Đang tải... (xem toàn văn)
ĐẶT VẤN ĐỀ Dược chất quang hoạt là một trong những quan tâm chính của ngành công nghiệp dược trong hai thập kỷ qua. Tác dụng sinh học của thuốc đôi khi chỉ thể hiện ở một trong những dạng đồng phân quang học riêng lẻ. Trong một vài trường hợp, các tác dụng phụ không mong muốn hoặc thậm chí độc tính có thể xảy ra với những đồng phân quang học không có hoạt tính. Điển hình như [29]: thalidomid ở dạng hỗn hợp racemic nhưng chỉ có dạng (R)-thalidomid có tác dụng an thần, còn (S)-thalidomid không có tác dụng an thần nhưng lại gây quái thai. Cả hai đối quang cũng có thể có tác dụng sinh học giống nhau nhưng tỉ lệ hoạt tính rất khác nhau. Chẳng hạn, các chế phẩm chứa (S)-amlodipin, (S)omeprazol, levofloxacin, levocetirizin… có hoạt tính mạnh hơn dạ ng racemic và đối quang tương ứng [12], [29], [55], [83]. Để tránh những tác dụng không mong muốn có thể có của một dược phẩm quang hoạt, thuốc dạng đồng phân quang học tinh khiết có hoạt tính trị liệu nên được đưa ra thị trường. Tuy nhiên, một số lượng lớn các loại thuốc chứa dược chất quang hoạt vẫn còn trên thị trường ở dạng racemic. Do đó, nhu cầu để phát triển công nghệ cho phân tích và tách riêng đồng phân quang học của các thuốc racemic là rất lớn. Đây cũng là nguyên nhân làm cho các cơ quan quản lý ở các nước Châu Âu, Mỹ và Nhật yêu cầu ngành công nghiệp dược phải đưa ra thị trường các thuốc mới ở dạng đồng phân quang học riêng lẻ [29], [57]. Điều này dẫn đến sự phát triển đáng kể trong nỗ lực nghiên cứu tổng hợp các chất đối quang mới, tìm kiếm những tác nhân, tối ưu hóa qui trình tổng hợp để cho sản phẩm đồng phân chọn lọc đối quang tinh khiết. Bên cạnh đó, công tác tiêu chuẩn hóa nguồn nguyên liệu sau tổng hợp là vô cùng quan trọng để sản xuất thuốc có chất lượng tốt, hạn chế tối đa những tác dụng phụ cho người sử dụng. Vì thế, việc nghiên cứu một cách hệ thống các đồng phân quang học riêng lẻ và xác định độ tinh khiết quang học để cải thiện việc sử dụng thuốc an toàn là cần thiết. Nghiên cứu sản xuất thuốc mới là một trong những nhiệm vụ vô cùng quan trọng của ngành Dược. Dẫn xuất phthlalazinon đã được nhiều nhóm tác giả trên thế giới phát hiện hoạt tính ức chế chọn lọc enzym phosphodiesterase 4, có tác dụng kháng viêm dùng trong điều trị bệnh hen suyễn và viêm khớp dạng thấp [18] [34], [43], [48], [51], [65], [69], [70], [71], [72], [73], [81]. Các công trình nghiên cứu đã công bố tác dụng sinh học của dẫn xuất cis-phthlalazinon mạnh hơn dẫn xuất trans-phthlalazinon và hỗn hợp racemic rất nhiều [18], [72]. Trong một số công trình nghiên cứu của chúng tôi trước đây cũng đã tổng hợp các dẫn xuất quang hoạt cis-phthalazinon mới và đã được công bố trên tạp chí ngoài nước [18]. Trên cơ sở đó, với mục tiêu tiếp tục nghiên cứu tổng hợp, ứng dụng các