợc chất và tá dƣợc lactose đến số lƣợng vi sinh vật trong pellet thu đƣợc. 15 2.3. Phƣơng pháp nghiên cứu 15 2.3.1. Phƣơng pháp hoạt hóa giống 15 2.3.2. Phƣơng pháp nhân giống 15 2.3.3. Phƣơng pháp nuôi cấy thu hỗn dịch tế bào 16 2.3.4. Phƣơng pháp đông khô 16 2.3.5. Phƣơng pháp bào chế pellet 16 2.3.6. Phƣơng pháp làm khô và bảo quản pellet 18 2.3.7. Phƣơng pháp xác định hàm ẩm pellet 18 2.3.8. Phƣơng pháp xác định số lƣợng vi sinh vật theo phƣơng pháp pha loãng liên tục 19 2.3.9. Phƣơng pháp đánh giá sơ bộ một số chỉ tiêu chất lƣợng của pellet 19 CHƢƠNG III. THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 21 3.1. Khảo sát một số thông số trong quá trình tạo pellet probiotics chứa Lactobacillus acidophilustừ nguyên liệu đông khô tự tạo. 21 3.1.1. Khảo sát lƣợng tá dƣợc dính HPMC E6 5% 22 3.1.2. Khảo sát thời gian ủ 24 3.1.3. Khảo sát thời gian làm khô bằng máy sấy tầng sôi 26 3.1.4. Đánh giá một số chỉ tiêu chất lƣợng của pellet 27 3.2. Đánh giá ảnh hƣởng của một số giai đoạn trong quá trình tạo pellet đến sự sống sót của vi sinh vật và theo dõi độ ổn định của pellet probiotics . 28 3.2.1. Đánh giá ảnh hƣởng của một số giai đoạn trong quá trình tạo pellet đến sự sống sót của vi sinh vật 29 3.2.2. Theo dõi độ ổn định của pellet probiotics trong quá trình bảo quản 32 3.3. Khảo sát ảnh hƣởng của tỉ lệ dƣợc chất và tá dƣợc lactose đến số lƣợng vi sinh vật trong pellet thu đƣợc. 35 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 37 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ATCC (American Type Culture Collection) Trung tâm giữ giống quốc gia Mỹ CT Công thức Cfu (Colony – Forming Units) Số đơn vị khuẩn lạc FAO (Food and Agriculture Organization) Tổ chức Nông lƣơng thế giới HPMC Hydroxypropyl methyl cellulose IDF (International Dairy Federation) Liên đoàn bơ sữa thế giới LAB (lactic acid bateria) Nhóm vi khuẩn lactic MT Môi trƣờng MRS (de Man, Rogosa, Sharpe) Môi trƣờng nuôi cấy vi khuẩn SSG Natri starch glycolat VSV Vi sinh vật WHO (World Health Organization) Tổ chức Y tế thế giới DANH MỤC CÁC BẢNG STT Tên bảng Trang 1.1 Một số tá dƣợc dùng trong công thức bào chế pellet 10 2.1 Các hóa chất dùng trong nghiên cứu 14 2.2 Các tá dƣợc sử dụng trong nghiên cứu 14 2.3 Các thiết bị dùng trong nghiên cứu 15 2.4 Công thức bào chế pellet probiotics (mẻ 200g) 18 3.1 Công thức bào chế pellet probiotics (mẻ 200g) 21 3.2 Ảnh hƣởng của lƣợng dung dịch tá dƣợc dính tới quá trình tạo pellet 22 3.3 Ảnh hƣởng của thời gian ủ tới thể chất pellet 24 3.4 Ảnh hƣởng của thời gian làm khô bằng máy sấy tầng sôi đến hàm ẩm pellet 27 3.5 Số lƣợng vi sinh vật (cfu/g) và hàm ẩm trong quá trình tạo pellet bằng phƣơng pháp đùn – tạo cầu 31 3.6 Số lƣợng vi sinh vật (cfu/g) và hàm ẩm của pellet trong thời gian bảo quản 34 3.7 Số lƣợng vi sinh vật (cfu/g) và hàm ẩm của pellet đƣợc tạo thành khi thay đổi tỉ lệ dƣợc chất và tá dƣợc lactose 36 DANH MỤC CÁC HÌNH STT Tên hình Trang 1.1 Hình ảnh Lactobacillus acidophilus trên kính hiển vi điện tử 5 1.2 Sơ đồ các bƣớc sản xuất pellet bằng phƣơng pháp đùn – tạo cầu 11 2.1 Sơ đồ quy trình bào chế pellet 18 3.1 Sợi đùn trong quá trình đùn khi sử dụng 70ml dd HPMC E6 5% 23 3.2 Sợi đùn trong quá trình đùn khi sử dụng 75ml dd HPMC E6 5% 23 3.3 Biến thiên hàm lƣợng vi sinh vật (cfu/g) trong pellet và hàm ẩm pellet trong quá trình tạo pellet 31 3.4 Đồ thị biến thiên hàm lƣợng vi sinh vật (cfu/g) và hàm ẩm pellet trong thời gian bảo quản 34 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Trong vài năm gần đây các dạng thuốc probiotics đang rất đƣợc quan tâm nghiên cứu và phát triển bởi nhiều lợi ích mà nó mang lại cho sức khỏe của con ngƣời. Trong đó, Lactobacillus acidophilus là một trong những chủng vi sinh vật probiotics phổ biến nhất hiện nay bởi nhiều lợi ích mà nó mang lại. L. acidophilus xuất hiện từ rất sớm trong những thực phẩm truyền thống nhƣ sữa tƣơi, sữa chua, cũng nhƣ các sản phẩm bổ sung dinh dƣỡng[23]. Ở nƣớc ta, việc phát triển các sản phẩm probiotics đang trong giai đoạn đầu. Dạng bào chế probiotics thông dụng hiện nay là bột và cốm. Việc đảm bảo độ sống sót của vi sinh vật và bảo vệ vi sinh vật khi sử dụng qua đƣờng uống là vấn đề lớn còn mắc phải, do khi sử dụng theo đƣờng uống thuốc phải chịu tác động của các yếu tố nhƣ: pH acid, enzym tiêu hóa, acid mật…[23] là các yếu tố làm suy giảm số lƣợng sống sót của vi sinh vật đi rất nhiều. Trên thế giới, các nƣớc đã và đang tập trung nghiên cứu phát triển nhiều loại chế phẩm probiotics dạng pellet, bởi dạng pellet có nhiều ƣu điểm lớn nhƣ: rút ngắn thời gian lƣu thuốc ở dạ dày, ít bị rã ở dạ dày; mặt khác do pellet hình cầu, bề mặt nhẵn thuận tiện cho quá trình bao màng nhằm mục đích bảo vệ vi sinh vật, bao tan trong ruột…[2], [3]. Từ các lí do trên chúng tôi thực hiện đề tài “Khảo sát ảnh hƣởng của tá dƣợc lên khả năng sống sót của Lactobacillus acidophilustrong pellet probiotic” nhằm 3 mục tiêu sau: 1. Khảo sát một số thông số trong quá trình tạo pellet probiotics chứa Lactobacillus acidophilustừ nguyên liệu đông khô tự tạo. 2. Đánh giá ảnh hƣởng của một số giai đoạn trong quá trình tạo pellet đến sự sống sót của vi sinh vật và theo dõi độ ổn định của pellet probiotics. 3. Khảo sát ảnh hƣởng của tỉ lệ dƣợc chất và tá dƣợc lactose đến số lƣợng vi sinh vật trong pellet thu đƣợc. [...]... nghiên cứu 2.2.1 Khảo sát một số thông số trong quá trình tạo pellet probiotics chứa Lactobacillus acidophilustừ nguyên liệu đông khô tự tạo Khảo sát lƣợng tá dƣợc dính HPMC E6 5% Khảo sát thời gian ủ Khảo sát thời gian làm khô bằng máy sấy tầng sôi Đánh giá một số chỉ tiêu chất lƣợng của pellet 2.2.2 Đánh giá ảnh hƣởng của một số giai đoạn trong quá trình tạo pellet đến sự sống sót của vi sinh... pellet đến sự sống sót của vi sinh vật và theo dõi độ ổn định của pellet probiotics Đánh giá ảnh hƣởng của một số giai đoạn trong quá trình tạo pellet đến sự sống sót của vi sinh vật Theo dõi độ ổn định của pellet probiotics trong quá trình bảo quản 2.2.3 Khảo sát ảnh hƣởng của tỉ lệ dƣợc chất và tá dƣợc lactose đến số lƣợng vi sinh vật trong pellet thu đƣợc 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 2.3.1 Phƣơng pháp... đây đƣợc thực hiện để khảo sát một số thông số của quá trình tạo pellet bằng phƣơng pháp đùn – tạo cầu ảnh hƣởng tới thể chất của pellet tạo thành Các thông số đƣợc khảo sát bao gồm: 22 Lƣợng dung dịch tá dƣợc dính HPMC E6 5% Thời gian của quá trình ủ Thời gian sấy 3.1.1 Khảo sát lƣợng tá dƣợc dính HPMC E6 5% Tuy công thức bào chế đã đƣợc tham khảo trong luận án tiến sĩ của TS Nguyễn Thị Thanh... đƣờng kính nhỏ hơn 0,25mm Test nhanh độ rã của pellet bằng cách cho 1g pellet vào trong 100 ml nƣớc cất, lắc với tốc độ 125 vòng/phút, xác định thời gian pellet rã 21 CHƢƠNG III THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Khảo sát một số thông số trong quá trình tạo pellet probiotics chứa Lactobacillus acidophilustừ nguyên liệu đông khô tự tạo Khi bào chế pellet probiotics vấn đềquan tâm đầu tiên trƣớc khi... đó phải có khả năng sống sót qua hệ tiêu hóa và phải có khả năng phát triển trong ruột Do trong quá trình sử dụng vi khuẩn probiotics phải đối mặt với nhiều điều kiện bất lợi 3 của đƣờng tiêu hóa nên để đem lại tác dụngbất cứ sản phẩm chứa probiotics nào cũng phải chứa ít nhất 106 cfu/ml tế bào vi sinh vật sống cho đến ngày hết hạn sử dụng [17], [33] 1.2 Tình hình nghiên cứu và sử dụng probiotics trên... dƣới tác động của probiotics.Tuy nhiên, cho đến nay những nhân tố nào góp phần tạo nên một hệ vi sinh vật cân bằng hoặc làm rối loạn sự cân bằng của hệ vi sinh vật đƣờng ruột cũng chƣa đƣợc hiểu biết đầy đủ Probiotics đem lại nhiều tác dụng có lợi cho cơ thể vật chủ, nhƣng hiểu biết của con ngƣời về cơ chế tác động của probiotics còn rất hạn chế Có một số tác giả cho rằng hiệu quả của probiotics trong. .. [30] Vì thế đề tài đã thực hiện khảo sát hàm ẩm pellet tạo thành trong thời gian sấy bằng máy sấy tầng sôi để lựa chọn đƣợc thời gian sấy ngắn nhất mà vẫn đạt yêu cầu về hàm ẩm pellet probiotics Mục tiêu Khảo sát thời gian làm khô pellet bằng phƣơng pháp sấy tầng sôi Từ đó lựa chọn đƣợc thời gian sấy pellet ngắn nhất để tạo pellet có hàm ẩm đạt tiêu chuẩn Tiến hành Pellet sau khi đƣợc tạo thành theo... gây tác dụng Việc đảm bảo khả năng sống sót của vi sinh vật probiotics trong sản xuất, bảo quản, lƣu hành, và tỉ lệ sống sót cao khi đến ruột không đơn giản; do vậy đã có nhiều hƣớng nghiên cứu khác nhau nhƣ cải tiến phƣơng pháp đông khô tạo bột, áp dụng phƣơng pháp lên men 2 bƣớc, phƣơng pháp vi nang hóa, phƣơng pháp sử dụng kết hợp với tá dƣợc bảo vệ[18] Một số cơ sở có sản xuất nguyên liệu probiotics... pháp bào chế pellet Chuẩn bị nguyên liệu 17 Dƣợc chất:Nguyên liệu bột đông khô chứa Lactobacillus acidophilus đƣợc tạo thành bằng phƣơng pháp nuôi cấy theo mục 2.3.3, sau đó đông khô theo mục 2.3.4 Tá dƣợc: Chuẩn bị các tá dƣợc nhƣ trong bảng 2.2, đem đi hấp tiệt trùng ở điều kiện 0,6 atm trong 20 phút Tạo pellet Trong công thức bào chế này đã có sự tham khảo ở luận án tiến sĩ của TS Nguyễn... Bảng 1.1 Một số tá dược dùng trong công thức bào chế pellet Nhóm Vai trò Một số tá dƣợc điển hình tá dƣợc Tá dƣợc Giúp pellet tạo đƣợc hình cầu hoàn Cellulose vi tinh thể (avicel pH tạo cầu 101, avicel pH 102), chỉnh carboxymethyl cellulose,… Tá dƣợc Còn gọi là tá dƣợc pha loãng, đƣợc Lactose, manitol, tinh bột, thêm vào để đảm bảo khối lƣợng cellulose vi tinh thể, calci cần thiết của pellet hoặc để . vật, bao tan trong ruột…[2], [3]. Từ các lí do trên chúng tôi thực hiện đề tài Khảo sát ảnh hƣởng của tá dƣợc lên khả năng sống sót của Lactobacillus acidophilustrong pellet probiotic nhằm. ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGÔ XUÂN BÁCH KHẢO SÁT ẢNH HƢỞNG CỦA TÁ DƢỢC LÊN KHẢ NĂNG SỐNG SÓT CỦA Lactobacillus acidophilus TRONG PELLET PROBIOTIC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ. HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGÔ XUÂN BÁCH KHẢO SÁT ẢNH HƢỞNG CỦA TÁ DƢỢC LÊN KHẢ NĂNG SỐNG SÓT CỦA Lactobacillus acidophilus TRONG PELLET PROBIOTIC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