Đang tải... (xem toàn văn)
MÔN HỌC: PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN MÔN HỌC: PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN MÔN HỌC: PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN MÔN HỌC: PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN MÔN HỌC: PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN MÔN HỌC: PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN MÔN HỌC: PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN MÔN HỌC: PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN MÔN HỌC: PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN MÔN HỌC: PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN MÔN HỌC: PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN MÔN HỌC: PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN MÔN HỌC: PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN MÔN HỌC: PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN
LOGO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM Nhóm 03 ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN MÔN HỌC: PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM GVHD: Nguyễn Thị Mỹ Lệ LOGO THÀNH VIÊN NHÓM 1. Nguyễn Thảo Hiền 2. Võ Thị Kim Ngọc 3. Phạm Thị Cẩm Viện 4. Ông Thị Diễm 5. Phan Thị Thảo Trinh 6. Đỗ Thị Bé Em ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN LOGO NỘI DUNG GiỚI THIỆU SƠ LƯỢC E.COLI www.themegallery.com PHƯƠNG PHÁP MPN & QUI TRÌNH THỰC HIỆN LOGO GIỚI THIỆU VỀ E.COLI E.coli là trực khuẩn Gram âm. Kích thước trung bình từ 2 đến 3µm x 0,5µm; trong những điều kiện không thích hợp (ví dụ như trong môi trường có kháng sinh) vi khuẩn có thể rất dài như sợi chỉ. Rất ít chủng E.coli có vỏ, nhưng hầu hết có lông và có khả năng di động. Escherichia coli do Theodore Escherich (1857-1911), một nhà vi khuẩn học người Đức, phát hiện lần đầu tiên năm 1885. Chi Escherichia thuộc họ vi khuẩn đường ruột. Trong các loài thuộc chi này, E.coli được chọn làm điển hình và có vai trò quan trọng nhất trong y học. ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN LOGO GIỚI THIỆU VỀ E.COLI ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN LOGO GIỚI THIỆU VỀ E.COLI Tính chất hóa sinh E.coli có khả năng lên men nhiều loại đường và có sinh hơi. Hầu hết E.coli đều lên men lactose và sinh hơi, trừ E.coli trơ (inactive) không hoặc lên men rất chậm. E.coli có khả năng sinh indole. Không sinh H 2 S. Không sử dụng được nguồn carbon của citrate trong môi trường Simmons. Thử nghiệm VP (Voges Proskauer) sau 24 giờ âm tính, sau 48 giờ có thể dương tính. ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN LOGO GIỚI THIỆU VỀ E.COLI Tính chất nuôi cấy E.coli phát triển dễ dàng trên các môi trường nuôi cấy thông thường. Một số có thể phát triển trên môi trường tổng hợp rất nghèo chất dinh dưỡng. Hiếu, kỵ khí tùy ý. Có thể phát triển ở nhiệt độ từ 5-50 0 C. Nhiệt độ thích hợp xung quanh 37 0 C. Trên môi trường thạch thường, sau khoảng 8 đến 10 giờ, dung kính lúp đã có thể quan sát được khuẩn lạc. Trên môi trường phân lập, tùy theo chất chỉ thị màu, E.coli có khuẩn lạc màu vàng (như trên thạch lactose) hoặc màu đỏ (như trên thạch MacConkey) ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN LOGO GIỚI THIỆU VỀ E.COLI THẠCH MACONKEY THẠCH MACONKEY ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN LOGO GIỚI THIỆU VỀ E.COLI Khả năng gây bệnh E.coli là 1 vi khuẩn gây bệnh quan trọng, nó đứng đầu trong các vi khuẩn gây tiêu chảy, viêm đường tiết niệu, viêm đường mật; đứng hàng đầu trong các căn nguyên gây nhiễm khuẩn huyết, là căn nguyên thường gặp trong viêm màng não, viêm phổi ở trẻ mới sinh. E.coli còn gặp trong nhiễm trùng ngoại khoa, nhiễm trùng trong bỏng. ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN LOGO PHƯƠNG PHÁP MPN & QUY TRÌNH THỰC HIỆN ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN [...]... 