BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG THÔN VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM ––––––––––––––––––––––––––––––– ĐỊNH MỨC NGHIÊN CỨU LĨNH VỰC TRỒNG TRỌT VÀ BẢO VỆ THỰC VẬT HÀ NỘI - 2011 Mục lục Trang PHẦN I: ĐỊNH MỨC CHI PHÍ CHO NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN MỘT SỐ CÂY LƯƠNG THỰC VÀ CÂY THỰC PHẨM 1.1 Định mức chi phí cho nghiên cứu phát triển lúa 1.2 Định mức chi phí cho nghiên cứu phát triển lúa lai 1.3 Định mức chi phí cho phân tích mẫu lúa gạo 11 1.4 Định mức chi phí cho nghiên cứu phát triển ngơ 16 1.5 Định mức chi phí cho nghiên cứu phát triển khoai lang 24 1.6 Định mức chi phí cho nghiên cứu phát triển khoai tây 28 1.7 Định mức chi phí cho nghiên cứu phát triển dong riềng 32 1.8 Định mức chi phí cho nghiên cứu phát triển khoai sọ 36 1.9 Định mức chi phí cho nghiên cứu phát triển sắn 40 1.10 Định mức chi phí cho nghiên cứu phát triển đậu đỗ 44 1.11 Định mức chi phí cho nghiên cứu phát triển nấm ăn nấm dược liệu 54 PHẦN II: ĐỊNH MỨC CHI PHÍ CHO NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÂY 66 RAU, HOA VÀ CÂY ĂN QUẢ 2.1 Định mức chi phí cho nghiên cứu phát triển rau 66 2.2 Định mức chi phí cho nghiên cứu phát triển hoa 100 2.3 Định mức chi phí cho nghiên cứu phát triển ăn 121 PHẦN III: ĐỊNH MỨC CHI PHÍ CHO NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN 149 MỘT SỐ CÂY CÔNG NGHIỆP 3.1 Định mức chi phí cho nghiên cứu phát triển chè, cà phê, dâu tằm, cao su 149 3.2 Định mức chi phí cho nghiên cứu phát triển ca cao, điều, bơ, mít, dừa, 156 3.3 Định mức chi phí cho nghiên cứu phát triển thuốc lá, mía 161 3.4 Định mức chi phí cho nghiên cứu phát triển hồ tiêu 165 3.5 Định mức chi phí cho nghiên cứu phát triển tằm 169 3.6 Định mức chi phí cho nghiên cứu kiểm nghiệm chất lượng tơ 174 i PHẦN IV: ĐỊNH MỨC CHI PHÍ CHO BẢO TỒN, LƯU GIỮ NGUỒN GEN 177 4.1 Định mức chi phí cho lưu giữ nguồn gen kho lạnh 177 4.2 Định mức chi phí cho lưu giữ nguồn gen ngồi đồng ruộng 178 PHẦN V: ĐỊNH MỨC CHI PHÍ CHO PHÂN TÍCH MẪU 184 5.1 Định mức chi phí cho phân tích phân bón 184 5.2 Định mức chi phí cho phân tích chất lượng đất 192 5.3 Định mức chi phí cho phân tích tính chất đất 194 5.4 Định mức chi phí cho phân tích chất lượng nước 209 5.5 Định mức chi phí cho phân tích nơng sản 221 PHẦN VI: ĐỊNH MỨC CHI PHÍ CHO NGHIÊN CỨU BẢO VỆ THỰC VẬT 231 6.1 Định mức chi phí cho thí nghiệm phịng: Phân lập định loại VSV 231 6.2 Định mức chi phí cho thí nghiệm đánh giá hiệu lực vi sinh vật điều kiện cách ly (nhà kính, nhà lưới, ) 236 6.3 Định mức chi phí cho thử nghiệm đánh giá đồng ruộng 244 PHẦN VII: ĐỊNH MỨC CHI PHÍ CHO PHÂN TÍCH DI TRUYỀN 248 7.1 Định mức chi phí cho thu thập vật liệu cho phân tích di truyền 248 7.2 Định mức chi phí cho tách chiết ADN 248 7.3 Định mức chi phí cho tách chiết ARN tổng số/tinh mARN/tổng hợp cDNA 249 7.4 Định mức chi phí cho phân tích PCR 251 7.5 Định mức chi phí cho chuyển gen thực vật 253 7.6 Định mức chi phí cho phân lập, tách chiết gen 262 7.7 Định mức chi phí cho lập đồ phân tử gen kháng 269 7.8 Định mức chi phí cho kỹ thuật nuôi cấy invitro 272 PHẦN PHỤ LỤC 276 ii Viện Khoa học Nơng nghiệp Việt Nam Định mức thí nghiệm lĩnh vực trồng trọt bảo vệ thực vật PHẦN I: ĐỊNH MỨC CHI PHÍ CHO NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN MỘT SỐ CÂY LƯƠNG THỰC VÀ THỰC PHẨM I ĐỊNH MỨC CHI PHÍ CHO NGHIÊN CỨU CHỌN TẠO GIỐNG LÚA THUẦN 1.1 Nhóm Thí nghiệm tập đồn cơng tác chọn dịng Bao gồm: - Đánh giá nguồn gen lúa - Đánh giá, chọn lọc vườn dòng từ F1, M1 đến dịng - Thí nghiệm chọn dòng biến dị từ nguồn nhập nội nguồn khác… - Duy trì giống gốc, phục tráng giống địa, giống cũ 1.1.1 Thí nghiệm tập đồn cơng tác chọn dịng lúa Tính cho TT Nội dung chi Số lượng công 600 Làm đất (thủ cơng) cơng 50 Th gieo mạ, chăm sóc mạ cơng 40 Thuê nhổ mạ, cấy công 120 Thuê làm cỏ, bón phân cơng 40 Phun thuốc trừ sâu bệnh, trừ cỏ, chống