Đang tải... (xem toàn văn)
Glucose 6 phosphatdehydrogenase (G6PD) là một enzym ôxy hoá khử, là một enzym then chốt trong quá trình chuyển hoá Glucose theo con đường Hexose monophosphate trong hồng cầu.
ĐẶT VẤN ĐỀ Glucose 6 phosphatdehydrogenase (G6PD) là một enzym ôxy hoá khử, là một enzym then chốt trong quá trình chuyển hoá Glucose theo con đường Hexose monophosphate trong hồng cầu. Con đường này chỉ tạo ra năng lượng không đáng kể (10%glucose tham gia vào con đường này) nhưng lại đảm nhiệm hai chức năng quan trọng là cung cấp ribose cho quá trình sinh tổng hợp các nucleotid, acid nucleic và đặc biệt tạo ra một chất khử vô cùng quan trọng là NADPH. Chất này có khả năng chống lại tác nhân gây oxy hóa, loại bỏ H 2 0 2 , giúp bảo vệ cho màng hồng cầu đựơc bền vững, bảo vệ cấu trúc của Hemoglobin, cấu trúc của các enzym có trong hồng cầu để duy trì sự sống cho tế bào hồng cầu. Bệnh thiếu hụt G6PD là một trong những bệnh lý hay gặp nhất của hồng cầu. Cơ sở di truyền học của bệnh này là đột biến gen nằm trên đầu mút tận cùng nhiễm sắc thể X ở đoạn q với các dạng đột biến khác nhau (như Gâoh,Viangchan .) Các dạng đột biến khác nhau có thể tạo những mức độ thiếu hụt G6PD khác nhau và gây ra những biểu hịên lâm sàng khác nhau. Đây là bệnh di truyền gen lặn liên kết nhiễm sắc thể giới tính X không có alen tương ứng trên Y nên gặp nhiều ở nam hơn ở nữ,bệnh mang tính di truyền do đó biểu hiện khác nhau ở những dân tộc khác nhau. Các nghiên cứu gần đây cho thấy những biểu hiện lâm sàng của bệnh cũng đa số xuất hiện do sử dụng các biện pháp điều trị như thuốc hay sử dụng thức ăn có tính oxy hoá, do vậy ở vùng lãnh thổ khác nhau do tập quán sinh hoạt, thói quen và đặc điểm bệnh tật khác nhau nên tỷ lệ thiếu hụt của enzym này cũng thay đổi. Việt Nam là một trong những nước nằm trong bản đồ thiếu hụt G6PD, với tỷ lệ mắc bệnh tương đối cao. Thiếu G6PD thường có những biểu hiện tan máu gây vàng da, đái huyết sắc tố, thiếu máu, suy thận cấp và trường hợp nặng là tử vong. Bệnh xuất hiện khi tiếp xúc với các tác nhân gây oxy hoá như vi sinh vật, hoá chất (thuốc, thực 1 phẩm). Người bình thường với số lượng và chất lượng G6PD đảm bảo thì khi tiếp xúc với hàm lượng cao chất oxy hoá thì vẫn có khả năng sản xuất ra đủ NADPH để loại bỏ tác động của chúng và sẽ không có những biểu hiện lâm sàng trên. Trưòng hợp thiếu hụt nặng enzym thì hay gây ra những cơn tan máu cấp kể cả khi sử dụng rất ít chất õy hoá, nhưng cũng có trưòng hợp do sử dụng một lượng chất oxy hoá tuy ít nhưng kéo dài sẽ dẫn đến hiện tưọng không đủ enzym để tham gia quá trình khử, đây chính là hiện tượng thiếu enzym thứ phát. Bởi vậy việc phát hiện ra sự thiếu hụt G6PD là rất quan trọng. Qua sự phát hiện bằng những phưong pháp định