PHẦN I MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Cây thuốc có vị trí vơ quan trọng đời sống người Không sử dụng trực tiếp mà cịn nguồn ngun liệu vơ vùng q giá cung cấp cho sản xuất bào chế thuốc nhằm phục vụ chăm sóc sức khỏe cho nhân dân Với lợi vị trí địa lý, đa dạng địa hình tạo cho Việt Nam điều kiện đa dạng vùng khí hậu đất đai, có nguồn tài nguyên sinh vật phong phú, có nhiều lồi động thực vật sử dụng để làm thuốc Hiện đời sống người nâng cao, nhu cầu chăm sóc sức khỏe người ngày tăng lên, mặt khác xuất diễn biến phức tạp bệnh yêu cầu ngày phải có nhiều loại dược liệu mới, với số lượng lớn cung cấp cho ngành cơng nghiệp sản xuất thuốc Vì vậy, năm gần nhà khoa học không ngừng nghiên cứu, đẩy mạnh phát triển thuốc vào sản xuất Trong số đó, số lồi thuốc thuộc chi Phyllanthus quan tâm Diệp hạ châu đắng (Phyllanthus amarus Schum Et Thonn.) với tác dụng ức chế DNA polymerase virus viêm gan B virus viêm gan khác, bảo vệ tế bào gan, gây hạ đường máu, hạ áp người [3] Chó đẻ cưa (Phyllanthus urinaria L.) với tác dụng điều trị nhiều loại tế bào ung thư mà khơng có tác dụng phụ độc tế bào bình thường, ức chế nhiễm virus Herpes simplex – [12] Hiện có nhiều loại thuốc biệt dược sản xuất từ loài Fenlinat, VG – 5, Livlilnic, Diệp hạ châu, trà túi lọc Diệp hạ châu…đặc biệt chúng sử dụng làm thuốc mà khơng cần kết hợp với dược liệu khác Các sản phẩm cấp phép Bộ Y tế, bán rộng rãi thị trường người tiêu dùng đón nhận Tuy lồi thuốc có giá trị chưa có nghiên cứu cơng bố quy trình trồng trọt thức cho lồi Việt Nam Do chúng tơi tiến hành nghiên cứu số biện pháp kỹ thuật trồng trọt nhằm góp phần xây dựng quy trình trồng trọt cho lồi diệp hạ châu Xuất phát từ lý đó, chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài: “Nghiên cứu ảnh hưởng mật độ thời vụ đến sinh trưởng, phát triển, suất hàm lượng hoạt chất Phyllanthin hai loài Diệp hạ châu thuộc chi Phyllanthus điều kiện vụ xuân Gia Lâm – Hà Nội” 1.2 Mục đích yêu cầu đề tài 1.2.1 Mục đích Xác định mật độ trồng, thời vụ thích hợp giúp Diệp hạ châu sinh trưởng, phát triển tốt, đạt suất chất lượng dược liệu tốt 1.2.2 Yêu cầu đề tài - Đánh giá ảnh hưởng mật độ trồng đến sinh trưởng phát triển, mức độ nhiễm sâu bệnh suất loài Diệp hạ châu - Đánh giá ảnh hưởng thời vụ đến sinh trưởng phát triển, mức độ nhiễm sâu bệnh suất loài Diệp hạ châu - Đánh giá ảnh hưởng thời vụ đến hàm lượng hoạt chất Phyllanthin loài diệp hạ châu PHẦN III TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Nguồn gốc, phân bố, đặc điểm thực vật học chi Phyllanthus hai loài nghiên cứu 2.1.1 Nguồn gốc, phân bố chi Phyllanthus L Chi Phyllanthus L Thuộc họ Thầu dầu (Euphorbicaceae), Thầu dầu (Euphorbiales), lớp Ngọc lan (Magnoliopsida), ngành Ngọc lan (Magnoliophyta) [1], [2], [7], [18], [4], [5], [33], [7], [34] Họ Thầu dầu, với