kỹ thuật phân tích hiện đại trong phân tách đồng phân quang học đểø góp phần đưa ra các dẫn xuất quang hoạt mớ i có tác dụng sinh học, đề tài “Tổng hợp và tiêu chuẩn hóa các dẫn xuất quang hoạt cis-N-alkyl phthalazinon có tác dụng kháng viê m”, được thực hiện gồm các nội dung cụ thể như sau: - Tổng hợp ở qui mô phòng thí nghiệm các dẫn xuất quang hoạt cis-N-alkyl phthalazinon, cụ thể là các dẫn xuất quang hoạt N-n-heptyl và N-benzyl của cis(); cis-(+)-4-(3,4-dimethoxyphenyl)tetrahydrophthalazinon và hexahydrophthalazinon có độ tinh khiết quang học đối quang ee > 90%. - Thử sơ bộ tác dụng kháng viêm in vivo của các dẫn xuất quang hoạt cis-N-alkyl phthalazinon tổng hợp. - Xây dựng tiêu chuẩn kỹ thuật cho các dẫn xuất quang hoạt cis-N-alkyl phthalazinon tổng hợp.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CHƯƠNG NGỌC NÃI TỔNG HP VÀ TIÊU CHUẨN HÓA CÁC DẪN XUẤT QUANG HOẠT CIS-N-ALKYL PHTHALAZINON CÓ TÁC DỤNG KHÁNG VIÊM LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯC HỌC TP Hồ Chí Minh - Năm 2015 i BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CHƯƠNG NGỌC NÃI TỔNG HP VÀ TIÊU CHUẨN HÓA CÁC DẪN XUẤT QUANG HOẠT CIS-N-ALKYL PHTHALAZINON CÓ TÁC DỤNG KHÁNG VIÊM Chuyên ngành: Kiểm Nghiệm Thuốc Độc Chất Mã số: 62720410 LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯC HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS TS ĐẶNG VĂN TỊNH PGS TS NGUYỄN ĐỨC TUẤN TP Hồ Chí Minh - Năm 2015 ii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết luận án trung thực chưa công bố công trình khác Chương Ngọc Nãi iii MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa i Lời cam đoan ii Muïc luïc iii Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt v Danh muïc bảng vii Danh mục hình x Danh mục sơ đồ xiii ĐẶT VẤN ÑEÀ CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIEÄU 1.1 Đồng phân quang học 1.2 Enzym phosphodiesterase mô hình gây viêm thực nghiệm 10 1.3 Dẫn xuất phthalazinon 15 CHƯƠNG ĐỐI TƯNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 31 2.1 Đối tượng nghiên cứu 31 2.2 Nguyên liệu, hóa chất trang thiết bị 33 2.3 Phương pháp nghiên cứu 35 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 45 3.1 Tổng hợp dẫn xuất cis-N-alkyl phthalazinon 45 3.2 Xác định độ tinh khiết quang học phương pháp HPLC với pha tónh bất đối 71 3.3 Thử tác dụng kháng viêm in vivo 85 3.4 Xây dựng tiêu chuẩn kỹ thuật dẫn xuất quang hoạt 96 CHƯƠNG BÀN LUẬN 103 4.1 Dẫn xuất cis-N-alkyl phthalazinon 103 iv 4.2 Tổng hợp dẫn xuất cis-N-alkyl phthalazinon 105 4.3 Xaùc định độ tinh khiết quang học phương pháp HPLC với pha tónh bất đối 111 4.4 Thử tác dụng kháng viêm in vivo 116 4.5 Xaây dựng tiêu chuẩn kỹ thuật dẫn xuất quang hoạt 123 KẾT LUẬN 126 KIẾN NGHỊ 129 Danh mục công trình liên quan đến luận án Tài liệu tham khảo Phụ lục v DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt cAMP Cyclic adenosine monophosphate Adenosin monophosphat voøng cGMP Cyclic guanosine monophosphate Guanosin monophosphat vòng C Concentration Nồng độ CE Capillary electrophoresis Điện di mao quản COPD Chronic Obstructive Pulmonary Bệnh phổi tắc nghẽn Disease mạn tính Correlation spectroscopy Phổ tương quan COSY proton-proton CTCT Công thức cấu tạo CTPT Công thức phân tử DĐVN Dược điển Việt Nam DMF Dimethylformamide Dimethylformamid DMSO-d6 Deuterated Dimethylsulfoxide Dimethylsulfoxid deutri hóa e Giới hạn tin cậy ee Enantiomeric excess Độ dôi quang học ESI Electron Spray Ionization Ion hóa phun điện tử GC Gas chromatography Sắc ký khí HMBC Heteronuclear multiple bond Phổ tương tác dị nhân correlation qua nhiều nối vi HPLC cao Heteronuclear single quantum Phổ tương tác dị nhân cohenrence IC50 Sắc ký lỏng hiệu chromatography HSQC High performance liquid qua lượng tử Half maximal inhibitory Nồng độ ức chế 50% concentration ICH Hội nghị quốc tế hòa Harmonization IR International Conference on hợp Infrared Hồng ngoại KLPT Khối lượng phân tử LOD Limit of detection Giới hạn phát LOQ Limit of quantification Giới hạn định lượng MS Mass spectrum Phổ khối NMR Nuclear magnetic resonance Cộng hưởng từ hạt nhân NOESY Nuclear overhauser effect Phổ hiệu ứng hạt nhân spectrocopy overhauser PDE Phosphodiesterase Phosphodiesterase RSD Relative standard deviation Độ lệch chuẩn tương đối SD Standard deviation Độ lệch chuẩn SEM Standard error of mean Sai số chuẩn trung bình SKLM Thin layer chromatography Sắc ký lớp mỏng TB Trung bình tonc Nhiệt độ nóng chảy tt Thể tích vii DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Một số tác nhân bất đối sử dụng phổ biến Bảng 1.2 Hoạt tính ức chế enzym PDE dẫn xuaát 4-(3,4-dimethoxy phenyl)-2H-phthalazinon 17 Bảng 1.3 Dữ liệu phân giaûi acid cis-cyclohex(a)en -ceto 20 Baûng 1.4 Hoạt tính ức chế enzym PDE dẫn xuất 4-aryl hexahydrophthalazinon tetrahydrophthalazinon 21 Bảng 1.5 Hoạt tính ức chế enzym PDE tác dụng kháng viêm in vivo dẫn xuất N-H tetrahydrophthalazinon 22 Baûng 2.1 Danh mục hợp chất nghiên cứu 31 Bảng 2.2 Các điều kiện sắc ký khảo sát 38 Bảng 3.1 Khảo sát hệ dung môi kết tinh lại hợp chất sau 46 Bảng 3.2 Khảo sát thời gian kết tinh lại hợp chất n-hexan - ethyl acetat (1:1) 46 Bảng 3.3 So sánh khả tách dẫn xuất 8a, 8b, 10a, 10b hai tỉ lệ dung môi n-hexan - isopropanol (90:10) (95:5) với tốc độ dòng 0,5 ml/phút 72 Bảng 3.4 So sánh khả tách dẫn xuất 8a, 8b, 10a, 10b hai tỉ lệ dung môi n-hexan - isopropanol (90:10) (95:5) với tốc độ dòng ml/phút 73 Bảng 3.5 Khả tách dẫn xuất 8a, 8b, 10a, 10b tỉ lệ dung môi n-hexan isopropanol (90:10) với tốc độ dòng 0,8 ml/phút 74 Bảng 3.6 So sánh hệ số đối xứng pic dẫn xuất 8a, 10a