SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ THÀNH ĐOÀN TP. HỒ CHÍ MINH TP. HỒ CHÍ MINH CHƯƠNG TRÌNH VƯỜN ƯƠM SÁNG TẠO KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TRẺ B B Á Á O O C C Á Á O O N N G G H H I I Ệ Ệ M M T T H H U U (Đã được chỉnh sửa theo góp ý của Hội đồng nghiệm thu ngày 16/9/2010) “CHIẾT TÁCH CÁC ALCALOIDCRINAMIDIN VÀ 6-HYDROXYCRINAMIDIN CỦA LÁ TRINH NỮ HOÀNG CUNG ĐẠT YÊU CẦU ĐỘ TINH KHIẾT TRÊN 98%” Chủ nhiệm đề tài: NGUYỄN HỮU LẠC THỦY Cơ quan chủ trì: TRUNG TÂM PHÁT TRIỂN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TRẺ TP. Hồ Chí Minh, tháng 9 năm 2010 a SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ THÀNH ĐOÀN TP. HỒ CHÍ MINH TP. HỒ CHÍ MINH CHƯƠNG TRÌNH VƯỜN ƯƠM SÁNG TẠO KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TRẺ Tên đề tài: “Chiết tách các alcaloid Crinamdin và 6-hydroxycrinamidin của lá Trinh Nữ Hoàng Cung đạt yêu cầu độ tinh khiết trên 98%” (Isolation Crinamidin and 6-hydroxycrinamidin from Crinum latifolium L. with required of 98 % pure) Chủ nhiệm đề tài: Ths Nguyễn Hữu Lạc Thủy Cơ quan chủ trì: “Trung tâm phát triển khoa học và công nghệ trẻ - Thành đoàn TpHCM” Thời gian thực hiện đề tài: Kinh phí được duyệt: 80.000.000 (tám mươi triệu đồng). Kinh phí đã cấp: 80.000.000 theo TB số: TB-SKHCN ngày Mục tiêu của đề tài: Chiết tách được 100 mg Crinamidin 50 mg 6–hydroxycrinamidin với yêu cầu độ tinh khiết trên 98 %. Nội dung: Công việc dự ki ế n Công việc đã thực hiện 1 Thu thập dược liệu, chi ế t 50 g cao alcaloid toàn ph ầ n. Đã t h ực hiện 2 Thăm d ò c á c đ i ề u kiện tách phân đoạn. Đã t h ực hiện 3 Qui trình tách Crinamidin và 6-hydroxycrinamidin Đã t h ực hiện 4 Xác định c ấ u trúc, định danh sản ph ẩm Đã t h ực hiện 5 Qui trình định lượng sản ph ẩ m có TNHC Đã t h ực hiện b Đề tài: “Chiết tách các alcaloid Crinamdin và 6-hydroxycrinamidin của lá Trinh Nữ Hoàng Cung đạt yêu cầu độ tinh khiết trên 98%” (Isolation Crinamidin and 6-hydroxycrinamidin from Crinum latifolium L. with required of 98 % pure) TÓM TẮT Đặt vấn đề Hiện nay, các chế phẩm từ Trinh nữ hoàng cung (Crinum latifolium L.) với tác dụng điều trị u phì đại lành tính tuyến tiền liệt và hỗ trợ điều trị ung thư như Tadimax, Crila, Panacrin đã có mặt trên thị trường. Tuy nhiên, việc kiểm nghiệm các chế phẩm này hiện đang gặp khó khă n vì thiếu chất chuẩn để có thể tiến hành kiểm nghiệm thường xuyên. Công trình này nhằm phân lập nhanh một vài alcaloid từ lá TNHC làm chuẩn đối chiếu nhằm phục vụ công tác kiểm nghiệm các chế phẩm chứa TNHC. Phương pháp nghiên cứu Từ alcaloid toàn phần của lá TNHC, dùng kỹ thuật VLC với các hệ dung môi tăng dần độ phân cực, silicagel được tẩm đệm kiềm để phân lập nhanh các alcaloid tinh khiết. Alcaloid sản phẩm đượ c so sánh với alcaloid chuẩn trên sắc ký lớp mỏng, kiểm tra độ tinh khiết bằng SKLHNC và xác định cấu trúc hóa học bằng các phân tích phổ học. Kết quả và bàn luận Từ 50 g cao alcaloid toàn phần, đã phân lập được 100 mg alcaloid G 1 và 50 mg G 2 (tinh khiết trên 98 %, SKLHNC). Các dữ liệu phổ học đã khẳng định G 1 chính là Crinamidinvà G 2 chính là 6-hydroxycrinamidin. Điểm mới của nghiên cứu này là việc sử dụng silica gel đã được xử lý bằng kiềm. Ưu điểm của phương pháp là giảm được thời gian rửa giải và tăng độ tinh khiết của các hợp chất. SUMMARY Objectives Extracts from Crinum latifolium have been proved to possess some properties in treatment of the benign prostatic hyperplasia. Some of herbal drugs such as Tadimax, Crila, Panacrin which all contain extracts from Crinum latifolium as bioactive components have appeared on market for this therapeutic purpose. However, reference standards from Crinum latifolium for medicine quality control purpose is in trouble due to the supply still not enough. This paper reports a simple process to flash isolate a large amount of pure crinamidine an6- hydroxycrinamidine for using as a working reference in order to control the herbal drugs containing this extract as a bioactive component. Experimentals From total alkaloid residue of the leaves of , with a technique of VLC using basic modified silica, nine fractions of alkaloid were separated. One of them (fraction G) was easily crystalized to afford a pure alkaloid G 1 and G 2 . Results and Conclusions From 10 kg of the leaves of Crinum latifolium collected in Dong Nai province, 50 g of total alkaloid residue was separated. With a VLC technique using basic modified silica gel as a static phase, a large mount of alkaloid G 1 (100 mg) and G 2 (50 mg) were isolated successfully from the total alkaloid residue. The structure of G 1 and G 2 were determined as crinamidine and 6-hydroxycrinamidine [7], [12]., known alkaloids isolated from Crinum latifolium L. species previously. The decrease in time of the process is an advantage of this study. c Lời cảm ơn: Nhóm nghiên cứu chúng tôi chân thành cảm ơn: Sở khoa học và công nghệ Tp Hồ Chí Minh Thành đoàn Tp Hồ Chí Minh Trung tâm phát triển Khoa học và công nghệ trẻ, Thành đoàn Tp HCM Khoa Dược, đại học Y dược Tp Hồ Chí Minh Bô môn Phân tích – Kiểm nghiệm, Khoa Dược, đại học Y dược Tp HCM Đã tạo điều kiện về mọi mặt như: hổ trợ kinh phí, trang thiết bị để chúng tôi thực hiện và hoàn thành đề tài. Đề tài đã bổ sung nguồn chất chuẩn có nguồn gốc tự nhiên, góp phần trong công tác tiêu chuẩn hóa nguồn nguyên liệu Trinh Nữ Hoàng Cung để làm thuốc. Đồng thời qua quá trình thực hiện đề tài đã giúp tích lũy, nâng cao các kiến thức để nghiên cứu khoa học cho nhóm nghiên cứu chúng tôi và các bạn sinh viên Khoa Dược, đại học Y dược Tp Hồ Chí Minh. ii MỤC LỤC Trang 1. TỔNG QUAN ……………………………………………………………. 1 1.1 CÂY TRINH NỮ HOÀNG CUNG….…………………………………………. 1 1.2 CHẤT CHUẨN ……………………………………………… 5 1.3 VẬT LIỆU VÀ TRANG THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU …………… 6 2. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU – PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU … 7 2.1 NỘI DUNG 1: CHIẾT ALCALOID TOÀN PHẦN ….