TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y – DƯỢC HUẾ KHOA DƯỢC BỘ MÔN : HÓA PHÂN TÍCH CHỦ ĐỀ : ĐỊNH LƯỢNG PROTEIN TRONG HUYẾT THANH Nhóm thực hiện LÔ VĂN ĐẠI Lớp D2A HOÀNG CÔNG CHIẾN Lớp D2B ĐINH MINH CHUNG Lớp D2A NGUỒN GỐC VÀ VAI TRÒ CỦA PROTEIN TOÀN PHẦN ĐỐI VỚI CƠ THỂ:  Nguồn gốc của protein: Protein trong máu gồm 3 thành phần là albumin chiếm 50 - 55%, globulin chiếm 39 – 45%, fibrrinogen chiếm 4 – 6%. Protein toàn phần trong huyết tương cao hơn huyết thanh vì có thêm fibrinogen . Albumin và fibrinogen được tổng hợp duy nhất bởi gan. Globulin do các tế bào có thẩm quyền miễn dịch sản xuất ra (tuỷ xương, lách, tế bào lympho, tế bào Kuffer của gan).  Protein huyết tương có các vai trò sau: - Tham gia cấu tạo nên cơ thể. - Tạo áp lực keo có vai trò trong quá trình vận chuyển và trao đổi muối nước. - Tham gia thành phần hệ thống đệm góp phần giữ cân bằng pH cho máu. - Bảo vệ cơ thể: globulin là yếu tố miễn dịch có vai trò bảo vệ cơ thể hơn nữa fibrrinogen tham gia vào quá trình đông máu giúp cầm máu khi bị xây xước, chấn thương. - Vận chuyển hormon và các enzym, protein còn làm nhiệm vụ vận chuyển thuốc như thuốc kháng sinh, coumarin, salycylate, thuốc ngủ. Các bậc của protein.  Cấu trúc bậc 1 Cấu trúc bậc 1 biểu thị trình tự các gốc amino acid trong chuỗi polypeptide, cấu trúc này được giữ vững bằng liên kết peptide (liên kết cộng hóa trị). Cấu trúc bậc 1 là phiên bản của mã di truyền, việc xác định được cấu trúc bậc 1 là cơ sở để tổng hợp nhân tạo protein bằng phương pháp hoá học hoặc bằng biện pháp công nghệ sinh học.  Cấu trúc bậc 2 Biểu thị sự xoắn của chuỗi polypeptide, là tương tác không gian giữa các gốc amino acid ở gần nhau trong mạch polypeptide. Nói cách khác, là dạng không gian cục bộ của từng phần trong mạch polypeptide. Cấu trúc này được làm bền nhờ các liên kết hydro được tạo thành giữa các liên kết peptide ở gần nhau.  Cấu trúc bậc 3 Biểu thị sự xoắn và cuộn khúc của chuỗi polypeptide thành khối, đặc trưng cho protein dạng cầu, là tương tác không gian giữa các gốc amino acid ở xa nhau trong mạch polypeptide. Trong nhiều protein dạng cầu có chứa các gốc cysteine tạo nên liên kết disulfur giữa các gốc Cys xa nhau trong mạch polypeptide làm cho mạch bị cuộn lại. Ngoài ra, cấu trúc bậc 3 còn được giữ vững bằng các loại liên kết khác như liên kết kị nước, lực Van der Waals, liên kết hydro, liên kết tĩnh điện giữa các gốc amino acid.  Cấu trúc bậc 4 Biểu thị sự kết hợp của các chuỗi có cấu trúc bậc 3 trong phân tử protein. Những phân tử protein có cấu trúc từ 2 hay nhiều chuỗi protein hình cầu, tương tác với nhau sắp xếp trong không gian tạo nên cấu trúc bậc 4. Mỗi một chuỗi polypeptide đó được gọi là một tiểu đơn vị, chúng gắn với nhau nhờ các liên kết hydro, tương tác Van der Waals giữa các nhóm phân bố trên bề mặt của các tiểu đơn vị để làm bền cấu trúc bậc 4.  