BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC BÁO CÁO THỰC HÀNH VI SINH VẬT CÔNG NGHIỆP CÁN BỘ HƯỚNG DẪN TRẦN VŨ PHƯƠNG SINH VIÊN THỰC HIỆN NGUYỄN BÁ TRƯỜNG MSSV: B1203178 LỚP: VI SINH VẬT K38 Cần Thơ, Tháng 4/2014 Báo cáo thực hành Vi Sinh Vật Công Nghiệp Trường ĐHCT MỤC LỤC Trang MỤC LỤC i DANH SÁCH HÌNH ii DANH SÁCH BẢNG ii BÀI 1: LÊN MEN RƯỢU NHO I GIỚI THIỆU II PHƯƠNG TIỆN .1 III PHƯƠNG PHÁP IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Kết quả: Thảo luận: .4 V KẾT LUẬN .6 BÀI 2: SẢN XUẤT SINH KHỐI NẤM MEN .7 I GIỚI THIỆU II PHƯƠNG TIỆN .7 III PHƯƠNG PHÁP IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Kết quả: Thảo luận: .9 V KẾT LUẬN .9 BÀI 3: SẢN XUẤT BÀO TỬ MỐC TƯƠNG 11 I GIỚI THIỆU 11 II PHƯƠNG TIỆN .12 III PHƯƠNG PHÁP 12 IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .13 Kết quả: .13 Thảo luận: 14 V KẾT LUẬN .14 TÀI LIỆU THAM KHẢO 15 i Chuyên ngành Vi Sinh Vật Học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Báo cáo thực hành Vi Sinh Vật Công Nghiệp Trường ĐHCT DANH SÁCH HÌNH Trang Hình 1: Rượu vang đỏ Hình 2: Khuẩn lạc S cerevisiae Hình 3: Tế bào S cerevisiae Hình 4: Aspergillus oryzae phát triển 11 Hình 5: Aspergillus oryzae 12 Hình 7: Mặt trước túi nilon ni cấy 13 Hình 6: Mặt sau túi nilon nuôi cấy 13 DANH SÁCH BẢNG Trang Bảng 1: Sự thay đổi pH qua giai đoạn Bảng 2: Sự thay đổi độ Brix qua giai đoạn Bảng 3: Sự lên men nấm men Bảng 4: Nồng độ rượu sau lên men Bảng 5: Kết đánh giá cảm quan Bảng 6: Sinh khối nấm men sau lên men thu ii Chuyên ngành Vi Sinh Vật Học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Báo cáo thực hành Vi Sinh Vật Công Nghiệp Trường ĐHCT Bài 1: LÊN MEN RƯỢU NHO I GIỚI THIỆU Rượu nho (tên gọi khác rượu vang hay rượu chát) loại thức uống có cồn lên men từ nước nho Rượu vang đỏ thường lên men từ nước ép vỏ nho, rượu vang trắng lên men từ nước nho Đã xuất từ lâu giới Ở Việt Nam, nho trồng nhiều tỉnh phía nam Miền trung tỉnh Ninh Thuận rượu nho mang nhãn hiệu rượu vang Đà Lạt, rượu vang Biên Hòa, rượu vang Hà Nội… xuất thị trường Sản xuất rượu nho dựa sở hố sinh xảy q trình lên men nước nho Hình 1: Rượu vang đỏ tác dụng enzyme nấm men (Saccharomyces cerevisiae) Hiện có hai phương pháp lên men bản: lên men tự nhiên lên men nhờ vào chủng nấm men khiết Khác với loại thức uống lên men khác, rượu nho có thời gian lên men dài (vài tháng đến vài năm) Phân loại: Theo màu sắc: có vang đỏ vang trắng Theo lượng đường rượu: có vang chat vang Trong nước nho có chứa glucose, fructose (khoảng 40%), chất pectin, acid hữu cơ, chất màu, hợp chất chứa nitơ (protein, acid amine), vitamin, muối khống,…Trong q trình lên men, nấm men sử dụng lượng đường dịch để tăng sinh khối tổng hợp số sản phẩm (rượu, CO2, acid acetic, acid