khoảng 283 chi 7300 loài, phân bố rộng rãi khắp giới, tập trung o Brazil Ấn Độ, Mã Lai [33], [8] Ở Việt Nam, họ Thầu dầu có 79 chi 459 loài Riêng chi Phyllanthus, nước ta có tổng số 53 lồi biết đến, có 47 lồi dân gian gọi Diệp hạ châu như: Diệp hạ châu Phú Quốc, Diệp hạ châu Trừng, Diệp hạ châu Ấn có lồi dân gian sử dụng làm thuốc từ lâu đời, có lồi sử dụng làm thuốc chữa bệnh gan bệnh có liên quan tới gan là: P emblica, P amarus, P urinaria L var urinaria, P urinaria var nudiscapa Ross.& Haic [16] 2.1.2 Đặc điểm thực vật học chi Phyllanthus L Chi Phyllanthus chi có số lượng lồi đa dạng, đồng thời đặc điểm thực vật học loài đa dạng phong phú Đặc điểm chung của chi là: Về dạng thân, lá: thân gỗ, bụi nhỏ, bụi vừa hay thân thảo Lá mọc cách, đơn, ngun, có cuống hay khơng có cuống, có kèm Cụm hoa: cụm hoa mọc kẽ hay nách Hoa nhỏ, khơng cánh Hoa đơn tính, gốc, khác gốc Hoa đực: Đài – 6, kiểu tiền khai hợp Đĩa mật hình dạng khác nhau, khơng có Nhị – 5, nhị rời hay nhị dính liền, bao phấn hình trứng hay hình cầu, bao phấn hai song song hay tách ra, mở dọc, mở chéo hay mở ngang Trên hoa đực đơi cịn có vết tích nhụy Hoa cái: Đài – hay nhiều Đĩa mật hình thành khác khơng có Bộ nhụy: bầu có ơ, – Vịi nhụy rời hay liền, ngun chẻ đôi hai đầu, mỏng hay dày mở rộng đỉnh Mỗi có hai nỗn xếp chồng hay xếp bên Quả: Quả nang, chín chia mảnh vỏ, mảnh van, có khơng có vỏ ngồi, có nạc hay mọng hay hạch Hạt: Hình cạnh (góc), khơng có mồng, lớp vỏ nang cứng, phơi nhũ nạc, phôi thẳng hay cong, mầm dày Theo nghiên cứu tiến sĩ thực vật học Nguyễn Nghĩa Thìn [18], chi Phyllanthus chi lớn với 700 loài, phân bố khắp nơi đặc biệt tập trung vùng Đông Nam Á vùng nhiệt đới Nam Mỹ Ở Việt Nam có 46 lồi thuộc phân chi: - Kiranelia: Thân bụi, mọc cách, có kèm Cụm hoa dạng bó nách Lá đài có – Đĩa mật tồn Nhị tự dính, bao phấn ô, mở dọc Bầu ô, nạc Ở Việt Nam phân chi có lồi - Cicca: Cây thân gỗ thân bụi Lá đơn, mọc cách, có kèm Hoa thành bó nách cành khơng có Lá đài thường – Cánh tràng khơng tồn Nhị 4, tự hặc dính liền Bầu ô ô Quả nang nạc Ở Việt Nam phân chi tồn loài - Phyllanthodendron: Lá đài kéo dài đỉnh, gần có gờ mặt lưng, khơng có đĩa mật thực hay nói cách khác xác lưỡi d, hẹp mọc xen kẽ với thùy đài loài tuyến; vịi nhụy thường dày khơng chia thành rãnh Phân chi Việt Nam có lồi - Phyllanthus: Hoa đực có nhị, bao phấn khơng có trung đới ngắn đỉnh Lá đài khơng có gờ mặt lưng khơng kéo dài đỉnh Hoa có vịi nhụy tự dính mức độ khác nhau, vịi nhụy phân chia phân chia khơng dày, có khía mặt Ở Việt Nam phân chi có 16 lồi - Eriococcus: Hoa đực có đài, hai nhị bé khơng cuống Hoa có – đài Ở Việt Nam phân chi có 13 loài 2.1.3 Đặc điểm thực vật loài nghiên cứu 2.1.3.1 Phyllanthus amarus Schum & Thonn.