chuột công 60 Thu mẫu, làm mẫu công 100 Thuê gặt, tuốt, phơi, làm công 180 Công dẫn nước công 10 Lao động kỹ thuật công 500 Chuẩn bị mẫu, thiết kế, bố trí thí nghiệm cơng 70 Theo dõi thí nghiệm, thu thập xử lý mẫu công 350 Xử lý số liệu, viết báo cáo I Đơn vị tính cơng 80 cơng 30 Giống kg 80 Đạm kg 250 Lân kg 500 Kali kg 200 Phân vi sinh, vi lượng Hoặc phân chuồng 10 Th khốn chun mơn Lao động phổ thông Thuê khác Bảo vệ thí nghiệm Th đất (thuế nơng nghiệp) II Ngun vật liệu, lượng Phân, thuốc sâu bệnh Viện Khoa học Nơng nghiệp Việt Nam Định mức thí nghiệm lĩnh vực trồng trọt bảo vệ thực vật Thuốc trừ sâu bệnh, thuốc trừ cỏ, thuốc chống chuột kg Cọc tre (có thẻ kèm theo) 3000 Biển tên thí nghiệm, bảng tên giống 30 Nia 100 Mẹt 100 Cuốc, cào 10 Thúng 10 Quang gánh, đòn gánh 20 Bạt phơi giống 10m2 Nilon chống chuột, chống rét kg 50 Bẫy chuột 100 Bao giấy đựng cá thể 2000 Bao giấy đựng dòng (1-3kg) 300 Bao dứa đựng dịng, giống (5-50kg) 200 Chi phí tưới tiêu nội đồng (thuỷ lợi phí) Xăng dầu phục vụ vận chuyển, máy thu hoạch lit 100 Dụng cụ, phụ tùng, vật rẻ tiền mau hỏng Nhu cầu điện nước, xăng dầu 1.2 Nhóm Tạo vật liệu khởi đầu mới: Các thí nghiệm tạo nguồn vật liệu khởi đầu phục vụ chọn tạo giống lúa (khốn theo tổ hợp, mẫu) 1.2.1 Lai hữu tính TT I Nội dung chi phí cho 01 tổ hợp lai hữu tính Số lượng cơng Cơng lao động Công lao động kỹ thuật (Đánh giá, chọn bố mẹ, chuẩn bị chậu vại, dụng cụ, trì bố mẹ chậu vại, khử đực, lai tạo, chăm sóc lai thu hoạch hạt F0) II Đơn vị tính Hóa chất III Dụng cụ tiêu hao Chậu vại, khay nhựa, đĩa petri, giấy thấm, kéo, panh, giấy bao cách ly IV Năng lượng nhiên liệu V Chi phí bảo dưỡng, sửa chữa thiết bị Viện Khoa học Nơng nghiệp Việt Nam Định mức thí nghiệm lĩnh vực trồng trọt bảo vệ thực vật 1.2.2 Xử lý đột biến (phóng xạ, hố chất) TT Nội dung chi phí cho 01 mẫu Cơng lao động kỹ thuật: Chuẩn bị mẫu (hạt, mầm, cây); Xử lý Chăm sóc, đánh giá, thu hoạch hạt M1 II cơng 10 Đơn vị tính Số lượng Công lao động Số lượng gram I Đơn vị tính Hóa chất (dùng cho xử lý đột biến hoá chất) - MNU, Conchicine III Dụng cụ tiêu hao Chậu vại, khay nhựa, đĩa petri, giấy thấm, kéo, panh, bao giấy IV Năng lượng nhiên liệu V Chi phí bảo dưỡng, sửa chữa thiết bị 1.2.3 Ni cấy bao, hạt phấn TT Nội dung chi phí cho 01 mẫu I Công lao động Công lao động phổ thông (Thu mẫu, rửa chai lọ, vệ sinh buồng nuôi cấy ) công Công lao động kỹ thuật (Xử lý mẫu, chuẩn bị môi trường, nuôi cấy, cấy chuyển, chăm sóc, theo dõi, thu hoạch ) cơng II Hóa chất - Mơi trường MS lit - Mơi trường Yoshida lit 10 - Chất điều hoà sinh trưởng (Niketin, NAA, IAA, 2,4D ) gram - Đường saccaro gram 100 - Hoá chất khử trùng (clorox ) lit 0,5 - Cồn tuyệt đối lit - Nước cất lần lit 30 - Agar gram 30 1,5 III Dụng cụ tiêu hao IV Bình thuỷ tinh, ống đong, pipet, khay, đĩa petri, giấy thấm, kéo, panh, nút Năng lượng nhiên liệu - Điện - Nước V Kw lit Chi phí bảo dưỡng, sửa chữa thiết bị Bóng đèn, điều hồ nhiệu độ, buồng nuôi cấy, nồi hấp, máy khuấy, 10 30 % (I+II+III+IV) Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam Định mức thí nghiệm lĩnh vực trồng trọt bảo vệ thực vật Nhóm 3: So sánh giống, nghiên cứu kỹ thuật canh tác, khảo nghiệm sinh thái, triển vọng vùng sinh thái khác (Khảo nghiệm tác giả) Tính cho TT Đơn vị tính Số lượng cơng 550 Làm đất (thủ cơng) cơng 50 Th gieo mạ, chăm sóc mạ cơng 40 Th nhổ mạ, cấy cơng 90 Th làm cỏ, bón phân công 60 Phun thuốc trừ sâu bệnh, trừ cỏ, chống chuột công 60 Thu mẫu, làm mẫu công 100 Thuê gặt, tuốt, phơi, làm công 130 Công dẫn nước công 20 Lao động kỹ thuật công 450 Chuẩn bị vật liệu, thiết kế, bố trí thí nghiệm cơng 60 Theo dõi thí nghiệm, thu thập xử lý mẫu công 320 Xử lý số liệu, viết báo cáo I Nội dung chi công 70 công 30 Giống kg 80 Đạm kg 250 Lân kg 500 Kali kg 200 Phân vi sinh, vi lượng Hoặc phân chuồng 10 Thuốc trừ sâu bệnh, thuốc trừ cỏ, thuốc chuột kg Cọc tre (có thẻ kèm theo) 