KỸ THUẬT LẤY VÀCHUYÊN CHỞBỆNH PHẨM TRONGXÉT NGHIỆM VI SINH LÂM SÀNG KỸ THUẬT LẤY VÀCHUYÊN CHỞBỆNH PHẨM TRONGXÉT NGHIỆM VI SINH LÂM SÀNG PhạmTháiBình KỸ THUẬT KHẢO SÁT TRỰC TIẾP PhạmTháiBình Bệnhphẩmlàmẫuthửlấytừbệnhnhân đểpháthiệnbằngchứnggiúpxácđònh đượctácnhângâynhiễmtrùng. KỸ THUẬT SOI TƯƠI KỸ THUẬT SOI TƯƠI Bệnhphẩmthườnggặptrongxétnghiệmvi sinh Máu Dòchnãotủy Nướctiểu Đườnghôhấptrên Hầuhọng Mũihầu Tai Xoang Đườnghôhấpdưới Đàm Dòchphế quản Dòchkhí quản Mủvàtiếtdòch Phân Đườngsinhdục Soitươikhôngnền Mụcđích  Quansátdiđộngcủavi khuẩn.  Pháthiệnphẩykhuẩntả. Huyềndòch (vi khuẩn, bệnhphẩm) Hạtụquang, quansátở ×40 Phươngpháp Vìbệnhphẩmđượclấybởinhiềunguồnkhácnhaunênphảilấy bệnhphẩmđạtyêucầutrongxétnghiệmvi sinh Soitươicónền Mụcđích  Pháthiệnvi khuẩn, vi nấm, ký sinhtrùng, hồngcầubạchcầu trongdòchnãotủy, phân Phươngpháp Huyềndòch (vi khuẩn, bệnhphẩm) Nigrosin(2%) Methylenblue (0.001%) Hạtụquang, quansátở ×40 C. neoformans (nigrosin) C.meningitidis (nigrosin) D. Church, 2005, The seven principle of accurate microbiology specimens collection, Microbiology newsletter a publication of the division of microbiology, CargaryLaboratory Services Nguyênnhânlàmchobệnhphẩmkhôngđạt yêucầutrongxétnghiệmvi sinh Calgary Laboratory Services, Canada KỸ THUẬT CHUẨN BỊ PHẾT NHUỘM KỸ THUẬT CHUẨN BỊ PHẾT NHUỘM Phảichỉđònhlấybệnhphẩmsớm - ngaykhibệnhnhâncó ấuhiệunhiemtrùng 1 Chuẩnbòphếtnhuộmkhithựchiện:  NhuộmGram (Gram stain).  Nhuộmkhángacid (Acid fast stain).  Nhuộmđơn(simple stain). Khilàmphếtnhuộmcầnlưuý:  Phảidànđềuphếtnhuộmtrênlame  Phảiđểphếtnhuộmkhôtựnhiên.  Phảicốđònhphếtnhuộmbằng cáchhơnhẹqua ngọnlửèncồn.  Khôngđượcnướngphếtnhuộm Máu Chỉđònhcấymáungaykhi códấuhiệunhiễmtrùng huyết(septicemia) hoặcdu khuẩnhuyết(bacteremia).  Sốt, ớnlạnh, lạnhrun, tiếngthổitim (cardiac murmur).  Nghingờviêmnộitâmmạc.  Có xuất huyết ở da hay niêm mạc, xuất huyết dạng sao (splinder) trênmóngtay, choáng. Phạm Hùng Vân, 2005, Các kỹ thuật lấy vàlàm xét nghiệm vi sinh lâm sàng các bệnh phẩm khác nhau KỸ THUẬT NHUỘM GRAM KỸ THUẬT NHUỘM GRAM Hans Christian Gram Dòchnãotủy Chỉđònhcấydòchnãotủykhicócáctriệu chứngnghingờviêmmàngnão. Khôngchỉđònhchọc dòDNT:  trẻsơ sinh bò suy tim, suy hô hấp.  bệnh nhân códấuhiệugiatăngáplựcnộisọ(soi đáymắtthấygaithòbòphùnề).  bệnh nhân bò nhiễm trùng vùng da nơi kim chọc dò đi qua đểlấy DNT. Phạm Hùng Vân, 2005, Các kỹ thuật lấy vàlàm xét nghiệm vi sinh lâm sàng các bệnh phẩm khác nhau Nguyêntắc Váchcủatếbàovi khuẩnGram (+) giữđượcmàucủaphứchợp Crystal violet-Iodine khibòtẩybằngalcohol Nướctiểu Chỉđònhcấynướctiểukhinghingờ nhiễmtrùngtiểucấptính, mạntínhcó hoặckhôngcótriệuchứng  Nhiễmtrùngbàngquang(đáira mủ, ramáu, đáikhó, đáiđau, đau tức vùng xương mu hay bụngdưới).  Nhiễmtrùngthận(đaulưng, tức căngvùnggócsống-sườn). Phạm Hùng Vân, 2005, Các kỹ thuật lấy vàlàm xét nghiệm vi sinh lâm sàng các bệnh phẩm khác nhau Thuốcnhuộm Dung dòchCrystal violet  Hòa tan amonium oxalate (0.8g) trong nướccất (80ml).  Nghiền crystal violet (2g) trongcối vàchotừtừ ethanol95% (20ml) vào đểlàmtan hoàntoàn crystal violet.  Trộnđềuhaidung dòchvớinhau.  Bảoquảntránhánhsáng. Dung dòchLugol  Nghiền iodine (1g) và potassium iodine (3g) trongcốivới nướccất (100ml) chotan hoàntoàn.  Bảoquảntránhánhsáng. Dung dòchAlcohol  Dùngalcohol 96% Dung dòchSafranine  Nghiền safranine O (0.25g) với ethanol95% (10ml) trongcốicho tan hoàntoàn.  Thêmvào90ml nướccất, trộnđều.  Bảoquảntránhánhsáng. Phân Chỉđònhcấyphânkhibòtiêu chảyhoặcbòrốiloạntiêu hoánghingờdo nhiễmtrùng  Tiêuchảy.  Lỵvớiphâncómủ, nhầy hoặcmáu.  Bòđaubụngcơn. Phạm Hùng Vân, 2005, Các kỹ thuật lấy vàlàm xét nghiệm vi sinh lâm sàng các bệnh phẩm khác nhau Phươngphápthựchiện Phếtnhuộmđược cốđònhtrênlame PhủCrystal violet lênphếtnhuộm trong1 phút Rửabằngnước chosạchthuốc nhuộm Phủ Lugol lên phếtnhuộmtrong 1 phút Rửabằngnước chosạchthuốc nhuộm Tẩymàubằng alcohol PhủSafraninelên phếtnhuộmtrong 1 phút Rửabằngnước chosạchthuốc nhuộm Thấmkhôphết nhuộm Rửabằngnước Quansátở vậtkínhdầu [...]... lạnh n Phạm Hùng Vân, 2005, Các kỹ thuật lấy và làm xét nghiệm vi sinh lâm sàng các bệnh phẩm khác nhau Dòch não tủy Do bác só chuyên khoa chọc dò bằng phương CÁC KỸ THUẬT NHUỘMtrùKHÁC pháp vô ng Lấy 1-3ml dòch não tủy cho vào tube hoặc lọ vô trùng rồi gởi ngay đến phòng xét nghiệm Phạm Hùng Vân, 2005, Các kỹ thuật lấy và làm xét nghiệm vi sinh lâm sàng các bệnh phẩm khác nhau Nước tiểu Kỹ thuật nhuộm... sạch mủ Vai trò của khảo sát trực tiếp trong vùng tai ngoàinghiệmg vi sinh lâm sàng g xét rồi dùn tăm bông vô trùn thấm mủ ở tai giữa Phạm Hùng Vân, 2005, Các kỹ thuật lấy và làm xét nghiệm vi sinh lâm sàng các bệnh phẩm khác nhau Khảo sát trực tiếp: máu Đường hô hấp trên Viêm xoang Nếu cấp tính thì lấy quệt mũi sau hoặc quệt mũi khe giữa (lấy qua nội soi tai mũi họng) Nếu Gram (-) Trực khuẩnmạn tính... saprophyticus (Nước tiểu, Gram) Phạm Hùng Vân, 2005, Các kỹ thuật lấy và làm xét nghiệm vi sinh lâm sàng các bệnh phẩm khác nhau Khảo sát trực tiếp: phân Không có yêu cầu cụ thể của lâm sàng: không thực hiện khảo sát trực tiếp Mủ và tiết dòch V cholerae (Phân, Gram) Yêu cầu tìm tả: soi tươi, nhuộm Gram Yêu cầu tìm Campylobacter: Mủ nạo hay mô khi giải phẩu nhuộm Gram Lấy mẫu trực tiếp cho vào lọ, tube vô... dòch não tủy Dòch hút khí phế khuẩn Gram (-) Trực quản L monocytogenes Dòch hút đàm trên khí quản qua đường mũi (Naso-Tracheal-Aspirate) Dòch hút phế quản qua nội soi (BronchoWashing) Dòch hút xuyên khí quản, chọc hút phổi N meningitidis S agalactidae Phạm Hùng Vân, 2005, Các kỹ thuật lấy và làm xét nghiệm vi sinh lâm sàng các bệnh phẩm khác nhau Khảo sát trực tiếp: nước tiểu Mủ và tiết dòch Mủ abcess,... lưỡi hay vòm khẩu cái hay niêm mạc má, miệng Lympho bào Hồng cầu Trung tính đa nhân C meningitidis Phạm Hùng Vân, 2005, Các kỹ thuật lấy và làm xét nghiệm vi sinh lâm sàng các bệnh phẩm khác nhau Khảo sát trực tiếp: Đàm dòch não tủy (tt) Đường hô hấp dưới Bệnh nhân súc