GiỚI THIỆU VỀ NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT ThS. Lê Trầm Nghĩa Thư Modular laboratory cell culture deviceCELLROLL GiỚI THIỆU VỀ NUÔI CẤY TẾ BÀO THẾ NÀO LÀ NUÔI CẤY TẾ BÀO? NUÔI CẤY SƠ CẤP (PRIMARY CULTURE) CELL LINE CELL STRAIN FINITE VS CONTINUOUS CELL LINE GiỚI THIỆU VỀ NUÔI CẤY TẾ BÀO HÌNH THÁI TẾ BÀO TRONG NUÔI CẤY ỨNG DỤNG CỦA NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY BẢO QUẢN LẠNH GiỚI THIỆU VỀ NUÔI CẤY TẾ BÀO • THẾ NÀO LÀ NUÔI CẤY TẾ BÀO? - Tế bào được tách từ động vật hay thực vật - Tiếp tục tăng trưởng tế bào trong môi trường nhân tạo thuận lợi - Tế bào được tách trực tiếp từ mô bằng enzyme hay bằng cơ học; hay có thể bắt nguồn từ một cell line hay cell strain GiỚI THIỆU VỀ NUÔI CẤY TẾ BÀO GiỚI THIỆU VỀ NUÔI CẤY TẾ BÀO GiỚI THIỆU VỀ NUÔI CẤY TẾ BÀO www.themegallery.com GiỚI THIỆU VỀ NUÔI CẤY TẾ BÀO Nuôi cấy sơ cấp liên quan đến gđ nuôi cấy sau khi tế bào được tách ra từ mô và được tăng sinh trong đk thích hợp cho đến khi tế bào bao phủ hết bề mặt nuôi cấy (hợp dòng- confluence). Ở gđ này, tế bào được cấy chuyền (subculture, passage) bằng cách chuyển chúng sang một binh nuôi cấy mới với môi trường tăng trưởng mới NUÔI CẤY SƠ CẤP CELL LINE CELL STRAIN www.themegallery.com GiỚI THIỆU VỀ NUÔI CẤY TẾ BÀO Sau lần cấy chuyền đầu tiên, tế bào nuôi cấy sơ cấp được biết như một cell line hay subclone. Cell line có nguồn gốc từ nuôi cấy sơ cấp có một tuổi thọ giới hạn (hữu hạn- finite) và khi chúng được cấy chuyền, những tế bào với khả năng tăng trưởng cao nhất sẽ chiếm ưu thế, dẫn đến sự hình thành những tế bào đồng nhất về kiểu gen và kiểu hình trong quần thể các tế bào nuôi cấy NUÔI CẤY SƠ CẤP CELL LINE CELL STRAIN www.themegallery.com GiỚI THIỆU VỀ NUÔI CẤY TẾ BÀO Nếu một quần thể nhỏ của một cell line được chọn lựa trong quá trình nuôi cấy bằng cách tạo dòng hay một số phương pháp khác, thì cell line này trở thành một cell strain. Một cell strain thường có sự thay đổi di truyền so với dòng bô mẹ (parent line) NUÔI CẤY SƠ CẤP CELL LINE CELL STRAIN [...]... CELL LINES • Nuôi cấy tế bào bám dính và tế bào huyền phù – Đặc điểm của mỗi loại nuôi cấy CELL LINES • Nuôi cấy tế bào bám dính và tế bào huyền phù • Lựa chọn dòng tế bào thích hợp MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY TẾ BÀO NUÔI CẤY TẾ BÀO BÁM DÍNH NUÔI CẤY TẾ BÀO HUYỀN PHÙ MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY TẾ BÀO • MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY VÀ HUYẾT THANH • pH và CO2 • Nhiệt độ HÌNH THÁI TẾ BÀO • Hình thái tế bào động vật Epithelial-like... GiỚI THIỆU VỀ NUÔI CẤY TẾ BÀO • ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY – Hầu hết tế bào phụ thuộc vào nơi neo đậu và tế bào nuôi cấy bám vào một chất nền bán rắn hay rắn (nuôi cấy lớp đơn hay bám dính), trong khi một số tế bào khác có thể phát triển lơ lửng trong môi trường nuôi cấy (nuôi cấy huyền phù) GiỚI THIỆU VỀ NUÔI CẤY TẾ BÀO • BẢO QUẢN LẠNH – Khi có nhiều tế bào từ quá trình cấy chuyền, tế bào nên được xử lý với... đến khi cần GiỚI THIỆU VỀ NUÔI CẤY TẾ BÀO • HÌNH THÁI TẾ BÀO TRONG NUÔI CẤY – Tế bào