Đang tải... (xem toàn văn)
MÔN PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỀ TÀI : PHƯƠNG PHÁP ELISA MÔN PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỀ TÀI : PHƯƠNG PHÁP ELISA MÔN PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỀ TÀI : PHƯƠNG PHÁP ELISA MÔN PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỀ TÀI : PHƯƠNG PHÁP ELISA MÔN PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỀ TÀI : PHƯƠNG PHÁP ELISA MÔN PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỀ TÀI : PHƯƠNG PHÁP ELISA MÔN PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỀ TÀI : PHƯƠNG PHÁP ELISA MÔN PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỀ TÀI : PHƯƠNG PHÁP ELISA MÔN PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỀ TÀI : PHƯƠNG PHÁP ELISA MÔN PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỀ TÀI : PHƯƠNG PHÁP ELISA MÔN PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỀ TÀI : PHƯƠNG PHÁP ELISA MÔN PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỀ TÀI : PHƯƠNG PHÁP ELISA MÔN PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỀ TÀI : PHƯƠNG PHÁP ELISA MÔN PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỀ TÀI : PHƯƠNG PHÁP ELISA MÔN PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỀ TÀI : PHƯƠNG PHÁP ELISA
L/O/G/O BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐH CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM MÔN PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM GVHD: NGUYỄN THỊ MỸ LỆ ĐỀ TÀI : PHƯƠNG PHÁP ELISA L/O/G/O www.themegallery.com NHÓM 11 1. PHẠM NGỌC QUẾ HƯƠNG 2005100240 2. NGUYỄN THỊ MAI PHỤNG 2005100267 4. NGUYỄN BER LY 2005100152 5. TRƯƠNG NGỌC QUÍ 2005100036 6. HỒ VĨNH HƯNG 2005100101 3. NGUYỄN ÁI LINH 2005100012 L/O/G/O www.themegallery.com NỘI DUNG PHƯƠNG PHÁP ELISA ĐỊNH NGHĨA MỘT SỐ KHÁI NIỆM NGUYÊN TẮC PHƯƠNG PHÁP ELISA CÁC PHƯƠNG PHÁP ELISA ỨNG DỤNG VÍ DỤ THỰC TIỄN L/O/G/O www.themegallery.com ĐỊNH NGHĨA ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay ) Phương pháp hấp thụ miễn dịch dùng enzyme hay EIA (Enzyme ImmunoAssay) là một kỹ thuật sinh hóa để phát hiện kháng thể hay kháng nguyên trong mẫu xét nghiệm. L/O/G/O www.themegallery.com ĐỊNH NGHĨA - Ví dụ: Enzyme peroxidase phản ứng với một số cơ chất nhất định như: Tetramethylbenzidine hay 3-ethylbenzthiazoline- 6-sulphonic acid sẽ phát màu. Màu sinh ra từ các phản ứng này có thể được sử dụng làm tín hiệu nhận biết (tín hiệu chỉ thị). L/O/G/O www.themegallery.com MỘT SỐ KHÁI NIỆM Kháng nguyên: là những chất có khả năng huy động hệ miễn dịch tiết ra kháng thể đặc hiệu, kháng nguyên bao gồm: protein lạ, acid nucleic, một số lipid và polysaccharide. Kháng thể: thành phần gramma globulin trong các protein máu. Kháng thể là những protein hòa tan do các tế bào B hay tương bào tiết ra để đáp ứng với 1 kháng