miệng sạch bằng bằng nước không có chất sát trùng S pneumoniae Hướng dẫn bệnh nhân hít thật sâu vào rồi hãy cố H influenzae khạc đàm ra... Dòch tiết (dòch màng phổi, dòch màng bụng…) Trực khuẩn Gram (-) Mẫu nạo mủ xương khi giải phẫu Trực khuẩn Gram (-), nhỏ Phẩy khuẩn Gram (-) Phạm Hùng Vân, 2005, Các kỹ thuật lấy và làm xét nghiệm vi sinh lâm sàng các bệnh phẩm khác nhau Đường sinh dục Biện luận kết quả Tụ cầu Gram (+) Trực khuẩn Gram (+) Trực khuẩn Gram (+), xếp chuỗi có tạo bào tử Chỉ đònh cấy đường sinh dục nghi ngờ bệnh lây truyền... áqua nống thông tiểu hoặc qua nội soi bọng đái Thấm khô phết nhuộm Quan sát ở vật kính dầu Nước tiểu được cho ngay vàoHạt vô trùnsắc lọ biến g bắt màu xanh đậm, phần còn lại của vi khuẩn bắt màu xanh nhạt Phạm Hùng Vân, 2005, Các kỹ thuật lấy và làm xét nghiệm vi sinh lâm sàng các bệnh phẩm khác nhau Cách lấy nước tiểu giữa dòng Kỹ thuật nhuộm lưỡng cực Phương pháp Phết nhuôm được cố đònh trên lame Phủ... dòch bề t khí mặt phếtnnhuộmg Kết quả c bọt phế quả , khôn lấy nướ có thể lầm tưởng hình ảnh vi nấm Phạm Hùng Vân, 2005, Các kỹ thuật lấy và làm xét nghiệm vi sinh lâm sàng các bệnh phẩm khác nhau Phủ safranine quá ngắn nên không thấy rõ màu của Gram (-) 3 Phải lấy bệnh phẩm đúng thời điểm -vào KỸ THUẬT lúc mà tác nhân nhiem trùng hiệ M KHÁNG ACID NHUỘn diện trong bệnh phẩm NHUỘM KHÁNG ACID Nguyên... vô trùng Tiểu bỏ phần đầu, lấy − Mô bắt màu hồng – đỏ nước tiểu phần còn lại Phân KHẢO SÁDùTRỰC TIẾP(muỗng) T ng mái chèo lấy phân tươi, vùng có nhầy, máu cho vào lọ vô trùng TRÊN CÁC BỆNH PHẨM Dùng tăm bông vô trùng nhúng vào phân, XÉT NGHIỆM VI SINH LÂM SÀNG vùng nhầy máu hoặc quệt hậu môn Phạm Hùng Vân, 2005, Các kỹ thuật lấy và làm xét nghiệm vi sinh lâm sàng các bệnh phẩm khác nhau Đường hô hấp... nho, dạng cầu trực khuẩn ) Phạm Hùng Vân, 2005, Các kỹ thuật lấy và làm xét nghiệm vi sinh lâm sàng các bệnh phẩm khác nhau Mủ và tiết dòch Biện luận kết quả Chỉ đònh cấy mủ và tiết dòch trong các trường hợp: Mủ áp-xe Vết thương nhiễm trùng (vết loét, lở, mổ hậu phẫu, loét do nằm lâu) Song cầu Gram (-) Mạch lươn; mạch dẫn xoang hay hạch bạch huyết Dòch tiết (dòch màng phổi, dòch màng bụng…) Trực khuẩn . KỸ THUẬT LẤY VÀCHUYÊN CHỞBỆNH PHẨM TRONGXÉT NGHIỆM VI SINH LÂM SÀNG KỸ THUẬT LẤY VÀCHUYÊN CHỞBỆNH PHẨM TRONGXÉT NGHIỆM VI SINH LÂM SÀNG PhạmTháiBình KỸ THUẬT KHẢO SÁT TRỰC TIẾP PhạmTháiBình Bệnhphẩmlàmẫuthửlấytừbệnhnhân đểpháthiệnbằngchứnggiúpxácđònh đượctácnhângâynhiễmtrùng. KỸ. sao (splinder) trênmóngtay, choáng. Phạm Hùng Vân, 2005, Các kỹ thuật lấy vàlàm xét nghiệm vi sinh lâm sàng các bệnh phẩm khác nhau KỸ THUẬT NHUỘM GRAM KỸ THUẬT NHUỘM GRAM Hans Christian Gram Dòchnãotủy Chỉđònhcấydòchnãotủykhicócáctriệu chứngnghingờviêmmàngnão. Khôngchỉđònhchọc. dòch màngbụng…).  Mẫunạomủxươngkhigiảiphẫu Phạm Hùng Vân, 2005, Các kỹ thuật lấy vàlàm xét nghiệm vi sinh lâm sàng các bệnh phẩm khác nhau Biệnluậnkếtquả TrựckhuẩnGram (-) TrựckhuẩnGram (-), nhỏ Song cầuGram