…………… …………7 2.1.1. Yêu cầu cần thực hiện ………………………………………………… … 8 2.1.2. Phương pháp nghiên cứu………………….………………………… …… 8 2.2 NỘI DUNG 2: THĂM DÒ ĐIỀU KIỆN TÁCH PHÂN ĐOẠN…… … ….…9 2.2.1. Yêu cầu thực hiện ………… ………………………………………… .… 9 2.2.2. Phương pháp nghiên cứu…………………………………………….… … 9 2.3. NỘI DUNG 3: TÁCH PHÂN ĐOẠN, PHÂN LẬP CÁC HỢP CHẤT 10 2.3.1. Yêu cầu cần thực hiện 10 2.3.2. Phương pháp nghiên cứu 10 2.4 NỘI DUNG 4: TINH CHẾ SẢN PHẨM 11 2.4.1 Yêu cầu 11 2.4.2 Phương pháp nghiên cứu 11 2.5 NỘI DUNG 5: ĐỊNH DANH SẢN PHẨ M 12 2.5.1 Yêu cầu thực hiện 13 2.5.2. Phương pháp nghiên cứu 13 2.6 NỘI DUNG 6: XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUI TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG CRINAMIDIN TRONG VIÊN OPCRILATI 14 2.6.1 Quy trình định lượng………………………………………… …………….14 2.6.2 Thẩm định qui trình ………………………………………… ……… ……17 iii 3. KẾT QUẢ - BÀN LUẬN 20 2.1 NỘI DUNG 1: CHIẾT ALCALOID TOÀN PHẦN ….………… ………… 20 2.2 NỘI DUNG 2: THĂM DÒ ĐIỀU KIỆN TÁCH PHÂN ĐOẠN…… ……. 21 2.3. NỘI DUNG 3: TÁCH PHÂN ĐOẠN, PHÂN LẬP CÁC HỢP CHẤT 24 2.4 NỘI DUNG 4: TINH CHẾ SẢN PHẨM 25 2.5 NỘI DUNG 5: ĐỊNH DANH SẢN PHẨM 25 2.6 NỘI DUNG 6: XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUI TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG CRINAMIDIN TRONG VIÊN OPCRILATI 27 4. KẾT LUẬN 28 TÀI LIỆU THAM KHẢO…………………………………………………… ……… 29 iv DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT VIẾT TẮT THUẬT NGỮ IR Infrared spectra NMR Nuclear Magnetic Resonance SKLM Sắc ký lớp mỏng SKLHNC Sắc ký lỏng hiệu năng cao TNHC Trinh Nữ Hoàng Cung UV Ultraviolet spectra DANH SÁCH BẢNG SỐ TÊN BẢNG SỐ LIỆU TRANG 2.1 Kết quả rửa giải qua cột silica gel tẩm đệm pH kiềm (cột 1) 8 2.2 Kết quả rửa giải qua cột silica gel tẩm đệm pH acid (cột 2) 9 2.3 Kết quả rửa giải qua cột silica gel không tẩm (cột 3) 9 2.4 So sánh G1, G2 với Crinamidin và 6-hydroxycrinamidin 12 2.5 So sánh G1, G2 với Crinamidin và 6-hydroxycrinamidin phổ IR 12 2.6 So sánh G1 với Crinamidin trên phổ NMR 13 2.7 So sánh G2 với 6-hydroxycrinamidin trên phổ NMR 13 2.8 Kết quả khảo sát tính tương thích hệ thống của Crinamidin 16 2.9 Kết quả khảo sát tính tương thích hệ thống của mẫu thử 16 2.10 Kết quả khảo sát tính tuyến tính 18 2.11 Kết quả khảo sát độ đúng 18 2.12 Kết quả khảo sát độ lặp lại 19 3.1 Hiệu suất chiết alcaloid từ bột lá TNHC 20 3.2 Một số hệ dung môi khai triển SKLM 21 3.3 Các bước thay đổi độ phân cực của dung môi qua sắc ký cột 22 3.4 Kết quả tách các phân đoạn alcaloid bằng SKC chân không 24 3.5 Khối lượng kết tinh thu được của phân đoạn G 25 v DANH SÁCH HÌNH SỐ TÊN HÌNH ẢNH TRANG 2.1 Sắc ký đồ và phổ UV của mẫu chuẩn đối chiếu Crinamidin 17 2.2 Sắc ký đồ và phổ UV của mẫu thử 17 2.3 Sắc ký đồ và phổ UV của mẫu thử thêm chất chuẩn 17 2.4 Đường biểu diễn mối tương quan giữa nồng độ và diện tích 18 3.1 Sắc ký đồ cao alcaloid toàn phần chiết bằng CH 2 Cl 2 21 3.2 Sắc ký đồ các phân đoạn tách được qua cột (UV 365 nm) 23 3.3 Sắc ký đồ các phân đoạn tách được qua cột (UV 254 nm) 23 3.4 Sắc ký đồ các phân đoạn tách được qua cột (hơ iod) 23 3.5 Sắc ký đồ các phân đoạn tách được qua cột (TT Dragendorff) 23 3.6 Các phân đoạn G xuất hiện kết tinh 25 3.7 Sắc ký đồ của kết tinh trong các ống nghiệm phân đoạn G 26 1 I. TỔNG QUAN 1.1. TỔNG QUAN VỀ CÂY TRINH NỮ HOÀNG CUNG Tên khác: Tỏi lơi lá rộng. Tên khoa học: Crinum latifolium L. Họ: Loa kèn đỏ (Amaryllidaceae) 1.1.1. Mô tả: Cây cỏ lớn. Thân hành to, hình cầu hoặc hình trứng thuôn, đường kính 8- 10cm, phủ bởi những vảy hình bản to, dày, màu trắng. Lá mọc thành tán trên một cán dẹt, dài 30- 40cm; lá bắc rộng, hình thìa dài 7 cm, màu lục, đầu nhọn; hoa màu trắng pha hồng, dài 10- 15 cm; bao hoa gồm 6 phiến bằng nhau, khi nở đầu phiến quăn lại; nhị 6; bầu hạ. Quả g ần hình cầu (ít gặp). 1.1.2. Phân bố, sinh thái Chi Crium L. có khoảng 100 loài, phân bố chủ yếu ở vùng nhiệt đới; trong đó, một số loài được trồng làm cảnh và làm thuốc tương đối phổ biến. Cây trinh nữ hoàng cung có nguồn gốc từ Ấn Độ, hiện được trồng rộng rãi ở nhiều nước trong khu vực Đông Nam Á như Thái Lan, Malaysia, Philippin, Campuchia, Lào, Việt Nam, Ấn Độ …. Ở Việt Nam, cây được trồng chủ y ếu ở các tỉnh từ Quảng Nam- Đà Nẵng trở vào, sau được trồng ở các tỉnh phía bắc. Trinh nữ hoàng cung là cây ưa ẩm, ưa sáng hoặc có thể chịu bóng râm 1 phần, sinh trưởng và phát triển tốt trong điều kiện khí hậu nóng và ẩm của vùng nhiệt đới. Cây có khả năng đẻ nhánh khoẻ, hàng năm có thêm 3- 5 hành con từ thân hành mẹ. Cây trồng được 3 năm sẽ tạo thành một khóm lớn, có đến 20 nhánh ở các tuổi khác nhau. 1.1.3. Cách trồng Trinh nữ hoang cung đang được trồng ở nhiều nơi, từ miền Bắc đến miền Nam. Cây được nhân giống bằng thân hành vào mùa xuân (tháng 2- 3) ở miền Bắc và vào đầu mùa mưa ở miền Nam. Chọn thân hành bánh tẻ, chưa ra hoa, không sâu bệnh để làm giống. Năm đầu, cây hầu như không đẻ nhánh. Từ năm thứ 2 trở đi, cây mới bắt đầu đẻ nhánh. Vì vậy, tốc độ nhân giống rất ch ậm, nhất là khi cần nhân một dòng đã chọn lọc. Hiện nay, đã có phương pháp nhân dòng vô tính khá nhanh bằng kỹ thuật nuôi cấy in vitro. 2 Trinh nữ hoàng cung hơi ưa bóng, ưa ẩm (luôn luôn là 60- 70%). Chọn loại đất thịt nhẹ hoặc trung bình, có khả năng giữ ẩm. Đất cần cày bừa kỹ, để ải, bón lót cho mỗi hecta 25- 30 tấn phân chuồng, 500kg supe lân, 300 kg sulfat kali. Trộn đều phân với đất, lên luống cao 25- 30 cm, mặt luống rộng 0,8m rồi trồng 2 hàng, mỗi hốc trồng 1 thân hành với khoảng cách 40 x 40 cm. Khi trồng, cần cắt bỏ hết rễ, cắt bớt lá, vùi sâu vừa h ết phần thân hành. Thường xuyên làm cỏ, xới xáo, vun kín thân hành, tưới đủ ẩm. Cây có thể chịu được úng ngập trong vài ngày. Trinh nữ hoàng cung bị một loại sâu đặc hiệu gây hại rất nghiêm trọng, đó là Brithys crini Fabricius thuộc họ Noctuidae, bộ Lepidotera. Sâu xuất hiện vào đầu tháng hai, gây hại tất cả các bộ phận. 1.1.4. Bộ phận dùng: Lá, thân hành. 1.1.5. Thành phần hoá học: Trinh nữ hoàng cung được nghiên cứu về hoá học vào khoảng từ năm 1980. Các alcaloid