1000 Biển tên thí nghiệm, bảng tên giống 30 Nia 10 Mẹt 10 Cuốc, cào (mỗi loại) 10 Thúng 10 Quang gánh, địn gánh (bộ) 10 Th khốn chun mơn Lao động phổ thông Thuê mướn khác Bảo vệ thí nghiệm Th đất (thuế nơng nghiệp) II Ngun vật liệu, lượng Phân, thuốc sâu bệnh Dụng cụ, phụ tùng, vật rẻ tiền mau hỏng Viện Khoa học Nơng nghiệp Việt Nam Định mức thí nghiệm lĩnh vực trồng trọt bảo vệ thực vật Bạt phơi giống 10m2 Nilon chống chuột, chống rét kg 30 Bẫy chuột 50 Bao giấy đựng dòng (1-3kg) 200 Bao dứa đựng dòng, giống (5-50kg) 100 Xăng dầu phục vụ vận chuyển, máy thu hoạch lit 100 Tiền thuỷ lợi phí (nước nguồn) Nhu cầu điện nước, xăng dầu 1.4 Nhóm 4: Khảo nghiệm rộng, xây dựng mơ hình trình diễn dòng, giống lúa triển vọng vùng sinh thái khác Tính cho TT Đơn vị tính Số lượng Lao động phổ thơng cơng Lao động kỹ thuật I Nội dung chi công 120 công 120 Giống kg 50 Đạm kg 125 Lân kg 250 Kali kg 100 Thuốc trừ sâu bệnh, thuốc trừ cỏ, thuốc chuột kg Biển tên thí nghiệm, bảng tên giống 20 Nia 10 Mẹt 10 Cuốc, cào (mỗi loại) 10 Thúng 10 Quang gánh, đòn gánh 10 Bạt phơi giống 10m2 Nilon chống chuột, chống rét kg 30 Bẫy chuột 50 Bao dứa đựng dòng, giống (5-50kg) 100 Th khốn chun mơn Theo dõi, đánh giá, đo đếm tiêu, thu thập mẫu, xử lý mẫu, xử lý số liệu, viết báo cáo II Nguyên vật liệu, lượng Phân, thuốc sâu bệnh Dụng cụ, phụ tùng, vật rẻ tiền mau hỏng III Chi phí, th mướn khác Cơng tác phí km Thuê đất Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam Định mức thí nghiệm lĩnh vực trồng trọt bảo vệ thực vật II ĐỊNH MỨC CHI PHÍ CHO NGHIÊN CỨU CHỌN TẠO GIỐNG LÚA LAI 2.1 Nhóm 1: Thí nghiệm tập đồn cơng tác vườn dịng (tập đồn, vườn dịng) Tính cho TT Nội dung chi phí Đơn vị tính Số lượng I Thuê khốn chun mơn Lao động phổ thơng cơng 650 Làm đất cơng 50 Gieo, chăm sóc mạ cơng 40 Nhổ mạ, cấy cơng 120 Bón phân, làm cỏ, chống chuột cơng 100 Phun thuốc bảo vệ thực vật, hố chất công 50 Thu mẫu, làm mẫu công 120 Thu hoạch, phơi sấy công 150 Thuê tưới tiêu nước công 20 Lao động kỹ thuật 600 Chuẩn bị mẫu, thiết kế, bố trí thí nghiệm 70 Theo dõi, chọn mẫu, thu mẫu, xử lý mẫu, soi phấn công 450 Xử lý số liệu, viết báo cáo công 80 công 30 Giống kg 40 Phân vi sinh kg 1.500 Đạm urê kg 300 Supe lân kg 550 Kali clorua kg 200 Thuốc bảo vệ thực vật, thuốc chuột cơng kg Bảng thí nghiệm 10 Nilon che mạ kg 250 Thẻ thí nghiệm 3.000 Cọc tre chống chuột 750 cuộn 20 Liềm 20 Cuốc 10 Bình bơm thuốc sâu Thuê mướn khác Bảo vệ thí nghiệm Th đất (thuế nơng nghiệp) II Nguyên vật liệu, lượng Giống, phân bón, hố chất Vật tư khác Dây buộc Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 Định mức thí nghiệm lĩnh vực trồng trọt bảo vệ thực vật ml ml g g g g g g mg mg mg g g g ml mg l l ml ml g mg mg mg mg mg mg mg mg mg mg mg mg mg mg mg mg g g Phenol Xl1-blue/YM4271 competent cell NaCl MgSO4 maltose casein hydrolysate EDTA Agarose Bromophenol blue Xylen FF Ethidium bromide Urê Acrylamide Bis- acrylamide Glacial acetic acid APS TEMED Bind Xylene Sigma Cote Rain X D-sorbitol L-Isoleucine L -Valine L -Adenine hemisulfate salt L -Arginine HCl L -Histidine HCl monohydrate L -Leucineb L -Lysine HCl L -Methionine L -Phenylalanine L -Threonine L -Tryptophanc L -Tyrosine L -Uracil L -Glutamic acid L -Aspartic acid L -Serine Lithium Acetate PEG 3350 268 20 50 20 5 1 0,02 63 6,8 0,4 400 1,2 400 5 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 30 Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 III Định mức thí nghiệm lĩnh vực trồng trọt bảo vệ thực vật Tris-HCl ssDNA Na2HPO4.7H2O NaH2PO4 H2O KCl MgSO4 7H2O β-mercaptoethanol X-gal DMF Chloroform Phenol Isoamyl Alcohol Triton® X-100 SDS EDTA 3AT Hóa chất khác Dụng cụ, vật tư tiêu hao Giấy parafilm 10 11 12 13 14 15 16 17 17 IV 10 100 100 100 100 Đầu côn 10 l Găng tay Giấy thấm Cuộn bọc nhôm Cuộn bọc nilon Giấy lau gel Bút viết kính Chai lọ loại Đĩa petri ống đong… Năng lượng nhiên liệu 200 tờ chiếc chiếc Đầu côn 200 l 20 0,1 16 0,75 0,0256 0,02 0,05 20 100 100 10 3 0,2 10% cm2 Giấy cân ống Eppendorf 1,5 ml ống Eppendorf 0,2ml Đầu côn 1ml g mg g g g g ml g mg ml ml ml ml g g g 500 hộp Hộp Cuộn Cuộn Gói Chiếc Lọ 100 ống theo thực tế đề tài yêu cầu 269 Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam Định mức thí nghiệm lĩnh vực trồng trọt bảo vệ thực vật 7.6.2.5 Tách plasmid, giải & phân tích trình tự, biểu protein, kiểm tra protein TT Nội dung chi Đơn vị tính Số lượng I Th khốn Cơng lao động phổ thông công 40 Công lao động kỹ thuật công 100 Công chuẩn bị mẫu, thiết kế bố trí TN cơng 30 Cơng theo dõi TN thu thập số liệu công 60 Công xử lý số liệu viết báo cáo cơng 10 Lần thí nghiệm 2-3 II Hóa chất Theo mục 6.1.4 Một số hóa chất khác tùy thuộc đặc tính protein cần kiểm tra thuyết minh tùy trường hợp cụ thể 7.7 Lập đồ phân tử gen kháng chọn tạo giống phương pháp MAS (1 gen kháng bệnh mới) Chi tiết hạng mục công việc bao gồm: TT Nội dung cơng việc Đơn vị tính Số lượng Phân tích, chọn cặp giống bố mẹ (chọn I giống kháng giống có đặc tính nơng sinh học tốt nhiễm bệnh) Thu thập, chọn lọc, lưu giữ nguồn vật liệu (100 Giống 100 giống làm nguồn vật liệu) Theo mục Đánh giá vật liệu 780 2390 Đánh giá kiểu hình tính kháng giống vật liệu (100 2.1 650 1.500 giống x 30 x lần lặp lại = 9.000 cây) + Gieo trồng, chăm sóc: 350 350 + Tạo, lưu giữ, nhân nguồn bệnh, lây nhiễm 150 500 + Đánh giá tính kháng/ nhiễm bệnh 150 500 + Tổng hợp, xử lý số liệu, phân tích kết 150 2.2 Phân tích đa dạng di truyền genome giống vật liệu + Tách chiết ADN, kiểm tra chất lượng ADN, đọc Giống 100 nồng độ ADN, pha loãng ADN (100 mẫu giống) Xem Mục + Chọn lọc thị, làm phản ứng PCR, chạy điện di Mẫu 5.000 (50 thị x 100 giống = 5.000 mẫu PCR) Xem Mục Đọc kết quả, nhập số lệu, xử lý số liệu, phân tích Mẫu 100 chọn cặp giống bố mẹ thích hợp II Lai tạo quần thể lập đồ 270 Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam III IV 1.1 1.2 2.1 2.2 Định mức thí nghiệm lĩnh vực trồng trọt bảo vệ thực vật Lai tạo quần thể F1 từ 02-04 giống bố mẹ (100 hạt lai/cặp lai) (1 vụ x tháng x 30 ngày = 150 ngày) Tạo quần thể lập đồ hệ F2 (300 cá thể) (5 vụ x tháng x 30 ngày = 750 ngày) Tạo quần thể lập đồ hệ F3 (300 cá thể) BC (5 vụ x tháng x 30 ngày = 750 ngày) Xác định thị phân tử đa hình hai giống bố mẹ Tách chiết ADN, kiểm tra chất lượng ADN, đọc nồng độ ADN, pha loãng ADN bố mẹ (40 mẫu ADN) Xem Mục Tìm thị phân tử từ trang web chuyên ngành, cơng trình cơng bố giới, tổng hợp thị phân tử (1000 thị) Làm phản ứng PCR giống bố mẹ với thị phân tử chạy điện di phân tích sản phẩm PCR (4.000 mẫu PCR) Xem Mục Đọc kết quả, phân tích kết quả, xác định thị cho đa hình hai giống bố mẹ Nghiên cứu di truyền lập đồ locus gen kháng Đánh giá kiểu hình tính kháng quần thể lập đồ Đối với tính trạng phi sinh học (chịu hạn, mặn) Gieo trồng, chăm sóc quần thể lập đồ F2 (300 cá thể), BC1, BC2 (200-300 cá thể) Tạo nguồn bệnh, lây nhiễm, tạo điều kiện thử hạn… Đánh giá tính kháng/ nhiễm Tổng hợp, xử lý số liệu, phân tích kết Đối với tính trạng chịu tác động tác nhân sinh học (các nguồn bệnh rầy nâu, bạc lá, đạo ôn… lúa loại bệnh tương tự khác) Gieo trồng, chăm sóc quần thể lập đồ (300 cá thể), BC1, BC2 (200-300 cá thể) Tạo nguồn bệnh, lây nhiễm nhân tạo Đánh giá tính kháng/ nhiễm Tổng hợp, xử lý số liệu, phân tích kết Đánh giá kiểu gen cá thể quần thể lập đồ Tách chiết ADN, kiểm tra chất lượng ADN, đọc nồng độ ADN, pha loãng ADN quần thể lập đồ (300500 mẫu ADN) Xem Mục Làm phản ứng PCR quần thể lập đồ với thị phân tử cho đa hình hai bố mẹ chạy điện di 271 Hạt lai/cặp lai 100 Cá thể 300 Cá thể 300 Mẫu 40 Chỉ thị 1000 Mẫu 4.000 Chỉ thị 200 750 1.500 Cá thể 300 Cá thể 200-300 Mẫu 300 Mẫu 30.000 Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam Định mức thí nghiệm lĩnh vực trồng trọt bảo vệ thực vật phân tích sản phẩm PCR (30.000 mẫu PCR) Xem Mục V