Chương 6: Ứng dụng phức chất để tách, phân chia, cô đặc, làm dung môi hữu cơ, sắc kí MỤC LỤC Trang Phần 1: Lời mở đầu Phần 2: Nội dung A- Chiết ………………………………………………………………………………………4 I/ Giới thiệu ……………………………………………………………………………….4 II/ Các trường hợp chiết ………………………………………………………………… 1, Chiết hợp chất nội phức…………………………………………………………4 2, Chiết ion liên hợp ……………………………………………………………….7 3, Chiết hợp chất vô cơ………………………………………………………… 4, Chiết phức clorua kim loại…………………………………………………… 5, Chiết muối nitrat……………………………………………………………… 6, Các dung mơi dùng để chiết……………………………………………… …9 7, Ý nghĩa phương pháp chiết …………………………………………………… B- Chiết tổ hợp phương pháp khác nhau………………………………………………10 I/ Chiết trắc quang…………………………………………………………………………10 1, Nguyên tắc sở định lượng phương pháp…………………………………11 2, Các phương pháp nghiên cứu……………………………………………………….11 3, Một số thuốc thử hữu dùng chiết trắc quang………………………………14 II/ Chiết huỳnh quang…………………………………………………………………… 17 1, Đặc tính chung phương pháp……………………………………………………18 2, Các ví dụ sử dụng phương pháp…………………………………………………… 19 III/ Chiết hấp thụ, phát xạ, huỳnh quang nguyên tử……………………………………… 21 1, Chiết hấp thụ nguyên tử………………………………………………………………22 2, Chiết phát xạ nguyên tử………………………………………………………………26 3, Chiết huỳnh quang……………………………………………………………………30 4, Chiết hố – phóng xạ………………………………………………………………….32 C- Phức chất dùng để tách phương pháp sắc kí……… …………………………… 35 I/ Vài nét lịch sử…………………………………………………………………………… 35 GVHD: Th.s Phạm Hoàng Yến Nhóm Page of 68 Chương 6: Ứng dụng phức chất để tách, phân chia, cô đặc, làm dung mơi hữu cơ, sắc kí II/ Phân loại – Nguyên tắc………………………………………………………………….35 1, Định nghĩa……………………………………………………………………………35 2, Phân loại…………………………………………………………………………… 35 3, Các lực liên kết sắc kí………………………………………………………….38 4, Sự tương tác thành phần hệ sắc kí………………………………………39 III/ Một số đại lượng dùng sắc kí…………………………………………………… 40 1, Hệ số phân bố KD cách xác định………………………………………………… 40 2, Sự liên hệ tốc độ di chuyển chất phân tích KD………………………… 40 3, Thời gian lưu tR thời gian hiệu chỉnh t’R………………………………………………… 41 4, Thể tích lưu Vm thể tích lưu hiệu chỉnh……………………………………………………41 5, Hệ số tách ………………………………………………………………………………… 41 6, Sắc kí đồ……………………………………………………………………………………….41 7, Đĩa lý thuyết……………………………………………………………………………………42 8, Độ phân giải cách làm tăng độ phân giải………………………………………………… 43 9, Thuyết tốc độ, phương trình Van Deemter…………………………………………………….43 Một số thuốc thử hữu dùng tách chiết sắc kí………………………………………… ……….45 Alizarin complexone………………………………………………………………………………………46 Murexid……………………………………………………………………………………………………49 8-Hydroxylquioline……………………………………………………………………………………… 51 Đề tài ví dụ ứng dụng phức chất phân chia, tách chiết………………………… ……………… 55 Tài liệu tham khảo…………………………………………………………………………………….72 GVHD: Th.s Phạm Hồng Yến Nhóm Page of 68 Chương 6: Ứng dụng phức chất để tách, phân chia, cô đặc, làm dung mơi hữu cơ, sắc kí Phần 1: Lời Mở Đầu Trong sống, người luôn mong muốn thỏa mãn tự đáp ứng nhu cầu cần thiết Cuộc sống đại nhu cầu đa dạng, phong phú đòi hỏi chất lượng ngày cao hơn; nhu cầu ăn uống, nhu cầu có mơi trường sống lành, nhu cầu tìm hiểu điều lạ giới sinh Để đáp ứng nhu cầu mơn hố phân tích đời, đáp ứng nhu cầu khám phá chất mới, tìm hiểu thành phần chúng Hiện nay, phương pháp phân tích ứng dụng rộng rãi nghành khoa học kĩ thuật sản xuất Với thiết bị ngày hoàn thiện đại, kết hợp tách máy sắc kí với loại đầu dị khác xử lí số liệu thực nghiệm máy vi tính chương trình chun dụng, cho phép làm tăng độ nhạy độ xác phép phân tích mà cịn tự động hố từ phép đo thơng số vật lý chất trình phân tích, rút ngắn thời gian phân tích, đáp ứng nhu cầu sản xuất nghiên cứu ngành khoa học phát triển mạnh mẽ Một phận hố học phân tích “Phức chất hoá học” Phức chất loại hợp chất ứng dụng rộng rãi ngày đa dạng hầu hết lĩnh vực khác hố học, sinh học, y học, dược học, nơng nghiệp, cơng nghiệp, phân tích mơi trường, điều tra… nhằm khai thác nguồn tài nguyên, khoáng sản đất nước Sự phát triển ngành hoá học phức chất có đóng góp to lớn quan trọng cho nhiều ngành khoa học, kỹ thuật kinh tế quốc dần Khoa học, kỹ thuật đại đặt cho ngành hoá học phức chất nhiệm vụ quan trọng hơn, phức tạp Cần phải nghiên cứu phương pháp phân tích có độ xác cao, độ nhạy cao độ chọn lọc cao, dựa việc ứng dụng phản ứng tạo phức đơn ligan đa ligan nhằm xác định hàm lượng nhỏ chất đối tượng phân tích khác Trong phân tích mơi phân tích điều chế loại vật liệu, chất siêu tinh khiết, phức chất đóng vai trị quan trọng Phức chất đóng vai trị định phương pháp tách, phân chia làm chất, hợp chất Trong đề tài tiểu luận này, hướng dẫn nhiệt tình Th.s Phạm Hồng Yến, nhóm chúng em tiềm hiểu “ỨNG DỤNG PHỨC CHẤT ĐỂ TÁCH, PHÂN CHIA, CÔ ĐẶC, LÀM SẠCH BẰNG DUNG MÔI HỮU CƠ, SẮC KÝ” phần “ CHIẾT TỔ HỢP VỚI CÁC PHƯƠNG PHÁP KHÁC NHAU” Tuy nhiên hạn chế kiến thức nên khơng thể tránh khỏi sai sót dù nhỏ Vì chúng em mong nhận đóng góp q báu Cơ bạn Chúng em chân thành cảm ơn GVHD: Th.s Phạm Hoàng Yến Nhóm Page of 68 Chương 6: Ứng dụng phức chất để tách, phân chia, cô đặc, làm dung mơi hữu cơ, sắc kí Phần 2: Nội dung A- Chiết I/ Giới thiệu - Sự phân bố chất hai chất lỏng không trộn lẫn dùng để nghiên cứu cân tạo phức Chất phân bố ligan hay hợp chất có chứa kim loại Địi hỏi cho hai pha (một hai pha thường nước hay dung dịch nước) không trộn lẫn với Địi hỏi có thực khơng hồn tồn Nếu độ tan tương hỗ hai chất lỏng đáng kể cần phải tính đến thay đổi môi trường ảnh hưởng thay đổi lên số tạo phức Trong nghiên cứu cân tạo phức dung dịch nước, người ta dùng dung môi hữu để làm chất lỏng thứ hai Có thể kiểm tra chiết hợp chất nhiều phương pháp Phương pháp chung hay dùng đồng vị Phương pháp cho phép làm việc với nồng độ nhỏ kim loại, điều cho phép nghiên cứu phức kim loại đặc trưng cho tạo phức đa nhân - Kỹ thuật thực nghiệm chiết đơn giản Điều quan trọng cho hai chất lỏng phải bão hoà lẫn trước chiết Để đánh giá số cân phân bố chất cần phải xác định phụ thuộc vào thay đổi nồng độ cấu tử phản ứng chiết II/ Các trường hợp chiết 1, Chiết hợp chất nội phức: - Các hợp chất nội phức đượ gọi hợp chất vòng cua hay chelat Các thuốc thử hữu tạo vịng có cơng thức chung HR Cân chiết biểu diễn phương trình sau: nHR + Mn+  MRn + nH+ (dung môi) (nước) (dung môi) (nước) Cân chiết phụ thuộc vào pH dung dịch - Trong phức chất tạo thành có loại liên kết phối trí sau: = S ; = O;  N GVHD: Th.s Phạm Hồng Yến Nhóm Page of 68 Chương 6: Ứng dụng phức chất để tách, phân chia, cô đặc, làm dung mơi hữu cơ, sắc kí Kết cấu công thức Tổng Tên Dithizone  - (phenylamino) - 1phenylimino Tên khác Thiourea(IUPAC)  1,5 diphenylthiocarbazone Tổng công thức C 13 H 12 N S Số CAS 60-10-6 PubChem 657 262 Mô ngắn tả màu xanh-đen bột tinh thể Thuộc tính Khối lượng mol 256,33 g · mol -1 Trạng thái vật cố định lý Điểm nóng chảy Độ tan 165-168 ° C (phân hủy) [1] - khơng tan nước, hịa ethanol [1]; carbon tetrachloride chloroformtốt, với sơn xanh hòa tan Một thuốc thử hữu thường sử dụng để chiết :  Dithizone GVHD: Th.s Phạm Hồng Yến Nhóm Page of 68 Chương 6: Ứng dụng phức chất để tách, phân chia, cô đặc, làm dung mơi hữu cơ, sắc kí - Dithizone hình thành phản ứng phenylhydrazine với carbon disulfide Việc hình thành trung gian Diphenylthiocarbazid nước cách đun nóng methanolic KOH giải pháp cho dithizone - Dithizone hình thức phức hợp với ion kim loại nặng hình thức phức hợp ổn định mà không tan nước tan carbon tetrachloride Các giải pháp dithizonates có màu đặc trưng: - Chúng dựa stoichiometry nhuộm cố định đo màu trắc quang cách để xác định chất lượng - Căn vào solubilities khác ion kim loại kim loại phức dithizone chuẩn độ khai khoáng sử dụng Với điều này, dung dịch nước chất phân tích với giải pháp tiêu chuẩn dithizone chloroform chuẩn độ - Cân chiết là: Mn+ + nHDz  MDzn + nH+ (nước) (dung mơi) (dung mơi) (nước) Ngồi phải kể đến cân H+ + D-z  HDz pKa = 8,7 (nước) (dung mơi) - Sự hình thành dithizonates phục vụ phương pháp phân tích nhạy cảm để xác định dấu vết Ion kim loại X Màu Kết cấu công thức Fe , Mn , Cu , Co , N tím i Bi , Sn , Cd , Zn , Pb màu đỏ màu vàng ion kim loại nặng khác Các giới hạn phát chì at 4:10 -8 g nồng độ ngưỡng lệ 1:1 250 000 Kẽm cho sử dụng chương trình làm giàu khai khống pha loãng 1:50 000 000, tức là, mg 50 ml nước Một số chứng để chứng minh đạt 10-100 ppm  8-hiđroxiquinolin Nhiều phức kim loại 8-hiđroxiquinolin chiết thuận lợi vào dung mơi hữu Có thể diễn tả q trình chiết phương trình: 2HQ(hc) + M(n)2+  MQ2(hc) + 2H+(n) Rõ ràng cân chiết phụ thuộc vào pH, tách ion kim loại thông qua điều chỉnh pH pha nước Những thử nghiệm thực tế chứng tỏ rằng, phương pháp tiện dụng để tách lượng vết kim loại  Tartrates: Tartrat muối este axit tartaric Trong đặc biệt tartrates kali ( cao ) muối Rochelle liên quan Các tartrat natri kali, đồng sunfat , thuốc thử thử nghiệm Fehling cho việc giảm đường Natri tartrat rubidi đóng vai trị trung tâm việc làm sáng tỏ cấu hình tuyệt đối enantiopure phân tử Ag , Hg GVHD: Th.s Phạm Hoàng Yến Nhóm Page of 68 Chương 6: Ứng dụng phức chất để tách, phân chia, cô đặc, làm dung mơi hữu cơ, sắc kí Thuốc với nhóm chức sử dụng tartrates, ví dụ, muối axit tartaric zolpide Tartrate tơ màu phản ứng hình thành phức tạp với đồng (II) muối dung dịch kiềm để chứng minh: 2C4H4O62- + Cu2+ + 2OH-  [Cu(C4H3O6)2]4- + 2H2O Ion tartrate, đồng (II) ion ion hydroxit phản ứng với Ditartratocuprat ion phức tạp (II), xuất xanh, nước  