trong nuôi cấy có thể được phân chia thành 3 loại cơ bản dựa trên hình dạng của chúng HÌNH THÁI TẾ BÀO • Hình thái tế bào động vật Epithelial-like cells fibroblast-likecells - Tế bào giống như nguyên bào sơi có dạng lưỡng cực hay đa cực, - có hình dạng thuôn dài, - phát triển bám chặt vào chất nền Tế bào giống biểu... trên tế bào, những đột biến hay chất sinh ung thư GiỚI THIỆU VỀ NUÔI CẤY TẾ BÀO • NHỮNG ỨNG DỤNG CỦA NUÔI CẤY TẾ BÀO – Sàng lọc thuốc và phát triển thuốc – Sản xuất ở quy mô lớn các hợp chất sinh học (vaccine, protein liệu pháp) Thuận lợi chính: sự đồng nhất và khả năng sinh sản của những tế bào THIẾT BỊ NUÔI CẤY TẾ BÀO • Những thiết bị cơ bản – Tủ thao tác cấy tế bào (cell culture hood) – Tủ nuôi cấy. .. line GiỚI THIỆU VỀ NUÔI CẤY TẾ BÀO • ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY – Thay đổi tùy theo loại tế bào nhưng môi trường nhân tạo để nuôi cấy tế bào phải có được: • Một chất nền hay môi trường cung cấp những chất dinh dưỡng thiết yếu (amino acid, carbohydrates, vitamins, khoáng) • Yếu tố tăng trưởng • Hormone • Khí (O2, CO2 ) • Một môi trường hóa- lý theo quy định (pH, áp lực thẩm thấu, nhiệt độ) GiỚI THIỆU VỀ NUÔI CẤY... Design Inc QUY TRÌNH NUÔI CẤY TẾ BÀO • PHƯƠNG PHÁP VÀ QUY TRÌNH NUÔI CẤY TẾ BÀO – Concentrating cells – Đếm tế bào bằng buồng đếm hồng cầu (Counting cells in a hemacytometer) – – – – – Bảo quản lạnh tế bào động vật hữu nhũ (Cryopreservation of Mammalian Cells) Dissociation of Cells from Culture Vessels Bổ sung yếu tố tăng trưởng cho những tế bào đặc biệt Hướng dẫn duy trì tế bào nuôi cấy (Guidelines for... chất nền Lymphoblast-like cells Tế bào giống lymphoblast có hạng hình cầu và thường phát triển ở dạng huyền phù không bám vào bề mặt nuôi cấy GiỚI THIỆU VỀ NUÔI CẤY TẾ BÀO • NHỮNG ỨNG DỤNG CỦA NUÔI CẤY TẾ BÀO – Một trong những công cụ chính được sử dụng trong sinh học phân tử và sinh học tế bào – Cung cấp hệ thống mô hình để nghiên cứu sinh lý và sinh hóa bình thường của tế bào (nghiên cứu sự chuyển hóa,... Preparation from Powder and Concentrates) QUY TRÌNH NUÔI CẤY TẾ BÀO • PHƯƠNG PHÁP VÀ QUY TRÌNH NUÔI CẤY TẾ BÀO – Chuẩn bị dung dịch muối từ (Preparing Salts Solutions from Powder Concentrates) – Cấy chuyền tế bào bám dính (Subculturing Adherent Cells) – Cấy chuyền tế bào huyền phù (Subculturing Suspension Cells) – Đông lạnh tế bào (Freezing Cells) – Giải đông tế bào đông lạnh (Thawing Frozen Cells) – Trypan... hút (nhu động hay chân không) – Máy đo pH – Kính hiển vi đồng pha – Máy flow cytometer – Bình nuôi cấy tế bào (e.g., flasks, Petri dishes, roller bottles, multiwell plates) – Pipettes and pipettors – Syringes and needles – Đồ chứa chất thải – Thuốc thử, huyết thanh và môi trường – Tế bào THIẾT BỊ NUÔI CẤY TẾ BÀO • Laminar flow hood – Phân loại Class I ThemeGallery is a Design Dig Class II ThemeGallery...GiỚI THIỆU VỀ NUÔI CẤY TẾ BÀO • FINITE VS CONTINUOUS CELL LINE – Finite cell line: Tế bào bình thường thường phân chia chỉ một số lần giới hạn trước khi chúng mất khả năng tăng sinh (lão hóa) – Một vài cell line trở nên bất tử qua một quá trình chuyển đổi (tự phát hay