BỘ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ HỌC VIỆN QUÂN Y ĐỀ TÀI NGHỊ ĐỊNH THƯ VIỆT NAM – HÀN QUỐC BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ ĐỀ TÀI HỢP TÁC NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH TẠO KHỐI TẾ BÀO THÔNG ĐỎ VIỆT NAM (Taxus wallichiana Zucc.) LÀM NGUYÊN LIỆU SẢN XUẤT THUỐC ĐIỀU TRỊ UNG THƯ CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI HỌC VIỆN QUÂN Y TS Nguyễn Văn Long Đại tá, GS.TS Hoàng Văn Lương Hà Nội – 2011 CÁC CÁ NHÂN VÀ ĐƠN VỊ THAM GIA NGHIÊN CỨU I CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI: TS Nguyễn Văn Long II CỘNG TÁC VIÊN CHÍNH: GS.TS Sang Yo Byun PGS.TS Nguyễn Tùng Linh TS Trương Ngọc Dương TS Trịnh Nam Trung TS Vũ Tuấn Anh TS Vũ Bình Dương ThS Nguyễn Trọng Điệp ThS Đào Văn Đôn ThS Nguyễn Thành Chung 10 DS Chử Văn Mến 11 DS Nguyễn Văn Thư 12 DS Đặng Trường Giang 13 BS Bùi Khắc Cường 14 BS Nguyễn Hoàng Ngân 15 DS Đặng Linh Chi III CÁC ĐƠN VỊ PHỐI HỢP NGHIÊN CỨU: Trường Đại học Ajou – Hàn Quốc Viện kiểm nghiệm thuốc Trung ương Viện Dược liệu Trung tâm NCƯD Sinh – Y – Dược học – HVQY Trung tâm Đào tạo, nghiên cứu Dược – HVQY Bộ môn khoa Giải phẫu bệnh lý – Bệnh viện 103 – HVQY MỤC LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT MỞ ĐẦU 1  CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3  1.1 CÂY THÔNG ĐỎ 3  1.1.1 Tên khoa học 3  1.1.2 Đặc điểm thực vật phân bố 3  1.1.3 Thành phần hóa học 5  1.1.4 Tác dụng sinh học 8  1.2 CÔNG NGHỆ SINH KHỐI TẾ BÀO THỰC VẬT 9  1.2.1 Khái niệm, ưu điểm khó khăn triển khai 9  1.2.2 Quy trình tạo sinh khối tế bào thực vật 12  1.2.3 Các yếu tố ảnh hưởng tới phát triển tế bào hàm lượng hoạt chất nuôi cấy tế bào thực vật 13  1.3 SINH KHỐI TẾ BÀO THÔNG ĐỎ SẢN XUẤT PACLITAXEL 19  1.3.1 Paclitaxel nhu cầu nguồn nguyên liệu 19  1.3.2 Sản xuất paclitaxel công nghệ sinh khối tế bào thực vật 21  1.3.3 Phương pháp định lượng paclitaxel dẫn chất sử dụng đánh giá chất lượng sinh khối tế bào thông đỏ 28  1.3.4 Phương pháp chiết xuất phân lập paclitaxel từ SKTB thông đỏ 29  CHƯƠNG II: NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 31  2.1 NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU 31  2.1.1 Nguyên liệu hoá chất 31  2.1.2 Thiết bị nghiên cứu 32  2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33  2.2.1 Xây dựng quy trình tạo sinh khối thơng đỏ quy mơ phịng thí nghiệm 33  2.2.2 Phương pháp xây dựng TCCS 43  2.2.3 Phương pháp nghiên cứu độc tính tác dụng kháng tế bào ung thư paclitaxel chiết xuất từ sinh khối thông đỏ 44  2.2.4 Phương pháp phân tích xử lý kết nghiên cứu 50  CHƯƠNG III: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 51  3.1 KẾT QUẢ XÂY DỰNG QUY TRÌNH TẠO SINH KHỐI TẾ BÀO THƠNG ĐỎ QUY MƠ PHỊNG THÍ NGHIỆM 51  3.1.1 Kết xây dựng quy trình tạo callus thông đỏ 51  3.1.2 Kết nuôi cấy môi trường lỏng bình 250 ml 67  3.1.3 Kết ni cấy hệ thống bioreactor lít 87  3.1.4 Kết nuôi cấy hệ thống bioreactor 15 lít 88  3.1.5 Kết nghiên cứu thu hoạch sinh khối tế bào thông đỏ 90  3.1.6 Quy trình tạo sinh khối tế bào thơng đỏ 93  3.1.7 Kết nghiên cứu thành phần hóa học sinh khối tế bào thông đỏ 95  3.2 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ SỞ 129  3.2.1 Kết xây dựng TCCS cành non thông đỏ 129  3.2.2 Kết nghiên cứu xây dựng TCCS sinh khối thông đỏ 136  3.2.3 Kết nghiên cứu xây dựng TCCS paclitaxel 142  3.3 KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH VÀ TÁC DỤNG SINH HỌC 150  3.3.1 Kết đánh giá độc tính 150  3.2.2 Kết đánh giá tác dụng kháng tế bào ung thư 160  KẾT LUẬN 171  KIẾN NGHỊ 174  TÀI LIỆU THAM KHẢO 175  DANH MỤC CÁC BẢNG  Bảng 3.1: Kết khảo sát lựa chọn chất sát khuẩn 52  Bảng 3.2: Kết khảo sát thời gian tiệt khuẩn 54  Bảng 3.3: Thành phần loại môi trường nuôi cấy (Đơn vị: mg/l) 55  Bảng 3.4: Kết khảo sát lựa chọn môi trường nuôi cấy 56  Bảng 3.5: Ảnh hưởng môi trường tới phát triển callus 56  Bảng 3.6: Ảnh hưởng loại chất kích thích sinh trưởng tới phát triển callus 59  Bảng 3.7: Ảnh hưởng nồng độ NAA tới phát triển callus 60  Bảng 3.8: Ảnh hưởng nồng độ kinetin tới phát triển callus 60  Bảng 3.9: Đặc tính tế bào sau lần cấy chuyển môi trường SH 63  Bảng 3.10: Ảnh hưởng nồng độ đường đến phát triển callus 64  Bảng 3.11: Ảnh hưởng nhiệt độ đến tốc độ phát triển tế bào 65  Bảng 3.12: Ảnh hưởng pH môi trường tới phát triển callus 66  Bảng 3.13: Ảnh hưởng số lần cấy chuyển tới tốc độ phát triển tế bào 68  Bảng 3.14: Ảnh hưởng tỷ lệ mẫu cấy ban đầu tới tốc độ phát triển tế bào 70  Bảng 3.15: Ảnh hưởng pH môi trường tới tốc độ phát triển tế bào thông đỏ 72  Bảng 3.16 : Ảnh hưởng nhiệt độ nuôi cấy tới tốc độ phát triển tế bào thông đỏ 73  Bảng 3.17: Ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng đến tốc độ phát triển tế bào 74  Bảng 3.18: Ảnh hưởng nồng độ BAP đến đến tốc độ phát triển tế bào 75  Bảng 