Bộ môn; PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM Đề tài: QUY TRÌNH ĐỊNH TÍNH SALMONELLA GVHD: Nguyễn Thị Kim Oanh Nhóm: 5 DANH SÁCH NHÓM  Lê Thị Ngọc  Huỳnh Thị Quỳnh Nga  Dương Thị Hồng Diễm  Lâm Tây Sơn  Mai Nhật Long NỘI DUNG Các bước tiến hành Quy trình phân tích Môi trường và hóa chất Nguyên tắc Phạm vi áp dụng Tổng quan về Salmonella Kết quả Tình hình ngộ độc Salmonella TÌNH HÌNH NGỘ ĐỘC THỰC SALMONELLA TÌNH HÌNH NGỘ ĐỘC THỰC SALMONELLA  Theo thống kê, mỗi năm VN có chừng 250-500 vụ ngộ độc thực phẩm với 7.000-10.000 nạn nhân và 100 – 200 ca tử vong.  Vi khuẩn Salmonella là nguyên nhân của 70% vụ ngộ độc.  Salmonella có trong nhiều loại thực phẩm (đồ nguội, thịt nguội, nghêu sò, gà chưa nấu chín, chế phẩm từ sữa sống…) nhất là các món ăn chế biến từ trứng tươi hoặc còn hơi tươi sống.  Triệu chứng của ngộ độc do salmonella: Tiêu chảy, Đau bụng, Buồn ói và ói, Sốt, Đau đầu… Ngộ độc salmonella là một vấn đề xã hội rất phức tạp và khó giải quyết . Tổng quan về Salmonella  Trực khuẩn, Gram (-), kỵ khí tùy nghi, di động.  Sinh acid từ glucose và mannitol, sinh H2S.  Không lên men Saccharose và lactose, không sinh Indol, không phân giải Ure.  Không cho phép có mặt Salmonella trong 25g/25ml mẫu.  Kém chịu nhiệt. PHẠM VI ÁP DỤNG TCVN 4829:2005 Phát hiên Salmonella trong tất cả các loại thực phẩm NGUYÊN TẮC  Kết luận: Có hay không sự hiện diện của Salmonella trên lượng mẫu đã lấy.  Bắt buộc trải qua 5 giai đoạn, và phải sử dụng chủng đối chứng trong suốt quá trình phân tích. + Tiền tăng sinh + Tăng sinh + Phân lập + Phục hồi + Khẳng định MÔI TRƯỜNG VÀ HÓA CHẤT Môi trường và hóa chất Mục đích DD Buffered Peptone Water (BPW) Tăng sinh sơ bộ Canh Rappaport – Vasilia Soya Peptone (RVS) Tăng sinh chọn lọc Selenit xystin/ Tetrathionat (TT) Xylose Lysine Desoxycholate (XLD) Phân lập Hektoen Entric Agar (HE) Tryptone Soy Agar (TSA) Phục hồi Voges – Proskauer (VP) Thử nghiệm sinh hóa để khẳng định Salmonella Ure Broth MÔI TRƯỜNG VÀ HÓA CHẤT Môi trường và hóa chất Mục đích Lysine Decarboxylase broth (LDC) Thử nghiệm sinh hóa để khẳng định Salmonella Tryptone Water Kligler Iron Agar (KIA)/TSI Đĩa giấy ONPG Dung dịch creatin Thuốc thử các phản ứng sinh hóa Kháng huyết thanh Dung dịch α – naphtol KOH 40% Thuốc thử Kovac’s HCL và NaOH 10% Chỉnh pH [...]... Kiểm tra O, H,… Kết luận Mẫu được kết luận dương tính với Salmonella khi có khuẩn lạc đặc trưng trên môi trường phân lập và cho những kết quả sinh hóa sau: TSI/KIA: đỏ/vàng, có/không có H2S và sinh hơi, Ure (-), Indol (-), VP (-), ONPG (-), LDC (+) KẾT QUẢ Phát hiện (hay không phát hiện) Salmonella trong 25g/25ml mẫu Ví dụ QUY TRÌNH ĐỊNH TÍNH SALMONELLA TRONG MẪU THỊT GIA CẦM Ví dụ © Giang Nam™ © Giang... cho kết quả thử nghiệm sinh hóa phù hợp thì kết luận phát hiện Salmonella Salmonella trong mẫu on TSA  TH2: Nếu KL đầu cho kết quả không phù hợp thì tiến hành thử 4 KL còn lại, nếu 1 trong 4 KL này cho kết quả thử nghiệm sinh hóa phù hợp thì kết luận có Salmonella trong mẫu, ngược lại kết luận không có Salmonella trong mẫu BƯỚC 5: KHẲNG ĐỊNH SINH HÓA VÀ KHÁNG HUYẾT THANH Từ các khuẩn lạc đã chọn cấy... 3h  Dương tính: Môi trường giữ nguyên màu tím  Âm tính: Môi trường có màu vàng Salmonella on (LDC) BƯỚC 5: KHẲNG ĐỊNH SINH HÓA VÀ KHÁNG HUYẾT THANH Ure Broth  Nguyên tắc: Phát hiện khả năng phân cắt Ure thành ammoniac  Cách cấy mẫu: Cấy ria trên bề mặt nghiêng của thạch Ủ ở 37 ± 1⁰C/24 ± 3h  Dương tính: Môi trường từ màu đỏ chuyển sang màu hồng, sau đó chuyển thành màu đỏ hồng  Âm tính: Môi trường... 