Tính chất hóa học của protein. - Protein có thể bị thủy phân bởi enzyme hoặc bởi một số yếu tố khác như acid hoặc base đặc (nồng độ 6N) ở nhiệt độ cao và trong nhiều giờ để tạo thành các sản phẩm dở dang hoặc sản phẩm cuối cùng là các amino acid. - Protein cho phản ứng biurea (đặc trưng của liên kết peptid). - Các gốc amino acid trong phân tử protein cũng cho các phản ứng đặc trưng của amino acid tự do tương ứng. - Phân tử protein có nhóm a-NH2 ở đầu N-tận cùng và a-COOH ở đầu C-tận cùng, ngoài ra chúng còn có thể có thêm một số nhóm -NH2 và COOH của các gốc amino acid nằm giữa chuỗi polypeptid. Do vậy, protein có thể cho hoặc nhận proton (H+) để thể hiện tính acid hoặc base. Nhờ đặc điểm này cho nên protein là một hệ đệm góp phần duy trì pH của cơ thể động vật tương đối ổn định.  Do Protein cho phản ứng Biurea (phản ứng đặc trưng của liên kết peptid). Vì vậy trong thí nghiệm này chúng ta. Dùng tính chất này của proten dể định lượng protein trong huyết thanh. Để chận đoán bệnh xơ gan cổ chướng. I. NGUYÊN TẮC CỦA PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG Protein trong huyết thanh tác dụng với ion Cu+2 trong môi trường kiềm (thuốc thử Biure) tạo thành phức hợp màu xanh tím. Đậm độ màu của phức hợp tỷ lệ thuận với nồng độ protein trong huyết thanh và được xác định mật độ quang ở bước sóng 546nm bằng phép đo điểm cuối. II - CHUẨN BỊ 1. Dụng cụ - Dụng cụ lấy máu tĩnh mạch, - Giá ống nghiệm - Ống nghiệm to, nhỏ - Quả bóp to nhỏ - Pipet nhỏ giọt - Máy quang kế (bước sóng 530 - 560nm) cóng 1cm - Pipet 10ml (1) - Máy li tâm - Micropipet 0,1ml (1) Bộ dụng cụ lấy máu tĩnh mạch. [...]... độ g/l Protein mẫu A1 64 Huyết thanh A2 C - Ở đây protein mẫu là chất chuẩn - Ta tính nồng độ protein trong huyết thanh theo công thức điểm Cm Cm g chuẩn Ct = Dt ⇒ Ct = A2 ( ) l Dm A1 Trong đó: Ct là nồng độ của protein trong huyết thanh Cm là nồng độ của protein mẫu Dt ,Dm lần lượt là mật độ quang của proten huyết thanh, protein mẫu 2 Nhận định kết quả a Trị số bình thường - Nồng độ protein trong. .. biure không dùng được trong môi trường có NH4+ vì NH4+ tạo Phức với Cu2+ không màu, bền nên không tạo phức được với protein  Thuốc thử có thể dùng trong phân tích định tính và định lượng Trong một phản ứng tiêu biểu một phần thể tích của mẫu được trôn với 2 phần thể tích của thuốc thử, tỉ số tối giản phủ thuộc vào nồng độ tối đa của protein mà ta muốn phát hiện, sự xuất hiện của protein được tìm với... - Sau đó ly tâm máu lấy huyết thanh Ly tâm lấy huyết thanh Cho máu vào máy ly tâm để lấy huyết thanh 2 Pha chế thuốc thử Biure  Dung dịch làm xét nghiệm có thể mua sẵn hoặc tự pha thuốc thử Biuret theo Gornall o Thuốc thử: dựng bộ kít hóa chất mua sẵn gồm: reagent A – protein và standard – protein o Thuốc thử biure tự pha theo Gornal làm như sau: - Cân 5g CuSO4.5H2O hòa tan trong 495 ml H2O cất được... suy dinh dưỡng, thoái hóa thận dạng tinh bột, viêm gan, xơ gan sau chọc tháo nước nhiều lần, bệnh tao keo… Tuy nhiên giảm protein trong máu chủ yếu là do bệnh xơ gan cổ chướng - Tăng: trong bệnh u tủy, mất nước liên tục (nôn nhiều, ỉa chảy…), thiểu năng vỏ thượng thận (bệnh Addison) Do gan là nơi sản xuất một loạt proten quan trọng bao gồm hormon, emzym, protein trong huyết thanh, các yếu tố đông máu... giảm sản xuất protein kết cụm do bệnh gan Dịch có thể tích tụ trong ổ bụng (cổ chướng) và sưng chân như là kết quả của sự tắc nghẽn máu qua gan Đây là biến chứng do giảm sản xuất protein qua gan Dịch có thể bị nhiễm trùng ( viêm phúc mạc vi khuẩn) và có thể đe dọa sự sống  Cổ chướng (báng bụng) là tình trạng tích tụ dịch (thường là thanh dịch, là chất dịch trong và có màu vàng xanh) bên trong ổ bụng.. .Bộ dụng cụ Quả bóp Pipet Micropipet 0,1ml Giá để ống nghiệm và ống nghiêm Máy li tâm và máy đo quang Máy li tâm Máy đo quang 2 .Hóa chất: - Đồng sulfat (CuSO4.5H2O) (g) - Natri Kalitactrat: muối seignette (NaKC4H4O6.4H2O) (g) - Na2 CO3 (g) - NaOH (g) - Nước cất - Protein mẫu có nồng độ 64 g/l Nươc cất Háo chất III QUY TRÌNH TIẾN HÀNH ĐỊNH LƯỢNG 1 Lấy huyết thanh tĩnh mạch: Vị trí... kỹ bảo quản trong lọ màu, nút kín để trong tối ngay để tránh thuốc thử bị biến tính, bỏ đi khi có cặn Tốt nhất là chỉ pha ít một để dùng  Nghĩa là để riêng dung dịch đồng sulfat và dung dịch NaOH 10% khi cần mới trộn lẫn theo như công thức qui định  Bắt đầu pha thuốc thử với huyết thanh và dd Protein mẫu: -Hút 500 µL thuốc thử Biure vào 3 ống: trắng (Tr), mẫu (M), thử (T) - Hút 10µL protein mẫu... thỏ đều phụ thuộc vào khả năng của gan để sản xuất protein Gan xử lý hầu như tất cả mỏi thứ chúng ta ăn qua miệng, hít thở vào phổi và hấp thụ qua da Gan được coi là nhà máy sinh hóa của cơ thể, gan chuyển hóa các protein trong máu… SƠ LƯỢC VỀ BỆNH XƠ GAN CỔ CHƯỚNG  Nhận biết:  Nhìn bên ngoài thấy vàng da, những nhận biết khác như mệt mỏi suy nhược chán ăn, ngứa do sự trào ngược của mật vào trong. .. ống mẫu - Hút 10µL huyết thanh vào ống thử - Lắc đều, ủỐng nghiệm ởỐng Trắng (Tr) Ống Mãu (M) 10 phút nhiệt độ phòng Thuốc thử Protein mẫu có nồng độ 64g/l (µl) 10 Huyết thanh (µl thuốc thử Biure (µl) Ống Thử (T) 10 500 500 500  Sau khi pha được dung dịch Đo máy ở bước sóng 546 nm, phương pháp đo điểm cuối 546 Cho dung dịch vào máy đo quang đo ở bước sóng 546 nm Máy do quang IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ 1 Kết... (tăng áp lực của dòng máu bên trong gan)  Nguyên lý cơ bản cũng tương tự như tình trạng phù nề ở những nơi khác trong cơ thể do sự mất cân bằng giữa áp lực bên trong hệ tuần hoàn (nơi có áp lực cao) và bên ngoài hệ tuần hoàn, trong trường hợp này là áp lực ở bên trong ổ bụng (nơi có áp lực thấp) Sự gia tăng áp lực máu của hệ cửa và giảm albumin (một loại protein di chuyển trong máu) có thể là những yếu . vậy trong thí nghiệm này chúng ta. Dùng tính chất này của proten dể định lượng protein trong huyết thanh. Để chận đoán bệnh xơ gan cổ chướng. I. NGUYÊN TẮC CỦA PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG Protein. : HÓA PHÂN TÍCH CHỦ ĐỀ : ĐỊNH LƯỢNG PROTEIN TRONG HUYẾT THANH Nhóm thực hiện LÔ VĂN ĐẠI Lớp D2A HOÀNG CÔNG CHIẾN Lớp D2B ĐINH MINH CHUNG Lớp D2A NGUỒN GỐC VÀ VAI TRÒ CỦA PROTEIN TOÀN PHẦN. gốc của protein: Protein trong máu gồm 3 thành phần là albumin chiếm 50 - 55%, globulin chiếm 39 – 45%, fibrrinogen chiếm 4 – 6%. Protein toàn phần trong huyết tương cao hơn huyết thanh vì