3.19: Ảnh hưởng nồng độ NAA đến tốc độ phát triển tế bào 76  Bảng 3.20: Ảnh hưởng nồng độ saccharose tới tốc độ phát triển tế bào 77  Bảng 3.21: Ảnh hưởng elicitor tới tốc độ phát triển tế bào hàm lượng paclitaxel tế bào 79  Bảng 3.22: Ảnh hưởng nồng độ MJ tới tốc độ phát triển tế bào hàm lượng paclitaxel tế bào 80  Bảng 3.23: Ảnh hưởng thời gian tiếp xúc tế bào MJ tới tốc độ phát triển tế bào hàm lượng paclitaxel tế bào 82  Bảng 3.24: Ảnh hưởng thời điểm tiếp xúc tế bào MJ tới tốc độ phát triển tế bào hàm lượng paclitaxel khối tế bào 83  Bảng 3.25: Ảnh hưởng thời điểm bổ sung saccharose 85  Bảng 3.26: Ảnh hưởng nồng độ saccharose bổ sung vào môi trường 86  Bảng 3.27: Kết nuôi cấy hệ thống bình ni cấy lít 88  Bảng 3.28: Kết ni cấy hệ thống bình ni cấy 15 lít 89  Bảng 3.29: Kết phân tích dư lượng NAA, BAP hàm lượng paclitaxel mẻ nuôi cấy sinh khối thông đỏ 92  Bảng 3.30: Khảo sát điều kiện pha động 97  Bảng 3.31: Chương trình chạy sắc ký 98  Bảng 3.32: Độ lặp lại hệ thống 99  Bảng 3.33: Sự phụ thuộc diện tích pic vào nồng độ paclitaxel 100  Bảng 3.34: Sự phụ thuộc diện tích pic vào nồng độ baccatin III 100  Bảng 3.35: Kết xác định giới hạn định lượng paclitaxel 102  Bảng 3.36: Kết xác định giới hạn định lượng baccatin III 102  Bảng 3.37: Kết xác định độ xác 103  Bảng 3.38: Tỷ lệ (%) tìm thấy paclitaxel baccatin III 104  Bảng 3.39: Kết khảo sát độ ổn định mẫu thử 104  Bảng 3.40: Kết định tính sơ thành phần hóa học SKTB thông đỏ 106  Bảng 3.41: Kết định lượng paclitaxel sinh khối thông đỏ mẫu thông đỏ tự nhiên HPLC 108  Bảng 3.42: Số liệu phổ 13C-NMR (125 MHz) các chất – 114  Bảng 3.43: Số liệu phổ 1H-NMR (500 MHz) chất - 115  Bảng 3.44: Kết chiết xuất paclitaxel dung môi khác 118  Bảng 3.45: Kết chiết xuất paclitaxel với DCM (n=6) 119  Bảng 3.46: Kết khảo sát nồng độ than hoạt tính sử dụng tinh chế paclitaxel (n=6) 120  Bảng 3.47: Kết khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ n-hexan sử dụng để tinh chế paclitaxel (n=6) 121  Bảng 3.48: Kết khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ dung môi tới hàm lượng hiệu suất tinh chế paclitaxel (n=6) 122  Bảng 3.49: Kết tinh chế paclitaxel sắc ký cột lần 123  Bảng 3.50: Kết tinh chế paclitaxel sắc ký cột lần 124  Bảng 3.51: Kết tổng hợp hiệu suất hàm lượng paclitaxel qua giai đoạn chiết xuất, tinh chế 125  Bảng 3.52: Kết định lượng paclitaxel baccatin III cành non thông đỏ 132  Bảng 3.53: Kết xác định độ ẩm sinh khối thông đỏ 136  Bảng 3.54: Kết xác định tro tồn phần sinh khối thơng đỏ 137  Bảng 3.55: Kết xác định tro không tan acid sinh khối thông đỏ 137  Bảng 3.56: Kết định lượng paclitaxel baccatin III sinh khối tế bào thông đỏ 139  Bảng 3.57: Kết xác định suất quay cực paclitaxel 143  Bảng 3.58: Kết xác định độ ẩm paclitaxel 143  Bảng 3.59: Kết xác định tro toàn phần paclitaxel 143  Bảng 3.60: Kết xác định hàm lượng kim loại nặng paclitaxel 144  Bảng 3.61: Kết định lượng nội độc tố có paclitaxel 144  Bảng 3.62: Kết xác định có mặt vi khuẩn paclitaxel 146  Bảng 3.63: Kết xác định tổng số vi khuẩn hiếu khí paclitaxel 146  Bảng 3.64: Kết xác định hàm lượng % tạp chất paclitaxel 146  Bảng 3.65: Kết xác định hàm lượng paclitaxel 147  Bảng 3.66: Tỷ lệ chuột chết sau tiêm Paclitaxel 151  Bảng 3.67: Ảnh hưởng Paclitaxel trọng lượng thể thỏ (n = 12) 152  Bảng 3.68: Ảnh hưởng Paclitaxel điện tim thỏ (n = 12) 153  Bảng 3.69: Chỉ số hồng cầu huyết sắc tố thỏ lô nghiên cứu (n = 12) 154  Bảng 3.70: Chỉ số bạch cầu tiểu cầu thỏ lô nghiên cứu (n = 12) 155  Bảng 3.71: Hoạt độ AST ALT (IU/l) lô thỏ nghiên cứu (n = 12)156  Bảng 3.72: Nồng độ creatinin ure máu thỏ lô nghiên cứu (n = 12) 157  Bảng 3.73: Kết thử nghiệm Trypan Blue dòng tế bào HEP G2 160  Bảng 3.74: Kết thử nghiệm Trypan Blue dòng tế bào HEP 3B 160  Bảng 3.75: Kết thử nghiệm Trypan Blue dòng tế bào BT474 161  Bảng 3.76: Kết thử nghiệm Trypan Blue dòng tế bào H211 161  Bảng 3.77: Kết thử nghiệm Trypan Blue dòng tế bào HTB85 161  Bảng 3.78: Kết thử nghiệm Trypan Blue dòng tế bào KG-1 162  Bảng 3.79: Kết thử nghiệm Trypan Blue dòng tế bào K-562 162  Bảng 3.80: Kết thử nghiệm Trypan Blue dòng tế bào NCE-Z2 162  Bảng 3.81: Kết thử nghiệm Trypan Blue dòng tế bào HT29 163  Bảng 3.82: Kết thử nghiệm Trypan Blue dòng tế bào NCL-N87 163  Bảng 3.83: Kết thử nghiệm MTT dòng tế bào HEP G2 164  Bảng 3.84: Kết thử nghiệm MTT dòng tế bào HEP 3B 164  Bảng 3.85: Kết thử nghiệm MTT dòng tế bào BT474 164  Bảng 3.86: Kết thử nghiệm MTT dòng tế bào H211 165  Bảng 3.87: Kết thử nghiệm MTT dòng tế bào HTB85 165  Bảng 3.88: Kết thử nghiệm MTT dòng tế bào KG-1 166  Bảng 3.89: Kết thử nghiệm MTT dòng tế bào K-562 166  Bảng 3.90: Kết thử nghiệm MTT dòng tế bào NCE-Z2 166  Bảng 3.91: Kết thử nghiệm MTT dòng tế bào HT29 167  Bảng 3.92: Kết thử nghiệm MTT dòng tế bào NCL-N87 167  Bảng 3.93: Tỷ lệ (%) tế bào HEP G2 pha Apoptosis (sub-G1) 169    DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Thơng đỏ (Taxus wallichiana Zucc.) 4  Hình 1.2: Cấu trúc khung taxan thơng đỏ 5  Hình 1.3: Quy trình tạo sinh khối tế bào thực vật 12  Hình 1.4: Sự phát triển tế bào thực vật theo thời gian 18  Hình 1.5: Con đường sinh tổng hợp Paclitaxel 23  Hình 2.1: Sơ đồ quy trình chiết xuất SKTB thơng đỏ làm phản ứng định tính 39  Hình 3.1: Một số hình ảnh mẫu thí nghiệm ni cấy callus 53  Hình 3.2: Callus môi trường khác 56  Hình 3.3: Đồ thị biểu diễn khối lượng callus theo thời gian 57  Hình 3.4: Hình ảnh callus thơng đỏ mơi trường khác 62  Hình 3.5: Callus thông đỏ sau lần cấy chuyển môi trường thạch SH 62  Hình 3.6: Hình ảnh tế bào thơng đỏ qua lần cấy chuyển 68  Hình 3.7: Đồ thị biểu diễn khối lượng tế bào theo thời gian nuôi cấy 69  Hình 3.8: Sơ đồ quy trình thu hoạch sinh khối tế bào thông đỏ bioreactor 91  Hình 3.9: Sơ đồ quy trình tạo sinh khối tế bào thông đỏ 94  Hình 3.10: Sắc ký đồ mẫu sinh khối thông đỏ xử lý theo phương pháp chiết lỏng -lỏng (a) lỏng - rắn (b) 95  Hình 3.11: Sắc ký đồ hỗn hợp chuẩn paclitaxel baccatin III hệ pha động III sử dụng cột Luna L43 97  Hình 3.12: Phổ hấp thụ paclitaxel (a) baccatin III (b) 98  Hình 3.13: Sắc ký đồ hỗn hợp chuẩn (a) mẫu thử (b) 99  Hình 3.14: Đồ thị biểu diễn mối tương quan diện tích pic nồng độ paclitaxel 100  Hình 3.15: Đồ thị biểu diễn mối tương quan diện tích pic nồng độ baccatin III 101  Hình 3.16: Sắc ký đồ mẫu phân tích 107  Hình 3.17: Cấu trúc hố học chất – 116  Hình 3.18: Sơ đồ tinh chế paclitaxel sắc ký cột 123  Hình 3.19: Sắc ký đồ mẫu paclitaxel 125  Hình 3.20: Sơ đồ chiết xuất, tinh chế paclitaxel từ SKTB thơng đỏ 128  Hình 3.21: Ảnh vi phẫu cành non thông đỏ 130  Hình 3.22: Các đặc điểm bột cành non thông đỏ 130  Hình 3.23: Sắc ký đồ HPLC chuẩn (a) cành non thơng đỏ (b) 131  Hình 3.24: Hình ảnh sắc ký đồ chuẩn (a) mẫu sinh khối thông đỏ (b) 138  Hình 3.25: Một số hình ảnh tế bào nghiên cứu 168  Hình 3.26: Ảnh điện di ADN tổng số 169  Hình 3.27: Sự di cư tế bào ung thư phổi 170     19 Angela S (1991), “The manufacture of food ingredients using plant cell and tissue cultures”, Trends in Food Science Technology, 2:116-122 20 Appendino G, Ozen H C., Enriu R., Barboni L., Gabetta B., Zini G F (1993), “Apocarotenoids from the Needles of Taxus wallichiana”, Fitoterapia, 64, pp 396-398 21 Bala S., Chattopadhyay S.K., Tripathi V., Sashidhara K.V., Kulshrestha M., Sharma R.P., Jain S.P., Kukreja A.K., Kumar S (1999), “Analysis of taxol and major taxoids in Himalayan yew, Taxus wallichiana”, Journal of Chromatography, 858, pp 239-244 22 Benhamou N (1996), “Elicitor induce plant defense pathways”, Trends in Plant Science, 1, pp 233-240 23 Bentebibel S., Palazon J., Cusido R M., Bonfill M., Eibl R., Pinol M T (2005), “Effect of immobilization by entrapment in alginate and scaleup in paclitaxel and baccatin III production in cell suspension cultures of Taxus baccata”, Biotechnol Bioeng, 89, pp 647-655 24 Birgitta M., Peter J., Hylands, Adelbert B., Nmeinhart H Z (1998) “Taxoids from cell cultures of Taxus chinensis”, Phytochemistry 49(1) pp 113-125 25 Bonfill M., Cusido R M., Joly S., Morales C., Pinol M T (2003), “Influence of elicitors on taxane production and 3-hydroxy-3methylglutaril coenzyme A reductase activity in Taxus media cells”, Plant Physiology Biochemistry, 41, pp 91-96 26 Bonfill M., Bentebibel S., Moyano E., Palazon J., Cusidó R M., Eibl R (2007), “Paclitaxel and baccatin III production induced by methyl jasmonate in free and immobilized cells of Taxus baccata”, BiolPlantarum, 51, pp 647-652 27 Bonfill M., Exposito O., Moyano E., Cusido R M., Palazon J., Pinol M T (2006), “Manipulation by culture mixing and elicitation of paclitaxel and baccatin III production in Taxus baccata suspension cultures”, In Vitro Cell Dev-Pl, 42, pp 422-426 177 28 British Pharmacopoiea (2010) 29 Brodelius P (1982), “Immobilized plant cells”, Appl Biochem Biotechnol, 7, pp 31-44 30 Brunakova K., Babincova Z., Takác M., Cellárová E (2004), “Selection of callus cultures of Taxus baccata L as a potential source of paclitaxel production”, Eng Life Sci, 4, pp.465-469 31 Brunakova K., Cellarova E (2005), “Production of taxanes in callus and suspension cultures of Taxus baccata L.”, Springer, 5, pp.567-574 32 Buitelaar R.M., Tramper J (1992), “Strategies to improve the production of secondary metabolites with plant cell cultures: a literature review”’ Journal of Biotechnology, 2, pp.111-141 33 Butenko R.G., Lipsky A K., Chernyak N D., Arya H C (1984), “Changes in culture medium pH by cell suspension cultures of Dioscorea deltoidea”, Plant Science Letters, 35(3), pp.207-212 34 Cai YE, F J., Roberts, M F., Phillipson, J D., Zenk, M H., Gleba, Y Y (1991), “Biological