370C, 24 giờ ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN LOGO QUY TRÌNH THỰC HIỆN Bước 7: Chọn khuẩn lạc E Coli giả định trên EMB/ Endo cấy vào TSA/ BHI Ủ qua đêm ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN LOGO QUY TRÌNH THỰC HIỆN Bước 8: Cấy chuyền từ môi trường TSA/ BHI vào các môi trường thử nghiệm sinh hóa Trypton Broth, MR-VP , 0 SC ủ 44,5 ± 0,2 C, 24 giờ ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN LOGO THỬ... nếu dung dịch môi trường có màu đỏ vi sinh vật có thể tạo ra Acetoin + âm tính nếu dung dịch môi trường không đổi màu đỏ không có vi sinh vật có thể tạo ra Acetoin ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN LOGO THỬ PHẢN ỨNG SINH HOÁ Phản ứng VP (Voges Proskauer) ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN LOGO THỬ PHẢN ỨNG SINH HOÁ Phản ứng Citrat Nguyên tắc: Những vi sinh vật có khả năng sử dụng muối... indole + âm tính nếu dung dịch môi trường không đổi màu không có sự hiện diện của indole ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN LOGO THỬ PHẢN ỨNG SINH HOÁ Phản ứng INDOLE ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN LOGO THỬ PHẢN ỨNG SINH HOÁ Phản ứng MR (metyl red) - Dùng để phân biệt những vi sinh vật có khả năng sản sinh và duy trì các sản phẩm biến dưỡng có tính acid, bền với môi + trường, chỉ thị Methyl... PHẢN ỨNG SINH HOÁ Kết quả: Ống nghiệm cho kết quả EC (+), và khuẩn lạc E Coli giả định trên môi trường EMB cho kết quả thử nghiệm IMViC (++ ) là ống nghiệm có chứa E Coli (+) Từ số lượng các ống có E Coli (+) ở mỗi độ pha loãng của mẫu tra bảng MPN để tính ra mật độ vi sinh vật trong mẫu và biểu diễn dưới dạng trị số MPN/ g hay MPN/ ml ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN LOGO ỨNG DỤNG ĐỊNH LƯỢNG E... không đổi màu ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN LOGO THỬ PHẢN ỨNG SINH HOÁ Phản ứng Citrat LOGO KẾT LUẬN Sau 4 thử nghiệm kiểm tra E.coli: • • • Thử nghiệm khả năng sinh Indole : dương tính(+) Thử nghiệm khả năng sinh Acid : dương tính(+) Thử nghiệm Voges – Proskauer (VP) : âm tính (-) • Thử nghiệm khả năng biến dưỡng Citrate: âm tính (-) -> Kết luận vi sinh vật kiểm tra là E.coli (IMViC + + - -)... MR-VP , 0 SC ủ 44,5 ± 0,2 C, 24 giờ ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN LOGO THỬ PHẢN ỨNG SINH HOÁ ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN LOGO THỬ PHẢN ỨNG SINH HOÁ Phản ứng INDOL Nguyên tắc: - Dùng để phân biệt những vi sinh vật có khả năng phân hủy Tryptophane tạo Indole do có enzyme Tryptophanase - 0 Thực hiện: cấy khuẩn lạc nghi ngờ vào ống nghiệm chứa 5ml Trypton broth, ủ 37 C trong 24h -... vẫn màu cam thì kết luận kết quả âm tính LOGO THỬ PHẢN ỨNG SINH HOÁ Phản ứng MR ( metyl red ) ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN LOGO THỬ PHẢN ỨNG SINH HOÁ Thử nghiệm không sinh Acetoin ( thử nghiệm Voges – Proskauer) (VP) Nguyên tắc: - Phản ứng thử VP dùng để phân biệt các vi sinh vật có khả năng sinh Acetoin ( môi trường trung tính) - Cho vào ống nghiệm chứa môi trường MRVP khoảng 0,6ml dung... màu để định tính sự hiện diện là các ống dương tính (+) Ghi nhận số ống nghiệm dương tính ở mỗi nồng độ pha loãng và dựa vào bảng MPN để suy ra số lượng nhóm vi sinh vật tương ứng hiện diện trong 1g (hoặc 1ml) mẫu ban đầu ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN LOGO QUY TRÌNH THỰC HIỆN Bước 1: Chuẩn bị dịch đồng nhất hoặc pha loãng để có các nồng độ pha loãng là 10-1 , 10-2 , 10-3 Bước 2: Chuyển 1ml dung...PHƯƠNG PHÁP MPN Nguyên tắc Phương pháp MPN ( Most Probable Number) dựa vào nguyên tắc mẫu được pha loãng thành một dãy thập phân (hai nồng độ kế tiếp khác nhau 10 lần); 3 hoặc 5 mẫu có độ pha loãng thập phân liên tiếp được ủ trong ống nghiệm chứa môi trường thích hợp có ống bẫy khí Durham Theo dõi sự sinh hơi và đổi màu để định tính sự hiện diện là các ống dương... tại địa bàn thành phố Hồ Chí Minh, các loại nước đóng chai và không đóng chai được cho vào bao nilon vô trùng, sau đó mang về phòng thí nghiệm Tiến hành phân tích định lượng theo qui trình phương pháp MPN www.themegallery.com LOGO ỨNG DỤNG ĐỊNH LƯỢNG E COLI TRONG NƯỚC GiẢI KHÁT Bước 1: Chuẩn bị dịch đồng nhất hoặc pha loãng để có các nồng độ pha loãng là 10 -1 , 10-2 , 10-3 Bước 2: Chuyển 1ml dung . Thị Bé Em ĐỊNH LƯỢNG E. COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN LOGO NỘI DUNG GiỚI THIỆU SƠ LƯỢC E. COLI www.themegallery.com PHƯƠNG PHÁP MPN & QUI TRÌNH THỰC HIỆN LOGO GIỚI THIỆU VỀ E. COLI E. coli là. THIỆU VỀ E. COLI Tính chất hóa sinh E. coli có khả năng lên men nhiều loại đường và có sinh hơi. Hầu hết E. coli đều lên men lactose và sinh hơi, trừ E. coli trơ (inactive) không hoặc lên men rất. chi này, E. coli được chọn làm điển hình và có vai trò quan trọng nhất trong y học. ĐỊNH LƯỢNG E. COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN LOGO GIỚI THIỆU VỀ E. COLI ĐỊNH LƯỢNG E. COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN LOGO