1 NGHIÊN CỨU ĐÔNG LẠNH TINH DỊCH DÊ VÀ THỤ TINH NHÂN TẠO CHO D£ Đỗ Văn Thu ** , Đinh Văn Bình * Chu Đức Tụy * Nguyễn Tuấn Anh ** * Trung tâm Nghiên cứư Dê và Thỏ Sơn Tây ** Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam Abstract : In Vietnam the studying on Artificul insumenation (AI) are pay attention by evry one now. Technology of AI by using strow semen is very nesseseries for crossed breeding and maitend genetic of goat breeds in Vietnam. There for up to now these technologies have not study and apply well in Vietnam. The results of it are only 30-35%. So studying on technologies of AI have been done in Vietnam. The results of studied from Junuary to December 2006 in Goat and Rabbit research Center showed that: Activities of sperm is more than 35%; Using hot water is in 37 0 C with time is 60 secon for prepearing semen ; Apply method mating with using one peple keeping goat; Duration mating for goat is 8 hours ; That will be get very good resul (66.6% interest) 1. Đặt vấn ñề Trên thế giới từ ñầu thế kỷ XX, việc ứng dụng thụ tinh nhân tạo (TTNT ) vào chăn nuôi dê phát triển mạnh, nhất là ở các nước Nga, Mỹ, Anh, Pháp, Canada và Hà Lan. Cho ñến nay như Pháp trên 90% ñàn dê ñược phối TTNT bằng tinh ñông lạnh cọng rạ. Việt Nam nghiên cứu TTNT cho dê ñang là vấn ñề ñược nhiều người quan tâm, kỹ thuật TTNT cho dê bằng tinh cọng rạ tinh ñông lạnh là nhu cầu cần thiết trong công tác lai tạo giống dê. Công nghệ ñông lạnh lưu giữ tinh trùng lâu dài trong nitơ lỏng (-196 o C) góp phần khai thác triệt ñể tiềm năng sinh sản của ñực giống, nhất là ñực giống cao sản, mở rộng phạm vi thụ tinh, góp phần lưu giữ quỹ gen và tính ña dạng sinh học các giống dê Việt Nam, giúp cho xuất nhập khẩu và thương mại giống dễ dàng, tránh cận huyết và dịch bệnh, tránh ñược sự chênh lệch về khối lượng cơ thể, ñem lại hiệu quả kinh tế cao cho chăn nuôi. Mỗi ñực giống tốt là một nguồn gen quý góp phần vào việc sản xuất hàng nghìn cá thể cho ñời sau, vì vậy nó là nguồn nguyên liệu phục vụ cho việc sản xuất tinh ñông lạnh lưu gữ qua nhiều thế hệ. Tuy vậy vấn ñề này chưa ñược ñầu tư nghiên cứu áp dụng ở nước ta. Tỷ lệ thụ thai do TTNT bằng tinh ñông lạnh mới chỉ ñạt 30-35% vì vậy nghiên cứu các biện pháp kỹ thuật nâng cao kết quả TTNT cho dê bằng tinh ñông lạnh cọng rạ là nhu cầu bức thiết của sản xuất ñặc biệt trong công tác lưu giữ nguồn gene ñể lai tạo giống dê ở nước ta Với lý do trên chúng tôi ñã thực hiện ñề tài “ Nghiên cứu ñông lạnh tinh dịch dê và thụ tinh nhân tạocho dª” 2. Nội dung và phương pháp nghiên cứu a. Đối tượng nghiên cứu Thí nghiệm ñược tiến hành trên các giống dê (Barbari, Jamnapari, Boar, Saamen, 2 Beetal, Alpine, Bách thảo). Dê thí nghiệm khỏe mạnh, sinh sản bình thường, nuôI theo