and chemical investigation of dragon's blood from Croton species of South America Part Polyphenolic compounds from Croton lechleri”, Phytochemistry, 30(6), pp 2033-2040 35 Chawla H S (2003), Introduction Plant Biotechnology, Amazon Press 36 Chen W., Wu B., Zheng Q (1991), “Studies on the chemical constituents of Taxus yunnanensis”, Acta pharmaceutica Sinica, 26, pp 747 37 Cheol S.J., Kee Y P (2006), “Effects of oxygen, carbon dioxide and ethylene on growth and bioactive compound production in bioreactor culture of ginseng adventitious roots” Biochemical Engineering Journal, 27(3), pp.252-263 38 Choi H K., Kim S I., Son J S., Hong S S., Lee H S., Lee H J (2000), “Enhancement of paclitaxel production by temperature shift in suspension culture of Taxus chinensis”, Enzyme and Microbial Technology, 27, pp 593-598 178 39 Chuang C L., Chen K J., Lin Y S., Chen F C (1990), “Constituents of the heartwood of Taiwan yew Part IV Isolation of 1, 4-p-methanediol and 1-dehydroxy baccatin IV”, Huaxue, 48, pp.275-280 40 Ciddi V., Srinivasan V., Shuler M L (1995), “Elicitation of Taxus sp cell cultures for production of paclitaxel”, Biotechnol Lett, 17, pp.13431346 41 Cusido R M., Palazon J., Bonfill M., Exposito O., Moyano E., Pinol M T (2007), “Source of isopentenyl diphosphate for taxol and baccatin III biosynthesis in cell cultures of Taxus baccata”, Biochemical Engineering Journal, 33, pp.159-167 42 Cusido R M., Palazon J., Navia-Osorio A., Mallol A., Bonfill M., Morales C., Pinol M T (1999), “Production of taxol and baccatin III by a selected Taxus baccata callus line and its derived cell suspension culture”, Plant Science Letters, 146, pp.101-107 43 Da H L., Seul G K., Sungyong M., Jin H K (2010), “Evaluation of feeding and mixing conditions for fractional precipitation of paclitaxel from plant cell cultures” Process Biochemistry, 45, pp.1134-1140 44 Daniela B (1978), “Conditioning factor affecting growth in plant cells in culture” Plant Science Letters, 51(1), pp.83-91 45 David N W., Benson (1992), “Carbon-13 NMR studies on sitosterol biosynthesized from [13C] mevalonates”, Phytochemistry, 31(3), pp.805811 46 DiCosmo F., Misawa M (1995), “Plant cell and tissue culture: alternatives for metabolite production”, Biotechnology Advance, 13, pp.425-453 47 Dirk H.S (1996), “The design of culture media based on the elemental composition of biological material” Journal of Biotechnology, 45(2), pp.97-102 48 Enaksha R M., Wickremesinhe, Arteca R N (1993), “Taxus callus cultures: Initiation, growth optimization, characterization and taxol 179 production”, Plant cell, Tissue and Organ Culture, 35, pp.181-193 49 Erdtman H.; Tsuno K (1969), “Taxus heartwood constituents”, Phytochemistry, 8, pp.931-932 50 Exposito O., Bonfill M., Onrubia M., Jane A., Moyano E., Cusido R M., Palazon J., Pinol M T (2009), “Effect of taxol feeding on taxol and related taxane production in Taxus baccata suspension culture” New Biotechnology, 25, pp.252-259 51 Farmer E E., Almeras E., Krishnamurthy V (2003), “Jasmonates and related oxylipins in plant responses to pathogensis and herbivory”, Current Opinion in Plant Biology, 6, pp.372 - 378 52 Fornale S., Esposti D D., Navia-Osorio A., Cusido R M., Palazon J., Piñol M T., Bagni N (2002), “Taxol transport in Taxus baccata cell suspension cultures”, Plant Physiol Biochem, 40, pp 81-88 53 Frank D (1995), “Plant cell and tissue culture: alternatives for metabolite production”, Biotechnology Advance, 13(3), pp.425-453 54 Furmanova M., Sykłowska-Baranek K., Josefowicz & J GS (2000), “Increased taxane accumulation in callus cultures of Taxus cuspidata and Taxus x media by some elicitors and precursors”, Biotechnology Letters, 22, pp.1449-1452 55 Gabriella P., Fausto M., Silvia A (2002), “Effects of the culture medium pH and ion uptake in invitro vegetative organogenesis in thin cell layers of tobacco” Plant Science, 162, pp.947-955 56 Gulik W M., Hoopen H J G (2004), “Kinetics and stoichiometry of growth of plant cell cultures of Catharanthus roseus and Nicotiana tabacum in batch and continuous fermentors”, Biotechnol Bioengineering, 40(8), pp.863-874 57 Gulik W M., Hoopen H J G., Heijnen J J (2001), “The application of continuous culture for plant cell suspensions” Enzyme and Microbial Technology, 28(9-10), pp.796-805 58 Gundlach H., Muller M J., Kutchan T M., Zenk M H (1992), 180 “Jasmonic acid is a signal transducer in elicitor-induced plant cell cultures” Proc Natl Acad Sci USA, 89, pp.2389-2393 59 Heike D., Dietrich K (1995), “Strategies for the improvement of secondary metabolite production in plant cell cultures”, Enzyme and Microbial Technology, 17(8), pp.674-684 60 Hirasuna T J., Srinivasan V., Shuler M L, (1996) “Paclitaxel production in suspension cultures of Taxus baccata”, Plant