lactic, este…) Các chất pectin thuỷ phân kéo theo tạo thành lượng nhỏ methanol Nấm men Saccharomyces cerevisiae phổ biến trình lên men chiếm 80% tổng số Saccharomyces có nước lên men Đa số tế bào hình ovan sinh sản theo lối nảy chồi tạo bào tử Saccharomyces cerevisiae có khả sinh enzyme invertase xúc tác phản ứng thuỷ phân saccharose thành glucose fructose (tỉ lệ mol 1:1) Vì lên men ta bổ sung đường saccharose với hàm lượng tính tốn để tạo độ Brix cần đạt, giúp trình lên men hiệu II PHƯƠNG TIỆN  Nho Chuyên ngành Vi Sinh Vật Học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Báo cáo thực hành Vi Sinh Vật Công Nghiệp            III Trường ĐHCT Đường cát Nấm men khô Saccharomyces cerevisiae Bộ dụng cụ ép nước trái Bình tam giác 500 ml Waterlock Tủ ủ Máy li tâm Hệ thống chưng cất cồn Cồn kế pH kế Khúc xạ kế cầm tay (Brix kế) PHƯƠNG PHÁP Nho (khoảng 600g) Đo độ Brix pH Bổ sung lượng đường để đạt độ Brix yêu cầu Bỏ cuốn, rửa nghiền Saccharomyces cerevisiae Chia phần (khoảng 300g dịch vỏ) Bình tam giác 500ml (bình 2) Bình tam giác 500ml (bình 1) Để yên, lên men ngày, đếm bọt khí waterlock ngày phút Chưng cất 100ml dịch lên men Li tâm phần lại Chưng cất 100ml dịch lên men Thành phẩm Li tâm phần lại Thành phẩm Đo độ rượu Đo độ rượu Đo độ Brix; pH; Đánh giá cảm quan Đo độ Brix; pH; Đánh giá cảm quan Phương pháp nhằm xem xét khả lên men rượu nấm men Saccharomyces cerevisiae khả lên men rượu tự nhiên, xem xét yếu tố ảnh hưởng tới trình lên men nhằm tạo điều kiện tối ưu cho việc lên men rượu nho IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Chuyên ngành Vi Sinh Vật Học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Báo cáo thực hành Vi Sinh Vật Công Nghiệp Trường ĐHCT Kết quả: Bảng 1: Sự thay đổi pH qua giai đoạn Độ Brix ban đầu Nhóm Nấm men (%) pH ban đầu pH rượu thành phẩm 4,06 20,8 3,81 0,1 3,96 4,12 27 3,96 0,1 4,10 4,06 32 3,91 0,1 4.05 Bảng 2: Sự thay đổi độ Brix qua giai đoạn Nhóm Đọ Brix ban đầu 20,8 Nấm men (%) Độ Brix rượu thành phẩm 0,1 11,5 0,1 11 26 0,1 16 27 32 Bảng 3: Sự lên men nấm men Số bọt khí sinh phút Nhóm Độ Brix ban đầu Nấm men (%) Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày 0 10 0,1 15 11 1 0 18 11 7 20,8 27 Chuyên ngành Vi Sinh Vật Học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Báo cáo thực hành Vi Sinh Vật Công Nghiệp Trường ĐHCT 0,1 30 16 0 0 10 0,1 20 15 11 32 Bảng 4: Nồng độ rượu sau lên men Độ Brix ban đầu Nhóm Nấm men (%) Độ rượu sau lên men (20oC) 9,95 0,1 11,78 12,21 0,1 11,18 7,675 0,1 11,35 20,8 27 32 Bảng 5: Kết đánh giá cảm quan Nhóm Độ Brix ban đầu 20,8 Nấm men (%) Độ màu sắc Mùi Vị Ý thích Trung bình chất lượng 5 5 0,1 5 5 5 5 0,1 5 5 5 5 0,1 4 4,5 27 32 Thảo luận: Cơ chế lên men rượu: Rượu tạo chủ yếu nhờ tế bào nấm men phân