Xây dựng đồ gen kháng Tổng hợp số liệu, phân tích kiểu gen quần thể lập đồ Tổng hợp số liệu, phân tích kiểu hình tính kháng quần thể Xử lý số liệu phần mềm máy tính chuyên dụng, định vị gen kháng đồ nhiễm sắc thể, xác định thị phân tử liên kết Xác định thị phân tử liên kết với locus gen VI kháng Chọn lọc thị phân tử nằm vùng NST định vị gen kháng (các thị nằm xung quanh vùng gen kháng, sử dụng trang web chuyên ngành thông tin từ cơng trình cơng bố) Xác định thị cho đa hình hai giống bố mẹ (50 thị) Làm phản ứng PCR hai giống bố mẹ với thị phân tử chạy điện di phân tích sản phẩm PCR (100 phản ứng PCR) Xem Mục Phân tích quần thể lập đồ với thị phân tử cho đa hình (1.500 mẫu PCR) Xem Mục Đọc kết quả, nhập số lệu, xử lý số liệu, phân tích, xác định thị liên kết gần với gen kháng Ứng dụng thị phân tử chọn giống kháng VII bệnh (Marker- assissted selection) Tạo dòng kháng bệnh Chọn dòng kháng bệnh phương pháp truyền thống để kết hợp với sinh học phân tử Sàng lọc cá thể mang gen kháng thị phân tử liên kết Tách chiết ADN, kiểm tra chất lượng ADN, đọc nồng độ ADN, pha loãng ADN cá thể hệ (7 3.1 hệ x 200 cá =1.400 mẫu ADN) Xem Mục Làm PCR cá thể với thị phân tử liên kết với locus gen kháng chạy điện di phân tích sản phẩm 3.2 PCR (7 hệ x 200 cá x thị = 7.000 mẫu PCR) Xem Mục Đọc kết quả, phân tích kết quả, xác định cá thể 3.3 mang gen kháng 3.4 Lây nhiễm, đánh giá kiểu hình kháng bệnh 272 Mẫu 100 Mẫu 1500 Chỉ thị 200 Mẫu 1.400 Mẫu 7.000 Cá thể 500 Cây/Dòng/th 50-100 Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam 3.5 3.6 Định mức thí nghiệm lĩnh vực trồng trọt bảo vệ thực vật dòng chọn lọc (mỗi dòng đánh giá 50 -100 cây)/thế hệ + Tạo, lưu giữ, nhân nguồn bệnh, lây nhiễm (7 hệ) + Đánh giá tính kháng/ nhiễm bệnh (7 hệ) Tổng hợp, xử lý số liệu, phân tích kết (7 hệ) Kết phân tích kiểu hình kháng bệnh kiểu gen để chọn lọc cá thể mang gen kháng ế hệ Thế hệ Thế hệ 7 Ghi chú: Lập đồ phân tử gen kháng chọn tạo giống phương pháp MAS (cho gen kháng bệnh mới) kỹ thuật phức tạp bao gồm nhiều hạng mục công việc Số liệu bảng tính tốn cho khối lượng (quy mô) hạng mục công việc Với hạng mục công việc chi tiết, định mức cho th khốn hóa chất, vật tư tính theo mục trước TT Nội dung chi I Công lao động phổ thông Công lao động kỹ thuật II Hoá chất, dụng cụ vật tư tiêu hao III Năng lượng nhiên liệu Số lượng Thuê khoán Đơn vị tính 7.8 Kỹ thuật ni cấy in vitro (đơn vị: mẫu) 7.8.1 Tạo vật liệu vô trùng, tạo mô sẹo tái sinh chồi TT Nội dung chi I Th khốn Cơng lao động phổ thơng Chuẩn bị dụng cụ (rửa, hấp sấy, khử trùng ) Công lao động kỹ thuật Công chuẩn bị mẫu, thiết kế bố trí TN Cơng theo dõi TN thu thập số liệu Công xử lý số liệu viết báo cáo II Hoá chất Cồn tuyệt đối Cồn đốt H2O2 HgCl2 Ca(ClO)2 NaClO NH4NO3 KH2PO4 KNO3 10 Na2EDTA 11 FeSO4 12 CaCl2.2H2O 13 MgSO4.7H2O 273 Xem Phụ lục Xem Phụ lục theo thực tế đề tài yêu cầu Đơn vị tính Số lượng cơng cơng cơng cơng cơng công 5 3 ml ml ml mg mg ml mg mg mg mg mg mg mg 15 30 50 400 15 495 51 570 11,16 8,34 136 111 Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 III 10 11 IV Định mức thí nghiệm lĩnh vực trồng trọt bảo vệ thực vật KI H3BO3 MnSO4.4H2O CuSO4.5H2O ZnSO4.7H2O Na2MoO4.2H2O CoCl2.6H2O Vitamin B1 Vitamin B6 Nicotinic acid Glycine Myo-Inositol Sucrose Agar 2,4D NAA BA Kinetin IAA Thidiazuron Zeatin GA3 Dicambar Picloram Than hoạt tính Hóa chất bổ sung khác Dụng cụ, vật tư tiêu hao Găng tay Giấy thấm Ống nghiệm Đĩa petri Bình tam giác Panh cấy Lưỡi dao Kéo cắt mẫu Bông thấm nước, KTN Nút cao su Khăn cấy Năng lượng nhiên liệu mg mg mg mg mg mg mg mg mg mg mg mg g g mg mg mg mg mg mg mg mg mg mg g 0,249 1,86 6,69 0,0075 2,58 0,075 0,0075 0,3 0,15 0,15 0,6 30 2,4 0,12 0,15 0,06 0,18 0,12 0,6 0,6 0,6 0,6 0,12 10% Chiếc Hộp 0,5 Chiếc Chiếc Chiếc Chiếc Chiếc Chiếc Kg 0,3 Chiếc Chiếc theo thực tế đề tài yêu cầu Ghi chú: - lần cấy ban đầu kèm với lần cấy chuyển - Để