Cell, llssue and Organ Culture, 44, pp.95-102 61 Holton R., Kim H B., Liang F., Biediger R J., Boatman P D, (1994), “First total synthesis of paclitaxel Functionalization of the B ring”, J Am Chem Soc, 116, pp.1597-1598 62 Jeon K Y., Kim J H (2009), “Improvement of fractional precipitation process for pre-purification of paclitaxel”, Process Biochemistry,44, pp.736-741 63 Jeon S I., Kim J.H (2006), “Optimal temperature control in fractional precipitation for paclitaxel pre-purification”, Process Biochemistry, 41, pp.276-280 64 Jian J Z (2006), “Effects of plant growth regulators on cell growth and ginsenoside saponin production by suspension cultures of Panax quinquefolium”, Journal of Biotechnology, 45, pp.227 - 234 65 Jian Zhaoa T., Lawrence C., Davis B., Robert V (2005), “Elicitor signal transduction leading to production of plant secondary metabolites”, Biotechnology Advances, 23, pp.283-333 66 Jin H K., Seul G K., Sun I J (2008), “Effect of temperature and pH on fractional precipitation for paclitaxel pre-purification” Journal of Biotechnology, 136, pp.22-71 67 John H., Dodd S., Lorin W., Robert S (1995), Experiments in Plant Tissue Culture, Cambridge University Press, England, pp.55-60 68 Kawamura F., Ohira T., Yatagai M (1999), “Accelerated solvent extraction of paclitaxel and related compounds from the bark of Taxus 181 cuspidate”, Journal of Natural Products, 62(2), pp.244-247 69 Kee W Y., Hosakatte N M., Eun J H., Kee Y P (2005), “Ginsenoside production by hairy root cultures of Panax ginseng: influence of temperature and light quality” Biochemical Engineering Journal, 23(1), pp 53 - 56 70 Ketchum R E., Gibson D M., Croteau R B., Shuler M L (1999), “The kinetics of taxoid accumulation in cell suspension cultures of Taxus following elicitation with methyl jasmonat” Biotechnology and Bioengineering, 62, pp.97-105 71 Keum Y J., Jin H K (2009), “Improvement of fractional precipitation process for pre-purification of paclitaxel”, Process Biochemistry, 44, pp.736-741 72 Khosroushahi A Y., Valizadeh M., Ghasempour A., Khosrowshahli M., Naghdibadi H., Dadpour M.R., Omidi Y (2006), “Improved Taxol production by combination of inducing factors in suspension cell culture of Taxus baccata”, Cell Biology International, 30, pp.262-269 73 Kieran P M (1997), “Plant cell suspension cultures: some engineering considerations”, Journal of Biotechnology, 59(1-2), pp.39 - 52 74 Kim J H (2004), “Prepurification of paclitaxel by mixen and precipication”, Process Biochemistry, 39, pp.1567-1571 75 Kim J H., Kang I S., Choi H K., Hong S S., Lee H S (2002), “A novel prepurification for paclitaxel from plant cell cultures”, Process Biochemistry, 37, pp.679-682 76 Kim S G (2009), “Effect of pH on fractional precipitation for prepurification of paclitaxel from plant cell culture”, Korean Journal Chemistry Engineering, 26(2), pp.449-452 77 Kim S I., Choi H K., Kim J H., Lee H S., Hong S S (2001) “Effect of osmotic pressure on paclitaxel production in suspension cell cultures of Taxus chinensis”, Enzyme and Microbial Technology, 28, pp.202-209 78 Kolewe M E., Roberts S C (2008), “Pharmaceuticals active natural 182 products synthesis and supply via plant cell culture technology” Molecular Pharmaceutics, 5, pp.243-256 79 Kovacs P., Csaba G., Pallinger E., Czaker R (2007), “Effects of taxol treatment on the microtubular system and mitochondria of Tetrahymena”, Cell Biology International, 31, pp.724-732 80 Kwon I C., Lee J H., Hyun J O, (1998) “Enhancement of paclitaxel production by in situ recovery of product”, Process Biochemistry, 33, pp.701-708 81 Lauren D.R., Douglas J.A (1995) “Analysis of taxol, 10- deacetylbaccatin III and related compound in Taxus baccata”, J Chromatography 712, pp.303-309 82 Li C., Huo C., Zhang M., Shi Q (2008) “Chemistry of chinensis yew, Taxus chinensis var mairei”, Biochemical Systematics and Ecology, 36, pp.266-282 83 Li S., Zu Y., Sun R., Wang Y., Zang L., Luo H., Gu C., Efferth T (2009) “Determination of paclitaxel and other six taxoids in Taxus species by high-performance liquid chromatography- tandem mass spectrometry”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 49, pp.81-89 84 Li Y.; Liqun Z (2009) “Process utilized oligo-[1]-cyclodextrin substituted agarose gel medium for efficient purification of paclitaxel from Taxus cuspidata”, Separation and Purification Technology, 68, pp.119-124 85 Lipsky A K (1992), “Problems of optimization of plant cell culture processes”, Journal of Biotechnology, 26, pp.83-97 86 Liu S (1998), “Phosphate effect on production of ginseng saponin and polysaccharide by cell suspension cultures of Panax ginseng and Panax quinquefolium”, Process Biochemistry, 33(1), pp.69-74 87 Lorraine M (1999), Plant tissue culture techniques Tested studies for laboratory teaching, 11, pp.151-174 88 Luca M., Luciano S (1994), “HPLC Determination of Benzyladenine 183 Residues in Micropropagated Apple Explants”, J Agric Food Chem., 42, pp.744-746 89 Luo J (2004), “Optimization of elicitors and precursors for paclitaxel production in cell suspension culture of Taxus sp in the presence of nutrient feeding”, Process Biochemistry, 39, pp.1073-1079 90 Luo J., He G Y (2004), “Optimization of elicitors for paclitaxel production in cell suspension culture of Taxus chinensis in the presence of nutrient feeding”, Process Biochemistry, 39, pp.1073-1079 91 Luo J., Liu L., Wu C D (2001), “Enhancement of paclitaxel production by abscisic acid in cell suspension cultures of Taxus chinensis”, Biotechnology Letters, 23, pp.1345-1348 92 Ma W W., Adams T L., Park G L., Evans W A., Blumenthal S G., Gomez G A., Nieder M H., Hylands P J (1994), “Yunnanxane and its homologous esters from cell cultures of Taxus chinensis var mairei”, Journal of Natural Products 57 (9) , pp.1320−1324 93 Ma W., Evans W A., Blumenthal S G., Gomez G A (1994), “Taxol and its homologous esters from cell cultures of Taxus chinensis var mairei”, Journal of Natural Products, 58(5) , pp.1212-1215 94 Margaret D (1981), “Technologies and strategies in plant cell culture new approaches to old problems”, Enviromental and Experimetal Botany, 21, pp.269 - 275 95 Mclaughlin J.J., Powell R.G., Smith C.R (1981), “19-hydroxybaccatin III, 10-deacetylcephalomanine and 10 -deacetyltaxol: New antitumor taxanes from Taxus wallichiana”, Journal of Natural Products, 44(3) , pp.312-319 96 Michael W F (1986), Process strategies for plant cell cultures, Elsevier Science Publishers B.V., Amsterdam, 0166- 9430/86 97 Moon W J., Yoo B S., Kim D I., Byun S Y (1998), “Elicitation kinetics of taxane production in suspension cultures of Taxus baccata”, BiotechnolTech, 12, pp.79 184 98 Moyano E., Gene A., Bonfill M., Cusido R M., Palazon J., Pinol M.T (2004), “Improvement of paclitaxel and baccatin III production in Taxus sp cell cultures”, Biotechnol Prog., 5, pp.239-253 99 Mueller M J., Brodschelm W., Spannagl E., Zenk M H (1993), “Signaling in the elicitation process is mediatd through the octadecanoid pathway leading to jasmonic acid”, Proc Natl Acad Sci USA, 90, pp.74907494 100 Mun S Y (2008), “Optimization of productivity in solvent gradient simulated moving bed for paclitaxel purification”, Process Biochemistry, 43, pp.1407-1418 101 Namdeo A G (2004), Investigation on pilot scale bioreactor with reference to the synthesis of bioactive compounds from cell suspension cultures of Catharanthus roseus, PhD Thesis: Devi Ahilya Vishwavidyalya, Indore, M.P India 102 Namdeo A G (2007), “Plant cell elicitation for Production of secondary metabolites”, Pharmacognosy Reviews 1, pp.69-79 103 Namdeo A G., Patil S., Fulzele D P (2002), “Influence of fungal elicitors on production of ajmalicin by plantcell cultures of Catharanthus roseus”, Biotechnol Prog., 18, pp.159-162 104 Nhan Trung Nguyen, Arjun H et al (2003), “Diterpenes and sesquiterpenes from the bark of Taxus yunnnanensis”, Phytochemistry 64, pp.1141- 1147 105 Nims E., Dubois C P., Roberts S C., Walker E L (2006), “Expression profiling of genes involved in paclitaxel biosynthesis for targeted metabolic engineering”, Metabolic Engineering, 8, pp.385-394 106 Onrubiab M., Moyanob E., Bonfilla M., Expositoa O., Palazóna J., Cusido R M (2010), “An approach to the molecular mechanism of methyl jasmonate and vanadyl sulphate elicitation in Taxus baccata cell cultures: The role of txs and bapt gene expression”, Biochemical Engineering Journal, 53, pp.104-111 185 107 Osorio A.N GH, Cusidó R M., Palazón J., Alfermann A.W., Pinol M T (2002), “Taxol and baccatin III production in suspension cultures of Taxus baccata and Taxus wallichiana in an airlift bioreactor”, Journal of Plant Physiology, 159, pp.97-102 108 Palazon J., Cusido RM., Bonfill M., Morales C., Pinol M T (2003), “Inhibition of paclitaxel and baccatin III accumulation by mevinolin and fosmidomycin in suspension cultures of Taxus baccata”, Journal of Biotechnology, 101, pp.57-163 109 Pan Z W., Zhong J J (2000), “Scale-up study on suspension cultures of Taxus chinensis cells for production of taxane diterpene”, Enzyme and Microbial Technology, 27, pp.714-723 110 Parc G., Canaguier A., Landre P., Hocquemiller R., Chriqui D., Meyer M (2002), “Production of taxoids with biological activity by plants and callus culture from selected Taxus genotypes”, Phytochemistry 59, pp.725-730 111 Parr A J (1989), “The production of secondary metabolites by plant cell cultures”, Journal of Biotechnology, 2(5) , pp.101-126 112 Peter D S (1985), “Biotechnological applications of plant cells in culture”, Biotechnology Advance, 