giải glucose thông qua đường EM (Embden-Meyerhoff) Quá trình lên men rượu trình phức tạp Đầu tiên, đường thẩm thấu vào tế bào nấm men Ở đó, đường chuyển hóa qua hàng loạt sản phẩm trung gian tạo thành acid pyruvic Acid pyruvic tác Chuyên ngành Vi Sinh Vật Học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Báo cáo thực hành Vi Sinh Vật Công Nghiệp Trường ĐHCT dụng enzym Pyruvat-decacboxylase bi CO2 tạo thành Acetaldehit Enzym có coenzym Thiaminpyrophosphat cần có ion Mg++ làm chất hoạt hóa Sau đó, acetaldehit bị khử thành cồn etylic CO2 enzym Acoldehdrogenase xúc tác Phương trình tóm tắt q trình lên men rượu C6H12O6 Lên men 2C2H5OH + 2CO2 + 113,4 KJ Về nhiệt độ: Nấm men hoạt động tốt 20-300C, 160C lên men chậm, 350C hệ enzym thể nấm men bị giảm hoạt lực đến mức tối thiểu, hoạt động trao đổi chất bị ngưng trệ Nếu nhiệt độ 400C nấm men không tổng hợp lượng dự trữ cần thiết nên chết Trong thực nghiệm ta lên men nhiệt độ phịng khơng q 300C thuộc khoảng nhiệt độ thích hợp cho lên men Về độ pH: Nhìn chung, nấm men phát triển mơi trường có pH = - 8, thích hợp từ - 4,5 Mặt khác, vi khuẩn bắt đầu phát triển pH = 4,2 cao Vì lên men rượu để ngăn ngừa tượng nhiễm khuẩn, người ta thực giới hạn pH = 3,8 - 4,0 Độ pH phụ thuộc vào nhiều yếu tố: loài, chủng, nấm men, thành phần môi trường lên men, điều kiện lên men Thực tế pH đo từ dịch nước nho ba nhóm trình bày bảng giao động cao 3,96 thấp 3,81 thuộc khoảng pH giới hạn Độ pH phụ thuộc vào chủng loại nho nguyên liệu dùng để lên men, góp phần vào hương vị loại rượu nho bên cạnh chủng loại nấm men dùng Về nồng độ đường dịch lên men: Ảnh hưởng nhiều đến hiệu suất lên men, nấm men Saccharomyces cerevisiae có khả sinh enzyme invertase xúc tác phản ứng thuỷ phân saccharose thành glucose fructose (tỉ lệ mol 1:1) Vì nấm men có khả lên men đường thành rượu khoảng phù hợp từ 22 - 250 Brix Trong giới hạn này, nồng độ đường cao, rượu mạnh hàm lượng etylic cao, nên thêm đường vào dịch lên men biện pháp phổ biến nâng cao độ cồn Tuy nhiên việc bổ sung vượt lượng khoảng phù hợp dẫn đến tượng co nguyên sinh tế bào nấm men, làm giảm khả lên men, hiệu suất khơng cao Lưu ý tính tốn độ Brix Brix kế ta cần phải tính lượng đường hoà tan vào lượng dung dịch nước nho trừ phần vỏ khơng hồ tan đường, khơng trừ phần vỏ độ Brix vượt khỏi độ Brix tính tốn (q trình lên men rượu vang đỏ) b ax Cơng thức tính lượng đường bổ sung :  100 100  x Trong đó: a: Độ Brix dịch x : Lượng đường cần bổ sung cho 100g dịch b: Độ Brix cần đạt Tổng lượng đường cần bổ sung là: Chuyên ngành Vi Sinh Vật Học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Báo cáo thực hành Vi Sinh Vật Công Nghiệp Trường ĐHCT md x 10 (kg) (md: Khối lượng dịch ban đầu) Bảng cho thấy chủng nấm men sử dụng lượng