(Chó đẻ thân xanh, diệp hạ châu đắng) Cây thảo, cao 10 – 40 cm, phân cành, màu lục Lá mọc so le, xếp hai dãy cành trông kép lơng chim, gốc trịn, đầu tù nhọn, hai mặt nhẵn, mặt màu lục sẫm, mặt mốc Hoa đơn tính mọc kẽ lá, khơng có cánh hoa, màu lục nhạt, hoa đực có cuống ngắn xếp hoa cái, hoa có cuống dài Quả nang, hình cầu, nhẵn, dẹt, chia thành mảnh vỏ, mảnh vỏ có van chứa hạt Hạt hình tam giác, đường kính 1mm, có cạnh dọc vân ngang Mùa hoa tháng – 6, mùa tháng – [9] Diệp hạ châu đắng có nguồn gốc xa xưa vùng nhiệt đới Nam Mỹ thấy phân bố khắp vùng nhiệt đới cổ Ở Châu Á, vùng phân bố diệp hạ châu đắng gồm nước Ấn Độ, Malaysia, Philippin, Indonesia, Thái lam, Campuchia, Lào, Việt Nam, Nam Trung Quốc vùng đảo Salawesi Ở Việt Nam, diệp hạ châu đắng thấy khắp nơi, từ tỉnh vùng đồng bằng, ven biển, đảo lớn, đến tỉnh trung du miền núi có độ cao 800m, nước Đơng Nam Á, độ cao phân bố lên đến 1000m Diệp hạ châu đắng ưa sáng chịu bóng cịn nhỏ mọc xen lẫn với loài cỏ khác Cây thường mọc đất ẩm vườn, ruộng trồng hoa màu, ven đường hay nương rẫy Cây mọc từ hạt thường xuất vào khoảng cuối xuân, sinh trưởng nhanh vòng tháng mùa hè, sau hoa tàn lụi Tồn vòng đời kéo dài – tháng, hạt diệp hạ châu tồn đất – tháng sức mầm [3] Toàn (trừ rễ) sử dụng để làm thuốc, dùng tươi sấy khơ [3]Theo Phạm Hồng Hộ, Phyllanthus amarus Schum.& Thonn cỏ niên, cao đến 60cm, thân tròn, láng, nhánh ngắn daì – 6cm, mang nhỏ Lá có phiến trịn dài, to 5-11 x 3-6, tù hai đầu, gân phụ mảnh, có cặp gân; bẹ hẹp, nhọn Hoa nách lá, đài 5, tuyến mật nhiều thùy Quả nang trịn to 3mm, hạt có sọc dọc lưng, n = 13 [16] Đặc điểm vi phẫu thân loài P amarus so với loài P urinaria L Không khác nhiều, ngoại trừ P urinaria L có mấu lồi vịng gỗ gồm mạch gỗ kích thước nhau, xếp thành hàng khác [9] 2.1.3.2 Phyllanthus urinaria L (Chó đẻ cưa, cam kiềm, rút đất, chó đẻ) Theo Đỗ Tất Lợi cộng [11], Phyllanthus urinaria L hay cịn có tên gọi diệp hạ châu, diệp hịe thái, Lão nha châu, Prak phle (campuchia) mô tả loại cỏ, mọc hàng năm, cao khoảng 30cm, mọc thẳng đứng, mang cành, thường có màu đỏ Lá mọc so le, lưỡng hệ, trơng lồi kép, phiến thuôn, dài – 15 mm, rộng 2-5mm, đầu nhọn hay tù, mép nguyên có cưa nhỏ, mặt màu xanh lơ, khơng có cuống hay có cuống ngắn Hoa mọc kẽ lá, nhỏ, màu nâu đỏ, đơn tính, hoa đực hoa gốc, hoa đực đầu cành, hoa gốc cành Hoa khơng có cuống có cuống ngắn Đường kính đạt tới 2mm, treo lủng lẳng có tên diệp hạ châu, hạt cạnh, hình trứng, màu nâu nhạt, có vân ngang Về phân bố, Chó đẻ cưa mọc hoang khắp nơi nước ta khắp nước vùng nhiệt đới Người ta dùng toàn để làm thuốc Mùa thu hái quanh năm tốt vào mùa hạ 2.2 Thành phần hóa học 2.2.1 Phyllanthus amarus Schum & Thonn Trong Phyllanthus amarus Schum.& Thonn chứa chất đắng Phyllanthin, khơng có quinin alcaloid khác Lá khơ chứa chất đắng hypophyllanthin (0,05%) phyllanthin (0,35%) gây độc cá ếch Ngoài ra, có chứa niranthin, nitetralin phyteralin [6] Người ta cịn phát có lignan, flavonoid alkaloid kiểu securinin: niuroidin, isobubbialin, epibubbialin, chất amariinic acid, loại ellgitannin, với elaeocarpusin, geraniiic acid B repandusinnic acid A I-O-galloyl-2,4-dehydrohexahydroxydyphenoyl – glucopyranose [31], [32], 35] Foo-Ly tách được, 1,6-digalloylglucopyranosid, amariin geranniin, corilagin, rutin, quercetin-3-O-glucopyranosid từ phân đoạn phân cực phyllanthus amarus [32] Mới đây, nghiên cứu thành phần khoáng cây, Vũ Văn Vụ xác định có mặt Gd, La, Ce có khả tạo phức có hoạt tính chống ung thư Các kim loại nặng độc có hàm lượng thấp, có Cu Zn vi lượng trội Hàm lượng K trung bình cao (1,8%), điều liên quan đến tác dụng mát gan lợi tiểu thuốc [24] 2.2.2 Phyllanthus urinaria L Trong lồi P urinaria L có mặt acid, triterpen, vài alkaloid dẫn xuất phenol Gần đây, từ người ta phân lập acid ellagic, acid gallic, acid phenolic flavonoid, chất thứ không tan nước, chất sau tan nước nóng, cịn chất gọi coderacin [6] Theo Trần Công Khánh, tác giả người Trung Quốc phân lập từ số hợp chất, có chất xác định methylester dehydrochebulic carboxylat methyl brevifolin Gần đây, cơng trình nghiên cứu khoa học thành phần hóa học loài Phyllanthus amarus Phyllanthus urinaria [9], Thạc sĩ Lê Việt Dũng cộng phân lập chất là: HQ, DUNG 1, DUNG Căn vào phổ thu dự kiến chúng polyphenol, DUNG có cấu trúc flavonon So sánh thành phần hóa học lồi, anh khẳng định: hai lồi có tannin, flovonoid, đường khử, acid hữu cơ, carotene, tannin flavonoid thành phần chính, lồi P amarus cịn có alkaloid, khác biệt giúp cho việc phân biệt hai lồi qua phản ứng định tính Cả hai lồi có hàm lượng tanin cao (P amarus: 7,78%; P urinaria: 9,11%), điều phần lý giải tính sát trùng, giải độc chống viêm chúng có liên quan đến tác dụng chữa viêm gan tác dụng ức chế enzyme polymerase DNA nội sinh virus viêm gan B [9] 2.3 Tác dụng dược lý sử dụng 2.3.1 Phyllanthus amarus Schum & Thonn 2.3.1.1 Tác dụng dược lý Cây Diệp hạ châu đắng có vị đắng, tính mát, có tác dụng tiêu độc, sát trùng, tán ứ, thông huyết, điều kinh, lợi tiểu, thông sữa [3] Cao Diệp hạ châu đắng có tác dụng bảo vệ gan chuột cống trắng gây nhiễm độc gan carbon tetraclorid Trong mơ hình gây xơ gan thực nghiệm chuột cống trắng, thuốc có tác dụng làm giảm hàm lượng colagen máu làm giảm mức độ xơ gan động vật điều trị so với đối chứng Thuốc có tác dụng lợi tiểu, chống oxy hóa tỏ có mức độ an tồn cao thử nghiệm độc tính Các liguan phyllanthin hypophyllanthin Diệp hạ châu đắng có tác dụng bảo vệ tế bào gan chuột cống trắng chống lại tác dụng độc hại tế bào gây carbon tetraclorid galactosamin Diệp hạ châu đắng ức chế DNA polymerase virus viêm gan B virus viêm gan khác Trong thời gian nghiên cứu lâm sàng sơ bộ, người mang virus viêm gan B điều trị với liều hàng ngày 200 mg