tạo mẫu cấy vơ trùng cần phải khử trùng lần/mẫu - Tạo mơ sẹo/ mẫu phải qua lần cấy chuyển - Tái chồi / mẫu phải qua lần cấy chuyển mẫu 274 Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam Định mức thí nghiệm lĩnh vực trồng trọt bảo vệ thực vật 7.8.2 Nhân chồi, tạo hoàn chỉnh đưa nhà lưới TT Nội dung chi I Th khốn Cơng lao động phổ thơng Chuẩn bị dụng cụ giá thể sau in vitro Cơng chăm sóc nhà lưới Cơng hỗ trợ phân tích mẫu Cơng lao động kỹ thuật Cơng chuẩn bị mẫu, thiết kế bố trí TN Công theo dõi TN thu thập số liệu Công xử lý số liệu viết báo cáo II 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 Hoá chất NH4NO3 KH2PO4 KNO3 Na2EDTA FeSO4 CaCl2.2H2O MgSO4.7H2O KI H3BO3 MnSO4.4H2O CuSO4.5H2O ZnSO4.7H2O Na2MoO4.2H2O CoCl2.6H2O Vitamin B1 Vitamin B6 Nicotinic acid Glycine Myo-Inositol Sucrose Agar NAA BAP Than hoạt tính Cồn đốt CPPU Hóa chất số phụ gia khác… 275 Số lượng công công công công 10 4 công công công công 16 5 mg mg mg mg mg mg mg mg mg mg mg mg mg mg mg mg mg mg mg g g mg mg g ml mg Đơn vị tính 495 245 495 1,0 1,0 245 245 0,5 0,5 0,5 0,5 245 0,5 0,5 1,0 1,0 1,0 2,0 5,0 15 49 2,0 0,5 50 1,0 10% Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam Định mức thí nghiệm lĩnh vực trồng trọt bảo vệ thực vật III 10 11 12 13 14 15 16 17 Dụng cụ, vật tư tiêu hao Nút cao su Panh cấy Lưỡi dao Kéo cắt mẫu Găng tay Bình tam giác Bơng thấm nước, KTN Giá thể Đạm Kali Lân Xô nhựa, khay trồng Túi bầu Lưới đen che sáng Nilon che phủ Giấy xi măng… Giấy thiếc, thẻ, kích thích sinh trưởng, thuốc BVTV IV Năng lượng nhiên liệu Chiếc Chiếc Chiếc Chiếc đôi Chiếc Kg kg kg kg kg Chiếc Chiếc M2 Cuộn Tờ 15 10 0,3 0,2 0,1 0,2 5 10% theo thực tế đề tài yêu cầu Ghi chú: - Nhân chồi trình nhân nhanh để tạo đủ số lượng với mục đích u cầu chuyển sang mơi trường kéo dài chồi tạo hoàn chỉnh  giai đoạn cần nhiều hóa chất, vật tư tiêu haovà công lao động, công kỹ thuật - Nhân chồi tối thiểu phải qua 8- 12 lần cấy chuyển sau đến kéo dài chồi Giai đoạn kéo dài chồi phải tiếp1-2 lần - Giai đoạn tạo hoàn chỉnh:để tạo hoàn chỉnh cần lượng hóa chất để thăm dị tạo rễ chồi - Đưa từ ống nghiệm vườn khó khăn điều kiện dinh dưỡng nhân tạo, chuyển với điều kiện khí hậu, thời tiết dinh dưỡng khác nhiều với phịngthí nghiệm Vì cần phải bố trí thí nghiệm làm nhiều lần để thử điều kiện thích nghi giống với môi trường 276 Viện Khoa học Nơng nghiệp Việt Nam Định mức thí nghiệm lĩnh vực trồng trọt bảo vệ thực vật PHẦN PHỤ LỤC PHỤ LỤC Vật tư thí nghiệm khác (vật rẻ) cho loại thí nghiệm nghiên cứu ngơ TT Nội dung chi I Th khốn chun mơn ĐVT Số lượng Bình bơm thuốc trừ sâu Chiếc Nilon chống chuột Kg 25 Dây gieo căng nilon Kg 10 Sơn Kg Ghi Chiếc 150 Bẫy chuột Chiếc Chiếc 50 Bút bi, bút chì Chiếc 40 Giấy A4 Ram 10 Túi lưới đựng bắp, hạt Chiếc 400 Bao tải lớp Chiếc 50 Ghim bấm, cài Hộp 50 Bàn ghim Chiếc 10 Thước gieo, đo Chiếc 10 Bìa cứng A0 làm thẻ đeo Tờ 1,5 cm x 3-5 cm x 50120 cm 30 Bút kg sơn trắng +1 kg sơn đỏ/ 50 Cọc tre căng nilion cọc TK TN PHỤ LỤC Lập đồ phân tử gen kháng chọn tạo giống phương pháp MAS (1 gen kháng bệnh mới) Định mức chi tiết cho phần Thuê khoán TT Nội dung chi Cơng LĐPT Cơng LĐKT Phân tích, chọn cặp giống bố mẹ (chọn I giống kháng giống có đặc tính nơng sinh 780 2.010 học tốt nhiễm bệnh) Thu thập, chọn lọc, lưu giữ nguồn vật liệu (100 20 giống làm nguồn vật liệu) Đánh giá vật liệu 780 1990 Đánh giá kiểu hình tính kháng giống vật liệu (100 2.1 650 1.100 giống x 30 x lần lặp lại = 9.000 cây) + Gieo trồng, chăm sóc: 350 200 + Tạo, lưu giữ, nhân nguồn bệnh, lây nhiễm 150 250 + Đánh giá tính kháng/ nhiễm bệnh 150 500 + Tổng hợp, xử lý số liệu, phân tích kết 150 2.2 Phân tích đa dạng di truyền genome giống vật liệu 130 890 277 Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam II III 1.1 1.2 1.3 1.4 2.1 2.2 2.3 2.4 IV 1.1 1.2 1.3 1.4 2.1 Định mức thí nghiệm lĩnh vực trồng trọt bảo vệ thực vật + Tách chiết ADN, kiểm tra chất lượng ADN, đọc nồng độ ADN, pha loãng ADN (100 giống x mẫu ADN/giống = 300 mẫu AND) + Chọn lọc thị, làm phản ứng PCR (50 thị x 100 giống = 5.000 mẫu PCR) + Chạy điện di phân tích sản phẩm PCR: Đọc kết quả, nhập số lệu, xử lý số liệu, phân tích chọn cặp giống bố mẹ thích hợp Lai tạo quần thể lập đồ Lai tạo quần thể F1 từ hai giống bố mẹ xác định (100 hạt lai/cặp lai) (1 vụ x tháng x 30 ngày = 150 ngày) Tạo quần thể lập đồ hệ F2 (300 cá thể) (5 vụ x tháng x 30 ngày = 750 ngày) Tạo quần thể lập đồ hệ F3 (300 cá thể) BC (5 vụ x tháng x 30 ngày = 750 ngày) Nghiên cứu di truyền tính kháng/tính chống chịu gen cần lập đồ Đối với tính trạng phi sinh học (chịu hạn, mặn) Gieo trồng, chăm sóc quần thể lập đồ F2 (300 cá thể), BC1, BC2 (200-300 cá thể) Tạo nguồn bệnh, lây nhiễm, tạo điều kiện thử hạn… Đánh giá tính kháng/ nhiễm Tổng hợp, xử lý số liệu, phân tích kết Đối với tính trạng chịu tác động tác nhân sinh học (các nguồn bệnh rầy nâu, bạc lá, đạo ôn… lúa loại bệnh tương tự khác) Gieo trồng, chăm sóc quần thể lập đồ (300 cá thể), BC1, BC2 (200-300 cá thể) Tạo nguồn bệnh, lây nhiễm nhân tạo Đánh giá tính kháng/ nhiễm Tổng hợp, xử lý số liệu, phân tích kết Đánh giá kiểu hình tính kháng quần thể lập đồ Đối với tính trạng phi sinh học (chịu hạn, mặn) Gieo trồng, chăm sóc quần thể lập đồ (300 cá thể) Tạo nguồn bệnh, lây nhiễm, tạo điều kiện thử hạn… Đánh giá tính kháng/ nhiễm Tổng hợp, xử lý số liệu, phân tích kết Đối với tính trạng chịu tác động tác nhân sinh học (các nguồn bệnh rầy nâu, bạc lá, đạo ôn… lúa loại bệnh tương tự khác) Gieo trồng, chăm sóc quần thể lập đồ (300 cá thể) 278 30 90 50 500 50 300 100 1.750 750 250 150 750 300 750 300 1.800 4.050 750 1.500 300 300 300 150 600 300 300 1.050 2.550 300 300 600 150 1.500 450 300 600 1.300 250 100 100 50 500 100 200 100 100 350 800 100 100 Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam 2.2 2.3 2.4 Định mức thí nghiệm lĩnh vực trồng trọt bảo vệ thực vật Tạo nguồn bệnh, lây nhiễm nhân tạo Đánh giá tính kháng/ nhiễm Tổng hợp, xử lý số liệu, phân tích kết Xác định thị phân tử đa hình hai giống bố V mẹ Tách chiết ADN, kiểm tra chất lượng ADN, đọc nồng độ ADN, pha loãng ADN bố mẹ (2 giống x 10 mẫu ADN = 20 mẫu ADN) Tìm thị phân tử từ trang web chuyên ngành, cơng trình cơng bố giới, tổng hợp thị phân tử (1000 thị) Làm phản ứng PCR hai giống bố mẹ với thị phân tử (1000 thị x mẫu giống= 2.000 mẫu PCR) Chạy điện di phân tích sản phẩm PCR Đọc kết quả, phân tích kết quả, xác định 100 thị cho đa hình hai giống bố mẹ Đánh giá kiểu gen cá thể quần thể lập VI đồ Tách chiết ADN, kiểm tra chất lượng ADN, đọc nồng độ ADN, pha loãng ADN quần thể lập đồ (300 cá thể x mẫu ADN = 1.500 mẫu ADN) Làm phản ứng PCR quần thể lập đồ với thị phân tử cho đa hình hai bố mẹ (300 cá thể x 100 thị = 30.000 mẫu PCR) Chạy điện di phân tích sản phẩm PCR Đọc kết ghi nhận, phân tích số liệu VII Xây dựng đồ gen kháng Tổng hợp số liệu, phân tích kiểu gen quần thể lập đồ Tổng hợp số liệu, phân tích kiểu hình tính kháng quần thể Xử lý số liệu phần mềm máy tính chuyên dụng, định vị gen kháng đồ nhiễm sắc thể, xác định thị phân tử liên kết VII Sàng lọc thị phân tử liên kết gần với gen kháng I Chọn lọc thị phân tử nằm vùng NST định vị gen kháng (các thị nằm xung quanh vùng gen kháng, sử dụng trang web chuyên ngành thông tin từ cơng trình cơng bố) Xác định thị cho đa hình hai giống bố mẹ (50 thị) Làm phản ứng PCR hai giống bố mẹ với thị phân tử 279 200 50 500 100 100 105 760 10 150 50 200 50 200 200 750 5.500 150 500 600 2.000 600 2.000 1.000 600 200 200 200 200 940 90 50 100 Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam IX 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 3.6 3.7 Định mức thí nghiệm lĩnh vực trồng trọt bảo vệ thực vật Chạy điện di phân tích sản phẩm PCR Đọc kết quả, phân tích kết quả, xác định 50 thị cho đa hình hai giống bố mẹ Phân tích