đường hiệu với độ Brix 27 nhóm (có khơng bổ sung nấm men); Với độ Brix 32 nhóm bình khơng bổ sung nấm men, dựa vào bảng trình lên men diễn chậm đến ngày xuất bọt khí đếm phút đến ngày thứ tiếp tục lên men hai bình, bình có bổ sung nấm men nhóm sinh bọt khí khơng đếm bọt khí phút, dấu hiệu lên men yếu dần Về thời gian lên men: Phụ thuộc vào nhiều yếu tố nhiệt độ, nồng độ đường, chủng nấm men Trong thực hành khoảng thời gian giới hạn nên lên men ngày, hiệu suất chưa thật cao so với khoảng trung bình từ 15 – 20 ngày Để tăng giá trị cảm quan cần trữ rượu tháng trở lên Về nồng độ rượu etylic: Lượng rượu tạo hỗn hợp không khiết etylic, có methanol, ester, aldehyde,… chủ yếu rượu etylic an toàn cho người sử dụng Bảng nồng độ rượu cao bình lên men tự nhiên nhóm với độ rượu cao 12,21 200C Nhìn chung việc bổ sung nấm men nhóm giúp tăng hiệu suất lên men, tăng nồng độ rượu cho thành phẩm Việc nồng độ rượu tăng trình lên men làm ức chế nấm men hoạt động, độ rượu đạt - 8% thể tích, trao đổi chất nấm men bị ngừng trệ tồn phần, q trình lên men chuyển sang thời kỳ lên men thầm lặng Về đánh giá cảm quan: Dựa vào bảng nhìn chung tất thành phẩm rượu đạt tiêu chí độ trong, màu, mùi, vị, ý thích Nhưng lên men thời gian dài thành phẩm ngon V KẾT LUẬN Trong trình lên men rượu nho cần ý đặc biệt đến yếu tố ảnh hưởng đến suốt trình lên men đến nấm men Lên men khoảng nhiệt độ 20 – 300C, khoảng pH thích hợp từ 3,8 – 4,0, độ Brix từ 22 - 250 Brix, khoảng thời gian đủ dài để tạo hương vị tốt cho thành phẩm, cần ý đến nồng độ cồn thành phẩm việc lên men với số lượng lớn thương mại Chuyên ngành Vi Sinh Vật Học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Báo cáo thực hành Vi Sinh Vật Công Nghiệp Trường ĐHCT Bài 2: SẢN XUẤT SINH KHỐI NẤM MEN I GIỚI THIỆU Nấm men lồi nấm đơn bào, thường sinh sơi nẩy nở cách nảy chồi, với số lồi thường sử dụng để lên men bánh mì hay sản xuất đồ uống có cồn Phần lớn lồi nấm men thuộc ngành Ascomycota, số loài thuộc ngành Basidiomycota Chúng phân bố rộng tự nhiên, từ xa xưa người biết sử dụng nấm men để sản xuất thực phẩm lên men Hàm lượng protein tế bào cao từ 40 – 50% trọng lượng khơ, chất lượng protein cao, có đầy đủ acid amine thành phần đặc biệt acid amine khơng thay có giá trị dinh dưỡng cao, thành phần vitamin, khoáng, glucid, lipid…nên nấm men sử dụng việc sản xuất protein đạm đơn bào Tuy nhiên có nhiều lồi gây hại cho người động vật, làm hỏng thực phẩm Saccharomyces chi nấm men sử dụng rộng rãi ngành thực phẩm làm bánh mì, sản xuất rượu bia cồn thương mại Saccharomyces sản xuất với quy mơ lớn giới, chúng có khả hấp thụ chất dinh dưỡng qua màng tế bào môi trường nước mạch nha loại đường hòa tan, hợp chất nitơ (các acid amin, peptit), vitamin nguyên tố vi lượng môi trường… Sau