Cupferron:Cupferron, muối amoni N-nitroso-Nphenylhydroxylamine, thuốc thử chung cho complexation ion kim loại Cơng thức NH4[C6H5N (O)NO] Anion Các liên kết với cation kim loại thơng qua ngun tử oxy, hình thành vịng chelate năm - - Cupferron chuẩn bị từ phenylhydroxylamine NO + nguồn: C6H5NHOH + C4H9ONO + NH3 → NH4[C6H5N(O)NO] + C4H9OH 2, Chiết ion liên hợp: - Có thể làm chuyển dịch cân hệ dung dịch nước cách tạo phức chất bền dung mơi hữu có thích hợp Cân dễ chuyển dịch phức hữu có phức chất có vai trị quan trọng so với phần vô so với phần vô phức chất - Để chiết anion người ta thường sử dụng cation hữu sau đây: - Các muối tetraphenylasoni (C6H5)4As+ phân ly hoàn toàn dung dịch nước Ion tạo với anion: MnO4-, IO4-, ClO4-, RuO4-, ReO4-, TeO4-, BF4- hợp chất tan dung môi hữu Ion tetraphenylasoni tạo thành hợp chất tương tự với anion phức HgCl 42-, SnCl62-, CdCl42-, ZnCl42-,Co(SCN)42- anion số chất màu anion bromothimol xanh - Các cation: R4Sb+, R4P+, R4S+, R4Se+ có tính chất tương tự ion tetraphenylasoni Ion amoni bốn lần R4N+ hóa hợp với nhiều anion tạo thành hợp chất dễ bị chiết số nguyên tử cacbon R 4N+ nhiều (Ví dụ: hợp chất xetyl trimetyl GVHD: Th.s Phạm Hồng Yến Nhóm Page of 68 Chương 6: Ứng dụng phức chất để tách, phân chia, cô đặc, làm dung môi hữu cơ, sắc kí amoni hay n – tetrapropylamoni dễ bị chiết) Hiệu suất chiết tăng lên anion catrion vô kết hợp với gốc hữu có phức tạp tạo nên - Nhiều bazơ hữu amin chất màu bazơ tồn dạng cation HB + hóa hợp với anion vô tạo thành hợp chất tan dung môi hữu - Các amin có mạch nguyên tử dài phân tử, loại R 3N pH thích hợp dùng để chiết nhiều anion vô 2R3N + H+ + HSO4- ƒ (R3NH)2SO4 (Dung môi) (nước) (dung môi) 2+ 2+ ƒ 4R3N + 3SO4 + 4H + UO2 UO2(R3NH)4(SO4)3 (dung môi) (nước) (dung môi) - Các amin như: tri-n-octylamin, metyldodexylamin, dùng để chiết uran từ dung dịch sunfat - Nhiều chất màu bazơ có khả kết hợp với ion H + dùng để chiết anion Trong trường hợp này, dung dịch chiết có màu dùng để định lượng phương pháp trắc quang Ví dụ: xanh metylen (R) cho phản ứng: R + H+ + BF4- ƒ (RH)BF4 (dung môi) (nước) (dung môi) - Các anion hữu cơ, đặc biệt anion axit có mạch cacbon dài phân tử tạo với cation vơ muối tan dung mơi hữu cơ, ví dụ anion axit peflooctanic, ion ankylsunfat, ankylsunfonat - Nói tóm lại, để chiết anion, người ta cố gắng chọn cation có màu ngược lại, để chiết cation, người ta chọn anion có màu, chọn hợp chất tạo thành có màu sau chiết định lượng chúng dung mơi hữu phương pháp trắc quang 3, Chiết hợp chất vô cơ: - Một số chất vô như: brom, iot, nhiều phức chất không bền dung dịch nước (như phức chất với clorua, bromua, iodua, thioxyanat, axit dị da, photphatvanadat, photphatmolybdat…) tan dung môi hữu Độ tan chất dung mơi hữu đơi lớn, chiết lượng lớn khỏi dung dịch nước Người ta phân biệt hai loại hợp chất vô cơ: + Một số chất vô như: HgCl 2, Br2, SO2,… tan dung môi hữu tồn dạng phân tử, không phản ứng với dung mơi + Các chất khác chuyển vào dung mơi hữu hóa hợp với dung mơi tạo thành hợp chất phối trí Ví dụ: sắt (III) clorua, uranylnitrat… tan ete, este, xeton rượu tạo thành hợp chất phối trí với dung mơi - Đã từ lâu người ta chiết lượng lớn Fe(III) từ dung dịch axit clohidric đặc etedietylic, làm tách Fe(III) khỏi Al (III), Fe(II), Ni(II), coban, mangan,… Trong dung dịch H2O tồn ion Fe(H2O)63+ Còn dung dịch HCl 6N, Fe(III) tồn dạng ion sau: Fe(H2O)63+ + Cl- ƒ FeCl(H2O)52+ + H2O FeCl(H2O)52+ + Cl- ƒ FeCl2(H2O)4+ + H2O FeCl2(H2O)4+ + Cl- ƒ FeCl3(H2O)3 + H2O FeCl3(H2O)3 + Cl- ƒ FeCl4(H2O)2- + H2O + Khi nồng độ HCl đủ lớn (hơn 4N) cân dịch chuyển phía tạo thành ion FeCl 4(H2O)2(để đơn giản thường viết FeCl 4-) Trong dung dịch nước ion FeCl4-) Trong dung dịch nước ion FeCl4- cộng hợp thêm proton H+ tạo nên liên hợp ion H+FeCl4- khó mơi trường GVHD: Th.s Phạm Hồng Yến Nhóm Page of 68 Chương 6: Ứng dụng phức chất để tách, phân chia, cô đặc, làm dung môi hữu cơ, sắc kí khơng phân cực ete dietylic Trong môi trường thứ hai (môi trường hữu cơ), liên hợp ion FeCl4(R2O)2H bền vững không tan (R gốc C2H5 hay H+) + Liên hợp ion dạng FeCl4(R2O)2H tồn thay đổi từ [FeCl4(R2O)2]2 đến [FeCl4(R2O)2H]4 phụ thuộc vào nồng độ Fe(III) - Người ta thay ete dietylic ete izopropylic Bằng ete izopropylic chiết nguyên tố sau từ dung dịch axit clohidric 6N: sắt (III), gali, vàng (III), gecmani, asen (III) (V), antimony (III) (V), thiếc (II) (IV), molipden (V) Telu(IV) - Tính chất bromua gần giống clorua, đa số trường hợp bromua dễ bị chiết clorua 4, Chiết phức clorua kim loại: - Các số liệu bảng rõ rằng, số đáng kể phức clorua kim loại bị chiết vào đietylete từ dung dịch axit clohiđric 6M Một thông tin khác không phần quan trọng số lớn ion kim loại khác