3(1) , pp.29-38 113 Pyo S H., Song B K., Ju C H., Han B H., Choi H J (2005), “Effects of adsorbent treatment on the purification of paclitaxel from cell cultures of Taxus chinensis and yew tree”, Process Biochemistry, 40, pp.1113-1117 114 Pyo S.H., Song B K., Han B.H., Kim J H (2004), “A large-scale purification of paclitaxel from cell cultures of Taxus chinensis”, Process Biochemistry, 39, pp.1985-1991 115 Qiu L., Lian M., Ma Z., He G (1989), “Biflavones of Taxus wallichiana Zucc.”, Zhiwu Xuebao, 31, pp.54-56 116 Rao S R., Ravishankar G A (2002), “Plant cell cultures: chemical factories of secondary metabolites”, Biotechnology Advance, 20, pp.101- 186 153 117 Rehman H.U., Rahman A.U (2004), “Chemical constituents of Taxus wallichiana”, J.Chem Soc., 26, pp.302-306 118 Rheman H.U., Choudhary M.L (2004), “Chemical constituents of Taxus wallichiana”, J.chem Soc Pakistan 26, pp.302 119 Sabater-Jara A B., Lopez-Perez A J (2010), “In vitro culture of Taxus sp.: strategies to increase cell growth and taxoid production”, Phytochem Rev, 9, pp.343-356 120 Sang H P., Heung B P., Bong K S., Byung H H., Jin H K (2004), “A large-scale purification of paclitaxel from cell cultures of Taxus chinensis”, Process Biochemistry, 39, pp.1985-1991 121 Sharon M H S., Pauline M D (2009), “Foreign protein production using plant cell and organ cultures: Advantages and limitations” Biotechnology Advance, 27(6) , pp.1036-1042 122 Shen Y C., Chen C Y., Huang M C (2000), “Taxan diterpenoids from seeds of Taxus mairei”, Chem Pharm Bull., 48, pp.1344-1346 123 Shen Y C., Lo K L., Chen C Y., Kuo Y H., Huang M C (2000), “New taxans with an opened oxetane ring from the roots of Taxus mairei”, Journal of Natural Products, 63, pp.720-722 124 Siegfried B., Daniel G (1990), The taxus alkaloids, Academic Press, Inc Vol 39 125 Sonia M., Rosa M., Cusido et al (2011), “Production of the anticancer drug paclitaxel in Taxus baccata suspention culture”, Process Biochemistry, 46(1), pp.23-34 126 Susan C R., Michael L S (1997), “Large-scale plant cell culture”, Curr Opin Biotechnol, 8(2), pp.154-159 127 Tabata H (2004), “Paclitaxel Production by Plant-Cell-Culture Technology”, Adv Biochem Engin/Biotechnol, 7, pp.1-23 128 Tamogami S., Rakwal R., Kodama O (1997), “Phytoalexin production elicited by exogenously applied jasmonic acid in rice leaves (Oryza 187 sativa L.) is under the control of cytokinins and ascorbic acid”, FEBS Lett 412, pp.61-64 129 Thomas E A SD (1983), “A Method for the Quantitative Determination of Naphthalenylacetylaspartic 1-Naphthaleneacetic Acid, and Acid, P-D-Glucose 11-( 1- Naphtha1ene)acetate in Grapes”, J Agric Food Chem, 31, pp.286-288 130 United Stage Pharmacopoiea 30th (2007), NF 25:3461-3462 131 Verpoorte R., Memelink J (2002), “Engineering secondary metabolite production in plants” Curr Opin Biotechnol, 13, pp.181-187 132 Virendra B AP (1991), “Large-scale plant cell culture: methods, applications and products”, Curr Opin Biotechnol, 2, pp.370-374 133 Wang C., Mei X (2001), “Enhancement of taxol production and excretion in Taxus chinensis cell cultures by fungal elicitation and medium renewal”, Appl Microbiol Biotechnol, 55, pp.404-410 134 Wang H.Q., Zhong J.J (1999), “Significant improvement of taxane production in suspension cultures of Taxus chinensis by sucrose feeding strategy”, Process Biochemistry 35, pp.479-483 135 Wang Y D., Ying J Y., Jin C W (2004), “Induction studies of methyl jasmonat and salicylic acid on taxan production in suspension culture of Taxus chinensis var mairei” Biochemical Enginering Journal, 19, pp.259-265 136 Wani M C., Taylor H L., Wall M E., Coggon P., Mcphail A T (1971), “The Isolation and Structure of Taxol, A Novel Antileukemic and Antitumor Agent from Taxus brevifolia”, Journal of the American Chemical Society, 93, pp.2325-2327 137 Wu J., Mei X (2001), “Stimulation of taxol production and excretion in Taxus cell cultures by rare earth chemical lanthanum”, Journal of Biotechnology, 85, pp.67-73 138 Yan D W., Yuan J Y., Jin C W (2004), “Induction studies of methyl jasmonate and salicylic acid on taxane production in suspention culture 188 of Taxus chinensis var mairei”, Biochemical Engineering Journal, 19, pp.259-265 139 Yeung T K., Germond C., Chen X., Wang Z (1999), “The mode of action of taxol: Apoptosis At low concentration and necrosis at high concentration”, Biochemical and Biophysical Research Communications, 263, pp.398 - 404 140 Ying J Y., Zuo J W., Zhi Q M., Jin C W (2002), “Acting paths of elicitors on Taxol biosynthesis pathway and their synergistic effect” Biochemical Engineering Journal, 10, pp.77-83 141 Yong C L., Wen Y T., Cheng L (2009), “Paclitaxel production using co-culture of Taxus suspension cells and paclitaxel-producing endophytic fungi in a