đó, hàng loạt phản ứng sinh hóa mà đặc trưng trình trao đổi chất để chuyển hóa chất thành dạng cần thiết cho trình phát triển lên men nấm men tiến hành Q trình ni tăng sinh khối nấm men Saccharomyce cần phải cung cấp lượng khí cần thiết q trình ni tăng sinh khối Hình 3: Tế bào S cerevisiae II Hình 2: Khuẩn lạc S cerevisiae PHƯƠNG TIỆN Chuyên ngành Vi Sinh Vật Học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Báo cáo thực hành Vi Sinh Vật Công Nghiệp         III Trường ĐHCT Nấm men Saccharomyces cerevisiae Dung dịch đường mía 10% (NH4)2SO4 0,1%, KH2PO4 0,1% Bình tam giác 250ml Tủ ủ Máy li tâm pH kế Đĩa petri PHƯƠNG PHÁP Dung dịch đường mía 10% (NH4)2SO4 0,1% 1ml men giống Khử trùng 115oC, 15 phút KH2PO4 0,1% 1ml men giống Bình tam giác (2) Bình tam giác (1) Chuyển vào tủ ủ có chế độ lắc Li tâm 5000 vòng/ phút, 250C, 10 phút Sấy 1050C, 48h Cân, tính kết Bình Cân, tính kết Bình Phương pháp xem xét khả phát triển, yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng chủng nấm men Saccharomyces cerevisiae với nghiệm thức lần lặp lại Thu hoạch sinh khối, so sánh số liệu thu IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Kết quả: Chuyên ngành Vi Sinh Vật Học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Báo cáo thực hành Vi Sinh Vật Công Nghiệp Trường ĐHCT Kết số liệu sinh khối nấm men thống kê bảng sau: Bảng 6: Sinh khối nấm men sau lên men thu Sinh khối nấm men sau lên men (g) Nhóm A: 0,9473 B: 0,6994 A: 0,7241 B: 0,6862 A: 0,6096 B: 0,6030 Thảo luận: Nấm men Saccharomyces cerevisiae coi vi sinh vật sống hiếu khí tuỳ nghi Trong q trình ni tăng sinh khối cần cung cấp nhiều oxy để trình sinh sản diễn mạnh mẽ hơn, lượng sinh khối tăng lên nhanh trở thành sản phẩm chủ yếu môi trường lên men Ngược lại, điều kiện thiếu khơng có mặt O2, nấm men chuyển từ hoạt động hơ hấp sang lên men kỵ khí, sản phẩm môi trường etanol trở thành chủ yếu Tuy nhiên, hai kiểu hô hấp có mối quan hệ chung với nguồn đường có môi trường Qua thực tế sản xuất rượu vang cho thấy: lượng đường tiêu hao cho hơ hấp hiếu khí chiếm khoảng 1/5, tiêu hao cho hơ hấp kỵ khí 4/5 (thực chất lên men để tạo etanol) Đường mía cung cấp ngồi lượng sucrose cịn có nhiều khoáng vi lượng cần thiết cho nấm men phát triển Ngồi cịn bổ sung lượng (NH4)2SO4 0,1%, KH2PO4 0,1% vào mơi trường dung dịch đường mía 10% nhằm cung cấp nguồn nitơ photpho vô cho nấm men Trong môi trường nuôi cấy cần ý nguyên tố đa lượng khác Ngoài yếu tố ảnh hưởng đến chủng nhiệt độ, pH, nồng độ đường trình bày Kết sinh khối nấm men thu cho thấy sinh khối nấm men thu quanh mức 0,6 gram, cá biệt bình A nhóm lên đến 0,9473 gram Xét thấy nấm men phát triển tăng sinh khối đồng bình kiện ni cấy giống Trường hợp bình ni cấy A nhóm bình ni cấy A nhóm khối