0.25ml thuốc thử để phát hiện β-galactosidase và lắc đều Đặt lại ống vào nồi cách thủy để ở 37⁰C/24 ± 3h  Dương tính: Màu vàng (xuất hiện sau 20 phút) BƯỚC 5: KHẲNG ĐỊNH SINH HÓA VÀ KHÁNG HUYẾT THANH Voges – Prokauer  Nguyên tắc: Xác định khả năng sinh acetylmethylcarbinol (acetoin) trong quá trình lên men glucose của một số vi sinh vật  Cách cấy mẫu: Cấy VSV vào môi trường glucose phosphate (MR –VP... hình hoặc nghi ngờ, cấy lên NA/TSA Ủ ở 37 ± 1⁰C/24 ± 3h QUY TRÌNH PHÂN TÍCH Đánh dấu 5 khuẩn lạc điển hình hoặc nghi ngờ, cấy lên NA/TSA Ủ ở 37 ± 1⁰C/24 ± 3h Không có khuẩn lạc điển hình hoặc nghi ngờ từ MT phân lập Thử một khuẩn lạc điển hình hoặc nghi ngờ TSI Ure agar Không phát hiện Salmonella trong 25g/25ml LDC ONPG VP Ủ ở 37 ± 1⁰C/24 ± 3h Âm tính Thử 4 khuẩn lạc còn lại đã được đánh Tryptone broth... kháng huyết thanh BƯỚC 5: KHẲNG ĐỊNH SINH HÓA VÀ KHÁNG HUYẾT THANH  Thạch TSI  Nguyên tắc: Xác định khả năng sử dụng nguồn Cacbonhydrate cụ thể kết hợp với môi trường tăng trưởng căn bản, cớ hoặc không có sinh hơi và H2S  Cách cấy mẫu: Cấy ria trên bề mặt nghiêng của thạch và cấy đâm sâu xuống đáy, ủ ở 37 ± 1⁰C/24 ± 3h  Salmonella chỉ lên men được đường glucose trong môi trường TSI → phần nghiêng... 1⁰C/24 ± 3h Sau đó thêm 2 giọt Creatin, 3 giọt α-naphthol và sau đó thêm 2 giọt dung dịch Kali hydroxide, lắc đều sau mỗi lần thêm thuốc thử  Dương tính: Xuất hiện màu hồng đến mà đỏ sang trong 15 phút  Âm tính: Dịch vi khuẩn không đổi màu BƯỚC 5: KHẲNG ĐỊNH SINH HÓA VÀ KHÁNG HUYẾT THANH  Thử phản ứng kháng huyết thanh  Loại trừ chủng tự ngưng kết: Nhỏ một giọt nước muối sinh lí lên phiến kính thủy... cấy, lật ngược các đĩa sao cho đáy hướng lên trên và ủ ở 37 ± 1⁰C/24 ± 3h  Kiểm tra các đĩa: Trên MT XLD, khuẩn lạc Salmonella điển hình có màu hồng trong suốt, trên MT HE có màu xanh lam, có hoặc không có tâm đen Đánh dấu vị trí các khuẩn lạc này trên đáy đĩa Salmonella on XLD agar Salmonella on HE Agar BƯỚC 4: PHỤC HỒI TRÊN MÔI TRƯỜNG DINH DƯỠNG NA/TSA  Đánh dấu 5 khuẩn lạc điển hình hoặc nghi ngờ... glucose trong môi trường TSI → phần nghiêng của thạch có màu đỏ, phần sau có màu vàng  Salmonella có khả năng sinh H2S → Xuất hiện các vệt màu đen trong môi trường TSI  Có thể thấy hiện tượng sinh khí qua hiện tượng làm vỡ thạch môi trường hoặc môi trường bị đẩy lên tạo ra một khoảng không bên dưới ống nghiệm BƯỚC 5: KHẲNG ĐỊNH SINH HÓA VÀ KHÁNG HUYẾT THANH Lysine Decarboxylase broth (LDC)  Nguyên tắc:... màu (vàng cam) Salmonella on Ure Broth BƯỚC 5: KHẲNG ĐỊNH SINH HÓA VÀ KHÁNG HUYẾT THANH Môi trường phản ứng Indol  Nguyên tắc: Phát hiện khả năng oxi hóa tryptophan thành các dạng của Indol: Indol, Skatol (methyl indol) và indolacetate  Cách cấy mẫu: Cấy khuẩn lạc nghi ngờ vào ống chứa 5ml môi trường tryptone water Ủ ở 37 ± 1⁰C/24 ± 3h Sau khi ủ, thêm 1ml thuốc thử Kovac’s  Dương tính: Bề mặt môi . hành Quy trình phân tích Môi trường và hóa chất Nguyên tắc Phạm vi áp dụng Tổng quan về Salmonella Kết quả Tình hình ngộ độc Salmonella TÌNH HÌNH NGỘ ĐỘC THỰC SALMONELLA TÌNH HÌNH NGỘ ĐỘC THỰC SALMONELLA  Theo. Bộ môn; PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM Đề tài: QUY TRÌNH ĐỊNH TÍNH SALMONELLA GVHD: Nguyễn Thị Kim Oanh Nhóm: 5 DANH SÁCH NHÓM  Lê Thị Ngọc  Huỳnh. 250-500 vụ ngộ độc thực phẩm với 7.000-10.000 nạn nhân và 100 – 200 ca tử vong.  Vi khuẩn Salmonella là nguyên nhân của 70% vụ ngộ độc.  Salmonella có trong nhiều loại thực phẩm (đồ nguội,