tính, định lượng chúng ta có thể biết được mức độ suy giảm để có được kế hoạch điều trị cũng như cách thức sinh hoạt hợp lý nhằm hạn chế thấp nhất sự biểu hiện của bệnh. Sử dụng phương pháp bán định lượng tạo vòng Formazan với ưu điểm nhanh chóng, đơn giản sẽ giúp cho chúng ta phát hiện được sự thiếu hụt này một cách đồng loạt và có hiệu quả. Tôi tiến hành làm khoá luận tốt nghiệp về đề tài: "Phát hiện tần suất thiếu hụt G6PD ở dân tộc Tày và dân tộc Nùng bằng phương pháp bán định lượng Formazan." Với hai mục tiêu sau đây: - Đánh giá các điều kiện của phản ứng Formazan. - Sử dụng kỹ thuật bán định lượng Formazan để phát hiện tần suất thiếu hụt G6PD ở dân tộc Tày và Nùng. 2 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1. Những hiểu biết về G6PD: 1.1.Đại cương: G6PD được Warburg và Christan phát hiện năm 1931 ở hồng cầu ngưạ, động vật, vi sinh vật, men bia và hồng cầu người. Năm 1936 G6PD đã được nghiên cứu và tiến hành chiết suất làm sạch nhưng phải 25 năm sau mới thành công. Bước đầu nghiên cứu enzym đã đựơc tìm hiểu về cấu trúc phân tử, dạng có hoạt tính sinh học, các dạng biến thể của enzym. Quá trình tách chiết enzym ra khỏi hồng cầu cũng ngày càng đạt được độ tinh sạch cao hơn, trải qua các bước như điện di, phương pháp sắc ký trao đổi ion, sắc ký ái lực độ tinh sạch của enzym đã đạt đựơc tới 1448,2 lần [2]. Cùng với sự phát triển của sinh học phân tử các dạng đột biến của G6PD ngày càng được phát hiện nhiều, các phương pháp phát hiện thiếu hụt từ định lượng, định tính, bán định lượng, test nhanh ngày càng được phát triển chính xác hơn và áp dụng rộng rãi hơn trong cộng đồng. 1.2.Cấu trúc: Cấu trúc bậc một (monomer): là chuỗi polypeptid gồm 515 acid amin liên kết với nhau bằng những liên kết peptid (nhóm cacboxyl(-C00H) của acid amin trước sẽ liên kết với nhóm amin (-NH 2 ) của acidamin sau bằng cách chung nhau mất đi một phân tử nước). Trọng lượng phân tử của enzym nặng 59265 Daltons. Trình tự acid amin đã được giải mã, tính đồng nhất của trình tự này thay đổi tuỳ theo từng vùng. Vùng có tính đồng nhất cao được cho là vùng có chức năng quan trọng (hay còn gọi là trung tâm hoạt động) của enzym, ở người vùng này thuộc acidamin 188-291. Cấu trúc bậc cao hơn: G6PD có cấu trúc không gian là pôlymer, đó là các dạng dimer, tetramer, hexamer. Dạng cấu trúc không gian mới đảm bảo cho enzym hoạt động được. Trong hồng cầu người thì dạng dimer chiếm ưu thế hơn. Các cấu trúc bậc 1, bậc 3 cao hơn có sự chuyển dạng lẫn nhau tuỳ vào điều kiện của môi trường, như ở pH thấp thì chủ yếu là dạng tetramer, pH gần trung tính thì là dạng dimmer, ở pH trung tính thì hai dạng đó gần bằng nhau. G6PD là một enzym không đồng nhất và đa dạng phân tử, bằng phương pháp hoá sinh WHO đã mô