co-bioreactor”, Applied Microbiol Biotechnol, 83, pp.233-239 142 Yoshizaki F., Fufuda M., Hisamichi S (1998), “Constituents of the arils of Japanese yew, Taxus cuspidata”, Annu Rep Tohoku Coll Pharm, 34, pp.111-114 143 Yu L J., Qin W M., Xu H B (2001), “Effects of salicylic acid on fungal elicitor-induced membrane-lipid peroxidation and taxol production in cell suspension cultures of Taxus chinensis”, Process Biochemistry, 37, pp.477-482 144 Yukimune Y., Tabata H., Higashi Y., Hara Y (1996), “Methyl jasmonate induced over production of paclitaxel and baccatin III in Taxus cell suspension cultures”, Nattural Biotechnology, 14, pp.11291132 145 Zhang J Z., Fang Q C., Liang X T., He C H., Kong M., He W Y., Jin X L (1995), “Taxoids from the barks of Taxus wallichiana”, Phytochemistry, 40, pp.881-884 146 Zhen Y W., Jian J Z (2002), “Combination of conditioned medium and elicitation enhances taxoid production in bioreactor cultures of Taxus chinensis cells” Biochemical Engineering Journal, 12, pp.93-97 189 147 Zhong J.J., Fujiyama K., Seki T., Yoshida T (1993), “Enhancement of anthocyanin production by Perilla frutescens cells in a stirred bioreactor with internal light irradiation” Journal of Fermentation Bioengineering, 15, pp.299-303 148 Zhong T.X (1998), “Kinetin induced caffeic acid-O- methyltransferases in cell suspension cultures of Vanilla planifolia Andr and isolation of caffeic acid O-methyltransferase cDNAs”, Plant Physiology Biochemistry, 36(11), pp 132-137 149 Abrham W.B (1978), “Techniques of animal and clinical toxicology”, Med Pub Chicago, pp 55-68 150 WHO (1993), “Research guidelines for evaluating the safety and efficacy of herba medicines”, Manila, Philippin, pp 35-42 151 Ajabnoor GM, Crook T, Coley HM.(2012), “Paclitaxel resistance is associated with switch from apoptotic to autophagic cell death in MCF-7 breast cancer cells”, Cell Death Dis 2012 Jan 26;3:e260 doi: 10.1038/cddis.2011.139 152 Chrisanthar R, Knappskog S (2011), “Predictive and prognostic impact of TP53 mutations and MDM2 promoter genotype in primary breast cancer patients treated with epirubicin or paclitaxel”, PLoS One 2011 Apr 27;6(4):e19249 153 Kang HJ, Chang HM, Kim TW, Ryu MH, Sohn HJ, Yook JH, Oh ST, Kim BS, Lee JS, Kang YK (2008), “A phase II study of paclitaxel and capecitabine as a first-line combination chemotherapy for advanced gastric cancer”, Br J Cancer 2008 Jan 29;98(2):316-22 Epub 2008 Jan 22 154 Kumar S, Mahdi H, Bryant C, Shah JP, Garg G, Munkarah A (2010), “Clinical trials and progress with paclitaxel in ovarian cancer”, Int J Womens Health 2010 Nov 19;2:411-27 190 155 Mielgo A, Torres VA, Clair K, Barbero S, Stupack DG (2009), “Paclitaxel promotes a caspase 8-mediated apoptosis through death effector domain association with microtubules”, Oncogene 2009 Oct 8;28(40):3551-62 Epub 2009 Aug 10 156 Li XD, Shen H, Jiang JT, Zhang HZ, Zheng X, Shu YQ, Wu CP (2011), “Paclitaxel based vs oxaliplatin based regimens for advanced gastric cancer”, World J Gastroenterol 2011 Feb 28;17(8):1082-7 157 Odonkor CA, Achilefu S (2008), “Differential activity of caspase-3 regulates susceptibility of lung and breast tumor cell lines to Paclitaxel”, Open Biochem J 2008;2:121-8 Epub 2008 Sep 27 158 Qi Y, Fu X, Xiong Z, Zhang H, Hill SM, Rowan BG, Dong Y (2012), “Methylseleninic acid enhances paclitaxel efficacy for the treatment of triple-negative breast cancer”, PLoS One 2012;7(2):e31539 Epub 2012 Feb 14 159 Shajahan AN, Dobbin ZC, Hickman FE, Dakshanamurthy S, Clarke R (2012), “Tyrosine phosphorylated caveolin-1 (Y14) increases sensitivity to paclitaxel by inhibiting BCL2 and BCLxL via JNK”, J Biol Chem 2012 Mar 20 160 Schmidt M, Bremer E, Hasenclever D, Victor A, Gehrmann M, Steiner E, Schiffer IB, Gebhardt S, Lehr HA, Mahlke M, Hermes M, Mustea A, Tanner B, Koelbl H, Pilch H, Hengstler JG (2007), “Role of the progesterone receptor for paclitaxel resistance in primary breast cancer”, Br J Cancer 2007 Jan 29;96(2):241-7 Epub 2007 Jan 161 Scripture CD, Figg WD, Sparreboom A (2005), “Paclitaxel chemotherapy: from empiricism to a mechanism-based formulation strategy”, Ther Clin Risk Manag 2005 Jun;1(2):107-14 191 ... làm nguyên liệu sản xuất thuốc điều trị ung thư? ?? tiến hành nhằm mục tiêu: Xây dựng quy trình cơng nghệ sinh khối tế bào Thông đỏ Việt Nam quy mơ phịng thí nghiệm Xây dựng tiêu chuẩn nguyên liệu. .. dược liệu thông đỏ Việt Nam theo hướng ứng dụng công nghệ sinh khối tế bào thực vật, đề tài: ? ?Hợp tác nghiên cứu xây dựng quy trình tạo khối tế bào thơng đỏ Việt Nam (Taxus wallichiana Zucc.) làm. .. sinh khối tế bào thông đỏ 90  3.1.6 Quy trình tạo sinh khối tế bào thơng đỏ 93  3.1.7 Kết nghiên cứu thành phần hóa học sinh khối tế bào thông đỏ 95  3.2 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG