BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI  BÙI THỊ HÀ XÁC ðỊNH MỘT SỐ CHỈ TIÊU CHẤT LƯỢNG VÀ KHẢ NĂNG ðÁP ỨNG MIỄN DỊCH CHỐNG BỆNH NEWCASTLE CỦA VACXIN ðA GIÁ ND-IBD-IB SẢN XUẤT TẠI XÍ NGHỆP THUỐC THÚ Y TRUNG ƯƠNG. LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành : Thú y Mã số : 60.62.50 Người hướng dẫn khoa học : TS. HUỲNH THỊ MỸ LỆ HÀ NỘI– 2012 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… i LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan ñây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Các số liệu, kết quả nêu trong luận văn là trung thực và chưa từng ñược ai công bố trong bất kỳ công trình nào khác. Tôi xin cam ñoan rằng các thông tin trích dẫn trong luận văn ñều ñã ñược chỉ rõ nguồn gốc. Mọi sự giúp ñỡ ñã ñược cảm ơn. Hà Nội, ngày 19 tháng 9 năm 2012 Tác giả luận văn Bùi Thị Hà Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… ii LỜI CẢM ƠN ðể hoàn thành bản luận văn này, ngoài sự cố gắng, nỗ lực hết mình của bản thân còn có sự hướng dẫn tận tình của thầy cô hướng dẫn khoa học TS. Huỳnh Thị Mỹ Lệ, TS. Nguyễn Hồng Minh Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc ñến cô hướng dẫn, người ñã giành nhiều thời gian quý báu tận tình giúp ñỡ, hướng dẫn tôi trong suốt quá trình nghiên cứu và hoàn thành luận văn. Tôi xin chân thành cảm ơn: - Ban giám ñốc Xí nghiệp thuốc thú y Trung Ương. - Tập thể cán bộ công nhân viên trong phân xưởng vacxin siêu vi trùng – Xí nghiệp thuốc thú y Trung Ương. - Viện ñào tạo sau ñại học – Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội. ðã tận tình giúp ñỡ tôi trong suốt quá trình học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn. Nhân dịp này, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia ñình, người thân, bạn bè, ñồng nghiệp - Những người luôn tạo ñiều kiện, ñộng viên, giúp ñỡ tôi vượt qua mọi khó khăn trong quá trình học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn. Hà Nội, ngày 19 tháng 09 năm 2012 Tác giả luận văn Bùi Thị Hà Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… iii MỤC LỤC Lời cam ñoan 1 Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục các chữ viết tắt và ký hiệu v Danh mục bảng vii Danh mục hình viii 1 MỞ ðẦU 1 1.1 Tính cấp thiết của ñề tài 1 1.2 Mục tiêu nghiên cứu cảa ñề tài 2 1.3 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn 2 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4 2.1 Bệnh Newcastle 4 2.2 Bệnh Gumboro 16 2.3 Bệnh viêm phế quản truyền nhiễm 22 2.4 Vacxin và các loại vacxin phòng bệnh Newcastle, Gumboro và IB ñang lưu hành tại Việt Nam 28 3 NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 32 3.1 Nội dung nghiên cứu: 32 3.2 ðối tượng và phạm vi nghiên cứu 32 3.3 Nguyên liệu 33 3.4 Phương pháp nghiên cứu 33 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 43 4.1 Giới thiệu về vacxin ña giá ND-IBD-IB 43 4.2 Kết quả ñánh giá chất lượng các lô vacxin ña giá 45 4.2.1 Kết quả kiểm tra ñộ ẩm và ñộ chân không 45 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… iv 4.2.2 Kết quả kiểm tra vô trùng 49 4.2.3 Kết quả kiểm tra an toàn 50 4.2.4 Kết quả kiểm tra hiệu lực 52 4.3 ðánh giá tỷ lệ bảo hộ của gà ñối với bệnh Newcastle sau khi ñược sử dụng vacxin ña giá 57 4.4 Khảo sát sự biến ñộng HGKT và so sánh HGKT kháng