tả có 442 dạng khác nhau [1,3]. Hình 1: cấu trúc bậc bốn của G6PD 1.3.Chức năng: G6PD là một enzym oxy hoá khử xúc tác phản ứng chuyển hoá đầu tiên của chu trình Pentose( chu trình Hexomonophosphate), có ký hiệu quốc tế là: 1.1.49. Chức năng quan trọng của nó là tạo ra NADPH để chống lại các tác nhân oxy hoá và vì vậy trong hồng cầu nó ý nghĩa lớn trong việc bảo vệ màng hồng cầu đươc bền vững, đảm bảo thời gian tồn tại trong máu ngoại vi của hồng cầu là khoảng 120 ngày nhằm đáp ứng nhu cầu ôxy của cơ thể. Chu trình Hexomonophosphate ( pentosephosphat) Sự oxy hóa glucose theo con đường Hexomonophosphate xảy ra ở các mô song song với con đường đương phân song chiếm tỉ lệ thấp hơn nhiều (7%- 10%). Tuy nhiên ở một số tế bào như: hồng cầu, gan, tuyến mỡ, tuyến sữa thời kì hoạt động . Sự thoái hóa glucose theo con đường này chiếm ưu thế xảy ra trong phần dịch bào của tế bào. + G6P được tạo ra qua sự phosphorin hóa Glutathion dưới tác dụng của enzym Hexokinase 4 + G6P bước vào con đường Pentose qua 2 giai đoạn: Giai đọan 1: khử cacboxyl oxy hóa G6P thành pentose phosphat, quá trình này tạo ra NADPH 2 ở một số tổ chức con đường pentose dừng tại đây và phương trình tổng quát là: G6P + 2NADP + + H 2 O --> R5P + CO 2 + 2NADPH + 2H NADPH dùng cho các phản ứng sinh tổng hợp, còn R5P là tiền chất tổng hợp Nucleotid. Giai đoạn 2: biến hóa tiếp tục của pentose phosphat có sự vận chuyển các đơn vị 2C hoặc 3C dưới tác dụng của các enzym tương ứng là fructose 6 phosphat và 1 phân tử phospho glyconat: 6 G6P + 12NADP + + 6 H 2 O --> 5G6P +12 NADPHH + + 6CO 2 + Pi Đây là giai đoạn oxy hóa ở những tổ chức cần nhiều NADPH hơn R5P thì các pentose phosphat được đi vào chu trình biến hóa thành G6P để tiếp tục oxy hóa nhờ sắp xếp lại khung C mà 6 phân tử pentosephosphat trở thành 5 Hexo phosphat. Glucose-6-phosphate dehydrogenase Glucose-6-phosphat 6-phosphogluconolacton Mg 2+ NADP + NAPDH +H + Lactonase 6-phosphogluconat NADP + Mg 2+ 6-phosphogluconate dehydrogenase NADPH+ H + Ribulose-5-phosphat Phosphopentose isomerase D-Ribose-5-phosphat ( 5C) 5 Hình 2: giai đoạn 1 của chu trình Hexomonophosphate 5C 7C 6C 5C 3C 4C 6C 5C 3C 6C 5C 3C 5C 3C 4C 6C 5C 7C 6C Hình 3: giai đoạn 2 của chu trình Hexomonophosphate Glutathion reductase 6 Glucose Glucose 6 phosphate ATP ADP 6phosphogluconat G6PD NADP+ NADPH + +hHHHH Glutathion dạng OXH(G-S-S-G) Glutathion dạng khử (2G-SH) Hexokinase Glutathion peroxydase MetHb Hb Hình 4: Sơ đồ hoạt động của G6PD Thông qua quá trình photphoryl hóa tạo thành G6P qua xúc tác của G6PD để tạo ra sản phẩm 6PG đồng thời tạo thành NADPH từ NADP + là chất cung cấp H + để khử Glutathion dạng oxy hóa thành dạng khử thông qua enzym Glutathion reductase để từ đó trực tiếp bảo vệ hồng cầu chống lại các tác nhân gây oxy hóa ngoài ra còn khử MetHb thành Hb do đó tránh được sự biến tính Hb.Nếu không đủ G6PD thì lượng NADPH không đủ dẫn đến màng hồng cầu diễn ra quá trình peroxy hóa lipit dẫn đến hiện tượng vỡ hồng cầu gây ra tan máu và Hemoglobin sẽ bị kết tủa thành thể Heinz 1.4.Các yếu tố ảnh hưởng đến cấu trúc và hoạt động sinh lý của G6PD: Một số tính chất chung của enzym: Enzym là những chất xúc tác sinh học bản chất là prôtêin do cơ thể sống sinh ra nhờ đó mà các phản ứng hóa học trong cơ thể sống xảy ra với tốc độ rất nhanh trong điều kiện sinh lý bình thường: nhiệt độ, áp suất không cao, pH môi trường gần như trung tính. Có những enzym chỉ là những prôtêin đơn thuần nhưng cũng có những enzym có thành phần cấu tạo gồm có 1 thành phần là prôtêin đơn thuần (Apoenzym) và một thành phần là chất hữu cơ đặc biệt (chất cộng tác cofactor hay coenzym). Ngoài ra còn cần đến sự có mặt của các ion kim loại trong cấu trúc của enzyme, là thành phần để liên kết enzym và cơ chất, liên kết apoenzym và coenzym. Vị trí diễn ra phản ứng của enzym là trung tâm hoạt động có tính chất đặc hiệu đối với từng cơ chất cấu trức và hoạt tính của enzym chịu tác động của rất nhiều yếu tố khác như: nhiệt độ, pH muối kim loại nặng, chất hoạt hóa và ức chế hay các dung môi hữu cơ như rượu, axeton . Mỗi một cơ chất enzym có một Km xác định, đây chính là hằng số Michailis-Menten: là nồng độ của cơ chất (mol/lit) đủ làm cho tốc độ phản ứng enzym đạt tới một nửa tốc độ cực đại 7 (Vmax). Km thể hiện ái lực của enzym tới cơ chất Km càng nhỏ thì ái lực càng lớn và ngược lại. Có 6 loại enzym: enzym oxy hoá -khử (oxidoreductase), enzym vận chuyển nhóm (Transferase), enzym thuỷ phân (Hydrolase), enzym phân cắt (lyase), enzym chuyển đồng phân (Isomerase), enzym tổng hợp (Ligase). G6PD là enzym oxy hoá khử. Những điều kiện ảnh hưởng đến hoạt động của G6PD: + Nhiệt độ: enzym bắt đầu biến tính nhẹ từ 40C, đến 60C thì hoạt tính của enzym còn lại không đáng kể. + Độ pH: pH kiềm nhẹ sẽ làm cho nồng độ dạng dimer nhiêù và enzym sẽ hoạt động tốt nhất, bởi vậy có mặt một lượng nhỏ NaHCO 3 sẽ giúp enzym phản ứng tốt hơn. pH tối ưu của G6PD là 8,0 [2] + Nồng độ của của các chất nội bào như cơ chất, cofactor, chất tạo thành: tuân theo quy luật của các phản ứng hoá học khác. Sự trùng hợp của enzym từ dạng monomer sang dạng dimer và các cấu trúc bậc cao hơn cần có sự có mặt của NAPD+, chất vừa là cơ chất vừa là cofator. Mỗi dimer có 2 vị trí gắn NADP+, đó là NADP+ xúc tác, gắn lỏng lẻo và dễ dàng bị khử thành NADPH, còn lại là NAPD+ chức năng gắn chặt chẽ hơn cần thiết để duy trì cấu trúc hoạt động của enzym. +Khi ở ngoài cơ thể thì để đảm bảo cho enzym hoạt động được tốt thì vấn đề bảo quản là hết sức quan