với nồng độ mẫu khác 75 Bảng 3.7 Hiệu phân tách dẫn xuất 8a, 8b, 10a, 10b thêm diethylamin vào pha động 75 viii Bảng 3.8 Hiệu phân tách dẫn xuất 8a, 8b, 10a, 10b thêm triethylamin vào pha động 76 Bảng 3.9 Khảo sát dung môi pha mẫu cho dẫn xuất 8a, 8b, 10a, 10b 77 Bảng 3.10 Khả tách đồng phân dẫn xuất 7a, 7b, 9a, 9b với tốc độ dòng 0,8 ml/phút 78 Baûng 3.11 Khả tách đồng phân dẫn xuất 7a, 7b, 9a, 9b với tốc độ dòng 1,5 ml/phút 78 Bảng 3.12 Khả tách đồng phân dẫn xuất 7a, 7b, 9a, 9b với tốc độ dòng ml/phút 79 Baûng 3.13 Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống 80 Bảng 3.14 Kết khảo sát khoảng tuyến tính từ 80% - 120% nồng độ đo 83 Bảng 3.15 Kết khảo sát khoảng tuyến tính từ giới hạn định lượng - 10% nồng độ đo 84 Baûng 3.16 Kết khảo sát độ xác độ 84 Bảng 3.17 Độ sưng phù chân chuột lô thử nghiệm cis-N-alkyl hexahydrophthalazinon 86 Bảng 3.18 Độ sưng phù chân chuột lô thử nghiệm cis-N-alkyl tetrahydrophthalazinon 91 Baûng 3.19 Điểm chảy dẫn xuất 7b, 8b, 9b, 10b 96 Bảng 3.20 Số sóng hấp thu đặc trưng dẫn xuất 7b, 8b, 9b, 10b 96 Bảng 3.21 Góc quay cực riêng dẫn xuất 7b, 8b, 9b, 10b 97 Bảng 3.22 Tỉ lệ tạp đồng phân quang học dẫn xuất 7b, 8b, 9b, 10b tính theo phần trăm diện tích pic 97 Bảng 3.23 Tỉû lệ tạp chất liên quan dẫn xuất 7b, 8b, 9b, 10b tính theo phần trăm diện tích pic 98 ix Bảng 3.24 Kết xác định dung môi tồn dư dẫn xuất 7b, 8b, 9b, 10b 98 Bảng 3.25 Kết xác định hàm lượng nước dẫn xuất 7b, 8b, 9b, 10b 98 Bảng 3.26 Độ tinh khiết quang học theo sắc ký dẫn xuất 7b 99 Bảng 3.27 Độ tinh khiết quang học theo sắc ký dẫn xuất 8b 99 Bảng 3.28 Độ tinh khiết quang học theo sắc ký dẫn xuất 9b 100 Bảng 3.29 Độ tinh khiết quang học theo sắc ký dẫn xuất 10b 100 Bảng 3.30 Kết xác định độ tinh khiết quang học dẫn xuaát 7b, 8b, 9b, 10b 101 Bảng 3.31 Mức chất lượng đề nghị dẫn xuất quang hoạt 7b, 8b, 9b, 10b 101 PL-79 Phụ lục 22-4 Phiếu kiểm nghiệm dẫn xuất 8b PL-80 PL-81 PL-82 PL-83 PL-84 Phụ lục 22-5 Tiêu chuẩn kỹ thuật dẫn xuất 9b PL-85 PL-86 Phụ lục 22-6 Phiếu kiểm nghiệm dẫn xuất 9b PL-87 PL-88 PL-89 PL-90 PL-91 Phụ lục 22-7 Tiêu chuẩn kỹ thuật dẫn xuất 10b PL-92 PL-93 Phụ lục 22-8 Phiếu kiểm nghiệm dẫn xuất 10b ... phần đưa dẫn xuất quang hoạt có tác dụng sinh học, đề tài ? ?Tổng hợp tiêu chuẩn hóa dẫn xuất quang hoạt cis-N-alkyl phthalazinon có tác dụng kháng viêm? ??, thực gồm nội dung cụ thể sau: - Tổng hợp qui... khiết quang học đối quang ee > 90% - Thử sơ tác dụng kháng viêm in vivo dẫn xuất quang hoạt cis-N-alkyl phthalazinon tổng hợp - Xây dựng tiêu chuẩn kỹ thuật cho dẫn xuất quang hoạt cis-N-alkyl phthalazinon. .. Tổng hợp dẫn xuất cis-N-alkyl phthalazinon Tổng hợp dẫn xuất cis-N-alkyl phthalazinon dạng racemic theo qui trình mô tả sơ đồ 2.1 Tổng hợp dẫn xuất quang hoạt theo qui trình mô tả sơ đồ 2.2 Các