virus Newcastle trong huyết thanh của gà sau khi sử dụng vacxin ña giá và ñơn giá 61 4.5 Kết quả khảo nghiệm thực ñịa 65 4.5.1 Chỉ tiêu an toàn 65 4.5.2 Chỉ tiêu hiệu lực 66 5 KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 71 5.1 Kết luận 71 5.2 ðề nghị 72 TÀI LIỆU THAM KHẢO 73 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… v DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT VÀ KÝ HIỆU ARN Acid ribonucleic APMV Avian paramyxovirus EID 50 50% Egg-infective dose (Liều gây nhiễm 50% phôi gà thí nghiệm) ELISA Enzyme-linked immunosorbent assay (Phản ứng miễn dịch có gắn men) HA Haemagglutination (Phản ứng ngưng kết hồng cầu gà) HI Haemagglutination inhibition (Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà) IB Infectious bronchitis (Bệnh Viêm phế quản truyền nhiễm của gà) IBD Infectious Bursal Disease (Bệnh Gumboro) TCN Tiêu chuẩn ngành ND Newcastle disease (Bệnh Newcastle) OIE Office International des Epizooties (Tổ chức thú y thế giới) TN Thí nghiệm ðC ðối chứng HGKT Hiệu giá kháng thể NDV Newcastle disease virus (Nguyên dịch vacxin NCX) IBDV Infectious Bursa Disease Virus (Nguyên dịch vacxin Gumboro) IBV Infectious Bronchitis Virus (Nguyên dịch vacxin viêm phế quản truyền nhiễm) M41 Massachusetts – 41 CEK Chick embryo kidney (Tế bào thận phôi gà) CEL Chick embryo liver (Tế bào gan phôi gà) CK Chick kidney (Tế bào thận gà) CPE Cytopathic effect (Bệnh lý tế bào) Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… vi MDT Mean Death Time –hr (Thời gian gây chết phôi trung bình phôi gà với liều gây chết nhỏ nhất của virus) ICPI Intracerebral pathogenicity index in day-old chicks (Chỉ số gây chết khi tiêm vào não gà con 1 ngày tuổi) IVPI Intravenous pathogenicity index in 6-week-old chickens (Chỉ số gây chết khi tiêm vào tĩnh mạch gà 6 tuần tuổi) Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… vii DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang 4.2 Kết quả kiểm tra ñộ ẩm của vacxin ña giá sản xuất thử nghiệm 47 4.3 Kết quả kiểm tra vô trùng các lô vacxin ña giá 49 4.4 Kết quả kiểm tra an toàn của vacxin ña giá ñông khô 51 4.5 Kết quả kiểm tra hiệu lực các lô vacxin ña giá bằng phương pháp thay thế 53 4.6 Kết quả công cường ñộc gà các lô thí nghiệm 58 4.7 Kết quả xác ñịnh HGKT kháng bệnh Newcastle trong huyết thanh của gà sau khi ñược sử dụng vacxin 62 4.8 Quan sát các triệu chứng trên ñàn gà sau khi chủng vacxin 67 4.9 Hiệu giá kháng thể kháng virus Newcastle trên ñàn gà nuôi ngoài thực ñịa 68 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… viii DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang 4.1 Sơ ñồ quy trình sản xuất vacxin ña giá nhược ñộc ñông khô 43 4.2 Biểu ñồ biểu diễn kết quả kiểm tra ñộ ẩm và ñộ chân không của vacxin ña giá ñông khô 48 4.3 Kiểm tra hiệu giá kháng thể kháng virus Gumboro bằng phản ứng ELISA 54 4.4 Kiểm tra hiệu giá kháng thể kháng virus IB bằng phản ứng ELISA 55 4.5 Kiểm tra hiệu giá kháng thể kháng virus Newcastle bằng phản ứng HI 56 4.6 Gà ủ rũ, xác chết lông xơ xác 59 4.7 Xuất huyết dạ dầy tuyến, dạ dầy cơ 60 4.8 Xuất huyết niêm mạc ruột 60 4.9 Biến ñộng hiệu giá kháng thể kháng virus Newcastle trong huyết thanh của gà ñược sử dụng vacxin ñơn giá và ña giá 64 4.10 Hình ảnh ñàn gà nuôi ngoài thực ñịa 66 4.11 Biến ñộng hiệu giá kháng thể kháng virus Newcastle trong huyết thanh của gà ñược sử dụng vacxin ña giá thử nghiệm ngoài thực ñịa 69 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 1 1. MỞ ðẦU 1.1. Tính cấp thiết của ñề tài Cùng với sự phát triển của xã hội, ngành chăn nuôi nói chung và chăn nuôi gà nói riêng cũng phát triển theo hướng chăn nuôi công nghiệp ñã cung cấp một lượng thực phẩm ñáng kể cho người tiêu dùng, góp phần không nhỏ trong quá trình phát triển của ngành nông nghiệp. Tuy nhiên, cùng với sự tăng trưởng ñó, thì tình trạng bệnh của gà cũng biến ñổi theo xu thế tăng dần như bệnh về dinh dưỡng, về biến ñổi gen, các bệnh truyền nhiễm,… gây ảnh hưởng rất nghiêm trọng ñến chăn nuôi gà. Nguyên nhân gây ra các bệnh trên thường là do sự gia tăng các tác nhân gây stress cho vật nuôi, do sự phát triển nhanh của tổng ñàn, do sự nhiễm khuẩn hoặc do các tác nhân gây bệnh từ thức ăn, nước uống, chuồng trại Một số bệnh thường xuyên xảy ở ñàn gà như bệnh Newcastle (Newcastle Disease – ND), Gumboro (Infectious Bursal Disease – IBD), Viêm phế quản truyền nhiễm (Infectious Bronchitis – IB), không chỉ gây ốm, chết, giảm sự tăng trưởng của gà , mà còn gây ra sự suy giảm miễn dịch làm cho gà không thể sản sinh ra kháng thể sau khi tiêm phòng vacxin. ðể phòng chống các bệnh trên, biện pháp tốt nhất, an toàn nhất, hiệu quả kinh tế nhất là tiêm phòng bằng vacxin. Hiện tại, các loại vacxin ñơn giá phòng ba bệnh ND, IBD và IB ñang ñược sử dụng rất rộng rãi. Những sản phẩm này ñều là những mặt hàng truyền thống của các cơ sở sản xuất vacxin trong nước, có giá thành thấp nhưng hiệu quả phòng bệnh cao. Tại Việt Nam, trong những năm gần ñây chăn nuôi gà không chỉ giới hạn ở quy mô nhỏ, gia ñình mà còn phát triển thành các trang trại lớn, theo hướng chăn nuôi công nghiệp hàng nghìn, hàng vạn con. Khi quy mô chăn nuôi phát triển nếu sử dụng vacxin ñơn giá, người chăn nuôi phải chi phí [...]... Newcastle c a vacxin ña giá ND- IBD- IB s n xu t t i Xí nghi p thu c Thú y Trung ương 1.2 M c tiêu nghiên c u c a ñ tài - ðánh giá m t s ch tiêu ch t lư ng c a vacxin ña giá phòng ba b nh Newcastle, Gumboro, Viêm ph qu n truy n nhi m gà ñư c nghiên c u, s n xu t th nghi m t i Xí nghi p thu c thú y Trung ương - Xác ñ nh kh năng ñáp ng mi n d ch ch ng b nh Newcastle c a vacxin ña giá 1.3 Ý nghĩa khoa h c và th... hi u l c c a vacxin ña giá ñư c nghiên c u s n xu t t i Xí nghi p thu c Thú y Trung ương và ng d ng vào th c ti n s n xu t - Giúp x y d ng l ch dùng vacxin phòng b nh ND, IBD và IB có hi u qu Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 3 2 T NG QUAN TÀI LI U 2.1 B nh Newcastle 2.1.1 Gi i thi u chung v b nh B nh Newcastle g y ra b i virus paramyxo type 1 (APMV-1),... Embryo Kidney Cell - CEK), t bào th n gà (Chicken Kidney - CK) và t bào gan phôi gà (Chicken Embryo Liver - CEL) ñ nuôi c y IBV Virus y u c u ph i qua m t s l n c y chuy n m i g y b nh tích t bào (CPE); tuy nhiên, cũng có ch ng g y CPE ngay t l n c y chuy n ñ u tiên IBV khi ñã ñư c c y chuy n trên phôi và trên môi trư ng t bào th n gà, có th phát tri n trên môi trư ng t bào xơ phôi gà nhưng hi u giá. .. pathogenicity index in day-old chicks): ch s g y ch t khi tiêm vào não gà con 1 ng y tu i + IVPI (Intravenous pathogenicity index in 6-week-old chickens): ch s g y ch t khi tiêm vào tĩnh m ch gà 6 tu n tu i Các ch ng virus Newcastle có ICPI ≥ 1,6 và IVPI có giá tr g n b ng 3 thì ñư c x p vào nhóm Velogen 2.1.3.3 ð c tính sinh h c - Kh năng g y ngưng k t h ng c u: virus Newcastle và các Avian Paramyxovirus... Massachusetts vào năm 1941 và ch ng Connecticut vào năm 1951 C hai ch ng n y g y ra nh ng ca b nh gi ng nhau nhưng chúng không có s b o v chéo ho c trung hoà chéo Nh ng báo cáo g n ñ y ch y u ch ng minh nguyên nhân g y b nh IB do nhi u serotype g y ra B nh thư ng xuyên x y ra nh ng ñàn gà m c dù ñã ñư c tiêm phòng vacxin Virus phân l p ñư c t nh ng d ch ñó thư ng khác v i tuyp virus vacxin trong nư... ng tiêu hoá xâm nh p vào cơ th , qua niêm m c h u h ng r i vào máu g y huy t nhi m trùng Cũng trong th i gian ñó căn b nh ñi vào h u h t các cơ quan t ch c c a cơ th g y ra viêm ho i t N i mô thành huy t qu n b phá ho i, g y xu t huy t làm thâm nhi m d ch th m xu t vào các cơ quan trong cơ th Virus tác ñ ng g y r i lo n tu n hoàn và tác ñ ng vào trung khu hô h p c a h th nh kinh trung ương g y hi... ng trung hòa virus, Trung tâm ch n ñoán thú y Trung ương x y d ng quy trình ch n ñoán b nh b ng ph n ng khu ch tán trên th ch, trung tâm ki m nghi m thu c thú y Trung ương ñã x y d ng ñư c tiêu chu n ki m nghi m vacxin phòng b nh Gumboro Nh ng nghiên c u trên ñ u nh m m c ñích ti n t i kh ng ch b nh Gumboro m t cách có hi u qu ñ ngành chăn nuôi gi m b t ñư c thi t h i ñáng k v kinh t mà b nh g y ra... - Nuôi c y trên phôi gà T t c các avian parsmyxovirus ñ u nhân lên và phát tri n trên phôi gà Tr ng gà có phôi ngu n g c t các ñàn gà s ch b nh r t m n c m v i virus Newcastle, sau khi g y nhi m virus nhân lên và cho hi u giá virus r t cao Do v y, ngư i ta thư ng s d ng phương pháp n y ñ g y nhi m và phân l p virus Th i gian và kh năng g y ch t phôi tuỳ thu c vào ñ c l c c a các ch ng virus Newcastle. .. u nhân công, có th g y nh hư ng stress cho v t nuôi, d n t i gi m hi u qu kinh t , vì v y ñã có nhi u lo i vacxin ña giá ñư c l a ch n ñ phòng b nh cho ñàn gà Các vacxin ña giá ñ phòng ba b nh ND, IBD và IB ñang ñư c s d ng ph bi n nư c ta nhưng ch y u ñ u là vacxin nh p ngo i, có giá thành r t cao Hi n t i, trong nư c chưa có cơ s nào nghiên c u, s n xu t lo i vacxin ña giá n y ð kh c ph c ñư c nh... y trên t ch c s ng Darbyshire (1978), ñã thông báo k t qu g y nhi m virus IB vào t ch c khí qu n và m t s mô khác Tác gi ñã s d ng t ch c khí qu n c a phôi gà p 20 ng y tu i, nuôi c y trong các ng lăn, sau ñó g y nhi m virus IB, b nh lý lông rung d dàng quan sát b ng kính hi n vi sau 3 – 4 ng y Vi c nuôi c y virus vào t ch c khí qu n ñã ph c v cho vi c phân l p virus, chu n ñ xác ñ nh hi u giá và xác . khả năng ñáp ứng miễn dịch chống bệnh Newcastle của vacxin ña giá ND-IBD-IB sản xuất tại Xí nghiệp thuốc Thú y Trung ương . 1.2. Mục tiêu nghiên cứu của ñề tài - ðánh giá một số chỉ tiêu chất. BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI  BÙI THỊ HÀ XÁC ðỊNH MỘT SỐ CHỈ TIÊU CHẤT LƯỢNG VÀ KHẢ NĂNG ðÁP ỨNG MIỄN DỊCH CHỐNG BỆNH NEWCASTLE CỦA VACXIN ðA GIÁ. chất lượng của vacxin ña giá phòng ba bệnh Newcastle, Gumboro, Viêm phế quản truyền nhiễm ở gà ñược nghiên cứu, sản xuất thử nghiệm tại Xí nghiệp thuốc thú y Trung ương. - Xác ñịnh khả năng