khẩu phần chăn nuôI của Trung tâm Nghiên cứu Dê và Thỏ Sơn Tây b. a ñiểm nghiên cứu Trung tâm nghiên cứu Dê và Thỏ Sơn Tây, Trung tâm tinh ñông lạnh Moncada, Viện Công nghệ sinh học c. Thời gian nghiên cứu Thời gian nghiên cứu: 2006 - 2008 d. Nội dung nghiên cứu Nghiên cứu công nghệ ñông lạnh tinh dịch dê. Nghiên cứu thụ tinh nhân tạo cho dê. e. Phương pháp nghiên cứu Tinh dịch pha loãng ñược chuyển vào tủ bảo ôn và làm lạnh ñến 4 o C trong khoảng thời gian 1-8 giờ. Nạp tinh vào cọng rạ loại 0,25ml, hàn ñầu, in ký mã hiệu bằng máy tự ñộng (Automatic Filling and sealing machine with inkjet printer MPP113). Đông lạnh tinh bằng máy ñông lạnh Minitub, chuyển cọng rạ vào Nitơ lỏng –196 o C. Tinh dịch ñông lạnh bảo tồn ở – 196 o C, tinh ñông lạnh ñược giải ñông trong nước ấm 37 0 C với thời gian 60 giây. Đánh giá hoạt lực tinh trùng tiến thẳng, tỷ lệ tinh trùng sống và tỷ lệ tinh trùng kỳ hình sau ñông lạnh bằng kính hiển vi có gắn camera (vidiomicrography) hoặc kính hiển vi Olympus với ñộ phóng ñại 400 – 1000 lần. Thụ tinh nhân tạo cho dê cáI ñộng dục tự nhiên, sử dụng súng bắn của Pháp. Phối lặp, hai lần phối cách nhâu 8 – 12 giờ. Số liệu ñược xử lý theo chương trình phần mềm Excel 5.0 3. Kết quả thảo luận Nghiên cứu công nghệ ñông lạnh tinh dê Bảng 1. Ảnh hưởng của thời gian từ khi lấy tinh dịch ñến khi pha loãng lên phẩm chất tinh dịch trong thời gian bảo tồn Hoạt lực tinh trùng tiến thẳng: % Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình: % Tỷ lệ tinh trùng sống: % Thời gian bảo tồn tinh dịch (giờ) Pha ngay sau lấy tinh Pha sau lấy tinh 10 phút Pha sau lấy tinh 20 phút Pha ngay sau lấy tinh Pha sau lấy tinh 10 phút Pha sau lấy tinh 20 phút Pha ngay sau lấy tinh Pha sau lấy tinh 10 phút Pha sau lấy tinh 20 phút 0giờ 70,69 70,37 58,84 18,74 18,94 18,53 84,58 83,64 73,53 24 giờ 66,68 64,63 54,48 20,47 21,24 21,79 80,93 76,84 68,38 48 giờ 63,48 56,47 46,73 21,34 23,57 22,46 73,84 71,83 62,48 Bảng 1 cho thấy: thời gian từ khi lấy tinh dịch ñến khi pha loãng với môi trường có ảnh hưởng ý nghĩa lên hoạt lực tiến thẳng và tỷ lệ sống của tinh trùng trong thời gian bảo tồn, nhưng ảnh hưởng không có ý nghĩa lên tỷ lệ kỳ hình của tinh trùng. Pha tinh dịch với môi trường ngay sau lấy tinh cho hoạt lực 3 tiến thẳng của tinh trùng trong thời gian bảo tồn cao hơn không có ý nghĩa so với pha tinh dịch với môi trường sau lấy tinh dịch 10 phút. Hoạt lực tiến thẳng của tinh trùng trong trường hợp pha tinh dịch với môi trường sau lấy tinh 20 phút thấp hơn có ý nghĩa so với pha tinh dịch ngay sau lấy tinh và sau lấy tinh 10 phút. Phân tích kết quả, cho thấy pha tinh dịch ngay sau lấy tinh cho kết quả tốt nhất về phẩm chất tinh dịch trong thời gian bảo tồn. Bảng 2. Ảnh hưởng của tỷ lệ lòng