không bị chiết bị chiết phần nhỏ điều kiện nêu Như thực nhiều quy trình chiết có ích Một quy trình quan trọng tách sắt (III) (được 99%) khỏi số lớn kim loại khác Ví dụ: phần lớn sắt mẫu thép quặng sắt tách cách chiết trước phân tích vết ngun tố như: crom, nhơm, titan niken Hợp chất bị chiết dạng liên hợp ion H3O+FeCl-4 Phần trăm sắt chuyển vào tướng hữu phụ thuộc vào hàm lượng axit clohiđric tướng nước (một phần nhỏ chuyển lại tướng nước nồng độ HCl thấp 3M cao 9M) mức độ phụ thuộc vào hàm lượng sắt Bảng 1: Chiết phức clorua kim loại đietylete từ dung dịch HCl 6M Phần trăm bị chiết 90-100 50-90 Các nguyên tố trạng thái oxi hóa Fe (III) 99%; Sb(V) 99%* ; Ga(III)97% ; Ti(III) 95%* ; Au(III) 95% Mo(IV) 80-90% ; As(III) 80% ** ; Ge(IV) 40-60% Te(IV) 34% ; Sn(II) 15-30% ; Sn (IV) 17% ; Ir (IV) 5% ; Sb(III) 1-50 2,5%* As (V)* ; Cu(II) ; In(III) ; Hg(II) , Pt(IV) ; Se(IV) ; V(V) ; V(IV) ; 0 Zn(II) Al(III) ; Bi(III) ; Cd(II) ; Cr (III) ; Co(II) ; Be(II) ; Fe(II) ; Pb(II) ; Mn(II);Ni(II) ; Os(VIII) ; Pb(II) ; Rh(III) ; Ag(I) ; Th(IV) ; Ti(IV) ; W(VI) ; Zr(IV) * Isoprooyl ete sử dụng nhiều đietylete ** 8M HCl dung nhiều 6M GVHD: Th.s Phạm Hồng Yến Nhóm Page of 68 Chương 6: Ứng dụng phức chất để tách, phân chia, cô đặc, làm dung môi hữu cơ, sắc kí Metylizobutyl xeton chiết sắt từ dung dịch clorua sắt Trong trường hợp này, hệ số phân bố tốt chút so với đietylete cịn có thuận lợi khác khơng bị bắt lửa 5, Chiết muối nitrat: Các muối nitrat bị chiết lựa chọn đietylete dung mơi hữu khác Ví dụ: chiết uran (VI) thuận lợi khỏi nguyên tố khác chì thori ete từ dung dịch nước bão hịa amoni nitrat có nồng độ axit nitric khoảng 1,5M Bismut (III) sắt (III) nitrat bị chiết đến mức độ định điều kiện 6, Các dung mơi dùng để chiết: - Các ete: Trước người ta dùng ete etylic, nhược điểm dễ bay tan nhiều nước Hiện số ete tan nước, người ta thường dùng ete izopropylic - Các xeton: Tác dụng chiết xeton nói chung giống ete Người ta thường dùng metylizobutyl axeton - Các este: Tính chất este giống ete xeton Người ta thường dùng etylaxetat có nhược điểm dễ bay dễ bị thủy phân Có thể sử dụng amylaxetat tốt - Các rượu: Các rượu bậc cao dùng để chiết chất không tan dung môi khác, việc chiết phức tạp rượu dễ tan nước nước dễ tan chúng - Các dung môi trơ: Nếu dùng dung môi trơ cacbontetraclorua, cloroform, benzen,… để chiết tốt dung mơi khác dung mơi trơ dễ tách khỏi dung dịch nước Trong số đó, cloroform tốt cacbontetraclorua, lại bền Để ổn định nó, người ta thường thêm vào 1% rượu, điều gây khó khăn cho phân tích - Dung môi trộn lẫn với nước: Đôi người ta thêm vào dung dịch nước dung môi hữu trộn lẫn với nước để làm giảm số điện môi dung dịch, tạo điều kiện thuận lợi cho tạo phức để nâng cao hiệu suất chiết 7, Ý nghĩa phương pháp chiết: Khả ứng dụng phương pháp chiết lớn: - Chỉ có số nhỏ chất vô tan đựơc dung môi hữu cơ, mặt khác thuốc thử hữu lại tạo với ion vô nhiều hợp chất tan dung môi hữu riêng biệt hay hỗn hợp dung môi - Thêm dung mơi thứ hai vào nước chuyển số chất từ dung dịch nước vào dung dịch hữu làm dịch chuyển cân có liên quan đến chất dung dịch nước Do tạo phương pháp tác động lên cân thường có dung dịch nước cân axit – baz, cân oxi hóa – khử, cân tạo phức, cân kết tủa,… - Bằng cách chiết thực việc tách hai cấu tử khỏi ảnh hưởng Khi làm dịch chuyển cân tướng nước ta làm thay đổi phân bố chất hai dung môi, thực việc tách chọn lọc - Chiết phương pháp có ý nghĩa to lớn, phương pháp chiết có ưu điểm so với phương pháp tách khác chỗ tốc độ chiết lớn, vài phút cân đạt được, tướng tách khỏi tướng nhanh, tránh tượng hấp phụ, cộng kết GVHD: Th.s Phạm Hồng Yến Nhóm Page 10 of 68 Chương 6: Ứng dụng phức chất để tách, phân chia, cô đặc, làm dung môi hữu cơ, sắc kí Pha lỗng 50mL dung dịch đệm photphat với 850mL nước loại khí cho dung dịch Dung dịch A Dung dịch B Thêm 50mL dung dịch cetylpyridinium chloride vào dung dịch loại khí trên, cuối định mức thành 1L Dung dịch phải loại khí trước thêm cetylpyridinium chloride để tránh sủi bọt Pha loãng 50mL dung dịch cetylpyridinium chloride thành 1L hỗn hợp dung dịch acetonitril methanol tỉ lệ 1L+1L Hình 2: Pipet Pasteur  Phân tích loại đồ uống - Chuẩn bị mẫu: mẫu chuẩn bị sau: Q trình phân tích định lượng cách sử dụng mẫu trực tiếp sử dụng đồ thị hiệu chỉnh : chuyển 5ml mẫu vào ống 25ml pha loãng tới vạch nước khử ion Phân tích định lượng cách thêm chuẩn: thêm vào 5ml mẫu đồ uống lượng khác thuốc nhuộm (2,4,6,8 mg/l) tiến hành - Phân tích mẫu nước uống : lọc mẫu nước uống Millipore filter trước tiêm vào hệ thống sắc ký toàn thí nghiệm tiến hành lặp lại - Các thơng số q trình phân tích HPLC Cột Pha động Nova-Pak C18 Dung môi rửa giải A Dung môi rửa giải B Methanol Dung dịch đệm NaH2PO4/ Na2HPO4 Mô tả chế độ gradient t0 ( bắt đầu ) 0,1M pH=7 20% dung môi rửa giải A, 80% dung môi t1 ( phút ) t2 ( phút ) t0 ( phút ) rửa giải B 100% dung môi rửa giải A 100% dung môi rửa giải A 20% dung môi rửa giải A, 80% dung mơi rửa giải B Tốc độ dịng Thể tích tiêm Detector GVHD: Th.s Phạm Hồng Yến 2ml / phút 20µL 520nm Nhóm Page 54 of 68 Chương 6: Ứng dụng phức chất để tách, phân chia, cô đặc, làm dung mơi hữu cơ, sắc kí Bảng 1.1 Thống kê phương pháp phân tích Yellow Sunset loại mẫu thực phẩm khác Phương Loại mẫu Chuẩn bị mẫu/quá trình chiết pháp IP-RP Nước Cho chất phân tích bắt cặp HPLC chanh ion Cột phân tích Detector cetylpiridinium với dung dịch đệm photphat có sóng 430nm chứa cetylpiridinium clorua, chiết vào n-butanol Bia đắng Diot array bước clorua nước, sau RP- Gradient nồng độ (1,5ml/phút) aceton nitrile methanol với Pha loãng với nước lọc Cpherisorb C8 Pha động Gradient nồng độ (2ml/phút) sử Nova-pak HPLC Cột C18 hãng 520nm dụng methanol đệm natri photphate 0,1M Cặp ion- Nước trái Trung hòa mẫu với dung pha đảo cây, nước dịch NH3 50% ly tâm HPLC tương đậu triamoni citrate (10:1:39) nành metanol (1:1) HPLC Nước Gradient nồng độ (1ml/phút) 254nm MeOH-CH3CN(0,02M)- Altrex uống Zorbax ODS ultra- sphere TMODS loại Gradient nồng độ với amoni acetat 0,2N 18 đến 100% methanol đồ ăn HPLC Các loại nước uống Trung hòa mẫu dung Cột C18 hãng Gradient nồng độ(2ml/phút) dịch NH3 lọc Micro Bondapak 230nm với dung dịch amoni acetat 20mM methanol Sắc ký Nước Pha loãng với nước lọc ion hiệu uống cao loại bột Gradient nồng độ (1,5ml/phút) AS11 pha Dionex ion pac 480nm với HCl: nước :actonile, tiêm 50microlit uống liền Bảng 1.1( tiếp theo) Phương pháp Cặp Mẫu ion- HPLC Quá trình chuẩn bị mẫu Q trình chiết Detector Nước Pha lỗng với nước lọc Nova-pak C18 520 uống gelatin, siro Với chế độ gradient nồng độ(1,5ml/phút)với methanol-đệm photphat chứa 5mM tetra- Phương pháp Các đo phổ khả loại Pha loãng mẫu với nước Thuốc GVHD: Th.s Phạm Hoàng Yến butylamoni bromua Chương trình máy tính nhận biết hỗn hợp MULTv3.0 hợp chất cách so sánh phổ với phổ quimio Nhóm Page 55 of 68 Chương 6: Ứng dụng phức chất để tách, phân chia, cô đặc, làm dung mơi hữu cơ, sắc kí kiến nhuộm tách sóng siêu âm chuẩn program Pha lỗng mẫu lọc tới thể Hỗn khơng tích 100ml, thêm vào 5ml đệm sephadexDEAE A-25gel, tiến hành chiết pha cồn,rượu mùi axetat 1M pH=5 10ml rắn đưa vào cột có cỡ hạt 1mm tiến hương ethanol hành quét phổ Hình thành cặp ion với Chiết cặp ion vào n-butanol thương mại Chiết pha rắn- đo phổ Nước uống trái hợp khuấy với 50mg 487nm kem Phép đo phổ Nước uống không cồn Chiết pha rắn-đo phổ octadecyl-trietylamonibromua trái 485nm pH=5,6 Nước uống Hòa tan mẫu vào nước lọc Thuốc nhuộm màu trộn với không cồn sephadexDEAE A-25gel pH=2 , kẹo, thạch Từ 400 đến 800 nhồi vào hạt 1mm tiến hành đo phổ trái Bảng 1.1( tiếp theo) Phương pháp Loại mẫu Quá trình chuẩn bị mẫu Điều kiện phân tích Detector Đo phổ đạo Các sản phẩm Hòa tan 5-20g mẫu Phổ đạo hàm bậc hàm bậc bánh kẹo 100ml nước bước sóng 350700nm Đo phổ song Kẹo nước song uống bão hòa Hòa tan mẫu vào 25ml nước Hợp chất màu trích ly 300-700nm thêm vào 5ml đệm acetate cột SPE sử dụng hạt hấp phụ khoảng polyamide 1mm sau đo phổ nhảy sóng 5nm Đạo cacbon cách với bước hàm bậc bậc hai phân tích phép hiệu chỉnh nhiều chiều Phép đo Phổ Các sản phẩm Phương pháp áp dụng cho Khơng cần q trình tách, đạo hàm với thực mẫu chứa loại thuốc sử dụng để nhận biết hợp hệ số khơng thương mại nhuộm để phân tích loại chất nhân tạo với tỷ lệ 1:1:1 riêng biệt với điều kiện 1:5:5 cao phẩm giao tối ưu Phân tích vùng Đồ uống khơng Mẫu dùng trực tiếp hay Dung dịch mẫu chứa 15nm điện chuyển cồn pha lỗng với nước đệm borat pH = 10,5, tiêm mao dẫn siro hương trái GVHD: Th.s Phạm Hoàng Yến 216 nm thủy động lực học tách điện Nhóm Page 56 of 68 Chương 6: Ứng dụng phức chất để tách, phân chia, cô đặc, làm dung mơi hữu cơ, sắc kí ( CZE) 20kV CZE Nước uống Sử dụng trực tiếp mẫu cô đặc xong mẫu sau lọc hương dâu tây Cột SiO2 trần tiến hành tách điện nước cam 28kv với 254 10mM KH2PO4/Na2B4O7 /3% etanol , pH=11 HPCE Kem Mẫu tiêm trực tiếp Đệm borat-NaOH ph = 9,5 có nước uống soda Mảng diot chứa 5mmol beta-cyclodextrin trái Sắc ký mao sản phẩm có 5g mẫu chiết với nước – Cột mao quản silica phủ dẫn nhiệt động tính kích thích methanol tiến mixen bánh kẹo tetrabutylamoniumphosphat, (4;1), 1ml hành 30kv với dung dịch đệm 0,05M natri chiết cột C18 rửa giải deoxychelate methanol NaH2PO4/5mmol natri 5nmol borat ph=8,6/acetonitrile (17:3) Điện hóa đạo Nước hàm tỷ lệ uống Hịa tan mẫu vào nước, đun khơng cồn Q trình tiến hành trực nóng để hịa tan hoàn toàn tiếp sử dụng giọt thủy ngân treo lọc Điện hóa hấp Nước uống tinh phụ khiết sóng Hịa tan mẫu vào nước Tiến hành đo trực tiếp sunset yellow dung dịch đệm vuông amoni cho sóng điện hóa hấp phụ -0,6v điện cực giọt thủy ngân treo Bảng 1.2 Tóm lược thơng số thống kê cho sunset yellow thực phẩm Phương pháp Mẫu Phạm vi hiệu lực IP-RP-HPLC Nước chanh Phép thử liên phịng thí nghiệm RP-HPLC Bia đắng Phương pháp thiết lập với chuẩn( n=9) đối chiếu SP Phép đo quang Đồ uống không cồn, kẹo, Phương thật với mẫu pháp thiết lập áp dụng cho mẫu thật ( n=5 ) mứt trái IP-HPLC Sản phẩm thương mại Phương pháp thiết lập với chuẩn( n=9) đối chiếu với sản phẩm thương mại khác HPLC Các loại đồ uống Phương pháp thiết lập đối chiếu với mẫu thật ( n=3) Von-ampe hấp phụ sóng vng Đồ uống tươi mát Sự thực phương pháp thiết lập áp dụng tới mẫu thật ( n=5 ) CZE cf HPLC Đồ uống không cồn xiro Phương pháp thiết lập áp dụng cho mẫu thật có hương vị GVHD: Th.s Phạm Hồng Yến Nhóm Page 57 of 68 Chương 6: Ứng dụng phức chất để tách, phân chia, cô đặc, làm dung môi hữu cơ, sắc kí Các phương pháp quang phổ Chiết pha rắn kết hợp đo phổ Phép đo phổ đạo hàm với hệ số FIA Các phươngnhau quang phổ không giao pháp Các phương pháp quang phổ CZE Đo phổ đạo hàm bậc Đồ uống không cồn Đồ uống Sản phẩm thương mại Đồ uống nhẹ, rượu, kem Thuốc nhuộm thương mại Các loại đồ uống Sản phẩm bánh kẹo Phương pháp thiết lập áp dụng tới mẫu thật Phương pháp thiết lập áp dụng tới mẫu thật Phương pháp thiết lập áp dụng tới mẫu thật Phương pháp thiết lập áp dụng tới mẫu thật Phương pháp thiết lập tiêu chuẩn Phương pháp thiết lập áp dụng tới mẫu đồ uống nhẹ Phương pháp áp dụng với mẫu thật ( n=5 ) Vonampe dẫn suất tỉ lệ Đồ uống nhẹ Phương pháp áp dụng với sản phẩm thương mại Đo phổ song song Kẹo đồ uống bão hòa Phương pháp áp dụng với mẫu thật ( n=3 ) HPCE cacbonat Kem nước xô-đa Phương pháp áp dụng với mẫu thật ( n=3 ) MECC IP-RP-HPLC HPLC HPLC Thuốc bổ bánh kẹo Nước ép trái tương Đồ uống thức ăn Đồ uống Phương pháp áp dụng với sản phẩm thương mại Phương pháp áp dụng với tương Phương pháp áp dụng với sản phẩm thương mại Phương pháp áp dụng với đồ uống Bảng 1.3 : Các đặc điểm trình phân tích yellow sunset nước cốt chanh Mẫu Phân tích Số phịng thí nghiệm Đơn vị Giá trị trung bình Sr SRDf r SR SRDR R HoR Nước chanh Sunset yellow 10 mg/kg 23,9 34,4 1,67 5,7% 4,69 3,57 12,2% 10,0 1,3 Ý nghĩa ký hiệu: Nghĩa ký hiệu Trung bình đối tượng kiểm tra Trung bình thu từ kết lần thử nghiệm GVHD: Th.s Phạm Hồng Yến Nhóm Page 58 of 68 Chương 6: Ứng dụng phức chất để tách, phân chia, cô đặc, làm dung môi hữu cơ, sắc kí r Độ lặp lại (dao động phạm vi phịng thí nghiệm ) Giá trị mà khác tuyệt đối hai kết thử riêng biệt với phương pháp nguyên liệu thử đồng điều kiện Sr RSDr R mong sai lầm 95% xác suất Độ lệch chuẩn độ lặp lại Độ lệch chuẩn tương đối độ lặp lại ( Sr x 100/ trung bình ) Độ trùng ( dao động phịng thí nghiệm ) Giá trị mà khác tuyệt đối hai kết thử riêng biệt với phương pháp nguyên liệu thử đồng điều kiện mong sai SR SRDR HoR lầm 95% xác suất Độ lệch chuẩn độ trùng Độ lệch chuẩn tương đối độ trùng (SR x 100/ trung bình ) Giá trị HORRAT độ tụ giá trị SRDR quan sát phân biệt với giá trị SRDR tính từ phương trình Horwitz Bảng 1.4 Những đặc trưng cho sunset yellow mẫu bia đắng Mẫu Katly đắng Chất phân tích Sunset yellow Phương pháp định lượng Đo trực tiếp Thêm chuẩn Số lần xác định 2 Đơn vị mg/L mg/L Giá trị trung bình 7,8 ± 0,2 7,3 ± 0,3 Những thơng số thống kê cho phân tích Số lần xác định Tính tốn Chiều cao pic Diện tích pic Đơn vị mg/L SD 0,056 0,046 RSD ±3,72 ±2,85 Giới hạn phát 25,3 4,0 GVHD: Th.s Phạm Hoàng Yến Nhóm Page 59 of 68 Chương 6: Ứng dụng phức chất để tách, phân chia, cô đặc, làm dung mơi hữu cơ, sắc kí 2.2 E122: Azorubine (Carmoisine) 2.2.1 Giới thiệu Azorubine 2.2.1.1 Azorubine thơng số lý hóa[4] - Tên gọi khác : CI Acid Red 14, CI Food Red 3, Ext D&C Red No 10, Food Red - Tên IUPAC: Disodium 4-hydroxy-3- (4-sulfonato-1-naphthylazo) naphthalene-1-sulfonate - Công thức phân tử: C20H12N2Na2O7S2 ( M=502,42 g/mol ,d= 0.80g/cm3 ) - Công thức cấu tạo: 2.2.1.2 Ảnh hưởng azorubine tới sức khỏe [5][6] - Gây dị ứng, gây phản ứng sử dụng đồng thời với aspirin, gây tượng phát ban, rộp da, người suy nhược thể thường có phản ứng mạnh với hợp chất chúng tồn nhiều thực phẩm Khi kết hợp với benzoate gây triệu chứng thần kinh trẻ em Azorubine bị cấm sử dụng số quốc gia Hoa Kỳ, Thụy Điển, Na Uy, Áo… 2.2.1.3 Vai trị Azorubine thực phẩm - Các nhóm thực phẩm mà người ta thêm azorubine vào sản phẩm sô-cô-la, loại bánh kẹo, loại nước sốt, loại nước uống khơng có cồn với hàm lượng cho phép tối đa 500mg/kg sản phẩm ( hàm lượng cho phép tối đa giống với yellow sunset loại mẫu nước sốt, loại gia vị, dưa chua, tương ớt, kim chi…) Chúng để tạo màu, giúp chống lên men sau chế biến giúp cho sản phẩm tăng khả thu hút người tiêu dùng Hàm lượng hấp thu cho phép ngày 4mg/ kg thể trọng 2.2.2 Phương pháp phân tích Azorubine thực phẩm Azorubine loại thuốc nhuộm có nguồn gốc than đá sơ đồ tổng quát dùng để phân tích loại thuốc nhuộm thực phẩm giống hệt sơ đồ phân tích yellow sunset trình bày phần Có nhiều phương pháp dùng phân tích azorubine thực phẩm cơng bố Vai trị phương pháp dùng để phân tích nhiều loại thuốc nhuộm khác tan nước diện thực phẩm, có azorubine vài phương pháp giống hệt phương pháp dùng để phân tích yellow sunset Ban đầu nhà nghiên cứu sử dụng sắc ký giấy để phân tích phẩm màu có thực phẩm, mà 20 năm sau, phương pháp phân tích phổ GVHD: Th.s Phạm Hồng Yến Nhóm Page 60 of 68 Chương 6: Ứng dụng phức chất để tách, phân chia, cô đặc, làm dung môi hữu cơ, sắc kí và gần phương pháp điện di mao quản phát triển có nhiều đóng góp, thống kê phương pháp loại mẫu mà chúng áp dụng vào trình bày bảng 2.1 Nếu thơng số phương pháp nhà nghiên cứu nhận thấy khả dụng chúng trình bày bảng 2.2 Các phương pháp công bố dùng để phân tích Azorubine mẫu lỏng ví dụ loại nước uống xa áp dụng phương pháp phân tích với mẫu nước uống cho dụng dịch chiết loại mẫu nển khác ví dụ sản phẩm sơ-cơ-la Một phương pháp thích hợp dùng để phân tích azorubine loại nước uống không cồn sản phẩm làm từ bột mì phân tích cộng kết Phương pháp sử dụng dịch chiết phân tích định lượng sau cho chất cần phân tích bắt cặp ion với cetylpiridinium clorua, sau chiết vào n-butanol từ dung dịch ban đầu Khi phân tích azorubine thường sử dụng pha đảo, cặp ion với chế độ rửa giải gradient nồng độ phương pháp HPLC với nhận biết detector mảng diot Thống kê bước tiến hành phương pháp thông số phương pháp trình bày bảng 2.3 Phương pháp áp dụng cho phân tích loại sữa không kem sử dụng bước xử lý mẫu trình chiết giống loại nước uống khơng cồn Nếu qui trình chiết azorubine nước uống không cồn áp dụng cho sản phẩm làm từ bột mì thơng số đặc trưng phương pháp cần phải cải tiến Phương pháp HPLC pha đảo dùng để phân tích loại thuốc nhuộm có Azorubine áp dụng cho số mẫu thực phẩm ( ba loại thức uống, thức ăn tráng miệng agar có loại hương, siro hương dâu tây ) nhận thấy thích hợp Q trình tách tiến hành cột C18 hãng Nova sử dụng methanol, NaH 2PO4/Na2HPO4, dung dịch đệm pH=7 0.1M làm pha động với chế độ gradient nồng độ detector uv-vis bước sóng 520nm Dưới điều kiện tối ưu ( chi tiết trình bày phần phụ lục ) thuốc nhuộm rửa giải phút Thống kê bước phương pháp trình bày phần phụ lục bảng thống kê thông số kỹ thuật trình bày bảng 2.4 Phương pháp cịn dùng để so sánh kết quà phân tích song song loại thuốc nhuộm có thực phẩm có phương pháp phát triển ví dụ phương pháp điện di mao quản 2.2.3 Những hạn chế phương pháp Đối với azorubine, phương pháp phân tích phổ sau thu lấy dịch chiết mẫn áp dụng cho hầu hết loại nước uống, nước chấm, loại thực phẩm giàu chất béo giàu tinh bột Chưa có cơng bố phân tích azorubine sản phẩm sơ-cơ-la , phương pháp cần cải tiến 2.2.4 Các bước tiến hành phân tích azorubine Phương pháp phân tích azorubine loại nước uống khơng cồn giống phân tích yellow sunset q trình xử lý mẫu trình chiết tách sửa đổi cho sản phẩm làm từ bột mì  Phân tích azorubine sản phẩm bột mì  Q trình xử lý mẫu Cân xác 5g mẫu cho vào cốc 250ml Khử lượng chất béo có mẫu cách thêm vào 50ml hỗn hợp dầu hỏa : cồn theo tỷ lệ 4060 Khuấy gạn bỏ phần phía Lặp lại q trình khuấy gạn lần Nhiệt độ q trình khơng lớn 40OC Loại bỏ lượng dầu hỏa-cồn dư có mẫu Khử khí dung dịch sau khử chất béo nhiệt độ dao động xung quanh nhiệt độ nhỏ nhiệt độ xảy bốc việc khuấy gián đoạn  Quá trình chiết GVHD: Th.s Phạm Hồng Yến Nhóm Page 61 of 68 Chương 6: Ứng dụng phức chất để tách, phân chia, cô đặc, làm dung mơi hữu cơ, sắc kí Chuyển dung dịch sau khử bỏ chất béo vào ống ly tâm, Thêm vào 10ml đệm phosphate nồng độ 0,05mol/ lít Thêm 100mg α-amylase ủ 40OC vòng bồn lắc nước bồn lắc tay thông thường Thêm 5ml cetylpiridinium clorua nước nồng độ 0,1mol/lít, trộn thêm vào 10ml n-butanol bão hòa nước Lắc mạnh 10 phút bắng máy lắc 10 phút Ly tâm tốc độ 1000 vịng 10 phút Nếu có lớp gel hình thành lớp hữu phía trên, thêm vào 2ml n-butanol bão hòa nước khuấy nhẹ lớp hữu phía đũa thủy tinh cho đên lớp nhũ tương bi phá hủy - Sử dụng pipette Pasteur chuyển lớp hữu phía vào bình định mức 25ml - Lặp lại trình chiết với lần 5ml n-butanol lần - Định mức dung dịch bình tới thể tích 25ml n-butanol bão hịa nước - Pha lỗng xác phần dịch lọc sau dịnh mức thể tích tương đương pha động Trộn lên lọc lấy phần nước lọc dùng để phân tích  Q trình định lượng HPLC Đưa 20 microlit dung dịch chiết lên cột sử dụng chế độ rửa giải gradient nồng độ để đạt phân tách tối ưu Điều kiện để phân tích azorubine giống phân tích yellow sunset detector thiết lập 520nm  Phân tích loại nước uống Q trình chuẩn bị mẫu, điều kiện phân tích azorubine gống phân tích yellow sunset khác detector bước sóng đo 520 nm Bảng 2.1 Thống kê phương pháp phân tích Azorubine có thực phẩm Phương Mẫu Chuẩn bị mẫu pháp IP-RP- Nước cốt chanh, Bắt HPLC mẫu cetylpiridinium bánh, sữa cặp ion Thông số cột với Detector Spherisorb C8 Chế độ rửa giải gradient ( 1,5ml/ Mảng điot ỏ phút)bằng đệm phosphate có bước chứa 520nm clorua không kem RP-HPLC Pha động H2O, sau chiết Bia đắng vào n-butanol Pha lỗng với nước Nova-Pak C18 lọc HPLC Các loại nước uống, gelatine cetylpiridinium clorua axetonitrile CH3OH Chế độ rửa giải gradient Pha loãng với nước Nova-Pak C18 lọc đệm phosphate pH=7 Chế đô rửa giải gradient 520 (1,5ml/phút) với methanol-đệm phosphate7 pH=7(1:4) chứa Lắc với dung dịch NH3 MicroPak 5mM NH4Br Chế độ rửa giải gradient sử dụng 5% Thêm axeton Sữa chua 520 (2ml/phút) sử dụng methanol si-rơ HPLC sóng MCH-10 TBA methanol pha chung lắc.ly tâm cho tách lớp để loại với axeton.điều methanol-đệm 254nm phosphate pH = ± 0, 05 chình pH thêm GVHD: Th.s Phạm Hồng Yến Nhóm Page 62 of 68 Chương 6: Ứng dụng phức chất để tách, phân chia, cô đặc, làm dung mơi hữu cơ, sắc kí polyamide lắc ly tâm.rửa polyamide dư nước tiếp tục lắc với hỗn hợp MeOHHPLC Các sản phẩm dd NH3 (19:1) Khuấy mẫu Spherisorb Nước- acetonitrile(7-3) có chứa ODS-2 kết hợp 5mM dung dịch, pha lỗng cột pH=6,4( tốc độ dịng 1ml/phút) với nước theo tỷ lệ LiChrospher 1:10, lọc giấy có bánh kẹo RP-18 methanol, đương kính chiết lấy bảo vệ octylamin/H3PO4 520nm 0, 45µ m trước tiến hành tiêm mẫu Bảng 2.1 (tiếp theo) Phương pháp Điện di mao Mẫu Nước uống không Xử lý mẫu Sử dụng trực tiếp mẫu hay pha Điều kiện phân tích Dung dịch chứa 15mM đệm quản(CZE) cồn si-rơ hương lỗng với nước borat pH=10,5.tiêm mẫu Các trái Nước Pha loãng mẫu với 5ml đệm trình tách xảy 20kV Phân tích phương pháp đo phương uống, pháp quang phổ gelatine si-rơ acetate pha lỗng tới 25ml Chất màu, đường nước Dung dịch mẫu trộn với 1M Lắc hỗn hợp 10 phút, Giọt kết caramel, bánh kẹo HCl, etanol nồng độ 10% , nước, gel hấp phụ chất phân tích vào gel sephadex DEAE A-25 427 nm phổ với thiết bị Beckman DU-70 Chiết pha rắn Detector 216nm hạt 1mm trình hợp phương pháp quang phổ 525 800nm trình phân tích theo chế hấp Phân tích nhanh Các loại thực phẩm Mẫu lỏng sử dụng trực tiếp mẫu phụ hạt gel Hợp chất màu tách cột pha TLC quang phổ khác rắn hòa tan vào nước lọc lấy đảo C18- Sep-Pak rửa giải với phương TLC Các phương Nước uống không dung dịch Tạo cặp dung dịch isopropanol Chiết cặp ion vào n-butanol quang phổ 550nm pháp quang phổ cồn octadecyltrimetylamonium ion với hay pháp bromide pH=5,6 GVHD: Th.s Phạm Hồng Yến Nhóm Page 63 of 68 Chương 6: Ứng dụng phức chất để tách, phân chia, cô đặc, làm dung mơi hữu cơ, sắc kí Bảng 2.2 Tóm lượt thơng số thống kê cho azorubine thức ăn Phương pháp Đo quang nhanh Chất Nhiều loại thức ăn Phạm vi hiệu lực Phương pháp AOAC Những thông số thống kê Tham khảo JAOAC 71, 458 TLC IP-RP-HPLC Nước chanh, vụn 988.13 Thí nghiệm đầy đủ Xem bảng 2.3 Phương pháp áp dụng Phạm vi tuyến tính nồng độ 2-10mg/L Độ thu hồi 93,6- với chuẩn (n=9) sau 106,3% CV 4,7% áp dụng với mẫu thật Phương pháp áp Mẫu bia đắng (n=9) xem bảng 2.4 Đồ thị tuyến tính với nồng độ 2-10mg/L SD 0,039mg/L RSD dụng với chất chuẩn 2,32% Giới hạn phát 7,6ng Độ thu hồi 99,54% bánh RP-HPLC IP HPLC ngọt, sữa không kem Các loại bia đắng Các sản phẩm thương mại (n=9) sau áp dụng cho sản phẩm Mẫu thật Bia đắng 34,3±0,1 Xi rô mg/L 146,2±0,3 thương mại n=5 Đồ uống không cồn Phương pháp áp mg/Kg Đồ thị tuyến tính với nồng độ 4-200mg/L loại CZE cf HPLC dụng đồng thời với chất Giới hạn phát 0,60mg/L độ thu hồi 92,3-111,3% cho chuẩn mẫu thật 4-60mg/L hỗn hợp thuốc nhuộm có mẫu xi rơ hương trái Mẫu Bia đắng 37,5±0,2mg/L (CZE) Xi rô dâu tây 35,0±0,2mg/L (HPLC) 141,9±0,4mg/L (CZE) thật (n=3) Phương pháp thiết 137,9±0,3mg/L(HPLC) (n=3) Phạm vi tuyến tính 0-40μg/mL độ thu hồi 98% RSD 1,1% lập áp dụng cho cho 8μg/mL mẫu thật (n=3) Đồ uống có vị dâu tây: 3,90μg/mL (n=3) RSD 0,1% Kết Phẩm màu, đường Phương pháp thiết phân tích phù hợp với giá trị nhà sản xuất cơng bố Nồng độ tuyến tính 12-650μg/L Giới hạn phat 3,38μg/L thắng, bánh kẹo lập áp dụng tới mẫu RSD 1,3% cho mẫu chứa 250μg/L Các loại đồ uống, thật Phương pháp thiết Đường thắng 107,99±0,3mg/L Đồ thị tuyến tính với nồng độ lên đến 32mg/L gelatin, xi rô lập áp dụng cho mẫu Những mẫu lặp lại 8mg/L (n=9) RSD 3,44% HPLC Bánh kẹo thật Phương pháp áp dụng Giới hạn phát 0,72mg/L Độ thu hồi 95,3% Giới hạn phát