trọng G6PD là một enzym mất nhạy cảm, không bền vững, nhưng nếu hồng cầu được rửa và bảo quản nguyên vẹn trong dung dịch NaCl 0,9% ở nhiệt dộ lạnh (4 0 C) ngay sau 24h thì hoạt độ enzym chưa bị thay đổi. Trái lại chỉ bảo quản theo tiêu chuẩn máu thì sau 24h sẽ giảm 17% hoạt tính. +Ion Mg 2+ là ion đặc hiệu cho hồng cầu người, với nồng độ 0,01 mol/l thì hoạt độ enzym là 100%[2], theo nghiên cứu thì ion kim loại này đóng vai trò tạo phức hợp giữa enzym và cơ chất. 8 1.5 Cơ sở di truyền học của G6PD Gen quy định cấu trúc của G6PD nằm trên nhánh dài, locus q28 của nhiễm sắc thể X (vùng 2, băng 8) không có alen tương ứng trên Y. Vùng 2 là vùng mang thông tin di truyền mã hóa khá nhiều tính trạng khác như: nhìn màu, hemophilia A. Gen G6PD gồm có 13 exon và 12 intron. Dài khoảng 18,5 kilobases. Chức năng của từng exon khác nhau, và kích thước của các exon mã hóa thay đổi rất nhiều từ 38 - 236 bp. Trong đó exon 1 không mã hoá [12], exon 6 mã hoá sản phẩm là nơi gắn cơ chất G6P [6]. mARN G6PD gồm 2269 ribonucleotid, m RNA của G6PD có một đoạn đầu 3' không mã hóa dài 655 bp và đoạn đầu 5' không mã hóa dài 69 bp. Gen G6PD có sự điều hòa và kiểm soát chặt chẽ. Vùng promotor của G6PD kéo dài khoảng 300 nucleotid giầu GC và nhiều GC không bị methyl hóa. 2. Bệnh lý thiếu hụt G6PD. 2.1.Cơ chế bệnh sinh và cơ sở di truyền học: 2.1.1. Cơ chế bệnh sinh : Giảm G6PD sẽ giảm lượng Glutathione dạng khử không đủ để khử HbH 2 O 2 tạo thành Met Hemoglobin và Choleglobin do đó Hemoglobin bị biến tính và kết tủa thành thể Heinz [2][9]. Cơ chất tạo ra là NADPH còn có tác dụng bảo vệ nhóm -SH (nhóm chức năng hoạt động) của enzym phosphoglyceral-dehydrogenase, đây là 1 enzym quan trọng trong chuỗi phản ứng xúc tác NAD + thành NADH (một chất khử quan trọng chống lại sự ôxy hóa của hồng cầu [2]). Ngoài ra giảm NADPH dẫn đến hồng cầu phải sử dụng nhiều NADH 2 làm giảm lượng ATP cần thiết và lượng Na + trong tế bào bị ứ đọng, nước vào trong hồng cầu nhiều cộng với sự bền vững của màng hồng cầu bị yếu dẫn đến hồng cầu bị hủy hoại. 2.1.2 Bệnh lý gen học của thiếu hụt G6PD: 9 Giảm G6PD là bệnh di truyền gen hoặc nằm trên nhiễm sắc thể X không alen tương ứng trên Y do vậy tỷ lệ bị bệnh gặp ở nam giới là nhiều hơn và thường nặng hơn. Nam giới XY: giả sử a là gen quy định tính trạng giảm G6PD sẽ có kiểu gen là X a Y: ở nam giới chỉ cần người alen a ở X là có biểu hiện bị bệnh. Nữ giới XX: có 3 dạng X A X A : bình thường. X A X a : có thể bình thường hoặc thiếu hụt G6PD từ nhẹ đến trung bình, hiếm khi thiếu hụt nặng (trừ phi ở vùng trung tâm hoạt động). Nguyên nhân là do sự bất hoạt nhiễm sắc thể từ trong bào thai, trong quá trình phát triển của phôi tạo ra thể khảm giữa dòng tế bào lành và dòng tế bào bệnh, tỷ lệ giữa 2 loại tế bào này thay đổi rất lớn: tế bào giảm G6PD chiếm từ 1% -> 90%. X a X a : biểu hiện kiểu hình thiếu nặng nhưng tần suất gặp kiểu gen này rất nhỏ. Gen cấu trúc đột biến sẽ bây biến đổi về mặt chất lượng ngược lại gen điều hòa bị đột biến gây thiếu G6PD về mặt số lượng, nhưng biến đổi ở intron không gây biến đổi cấu trúc và sản lượng G6PD. Hoạt tính G6PD phụ thuộc vào cả chất lượng và số lượng. Ngày nay đã phát hiện được hơn 140 dạng đột biến khác nhau đại diện cho 442 biến thể khác nhau có tính chất đặc hiệu và phân biệt bằng các chỉ số sinh hóa. Do 1 axit amin có thể được quy định bởi người bộ ba nên có khi 2 biến đổi khác nhau trên AND chỉ gây nên một loại đột biến. Ví dụ như: - Dạng đột biến Aaches: đột biến nucleotid 1089C -> G - Dạng đột biến Loma Linda: 1089C -> A hai loại này đều làm thay đổi acid amin 363 Asn -> Lys. Dựa vào hoạt độ của enzym trong hồng cầu và những bệnh nhân lâm sàng của chúng, WHO đã chia các biến thể của thiếu hụt G6PD ra làm 4 lớp: + Lớp 1: thiếu enzym nặng với biểu hiện thiếu máu tan máu, hồng cầu hình không trò người mạn tính. 10 [...]... 3.3 Tn sut thiu ht G6PD dõn tc Ty v dõn tc Nựng Bng 3: T l thiu enzym G6PD dõn tc Ty v Nựng Dõn tc Ty Nựng 2 dõn tc N 130 71 201 9% 8% 7% 6% 5% 4% 3% 2% 1% 0% Thiu hon ton 7/130 (5,385%) 6/71 (8,451%) 13/201 (6,467%) Bỏn thiu 9/130 (6,923%) 1/71 (1,14%) 10/201 (4,975%) Tng 12,308% 9,861% 11,442% 8.45% 6.92% 6.47% 5.39% 5% THIếu Bán THIếu 1.41% Tày Nùng Chung Biu 3: T l thiu enzym G6PD dõn tc Ty v... ca enzym G6PD, t ú to ra NADPH l mt cht kh tham gia phn ng chuyn MTT thnh Formazan, chuyn t mu vng sang mu xanh thm( hỡnh minh ho cho nguyờn lý xin xem k thut Formazan) - Trng hp khụng thiu G6PD lng NAPDH to ra thỡ sn phm to ra cú mu xanh thm ca Formazan c kt qu (-) - Trng hp thiu G6PD thỡ phn ng xy ra khụng hon ton, sn phm to ra cú mu xanh nht, c kt qu (+) : bỏn thiu - Trng hp khụng cú G6PD : phn... tỏch hng cu ri tỏch enzym G6PD Xỏc nh hot G6PD do s thay i ph hp th ti bc súng 340 mm do coenzym NAPDH sinh ra trong quỏ trỡnh phn ng Hot G6 PD t l thun vi hp th ca NADPH S minh ha G G6P + NADP 6PD Glucorate 6 P + NADPH +H + Tớnh kt qu: A: thay i mt quang hc + Hot G6PD (UI/ml = A/phỳt x 30476 + Hot G6PD (UI/1012HC) = A/phỳt x 30476 Sn lng hng cu trong 1 lớt + Hot G6PD UI/gHb = A/phỳt x 30476... bin, t ú bit c thiu ht G6PD Tuy nhiờn k thut ny ũi hi phi cú trang thit b hin i do ú giỏ thnh cao 20 3.2 K thut bỏn nh lng to vũng Formazan C s khoa hc G6P G6P (C cht) (C cht) G6 PD G6 PD NADP++ NADP (dng OXH) (dng OXH) Formazan Formazan (mu xanh) (mu xanh) 6 GP 6 GP (sn phm) (sn phm) NAD PH NAD PH (Dng kh) (Dng kh) PMS PMS MTT MTT (mu vng) (mu vng) Nguyờn tc nhn nh kt qu: sn phm Formazan ca phn ng to... nhõn thiu G6PD Vonledam ó phỏt hin 94% hng cu hot G6PD bng khụng v 6% hng cu cũn li thỡ hot ch cũn 5% so vi bỡnh thng 2.5 Chn oỏn - Dch t v tin s: tr bcỏc bbnh nhim trựng, non ,thiu thỏnggia 16 ỡnh ó cú tr b vng da,hay trong vựng st rột,vựng cú t l thiu ht G6PD, hay sau khi s dng mt s thuc v thc phm cú tớnh oxy hoỏ - Lõm sng - Cn lõm sng - Chn oỏn nguyờn nhõn: C th nh do thiu ht G6PD, nh lng G6PD bng... Thiu G6PD nng (hot enzym < 10% so vi bỡnh thng + Lp 3: Thiu G6PD va n nh (Hot t 10 - 60% so vi bỡnh thng) + Lp 4: thiu rt nh hoc khụng thiu G6PD (60 - 100%) Tuy vy nhng s phõn bit ny l khụng rừ rng gia cỏc phõn lp Lp 1, lp 2 l gõy nguy him nht vỡ thng cú tan mỏu cp din Hin nay Vit Nam ó tỡm thy c cỏc dng t bin khỏc nhau, trong ú cú mt dng khụng lm nh hng n s mó húa acid amin trong cu trỳc G6PD ú... loi mỏu thiu G6PD 3 K thut phỏt hin thiu ht G6PD 17 3.1.Cỏc mc phỏt hin thiu ht G6PD: Phng phỏp nh tớnh: Phng phỏp phỏt quang (Beutler v Mitchelt-1968), phng phỏp c tin hnh bng cỏch ly mỏu t u ngún tay sau ú dựng thuc chng ụng Trn u mỏu ó chng ụng bng dung dch ó chun b sn gm NADP v G6P, sau ú nh vo giy Whatman s 1 vo thi im 0 phỳt, 5 v 10 phỳt khụ, c kt qu di ỏnh sỏng ốn cc tớm Nu hm lng G6PD thỡ cỏc... thng oxi húa cho xu hng oxi húa t phỏt nhng bnh nhõn ny thng thy Hemoglobin niu trong vi ngy V sau phỏt hin c ngi do cú gim G6PD Gim G6PD nh thng bnh sinh lý nh hn do ch nhng hng cu gi (do khi lng enzyen G6PD hng cu non) bnh nhõn nng thỡ c nhng hng cu non cng khụng cú hm lng G6PD, khụng cú kh nng t bo v trc cỏc tỏc nhõn oxi húa gõy nờn hin thng tan mỏu nng dn n ỏi ra huyt sc t cú th gõy viờm thn... dung dch v mỏu s phỏt quang v khụng phỏt quang khi khụng lng G6PD õy l mt phng phỏp ó c u ban quc t v cỏc tiờu chun trong huyt hc ngh s dng trong phỏt hin sng lc cỏc i tng thiu men G6PD Tuy vy phng phỏp ny cú giỏ thnh cao do cn phi cú cỏc thit b chuyờn dng nh ốn chiu tia t ngoi [12], ngoi ra phng phỏp ny khú phỏt hin trng hp thiu men G6PD n d hp t [6] Phng phỏp nhanh ca AkiraHirono-1998: l phng... cú t l thiu ht G6PD khỏc nhau tựy tng vựng v tựy tng dõn tc Theo nghiờn cu ca tỏc gi on Hnh Nhõn thiu G6PD hng cu, cú t 11 l cao ti mt s vựng St Rột Kim Bụi (34,1%), Mai Chõu (20,4%), Nh Xuõn (19,7%), t l thiu li thng thp ni khụng cú lu hnh bnh st rột dõn tc Mng (t l cao nht 31%) tip n l dõn tc Th (19,3% dõn tc Th, dõn tc Thỏi 19,3%) rt thp dõn tc kinh 0,5% Hỡnh 5: phõn b thiu ht G6PD trờn th gii . loạt và có hiệu quả. Tôi tiến hành làm khoá luận tốt nghiệp về đề tài: " ;Phát hiện tần suất thiếu hụt G6PD ở dân tộc Tày và dân tộc Nùng bằng phương pháp. loại máu thiếu G6PD. 3. Kỹ thuật phát hiện thiếu hụt G6PD 17 3.1.Các mức độ phát hiện thiếu hụt G6PD: Phương pháp định tính: Phương pháp phát quang