ñổ trướng gà trong môi trường ®Õn phẩm chất tinh dịch Hoạt lực tiến thẳng của tinh trùng (%) Tỷ lệ kỳ hình của tinh trùng (%) Tỷ lệ sống của tinh trùng (%) Thời gian bảo tồn Tris- F- 14 E Tris- F- 20 E Tris- F- 14 E Tris- F- 20 E Tris- F- 14 E Tris- F- 20 E 0 giờ 75,65 74,84 15,62 16,32 87,73 86,72 24 giờ 71,37 67,86 16,82 17,52 83,37 84,73 48 giờ 66,68 60,36 18,14 18,62 80,59 80,15 Bảng 2 cho thấy: tỷ lệ lòng ñỏ trứng gà 14% và 20% (theo thể tích) trong môi trường pha loãng tinh dịch ảnh hưởng không có ý nghĩa lên hoạt lực tiến thẳng của tinh trùng tại thời ñiểm 0 giờ. Sau 48 giờ bảo tồn tinh dịch pha loãng với môi trường có 14% lòng ñỏ trứng gà, hoạt lực tiến thẳng của tinh trùng cao hơn có ý nghĩa so với môi trường có 20% lòng ñỏ. Tỷ lệ 14% và 20% lòng ñỏ trứng gà trong môi trường pha loãng tinh dịch, ảnh hưởng không có ý nghĩa lên tỷ lệ sống của tinh trùng trong thời gian bảo tồn từ 0 giờ ñến 48 giờ. Tinh dịch pha với môi trương có 14% lòng ñỏ trứng gà cho tỷ lệ kỳ hình của tinh trùng thấp hơn không có ý nghĩa so với pha tinh dịch trong môi trường có 20%. Qua phân tích kết quả, cho thấy nên sử dụng 14% (v/v) lòng ñỏ trứng gà trong môi trường ñông lạnh tinh dịch. Bảng 3. Ảnh hưởng của một số loại ñường trong môi trường lên phẩm chất tinh dịch Hoạt lực tiến thẳng (%) của tinh trùng Tỷ lệ kỳ hình (%) của tinh trùng Tỷ lệ sống (%) của tinh trùng Thời gian bảo tồn (giờ) Tris - F Tris - G Tris – raf Tris - F Tris - G Tris – raf Tris - F Tris - G Tris – raf 0 77,15 76,82 76,56 16,84 16,93 16,47 88,73 88,85 87,85 24 74,49 71,49 70,37 17,94 18,84 17,85 86,49 87,84 85,35 48 70,37 66,27 61,37 19,73 18,85 19,83 82,84 81,85 75,84 Các loại ñường fructose, glucose, raffinose ảnh hưởng không có ý nghĩa lên hoạt lực tiến thẳng của tinh trùng ở thời ñiểm 0 giờ. Sau 48 giờ bảo tồn, tinh dịch pha loãng với môi trường có thành phần fructose hoặc glucose có hoạt lực tiến thẳng của tinh trùng cao hơn có ý nghĩa so với môi trường có thành phần là ñường raffinose. Môi trường có ñường fructose ảnh hưởng lên hoạt lực tiến thẳng của tinh trùng tốt hơn so với môi trường có thành phần ñường glucose. Các loại ñường trong môi trường pha loãng tinh dịch ảnh hưởng không có ý nghĩa lên tỷ lệ sống của tinh trùng trong thơì gian bảo tồn, tuy nhiên tinh dịch pha loãng với môi trường có ñường fructose hoặc glucose có tỷ lệ sống của tinh trùng cao hơn so với môi trường có raffinose. Các loại ñường fructose, glucose, raffinose ảnh hưởng không có ý nghĩa lên tỷ lệ kỳ hình của tinh trùng trong quá trình bảo tồn. Với kết quả nhận ñược, chúng tôi thấy sử dụng ñường fructose hoặc glucose trong môi trường pha loãng tinh dịch cho phẩm chất tinh dịch tốt hơn sử dụng môi trường có ñường raffinose. 