nguyên và chúng có thể gắn đặc hiệu với kháng nguyên . L/O/G/O www.themegallery.com NGUYÊN TẮC - Dựa trên sự kết hợp đặc hiệu giữa kháng nguyên và kháng thể, trong đó kháng thể được gắn với một enzyme. - Sử dụng kháng thể đơn dòng phủ lên bề mặt những đĩa giếng. Nếu có sự hiện diện của kháng nguyên trong mẫu, kháng nguyên sẽ tạo phức hợp với kháng thể cố định trên giếng và kháng thể tự do có gắn enzyme tạo thành 1 phức hợp kép. L/O/G/O www.themegallery.com NGUYÊN TẮC - Khi bổ sung cơ chất đặc hiệu vào enzyme xúc tác phản ứng thủy phân cơ chất để tạo thành các sản phẩm có màu hay phát sáng. - Sự xuất hiện màu chứng tỏ đã xảy ra phản ứng đặc hiệu giữa kháng thể và kháng nguyên và thông qua cường độ màu mà biết được nồng độ kháng nguyên hay kháng thể cần phát hiện. L/O/G/O www.themegallery.com NGUYÊN TẮC L/O/G/O www.themegallery.com CÁC PHƯƠNG PHÁP ELISA ELISA CẠNH TRANH 4 ELISA TRỰC TIẾP 1 ELISA GIÁN TIẾP 2 SANDWICH ELISA 3 [...]... www.themegallery.com PHƯƠNG PHÁP ELISA GIÁN TIẾP - Phương pháp này khác với ELISA trực tiếp ở chỗ kháng thể bắt kháng nguyên không được gắn với enzyme mà nó là mục tiêu gắn đặc hiệu của một kháng thể khác ( kháng thể này mới là kháng thể được gắn với enzyme) L/O/G/O www.themegallery.com PHƯƠNG PHÁP ELISA GIÁN TIẾP Bước 1: Cho kháng nguyên vào đĩa Bước 2: Đem ủ, rửa Bước 3: Thêm kháng thể Bước 4: Ủ, rửa Bước 5: Bổ...www.themegallery.com PHƯƠNG PHÁP ELISA TRỰC TIẾP - Đây là dạng đơn giản nhất của phương pháp ELISA Trong đó kháng nguyên cần phát hiện sẽ được gắn trực tiếp lên bề mặt giá thể và sẽ được phát hiện bằng một kháng thể duy nhất (kháng thể này đã được gắn với enzyme) L/O/G/O www.themegallery.com PHƯƠNG PHÁP ELISA TRỰC TIẾP Bước 1: Cho kháng nguyên vào đĩa Bước 2: Đem ủ đĩa chứa kháng nguyên Bước 3: Rửa đĩa Bước 4: Thêm... Rửa đĩa Bước 4: Thêm kháng thể có gắn với enzyme Bước 5: Rửa Bước 6: Ủ ở 37 0C Bước 7: Thêm cơ chất Bước 8: Ủ ở 370C Bước 9: Đọc kết quả L/O/G/O www.themegallery.com PHƯƠNG PHÁP ELISA TRỰC TIẾP - Ưu điểm : đơn giản nhất - Nhược điểm : Độ đặc hiệu bị giới hạn vì thường thì kháng nguyên có ít nhất là 2 epitope (trình duyệt kháng nguyên) mà phương pháp này chỉ sử dụng 1 kháng thể gắn vào một epitope Phải... SANDWICH ELISA Đây là một dạng ELISA được sử dụng phổ biến nhất trong thực tiễn do nó có phản ứng mạnh và nhạy kết quả thí nghiệm được đánh giá thông qua sự kết hợp của hai loại kháng thể : kháng thể bắt (capture antibodies) và kháng thể phát hiện (detection antibodies) Kỹ thuật này chia làm 2 dạng: Sandwich Elisa trực tiếp, Sandwich Elisa gián tiếp L/O/G/O www.themegallery.com SANDWICH ELISA Phương pháp. .. thể Bước 4: Ủ, rửa Bước 5: Bổ sung kháng thể có gắn enzyme Bước 6: Ủ, rửa Bước 7: Thêm cơ chất tạo màu Bước 8: Ủ, đọc kết quả L/O/G/O www.themegallery.com PHƯƠNG PHÁP ELISA GIÁN TIẾP - Ưu điểm : kháng thể