có trong trinh n ữ hoàng cung thuộc 2 nhóm: -Không dị vòng: latisolin, latisodin, beladin. -Dị vòng: ambelin, crinafolin, crinafolidin, 11- O- acetylambelin, 11- O- acetyl 1,2 β- epoxyambelin, lycorin, epilycorin, epipancrassidin, 9-O–demethylhomolycorin, lycorin–1–O–glucosid, pseudolycorin–1–O–β–D–glucosid, latindin, pratorin, pratorinin, pratorinin, pratorimin, pratosin, latifin (Shibanath Glosal và cộng sự, 1983, 1985, 1986, 1988, 1989, Jeffs Peter W. 1985, Kobayashi Shigeru, 1984). Thân rễ chứa 2 glucan: glucan A và glucan B, Glucan A gồm 12 đơn vị glucose, còn glucan B có khoảng 110 gốc của glucose (Tomada Mashashi và cộng sự, 1985). Ở Việt Nam, theo Nguyễn Hoàng và cộng sự, 1997, trinh nữ hoàng cung có 11 alcaloid, 11 acid amin, acid hữu cơ. Các acid amin là phenylalanin, 1– leucin, dl – valin và arginin monohydroclorid. Trần Văn Sung và cộng sự, 1997, đã phân lập được từ thân hành trinh nữ hoàng cung 5 alcaloid trong đó, 2 chất là lycorin và pratorin được nhận dạng bằng phổ khối lượng và ph ổ cộng hưởng từ hạt nhân proton carbon 13. Võ Thị Bạch Huệ và cộng sự, 1998, đã phân lập được từ 2 lá alcaloid là Crinamidin, 6–hydroxycrinamidin được nhận dạng bằng các phân tích hoá học và quang phổ. [...]... methanol của rễ, thân, và cao chiết alcaloid toàn phần của trinh nữ hoàng cung đều có tác dụng ức chế sự phân bào, kìm hãm sự tăng trưởng của rễ hành ta; hoạt tính của cao trinh nữ hoàng cung bằng hoặc hơn 50% so với hoạt tính của colchicin ở cùng nồng độ Panacrin là chế phẩm thuốc bào chế từ hỗn hợp 3 dược liệu: lá trinh nữ hoàng cung, củ tam thất và lá đu đủ, được nghiên cứu về tác dụng chống ung thư Trên. .. kiểm tra độ tinh khiết hai kết tinh G1 và G2, chúng tôi so sánh giá trị trên: Rf trên sắc ký lớp mỏng, thời gian lưu trên SKLHNC, phổ UV-Vis, phổ IR, phổ NMR của G1 và G2 với Crinamidin và 6-hydroxycrinamidin do nhóm đã phân lập trong công trình năm 2006 [7; 12] , kết quả khẳng định G1 là Crinamidin và G2 là 6- hydroxycrinamidin Kết quả: Bảng 2.4: Kết quả so sánh G1, G2 với Crinamidin và 6-hydroxycrinamidin... các kết tinh từ G1→ G4 Kết luận: Do G1 và G2 thể hiện độ tinh khiết (1 vêt trên sắc ký đồ) nên chọn kết tinh G1 và G2 tiếp tục tinh chế và kiểm tra độ tinh khiết bằng SKLHNC Kiếm tra độ tinh khiết bằng phương pháp SKLHNC kết tinh G1 và G2: Kết tinh của phân đoạn G1: sắc ký đồ G1 cho một đỉnh có thời gian lưu là 25,8 phút tương ứng với diện tích đạt 94,36% tính trên tổng diện tích đỉnh của mẫu trên sắc... C17H19NO5 G2 là 6-hydroxycrinamidin - C17H19NO6 Cấu tạo hóa học của Crinamidin và 6-hydroxycrinamidin O O 2 3 1 10 O 9 O 8 1 11 10 10a 2 3 OH 4 O 4a 9 10a 4 4a 12 7 6 OH 11 12 N 5 O OMe 8 7 6 N 5 OMe OH Crinamidin 6-hydroxycrinamidin 3.6 NỘI DUNG 6: XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUI TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG CRINAMIDIN TRONG VIÊN OPCRILATI Qui trình đạt các yêu cầu thẩm định: tính đặc hiệu, độ đúng, độ lặp lại, khoảng... tiếp tục tinh chế theo sơ đồ 3.3 và kiểm tra lần thứ hai cho độ tinh khiết là 99,37% Độ tinh khiết của đỉnh tại thời gian lưu là 100% (Phụ lục 1) Kết tinh của phân đoạn G2: sắc ký đồ G2 cho một đỉnh có thời gian lưu là 13,78 phút tương ứng với diện tích đạt 90,36 % tính trên tổng diện tích đỉnh của mẫu trên sắc ký đồ G2 được tiếp tục tinh chế theo sơ đồ 3.3 và kiểm tra lần thứ hai cho độ tinh khiết là... liệu - Lá cây Trinh Nữ Hoàng Cung thu hái ở Bình Định từ tháng 2 đến tháng 8 năm 2008 - Chất đối chiếu Crinamidin và 6 Hydroxycrinamidin do bộ môn Phân tích –Kiểm nghiệm cung cấp 1.3.2 Dung môi - Hóa chất - Các hóa chất thuốc thử đạt độ tinh khiết phù hợp với mục đích sử dụng - Các dung môi như: cyclohexan, dichloromethan, chloroform, ethyl acetat, aceton, methanol, ethanol, HCl, amoniac đạt tinh khiết. .. cam Các phân đoạn thu được từ cột (1), cột (2) và cột (3) được kiểm tra bằng sắc ký lớp mỏng để so sánh khả năng tách các phân đoạn sau khi tẩm silica gel bằng các dung dịch đệm có pH khác nhau 9 2.3 NỘI DUNG 3: TÁCH PHÂN ĐOẠN, PHÂN LẬP CÁC HỢP CHẤT 2.3.1 Yêu cầu cần thực hiện: Phân lập 100 mg Crinamidin và 50 mg 6-hydroxycrinamidin độ tinh khiết trên 98 % 2.3.2 Phương pháp nghiên cứu: 2.3.2.1 Tách. .. tính, độ đúng và độ lặp lại đều đạt yêu cầu thẩm định, có thể ứng dụng quy trình để khảo sát hàm lượng Crinamidin trong mẫu thử - Hàm lượng Crinamidin có trong 1 viên OPCrilati được tính theo công thức: P= St dpl × Cc × a × Sc 10 St: diện tích đỉnh của mẫu thử Sc: diện tích đỉnh của chất đối chiếu Cc: nồng độ của mẫu chuẩn (µg/ ml) a: độ tinh khiết của mẫu chuẩn (%) dpl: độ pha loãng 10: lượng cao chiết. .. ống nghiệm 24 Hình 3.6 Các phân đoạn G xuất hiện kết tinh 3.4 NỘI DUNG 4: TINH CHẾ SẢN PHẨM – KIỂM TRA ĐỘ TINH KHIẾT Tinh chế: bằng cách thay đổi dung môi Khối lượng kết tinh thu được sau khi tách và tinh chế như sau: Bảng 3.8 Khối lượng kết tinh thu được của phân đoạn G Phân đoạn G1 Khối lượng (mg) 200 Kiểm tra độ tinh khiết bằng sắc ký lớp mỏng G2 70 G3 1800 G4 1300 Kết quả trên sắc ký đồ: G1 cho... để tiếp tục kết tinh Kiểm tra độ tinh khiết của các kết tinh Bằng phương páhp SKLM và SKLHNC Kiểm tra độ tinh khiết bằng sắc ký lớp mỏng - Hệ dung môi khai triển CHCl3 : MeOH : NH4OH đđ (9 : 1 : 0,05) - Bản mỏng silica gel F254 (Merck) - Mẫu thử: G1, G2, G3, G4, Crinamidin, 6-hydroxycrinamidin hoà trong methanol 11 Kiếm tra độ tinh khiết bằng phương pháp SKLHNC kết tinh G1 và G2: Điều kiện: - Cột Phenomenex . Tên đề tài: Chiết tách các alcaloid Crinamdin và 6-hydroxycrinamidin của lá Trinh Nữ Hoàng Cung đạt yêu cầu độ tinh khiết trên 98% (Isolation Crinamidin and 6-hydroxycrinamidin from Crinum. b Đề tài: Chiết tách các alcaloid Crinamdin và 6-hydroxycrinamidin của lá Trinh Nữ Hoàng Cung đạt yêu cầu độ tinh khiết trên 98% (Isolation Crinamidin and 6-hydroxycrinamidin from Crinum. theo góp ý của Hội đồng nghiệm thu ngày 16/9/2010) “CHIẾT TÁCH CÁC ALCALOIDCRINAMIDIN VÀ 6-HYDROXYCRINAMIDIN CỦA LÁ TRINH NỮ HOÀNG CUNG ĐẠT YÊU CẦU ĐỘ TINH KHIẾT TRÊN 98%