4 Bảng 4. ảnh hưởng của glycerol và dimethyl sulfoxide lên chất lượng tinh dịch Hoạt lực tiến thẳng (%) của tinh trùng Tỷ lệ kỳ hình (%) của tinh trùng Tỷ lệ sống của tinh trùng (%) Chất bảo vệ lạnh Trước ñông lạnh Sau ñông lạnh Trước ñông lạnh Sau ñông lạnh Trước ñông lạnh Sau ñông lạnh Glycerol 75,25 39,37 19,58 24,74 84,63 67,53 DMSO 74,59 37,37 18,97 23,53 81,64 60,58 Glycerol + DMSO 70,46 30,94 19,35 23,82 74,73 50,93 Hoạt lực tiến thẳng của tinh trùng sau ñông lạnh, trong trường hợp môi trường có bổ sung glycerol hoặc dimethyl sulfoxide cao hơn có ý nghĩa so với bổ sung glycerol kết hợp với dimethyl sulfoxide. Hoạt lực tiến thẳng của tinh trùng sau ñông lạnh trong môi trường bổ sung glycerol cao hơn không có ý nghĩa so với bổ sung dimethyl sulfoxide. Tỷ lệ kỳ hình của tinh trùng sau ñông lạnh khác nhau không có ý nghĩa dưới ảnh hưởng của các chất bảo vệ lạnh. Glycerol có ảnh hưởng tích cực lên tỷ lệ sống của tinh trùng sau ñông lạnh. Tỷ lệ sống của tinh trùng sau ñông lạnh cao hơn có ý nghĩa trong trường hợp môi trường có glycerol so với môi trường có dimethyl sulfoxide và môi trường có glycerol kết hợp với dimethyl sulfoxide. Bảng 5. Ảnh hưởng của nồng ñộ glycerol trong môi trường lên phẩm chất tinh ñông lạnh Hoạt lực tinh trùng tiến thẳng (%) Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình (%) Tỷ lệ tinh trùng sống (%) Nồng ñộ glycerol Trước ñông lạnh Sau ñông lạnh Trước ñông lạnh Sau ñông lạnh Trước ñông lạnh Sau ñông lạnh Glycerol 4% 75,69 30,72 22,36 27,48 82,75 57,57 Glycerol 6,5% 74,62 40,75 21,57 26,84 83,59 65,15 Glycerol 7% 75,47 40,94 22,84 27,01 84,47 64,57 Glycerol 8% 74,65 38,15 22,57 27,81 81,39 58,58 Glycerol 10% 68,75 26,64 21,47 24,5 78,38 54,28 Bổ sung glycerol vào môi trường ñông lạnh với nồng ñộ 6,5%, 7% hoặc 8% thu ñược hoạt lực tiến thẳng của tinh trùng sau giải ñông cao hơn có ý nghĩa so với bổ sung glycerol nồng ñộ 4% hoặc 10%. Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình sau ñông lạnh khác nhau không có ý nghĩa trong các trường hợp bổ sung glycerol với các nồng ñộ 4%, 6,5%, 7%, 8%. Tỷ lệ sống của tinh trùng sau ñông lạnh cao hơn có ý nghĩa trong trường hợp bổ sung glycerol với nồng ñộ 6,5 hoặc 7% so với nồng ñộ 4%, 8% hoặc 10%. Bổ sung glycerol vào môi trường vói nồng ñộ 6,5% hoặc 7% có ảnh hưởng tốt lên sức sống của tinh trùng trong quá trình ñông lạnh và bảo tồn ở -196 0 C. 5 Bảng 6. Ảnh hưởng của thời ñiểm bổ sung glycerol lên chất lượng tinh dịch ñông lạnh Hoạt lực tinh trùng tiến thẳng (%) Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình (%) Tỷ lệ tinh trùng sống (%) Thời ñiểm bổ sung glycerol Trước ñông lạnh Sau ñông lạnh Trước ñông lạnh Sau ñông lạnh Trước ñông lạnh Sau ñông lạnh 0 giờ 75,17 28,47 19,15 25,58 84,62 56,52 1 giờ 74,36 32,36 20,48 24,3 82 83,85 67,85 2 giờ 76,95 40,57 19,83 25,83 85,84 65,85 3 giờ 73,84 36,83 20,52 24,36 85,72 56,75 4 giờ 74,87 33,48 20,62 25,95 83,95 58,73 Bổ sung phần môi trường có glycerol vào tinh dịch ở thời ñiểm sau 2 giờ ủ tinh pha loãng ở 5 0 C, cho hoạt lực tiến thẳng của tinh trùng sau ñông lạnh cao hơn có ý nghĩa so với với bổ sung môi trường có glycerol ở thời ñiểm 0, 1, 3 hoặc 4 giờ. Tỷ lệ kỳ hình của tinh trùng trước và sau ñông lạnh khác nhau không có ý nghĩa ở các thời ñiểm bổ sung môi trường có glycerol. Tỷ lệ sống của tinh trùng cao hơn có ý nghĩa khi bổ sung môi trường có glycerol ở thời ñiểm 1 hoặc 2 giờ so với thời ñiểm bổ sung 0, 3 hoặc 4 giờ. Với kết quả nhận ñược cho thấy bổ sung phần môi trường có glycerol ở thời ñiểm sau 2 giờ ủ tinh dịch ở 5 0 C cho phẩm chất tinh dịch sau ñông lạnh tốt hơn so với bổ sung ở thời ñiểm 0, 1, 3 hoặc 4 giờ. Bảng 7. Ảnh hưởng của thời gian ủ tinh dịch trước ñông lạnh lên phẩm chất tinh dịch ñông lạnh Hoạt lực tinh trùng tiến thẳng (%) Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình (%) Tỷ lệ tinh trùng sống (%) Thời gian ủ tinh dịch trước ñông lạnh Trước ñông lạnh Sau ñông lạnh Trước ñông lạnh Sau ñông lạnh Trước ñông lạnh Sau ñông lạnh 02 69,16 27,65 21,74 27,64 78,85 51,85 04 70,27 33,95 20,28 25,851 80,46 69,05 06 69,38 39,58 21,85 24,58 79,95 71,63 08 70,57 37,73 20,47 24,15 78,38 70,05 Thời gian ủ tinh dịch trước ñông lạnh ảnh hưởng có ý nghĩa lên hoạt lực tiến thẳng của tinh trùng sau ñông lạnh. Thời gian ủ tinh dịch trước ñông lạnh 4 giờ, 6 giờ hoặc 8 giờ cho hoạt lực tiến thẳng của tinh trùng sau ñông lạnh cao hơn có ý nghĩa so với thời gian 2 giờ ủ tinh dịch trước ñông lạnh. Thời gian ủ tinh dịch trước ñông lạnh 6 giờ cho hoạt lực tiến thẳng của tinh trùng sau ñông lạnh khác nhau không có ý nghĩa so với thời gian ủ tinh dịch 8 giờ. Thời gian ủ tinh dịch trước ñông lạnh ảnh hưởng không có ý nghĩa lên tỷ lệ kỳ hình của tinh trùng sau ñông lạnh. Thời gian ủ tinh dịch trước ñông lạnh ảnh hưởng có ý nghĩa lên tỷ lệ sống của tinh trùng sau ñông lạnh. Tỷ lệ sống của tinh trùng sau ñông lạnh cao hơn có ý nghĩa trong trường hợp ủ tinh dịch 4 giờ, 6 giờ hoặc 8 giờ so với ủ tinh dịch trong khoảng thời gian 2 giờ. Tỷ lệ sống của tinh trùng khác nhau không có ý nghĩa khi ủ tinh dịch ở các khoảng thời gian 4 giờ, 6 giờ hoặc 8 giờ. Với kết quả thí nghiệm nhận ñược, cho thấy thời gian tối thiểu ủ tinh dịch trước ñông lạnh là 4 giờ. 6 Bảng 8. Ảnh hưởng của phương pháp ñông lạnh lên phẩm chất tinh dịch ñông lạnh Chỉ tiêu theo dõi Trước ñông lạnh (5 0 C) Sau ñông lạnh (-130 0 C) Sau ñông lạnh (-165 0 C) Hoạt lực tinh trùng tiến thẳng (%) 75,25 33,73 39,58 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình (%) 20,56 26,58 25,52 Tỷ lệ tinh trùng sống (%) 83,59 53,14 69,15 Hai chương trình ñông lạnh tinh dịch ñược thực hiện: làm lạnh tinh cọng rạ ñến -130 0 C hoặc - 165 0 C sau ñó nhúng vào nitơ lỏng -196 0 C. Kết quả nhận ñược cho thấy: phương pháp ñông lạnh tinh dịch ảnh hưởng có ý nghĩa thống kê lên phẩm chất tinh dịch sau ñông lạnh. Phương pháp hạ nhiệt ñộ tinh dịch xuống -165 0 C có tác dụng duy trì hoạt lực tiến thẳng của tinh trùng sau ñông lạnh cao hơn có ý nghĩa so với hoạt lực tiến thẳng của tinh trùng sau ñông lạnh khi giảm nhiệt ñộ tinh dịch xuống -130 0 C trước khi nhúng tinh cọng rạ vào nitơ lỏng -196 0 C. Tỷ lệ sống của tinh trùng sau ñông lạnh cao hơn có ý ghĩa khi hạ nhiệt ñộ tinh dịch xuống -165 0 C so với trường hợp hạ nhiệt ñộ tinh dịch xuống -130 0 C. Phương pháp ñông lạnh tinh dịch ảnh hưởng không có ý nghĩa lên tỷ lệ kỳ hình của tinh trùng sau ñông lạnh. Bảng 9. Kết quả sản xuất tinh dê ñông lạnh Giống dê Tổng số cọng rạ S ố cọng rạ có ho ạt lực tinh trùng 25 – 30% S ố cọng rạ có ho ạt lực tinh trùng 31 – 55% Ho ạt lực tinh trùng (%) sau ñông lạnh Số lư ợng tinh trùng/ cọng rạ Al 1518 377 1141 38,43 85,98 Ba 980 87 893 42,86 62,74 Be 1366 78 1288 39,09 71,38 Bo 1736 284 1452 39,74 74,61 Bt 224 0 224 41,43 68,22 Ju 327 39 288 38,33 73,42 Sa 190 46 144 35,00 64,24 Tổng số 6341 911 5430 39,68 71,50 Al: Alpine Ba: Barbary Be: Beetal Bo: Boer Bt: Bách thảo Ju: Jumnapari Sa: Saanen Với quy trình ñược xây dựng trên cơ sở khoa học ñã thu ñược, chúng tôi ñã tiến hành sản xuất thử nghiệm tinh ñông lạnh của 7 giống dê hiện ñang nuôi tại Trung tâm nghiên cứu dê và thỏ Sơn Tây. Tông số tinh cọng rạ sản xuất ñược 6341 cọng, trong ñó có 5430 cọng có hoạt lực tinh trùng sau giải ñông 31 – 55%. Số lượng tinh trùng có trong cọng rạ 62,74 – 85,98 triệu. Kết quả theo dõi cho thấy chất lượng tinh ñông lạnh ổn ñịnh trong quá trình bảo tồn. Thụ tinh nhân tạo bằng tinh dê ñông lạnh Tinh dê ñông lạnh dạng cọng rạ thuộc các ñực giống Boer, Saamen, Alpine, Beetal, Barbari Barbari, sau 1 - 24 tháng bảo tồn trong nitơ lỏng -196 o C, tinh trùng có hoạt lực sau giải ñông 35 - 50%. Tinh ñông lạnh ñược sử dụng phối giống cho 50 dê cái sinh sản, thuộc các giống Beetal, Boer, Barbari, Alpine, Saanen, nuôi tại Trung tâm nghiên cứu dê và thỏ Sơn Tây. Dê cái có ñộ tuổi từ 2 - 4 năm, ñã ñẻ 2 - 7 lứa, dê cái thí nghiệm ñộng dục tự nhiên. Dùng ñực giống phát hiện dê cái ñộng dục ñể xác ñịnh thời ñiểm phối giống thích hợp. Phối tinh 2 lần, lần phối thứ hai cách lần phối thứ nhất 8 - 12 giờ. Tinh ñông 7 lạnh ñược giải ñông trong ống nghiệm khô ở bếp cách thuỷ 37 o C, thời gian giải ñông 10 giây, dùng súng bắn tinh, bắn tinh dịch vào sâu trong tử cung (khoảng 1 - 1,5 cm), thời gian từ khi giải ñông tinh dịch ñến khi kết thúc dẫn tinh khoảng 5 - 15 phút. Số cọng tinh dùng cho một lần phối giống 2 cọng. Kết quả phối giống và sinh trưởng của dê con do phối bằng tinh cọng rạ trình bày ở bảng sau: Bảng 10: Ảnh hưởng của hoạt lực tinh trùng sau ñông lạnh ñến tỷ lệ thụ thai STT Hoạt lực tiến thẳng của tinh trùng sau ñông lạnh (%) (n = 12) Tổng số con phối (con) Số con chửa (con) Tỷ lệ chửa % Lô 1 < 30 4 1 25,00 c Lô 2 30 7 3 42,85 b Lô 3 35 6 3 50,00 ab Lô 4 40 8 5 62,50 a TB 44,83 Kết quả ở bảng 10 cho thấy ở lô 1 có hoạt lực tiến thẳng của tinh trùng sau ñông lạnh nhỏ hơn 30 % có tỷ lệ chửa ñạt thấp nhất 25%, tiếp theo là lô 2 có tỷ lệ chửa 42,85%, lô 3 và lô 4 cho kết quả cao nhất ñạt 50 - 62.5 % như vậy hoạt lực tinh trùng sau ñông lạnh có ảnh hưởng tới tỷ lệ thụ thai và trong TTNT cho dê nên sử dụng những cọng tinh có hoạt lực tinh trùng sau ñông lạnh từ 30% trở lên. Kết quả về hoạt lực tinh trùng có ảnh hưởng ñến khả năng thụ thai tương ñương với kết quả nghiên cứu của Corteel (1977) [48], hoạt lực tinh trùng có ảnh hưởng ñến tỷ lệ thụ thai. Bảng 11. Ảnh hưởng của thời ñiểm phối thích hợp ñến tỷ lệ thụ thai Thời gian Tổng số con phối (con) Số con phối chửa (con) Tỷ lệ chửa % 12 giờ 7 4 57.10 18 giờ 6 4 66.67 24 giờ 6 2 33.30 30giờ 5 1 20.00 Dê cái có chu kỳ ñộng dục bình quân là 17 ngày (16-18 ngày). Động dục ở dê xảy ra trong khoảng 1,5-3 ngày, phổ biến là 18-24 giờ, nhưng thời gian phối có chửa chỉ kéo dài 10-12 giờ, do vậy việc phát hiện ñộng dục là vô cùng cần thiết. Ngoài việc chọn ghép ñôi giao phối thích hợp, tránh ñồng huyết thì TTNT ñúng thời ñiiểm là rất quan trọng, tỷ lệ thụ thai của dê cái ñược quyết ñịnh bởi: số lượng và chất lượng tinh trùng, kỹ thuật giải ñông, kỹ thuật phối, thời ñiểm phối giống thích hợp. Trong ñó thời ñiểm phối giống thích hợp cho dê là quan trọng nhất, dê thường ñộng dục về ñêm, thời gian ñộng dục là 1 ngày, kết quả ở bảng 3 cho thấy thời gian phối thích hợp từ 12 và 18 giờ tỷ lệ chửa ñạt: 57.1 - 66,67%, và phối tại 24, 30 giờ muộn do vậy tỷ lệ thụ thai không cao ñạt 20-33,3%. Bảng 12. Kết quả thụ tinh nhân tạo bằng tinh dê ñông lạnh Đực giống Thời gian bảo tồn ở - 196 o C (tháng Hoạt lực khi phối giống (A%) Số tinh trùng tiến thẳng (triệu) / lần phối Số dê cái phối (con) Số dê cái thụ thai (con) Tỷ lệ thụ thai (%) Số dê con sinh ra (con 8 Boer 18 30 - 50 68,22 7 4 57.14 6 Saanen 24 30 - 40 64,24 6 3 50.00 3 Alpine 24 30 - 50 85,98 9 5 55.56 7 Barbari 24 30 - 50 62,74 5 3 60.00 5 Beetall 18 30 - 50 71,38 7 4 57.10 5 Dê lai 10 6 60.00 8 T ng 44 25 56.60 34 Tỷ lệ thụ thai: 56,64%; Khối lượng sơ sinh: 2,80 kg Tỷ lệ ñẻ: 55,7%; Khối lượng một tháng tuổi: 5,0 kg Số con Sơ sinh/lứa: 1,6 con ;Khối lượng hai tháng tuổi: 9,6 kg Tinh ñông lạnh của các giống dê, sau 1 - 24 tháng bảo tồn ở -196 o C vẫn còn khả năng thụ tinh, 34 dê con sinh ra do phối bằng tinh ñông lạnh. Tỷ lệ thụ thai ñạt 56,60% (23 con cái ñậu thai trên số 44 dê cái ñược phối giống, 2 con xẩy thai). Tỷ lệ ñẻ của dê cái là 52,3%. Số dê con sinh ra trong một lứa là 1,6 con, khối lượng trung bình sơ sinh của dê con là 2,80 kg. Dê con sinh ra do phối bằng tinh ñông lạnh phát triển bình thường, khối lượng trung bình một tháng tuổi là 5.0 kg, khối lượng trung bình hai tháng tuổi là 9.6 kg. Kết quả thụ tinh nhân tạo bằng tinh dê ñông lạnh, chúng tôi nhận ñược, tuy là kết quả bước ñầu, thực hiện trên quy mô thí nghiệm với số dê cái còn ít, nhưng ñã khẳng ñịnh sự thành công của công nghệ sản xuất tinh ñông lạnh dê, góp phần lưu giữ quỹ gen của các giống dê. 4. Kết luận • Đẫ xây dựng ñược công nghệ ñông lạnh tinh dê, sản xuất ñược 6341 liều tinh cọng rạ có hoạt lực tinh trùng sau ñông lạnh 25 – 55%. Chất lượng tinh ñông lạnh ổn ñịnh trong thời gian bảo tồn. • Bước ñầu ñã thành công ứng dụng TTNT bằng tinh dê ñông lạnh dạng cọng rạ. Kết quả thụ tinh nhân tạo cho dê bằng tinh ñông lạnh cọng rạ ñạt 61,1%, số con sơ sinh/lứa ñạt 1,6con. Tài liệ tham khảo 1. Nguyễn Tấn Anh, PTS Đinh Văm Bình, Nguyễn Kim Lin, 1995. Một số kết quả bước ñầu nghiên cứu về dê ñực Bách Thảo. Tạp chí Khoa học - Công nghệ và Quản lý kinh tế. 8. 1995. Trang 296- 297. 2. Trịnh Thị Kim Thoa, Đỗ Văn Thu, Nguyễn Anh, 1999. Nghiên cứu quy trình công nghệ bảo quản tinh dịch dê và kết quả bước ñầu về thụ tinh nhân tạo bằng tinh ñông lạnh. Hội nghị công nghệ Sinh học toàn quốc, Hà Nội 1999, Trang 1005 - 1011. 3.Trịnh Thị Kim Thoa, Đỗ Văn Thu, 1997. Nghiên cứu công nghệ sản xuất tinh ñông lạnh dê. Kỷ yếu Viện Công nghệ Sinh học - Trung tâm KHTN và CNQG. Trang 462 - 467 4. Artificial insemination in Canada. Annual Report 1987. 1988, 22pp. Ottawa, Canada. 5. Chemineau P. and Cagnié, Y. 1991. Training manual on artificial insemination in sheep and goats. FAO. Animal Production and Health, paper 83 - Rome 1991. 6. Corteel J.M, 1977. Production, storage and insemination of goats semen. Proceedings of the Symposium: Management of Reproduction in Sheep and Goat, S., Jul. 24-25, Madison. 9 . Thời gian nghiên cứu: 2006 - 2008 d. Nội dung nghiên cứu Nghiên cứu công nghệ ñông lạnh tinh dịch dê. Nghiên cứu thụ tinh nhân tạo cho dê. e. Phương pháp nghiên cứu Tinh dịch pha loãng. tạo giống dê ở nước ta Với lý do trên chúng tôi ñã thực hiện ñề tài “ Nghiên cứu ñông lạnh tinh dịch dê và thụ tinh nhân tạocho dª” 2. Nội dung và phương pháp nghiên cứu a. Đối tượng nghiên. 1 NGHIÊN CỨU ĐÔNG LẠNH TINH DỊCH DÊ VÀ THỤ TINH NHÂN TẠO CHO D£ Đỗ Văn Thu ** , Đinh Văn Bình * Chu Đức Tụy * Nguyễn Tuấn Anh ** * Trung tâm Nghiên cứư Dê và Thỏ Sơn Tây **