lượng sinh khối thu cao bình lại, phần tăng sinh mơi trường tối ưu hơn, nấm men có sức sống cao phần sai sót thao tác lấy men giống, chuẩn bị mơi trường, sai sót q trình chuyển sinh khối li tâm V KẾT LUẬN Để thu sinh khối nấm men cao cần cung cấp đầy đủ oxy, chất dinh dưỡng, điều kiện cần thiết, hạn chế q trình lên men kỵ khí Ngồi chủng men giống phải Chuyên ngành Vi Sinh Vật Học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Báo cáo thực hành Vi Sinh Vật Cơng Nghiệp Trường ĐHCT có sức sống tốt, tăng trưởng nhanh Cần tìm hiểu thêm điều kiện tối ưu, quy trình ni cấy liên tục quy mô thương mại 10 Chuyên ngành Vi Sinh Vật Học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Báo cáo thực hành Vi Sinh Vật Công Nghiệp Trường ĐHCT Bài 3: SẢN XUẤT BÀO TỬ MỐC TƯƠNG (Aspergillus oryzae) I GIỚI THIỆU Aspergillus oryzae loại nấm vi thể thuộc Plectascales, lớp Ascomycetes (nang khuẩn) Cơ thể sinh trưởng chủng hệ sợi bao gồm sợi mảnh, chiều ngang – µm, phân nhánh nhiều có vách ngang, chia sợi thành nhiều bao tế bào Sinh sản vơ tính Đính bào tử Asp oryzae có màu vàng lục hay màu vàng hoa cau Nấm mốc Aspergillus oryzae giàu enzyme thuỷ phân nội bào ngoại Hình 4: Aspergillus oryzae phát triển bào như: amylase, protease, invertase,…phân giải tinh bột thành đường, protein thành acid amine, phân giải sucrose thành glucose fructose Asp oryzae ứng dụng sản xuất nước tương phương pháp vi sinh vật tác nhân lên men chủ yếu Chủng sử dụng chủ yếu ẩm thực truyền thống Trung Quốc, Hàn Quốc Nhật Bản để lên men đậu nành Aspergillus oryzae, khuẩn lạc môi trường Czapek (nhiệt độ ni cấy 270C, 10 ngày tuổi) có đường kính – cm, màu lục, vàng lục, lục nâu sau chuyển thành nâu lục, nâu Khối bào tử trần đỉnh bọng hình tia toả trịn, phần lớn 150 – 300 đến 400 – 500 m đường kính Giá bào tử trần nhẵn ráp, thường dài 1,0 – 2,5 cm, tới – cm Bọng đỉnh giá hình gần cầu, đường kính 40 – 50m, mang cuống thể bình thể bình mang thể bình Cuống thể bình – x – 12 m Thể bình mọc trực tiếp bọng đỉnh giá – x 12 – 15 m, thể bình mọc cuống thể bình 3,0 – 3,5 x – 10m Bào tử trần phần lớn hình cầu, đơi hình elip có đường kính 4,5 –7,0 m 8-10 m trục lớn, nhẵn ráp, có gai mịn Độ ẩm mơi trường tối ưu cho hình thành bào tử: 45%, độ ẩm mơi trường tối ưu cho hình thành enzyme: 55 – 58%, độ ẩm khơng khí: 85 – 95%, pH mơi trường: 5,5 – 6,5 Chúng diện dễ thấy kho nguyên liệu, dụng cụ chứa bột, gạo…đã hết chưa rửa sạch, bã bia, bã rượu, bã sắn,… Chúng mọc phát triển có thành lớp mốc, có màu sắc đen, vàng, xanh,… Màu bào tử già có màu sắc Các bào tử dễ bị gió bay xa rơi vào đâu gặp điều kiện thuận lợi mọc thành mốc Có nhiều ứng dụng Aspergillus oryzae để sản xuất loại enzyme môi trường lên men bán rắn hay lên men chìm Tuy nhiên, Aspergillus oryzae sinh nhiều enzyme lên men bán rắn 11 Chuyên ngành Vi Sinh Vật Học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Báo cáo thực hành Vi Sinh Vật Công Nghiệp Trường ĐHCT Môi trường tạo môi trường thuận lợi cho nấm mốc Asp oryzae phát triển Sử dụng 20 gram gạo cộng với 50% nước sau đem hấp, để chủng bột bào tử có sẵn điều kiện hiếu khí Hình 5: Aspergillus oryzae II       III PHƯƠNG TIỆN Nấm mốc Aspergillus oryzae Gạo Tủ ủ Cân Nồi khử trùng nhiệt ướt Túi nilon có cổ túi đậy nút gòn PHƯƠNG PHÁP Hai sản phẩm mục tiêu từ nấm mốc bột bào tử chế phẩm enzyme Mục tiêu nuôi cấy thu bào tử nấm mốc từ chủng nấm mốc Aspergillus oryzae có sẵn mơi trường chuẩn bị sẵn 10ml H2O 20g gạo Hấp Khử trùng1210C, 15’, Để nguội Thu hoạch 0,2g bột bào tử Cho vào túi nilon Ủ quan sát ngày Trộn 12 Chuyên ngành Vi Sinh Vật Học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Báo cáo thực hành Vi Sinh Vật Công Nghiệp Trường ĐHCT Phương pháp tạo điều kiện thuận lợi cho nấm mốc phát triển, quan sát ghi nhận phát triển khuẩn ty, hình thành bào tử, ghi nhận thay đổi qua ngày, thu hoạch kết vào ngày thứ IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Kết quả: Qua ngày thứ quan sát ghi nhận thấy có hình thành sợi khuẩn ty chủ yếu bao quanh hạt cơm, bắt đầu hình thành bào tử ít, nhiều hạt cơm áo màu vàng xung quanh hạt, số hạt xuất đóm màu xanh Mặt túi nilon hướng lên khuẩn ty phát triển nhiều so với mặt túi nilon tiếp xúc với vỉ tủ ủ khuẩn ty phát triển Vì mặt túi tiếp xúc với khơng khí nhiều so với mặt tiếp xúc với vỉ, hạt cơm đè lên tạo điều kiện khơng thống khí Qua ngày thứ quan sát ghi nhận đa số hình thành nhiều bào tử, màu xanh chiếm đa số bên cạnh màu vàng xuất nhiều ngày quanh hạt cơm túi nilon, mặt túi nilon bào tử phát triển nhiều màu xanh nhiều mặt tiếp xúc với vỉ tủ ủ bào tử phát triển Bào tử phát triển mạnh sau ngày ủ Vì mặt túi tiếp xúc với khơng khí nhiều so với mặt tiếp xúc với vỉ Hình 6: Mặt túi nilon ni cấy Hình 7: Mặt túi nilon nuôi cấy 13 Chuyên ngành Vi Sinh Vật Học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Báo cáo thực hành Vi Sinh Vật Công Nghiệp Trường ĐHCT Thảo luận: Cơm hấp cung cấp tương đối đầy đủ thành phần cho nấm mốc phát triển, đảm bảo nguồn cacbon, nitrogen, độ ẩm, thành phần khoáng,…trong điều kiện nhiệt độ ổn định tủ ủ, pH cơm hấp giới hạn cho phép cộng với hoạt động rộng chủng Asp oryzae pH từ – theo Michell (1988) Aspergillus oryzae đảm bảo u cầu khơng địi hỏi điều kiện vơ trùng nghiêm ngặt, dễ nuôi điều kiện tự nhiên, phát triển nhanh, có khả tạo nhiều bào tử Vì điều kiện ni cấy quy mơ thí nghiệm tạo điều kiện cho nấm mốc phát triển tương đối cao, hình thành hệ khuẩn ty dày đặc vào ngày thứ nhiều bào tử vào ngày thu hoạch Thêm vào theo Lotong Suwanarit, (1983) cho ngày sau ủ khối chất bao phủ bào tử Aspergillus oryzae màu vàng xanh nhạt, sau màu sắc trở nên đậm theo thời gian, việc ủ từ – ngày cho lượng bào tử cao Còn theo Võ Thị Hạnh et al., (2000) cho thời gian thích hợp để sản xuất lượng bào tử Aspergillus oryzae – ngày sau nuôi cấy Xét thấy phát triển hệ khuẩn ty bào tử phù hợp với mô tả nhà nghiên cứu trước Nấm mốc vi sinh vật hiếu khí bắt buộc, việc cung cấp đầy đủ oxi cần thiết cho nấm mốc hô hấp phát triển tăng sinh khối Thiếu oxi kiềm hãm phát triển nấm Việc làm cổ túi đậy nút gòn phương pháp sản xuất bào tử nhằm giúp cho trao đổi khí với mơi trường bên ngồi cách tương đối Trong quy trình sản xuất quy mơ thương mại cần tạo độ thống khí mơi trường bên cạnh bổ sung chất dinh dưỡng để phát triển nấm cao gia tăng hiệu quả, suất cao V KẾT LUẬN Aspergillus oryzae dễ nuôi điều kiện tự nhiên, phát triển nhanh, có khả tạo nhiều bào tử, nhiên cần phải kiểm soát tốt độ pH, nhiệt độ độ ẩm độ thống khí đảm bảo cung cấp đủ oxy cho nấm phát triển Nghiên cứu khoảng thời gian nuôi cấy đạt bào tử nhiều nhất, nhằm giảm chi phí gia tăng suất 14 Chuyên ngành Vi Sinh Vật Học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Báo cáo thực hành Vi Sinh Vật Công Nghiệp Trường ĐHCT TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bài giảng thực hành Vi Sinh Công Nghiệp – thầy Trần Vũ Phương, năm 2014 Bài giảng Vi Sinh Công Nghiệp – thầy Nguyễn Văn Thành, năm 2014 Giáo trình Vi Sinh Vật Học Cơng Nghiệp – PGS TS Nguyễn Xuân Thành Nhà xuất Giáo Dục Trang web http://en.wikipedia.org/wiki/Aspergillus_oryzae (ngày 1/5/2014) http://park.itc.u-tokyo.ac.jp/Lab_Microbiology/libraryfile/RIB40file/RIB40KE3days1.gif (ngày 1/5/2014) http://www.hamruou.vn/images/news/items/img1/ruou-vang-do-chong-lai-su-suygiam-thinh-luc.jpg (ngày 1/5/2014) http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/d/d9/S_cerevisiae_under_DIC_micro scopy.jpg (ngày 1/5/2014) http://eurekabrewing.files.wordpress.com/2012/05/plate1.jpg (ngày 1/5/2014) 15 Chuyên ngành Vi Sinh Vật Học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học ... 14 Chuyên ngành Vi Sinh Vật Học Vi? ??n NC&PT Công nghệ Sinh học Báo cáo thực hành Vi Sinh Vật Công Nghiệp Trường ĐHCT TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Vi? ??t Bài giảng thực hành Vi Sinh Công Nghiệp – thầy... tốt cho thành phẩm, cần ý đến nồng độ cồn thành phẩm vi? ??c lên men với số lượng lớn thương mại Chuyên ngành Vi Sinh Vật Học Vi? ??n NC&PT Công nghệ Sinh học Báo cáo thực hành Vi Sinh Vật Công Nghiệp. .. hàng loạt sản phẩm trung gian tạo thành acid pyruvic Acid pyruvic tác Chuyên ngành Vi Sinh Vật Học Vi? ??n NC&PT Công nghệ Sinh học Báo cáo thực hành Vi Sinh Vật Công Nghiệp Trường ĐHCT dụng enzym Pyruvat-decacboxylase