[...]... bầu đất đất Cấy sang bình Cấy sang bình 6-8 tuần khác để cây khác để cây đơn bội tiếp đơn bội tiếp tục phát triển tục phát triển Vỏ bao phấn Vỏ bao phấn sẽ nứt ra sẽ nứt ra tạo cây tạo cây đơn bội đơn bội 25-27oC 10-12h/ngày 2000-3000 lux 4 Nhị bội hóa thông qua giai đoạn callus • Tiến hành kiểm tra NST của cây đơn bội • Thân của cây thuốc lá đơn bội nuôi cấy trong ống nghiệm được cắt thành từng đoạn... glycerin 2% để tránh bay hơi Yếu tố ảnh hưởng đến khả năng tạo cây đơn bội trong nuôi cấy bao phấn, hạt phấn in vitro c.Tuổi thái lý bao phấn cho bao phấn Trạng xử sinh lý a.d.Tiềnhạt phấn của cây và hạt phấn và hạt phấn  Kết quả tạo cây đơn bội phụ thuộc nhiều vào trạng thái sinh đơn cây chỉ thubao phấn, hạt bao Trạng hơn Câylý của bội bố, cấycho bao phấn,cấyphấn phấn thái Hiệu quả nuôi mẹ được... parafin 00 Cấy lên môi Cấy lên môi cây ở 24- 27 C cây ở 24- 27 C D= 2mm trường N6 trường N6 CDAS 2000lux CDAS 2000lux Cấy lên MT Cấy lên MT tái sinh MS tái sinh MS Dán kính, 270C Phòng dưỡng cây Sau vài tuần Hình thành Hình thành Phòng dưỡng cây cường độ chiếu sáng cường độ chiếu sáng chồi chồi 50-60mol/m2/s 50-60mol/m2/s Cây xuất hiện Cây xuất hiện rễ trắng rễ trắng Khi cây cao 8-10 cm, cấy sang môi trường... NST • Tiến hành kiểm tra NST của cây đơn bội bằng cách cố định theo carnua, sau đó nhuộm mẫu bằng carmin hay dd cacbon fuchsin • Quan sát dưới kính hiển vi Nhị bội hóa cây đơn bội • Có 3 pp cùng nồng độ colchicine và thời gian 24-48h  PP1: nhổ, rửa và ngâm rễ lúa trong dd colchicine khi cây bắt đầu đẻ nhánh mạnh, sau đó rửa sạch và cấy lại  PP2: cắt bỏ phần trên cây lúa và bao chổ cắt của phần dưới...Nhị bội hóa cây đơn bội • Xử lí colchicine: cây con in vitro khi còn dính túi phấn được xử lý 24 đến 48 giờ với dd colchicine 0,5%, được rửa sạch bằng nước cất vô trùng và cấy chuyền lại tuy nhiên nếu cây đơn bội lớn thuần thục, dung dd colchicines-lanolin thấm lên trên cuống lá • Tái sinh qua phương pháp nuôi cấy mô: Những thể lưỡng bội được hình thành từ sự nhân đôi... triển của hạt phấn không đồng đều nên hiệu suất tạo cây đơn bội không cao  Hạt phấn là vật liệu quan trọng để gây đột biến và chuyển nạp gen, tuy nhiên nó ít được sử dụng vì làm giảm tỉ lệ tái sinh cây Nuôi cấy bao phấn:  Khó sàng lọc cây đơn bội  Khi nuôi cấy bao phấn thường gặp hiện tượng bạch tạng Kỹ thuật nuôi cấy bao phấn, hạt phấn tạo cây đơn bội phức tạp, phụ thuộc nhiều yếu tố: tuổi hạt phấn,... được tách ra từ cây thuốc lá đơn bội nuôi cấy trong ống nghiệm, cố định bằng hỗn hợp cồn: acetic (3:1) trong 24 giờ Mẫu được bảo quản ở cồn 70%, nhuộm nhiễm sắc thể bằng acetocarmin Đếm số lượng nhiễm sắc thể dưới kính hiển vi  Kết quả phân tích số lượng nhiễm sắc thể của các cây tái sinh từ quần thể tế bào callus đơn bội là không đồng nhất, cho thấy: cây 1n chiếm tỷ lệ khoảng 21,9 %, cây 2n khoảng... → Cây • Tiểu bội tử trong bao phấn → Callus → Chồi đơn bào • → Cây đơn bội Cấu trúc dạng phôi (embryoid) phát triển trực • Khốitừ hạt phấn tiếp mô này thường phát triển ra ngoài bao • phấn trình này thường xảy ra trong bao phấn Quá • Kiểu phát triển này hoàn toàn phổ biến và do • Phôi ở giai đoạn hình cầu, được phóng thích ra môi trường kích thích phát sinh từ vỏ ngoài và phát triển Qui trình tạo cây. .. những cây có mức bội thể cao hơn nhị bội NUÔI CẤY HẠT PHẤN CỦA CÂY LÚA Sơ đồ nuôi cấy bao phấn lúa • Thu thập vật liệu: - Túi phấn được thu nhận vào ngày thứ 60 hoặc 90 sau trồng - Các dòng lúa được gieo trồng cách khoảng nhau 1 tuần và tiến hành trong 5 lần để tránh các giống có thời gian chín khác nhau - Mỗi dòng cần 1-2 tép có mang tược hoa thụ phấn ở giai đoạn chín Quy trình • Xử lý vật liệu: - Cây. .. phương pháp nuôi cấy mô: Những thể lưỡng bội được hình thành từ sự nhân đôi xảy ra thường xuyên trong quá trình nuôi cấy mô thực vật đơn bội Thường sử dụng mô lá của cây đơn bội nuôi cấy SỰ PHÁT TRIỂN CÁ THỂ CỦA PHÁT SINH ĐƠN TÍNH ĐỰC • Hiện tượng phát sinh cây đơn bội từ các tế bào giao tử đực của thực vật được gọi là sinh sản đơn tính đực (androgenesis) • Có 2 phương thức sinh sản đơn tính đực: - . bao phấn sẽ nứt ra tạo cây đơn bội Vỏ bao phấn sẽ nứt ra tạo cây đơn bội Cấy sang bình khác để cây đơn bội tiếp tục phát triển Cấy sang bình khác để cây đơn bội tiếp tục phát triển 25-27 o C 10-12h/ngày 2000-3000 lux 6-8. • Chọn lọc cây đơn bội: có nhiều cách để xác định cây đơn bội như: làm tiêu bản để đếm số lượng nhiễm sắc thể, đo hàm lượng DNA trong tế bào, so sánh cây tái sinh từ bao phấn với cây mẹ về. Nitsch(1976) thu nhận được cây thuốc lá( Nicotiana tabacum) đơn bội hoàn chỉnh và từ đó có nhiều thành tựu trong nuôi cấy mô đơn bội được công bố.  Cây đơn bội có số lượng NST đơn bội ,đó là một bộ