gắn với enzyme có thể sử dụng để đánh dấu cho nhiều loại kháng nguyên nên tiện lợi và kinh tế hơn , dễ dàng thương mại hóa - Nhược điểm : độ đặc hiệu của từng kháng huyết thanh là khác nhau Điều này... ng/ml) - Rẻ tiền ít tốn sinh phẩm, hóa chất,số lượng mẫu lớn - Có thể tiến hành đồng thời nhiều mẫu L/O/G/O www.themegallery.com ƯU ĐIỂM VÀ NHƯỢC ĐIỂM Nhược điểm - Đòi hỏi thời gian (có kết quả sau 5h) - Yêu cầu kỹ thuật phân tích cao - Trang bị kĩ thuật hiện đại chi phí lớn L/O/G/O www.themegallery.com ỨNG DỤNG CỦA ELISA Trong thực phẩm - Phát hiện độc tố trong tảo - Phát hiện vi khuẩn E.coli, Salmonella,... aureus,sán lá gan… trong thực phẩm - Phát hiện chất chloramphenicol (chất không được phép có trong tôm, cá và các sản phẩm thuỷ sản khác) L/O/G/O www.themegallery.com ỨNG DỤNG CỦA ELISA Trong nông nghiệp - Chuẩn đoán bệnh Tristeza (tác nhân gây bệnh héo rũ) trên cây cam quýt - Phát hiện kháng thể chống Mycoplasma hyopnewmonia(MH) ở heo L/O/G/O www.themegallery.com ỨNG DỤNG CỦA ELISA Trong y học - Là... trong các kĩ thuật xét nghiệm HIV nhằm phát hiện kháng nguyên p24 - Ứng dụng để phát hiện bệnh A cantonensis (bệnh vi m màng não) do loại giun kí sinh ở phổi chuột gây ra L/O/G/O www.themegallery.com VÍ DỤ THỰC TIỄN Chế phẩm HIV UNIFORM II Plus O phát hiện nhiễm HIV Nguyên tắc Là phản ứng ELISA “Sandwich“ - Kháng nguyên gắn trên giếng là các protein vỏ gp160 của HIV-1 và ANT70 (nhóm O) gp36 của HIV2... trong mẫu nghiên cứu và bao gồm các bước cơ bản sau (quy trình có thể được thay đổi trong nhiều trường hợp ): Bước 1 Chuẩn bị bề mặt (microtiter) có gắn KT Bước 2.Khóa tất cả những vị trí gắn kết không đặc hiệu trên bề mặt Bước 3 Phủ mẫu chứa KN cần xác định đem ủ L/O/G/O www.themegallery.com SANDWICH ELISA Bước 4 Rửa đĩa, kháng KN không được gắn kết sẽ bị rửa trôi Bước 5 Thêm các KT đặc hiệu cho KN cần... KT sơ cấp ở bước 5) L/O/G/O www.themegallery.com SANDWICH ELISA Bước 7 Rửa đĩa, phần không gắn kết sẽ bị rửa trôi Bước 8 Thêm cơ chất Enzym sẽ biến đổi cơ chất tạo màu, phát quang hay tín hiệu hóa điện Bước 9 Đo cường độ ánh sáng, tín hiệu huỳnh quang, tín hiệu điện hóa qua đó xác định sự có mặt và hàm lượng KT L/O/G/O www.themegallery.com ELISA CẠNH TRANH Bước 1 "Ủ" Kháng Thể không được đánh dấu . PHÁP ELISA ELISA CẠNH TRANH 4 ELISA TRỰC TIẾP 1 ELISA GIÁN TIẾP 2 SANDWICH ELISA 3 L/O/G/O www.themegallery.com PHƯƠNG PHÁP ELISA TRỰC TIẾP - Đây là dạng đơn giản nhất của phương pháp ELISA. DUNG PHƯƠNG PHÁP ELISA ĐỊNH NGHĨA MỘT SỐ KHÁI NIỆM NGUYÊN TẮC PHƯƠNG PHÁP ELISA CÁC PHƯƠNG PHÁP ELISA ỨNG DỤNG VÍ DỤ THỰC TIỄN L/O/G/O www.themegallery.com ĐỊNH NGHĨA ELISA (Enzyme-Linked. antibodies) . Kỹ thuật này chia làm 2 dạng: Sandwich Elisa trực tiếp, Sandwich Elisa gián tiếp. L/O/G/O www.themegallery.com SANDWICH ELISA Bước 1. Chuẩn bị bề mặt (microtiter) có gắn KT. Bước