quần thể lập đồ với thị phân tử cho đa hình (300 cá thể x 50 thị = 1.500 mẫu PCR) + Làm phản ứng PCR + Chạy điện di phân tích sản phẩm PCR Đọc kết quả, nhập số lệu, xử lý số liệu, phân tích, xác định thị liên kết gần với gen kháng Ứng dụng thị phân tử chọn giống kháng bệnh (Marker assissted selection) (ứng dụng để chọn tạo giống kháng bệnh có suất, chất lượng cao) – vụ Tạo dòng kháng bệnh + Bằng phương pháp lai tự thụ (F7) + Bằng phương pháp lai hồi quy (BC3F4) Chọn dòng kháng bệnh phương pháp truyền thống để kết hợp với sinh học phân tử (7 hệ/1 quần thể) Sàng lọc cá thể mang gen kháng thị phân tử liên kết Tách chiết ADN, kiểm tra chất lượng ADN, đọc nồng độ ADN, pha loãng ADN cá thể hệ (7 hệ x 500 cá thế/1 hệ x mẫu ADN/ cá thể =7.000 mẫu ADN) Làm PCR cá thể với thị phân tử liên kết chặt với gen kháng (7 hệ x 500 cá thế/1 hệ x mẫu PCR/cá thể = 7.000 mẫu PCR) Chạy điện di phân tích sản phẩm PCR Đọc kết quả, phân tích kết quả, xác định cá thể mang gen kháng Lây nhiễm, đánh giá kiểu hình kháng bệnh dịng chọn lọc (mỗi dòng đánh giá 50 -100 cây)/thế hệ + Tạo, lưu giữ, nhân nguồn bệnh, lây nhiễm (7 hệ) + Đánh giá tính kháng/ nhiễm bệnh (7 hệ) Tổng hợp, xử lý số liệu, phân tích kết (7 hệ) Kết phân tích kiểu hình kháng bệnh kiểu gen để chọn lọc cá thể mang gen kháng 280 50 100 50 100 400 50 50 200 200 200 9.290 28.220 2.100 4.900 3.500 14.000 3.690 9.320 450 2.000 150 500 150 500 500 2.940 3.920 2.450 490 2.450 1.470 1.400 500 Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam Định mức thí nghiệm lĩnh vực trồng trọt bảo vệ thực vật PHỤ LỤC Lập đồ phân tử gen kháng chọn tạo giống phương pháp MAS (1 gen kháng bệnh mới) Định mức chi tiết cho phần Hóa chất Phân tích, chọn cặp giống bố mẹ (chọn giống kháng giống có đặc tính nơng sinh học tốt nhiễm bệnh) Đơn vị: 1mẫu ADN/1 thị phân tử TT Hố chất, vật tư Đơn vị tính Số lượng I Hóa chất ADN mẫu 4-5 g Enzyme giới hạn Đệm cắt enzyme Tris EDTA Triston X100 10 DDT Spermidine BSA dNTPs 10mM 11 12 Taq polymerase Mồi 10 mM (xuôi) 13 14 15 16 17 18 19 20 21 U l g g l mg mg mg l Unit 20 - 25 12 0,5 0,1 0,1 0,1 2,5 l 5 Mồi 10 mM (ngược) l Ladder (1Kb 100bp) 100 ng/l Boric acid Agarose Bromophenol blue Xylen FF Formamide l g g mg mg l mg Ethidium bromide 22 23 24 25 26 27 DNA Urê Acrylamide Bis- acrylamide Glacial acetic acid APS TEMED g g g g ml mg 28 Bind Xylene 29 30 31 Sigma Cote Rain X Sodiumthiosulfate l ml ml mg l 281 0,1 0,01 0,01 0,02 0.2 63 6,8 0,4 400 1,2 400 5 1,5 Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam 32 33 34 35 36 II 10 11 12 13 14 15 16 17 III Định mức thí nghiệm lĩnh vực trồng trọt bảo vệ thực vật Na2CO3 AgNO3 Ethanol Formaldehyde Nước cất khử ion Dụng cụ, vật tư tiêu hao Giấy parafilm Giấy cân ống Eppendorf 1,5 ml ống Eppendorf 0,5 ml ống Eppendorf 0,2ml PCR strip Đầu côn 1ml g g ml ml lít cm2 tờ chiếc chiếc chiếc Đầu côn 200 l Đầu côn 10 l Găng tay Giấy thấm Cuộn bọc nhôm Cuộn bọc nilon Giấy lau gel Bút viết kính Chai lọ loại ống đong… Năng lượng nhiên liệu (theo thực tế đề tài yêu cầu) 60 100 20 200 10 5 10 20 đôi 10 Tờ Cuộn 1/20 Cuộn 1/20 Gói 1/4 Chiếc Lọ ống (theo mẫu dự toán) Ghi chú: Số liệu bảng tính tốn riêng cho hạng mục công việc đặc thù, không thuộc hạng mục định mức mục trước 282 ... quy định thực tế đề tài) (theo mẫu dự tốn) III - Cơng tác phí 43 Viện Khoa học Nơng nghiệp Việt Nam Định mức thí nghiệm lĩnh vực trồng trọt bảo vệ thực vật X ĐỊNH MỨC CHI PHÍ CHO NGHIÊN CỨU VÀ... Trang PHẦN I: ĐỊNH MỨC CHI PHÍ CHO NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN MỘT SỐ CÂY LƯƠNG THỰC VÀ CÂY THỰC PHẨM 1.1 Định mức chi phí cho nghiên cứu phát triển lúa 1.2 Định mức chi phí cho nghiên cứu phát triển... Nguyên vật liệu, lượng Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam Định mức thí nghiệm lĩnh vực trồng trọt bảo vệ thực vật Giống kg 40 Đạm urê kg 175 Supe lân kg 350 Kali clorua kg 135 Thuốc bảo vệ thực vật