cao toàn Diệp hạ châu đắng (bỏ rễ) 30 ngày Kết quả, 22/37 (59%) bệnh nhân điều trị kháng nguyên bề mặt viêm gan B 1/23 (4%) bệnh nhân đối chứng có tượng Một số đối tượng theo dõi tháng khơng có trường hợp kháng ngun bề mặt xuất trở lại Khơng thấy có có tác dụng độc Tồn Diệp hạ châu đắng có tác dụng gây hạ đường máu, hạ áp lợi tiểu người Cây có hoạt tính kháng khuẩn kháng nấm Ba hoạt chất từ Diệp hạ châu đắng có tác dụng ức chế aldos reductase acid elargic, brefolin carboxylat ethylbrevifolin; acid elargic có tác dụng mạnh nhất, ức chế mạnh lần so với quereitrin chất thiên nhiên ức chế aldos reductase biết Nghiên cứu Viện Dược liệu tác dụng dược lý bột phyllanthin cho thấy: Diệp hạ châu đắng có tác dụng bảo vệ gan mơ hình gây nhiễm độc CCL4 cho thỏ uống cao khô Diệp hạ châu đắng với liều 0,65 g/1kg/ngày kéo dài 18 ngày Nghiên cứu khẳng định cao khô Diệp hạ châu đắng có tác dụng chống viêm cấp tốt cho thuốc đường tiêm đường uống, nhiên đường tiêm có tác dụng mạnh đường uống Thuốc có tác dụng chống xơ gan antioxydant Khi sử dụng bột phyllanthin với liều lượng tương ứng 10g dược liệu/kg/ngày uống liên tục tuần có tác dụng bảo vệ gan tốt mơ hình gây xơ gan thực nghiệm 12 tuần Về tác dụng chống antioxydant, thuốc làm giảm peroxy hóa có ý nghĩa < 0,01 hoạt tính chống oxy hóa thuốc 29,76% Với liều tính theo dược liệu khơ 20 g/kg chuột cho thấy tác dụng lợi tiểu rõ rệt Đồng thời khẳng định cao Diệp hạ châu đắng có tính độc thấp, có độ an tồn cao việc sử dụng làm thuốc điều trị cho người [10] 2.3.1.2 Sử dụng Diệp hạ châu đắng từ lâu đời sử dụng thuốc dân gian nhiều dân tộc giới, nước vùng Đông Nam Á miền Nam Trung Quốc Ở Việt Nam, Diệp hạ châu đắng biết đến từ lâu với tác dụng trị viêm gan, vàng da, sốt, đau mắt, rắn cắn Diệp hạ châu đắng làm tăng mãnh liệt tiết nước tiểu kinh nguyệt khơng gây hại Ở nhiều nước Viễn đơng sử dụng tính chất Tác dụng lợi tiểu có tỷ lệ Kali cao [24], [6] Dân gian thường sử dụng làm thuốc thông tiểu, thông sữa điều kinh thông kinh trục ứ Ở Ấn Độ, người ta dùng toàn làm thuốc lợi tiểu [37] bệnh phù, bệnh lậu rối loạn đường niệu sinh dục Nước sắc chồi non dùng để trị lang; rễ tươi làm thuốc trị vàng da; dùng làm thuốc trị tiêu hóa, dịch dùng để đắp vết lở loét Người ta cịn dùng rễ phơi khơ nghiền thành bột, trộn với nước vo gạo dùng làm thuốc chữa vết sưng phù loét [6] Ở Tây Ấn, Diệp hạ châu đắng dùng để trị giun cho tre em Theo thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Thái Lan, Diệp hạ châu sử dụng làm thuốc trị vàng da Ở Peru, nhân dân uống nước sắc phần phía mặt đất để làm thuốc lợi tiểu, trị sỏi mật sỏi thận Ở số nước Nam Mỹ, Diệp hạ châu đắng dùng trị sốt rét, sỏi thận, sỏi bàng quang, rối loạn tiết niệu nói chung cịn có tác dụng gây sẩy thai Ở Haiti, nhân dân uống nước sắc Diệp hạ châu đắng tắm với nước ngâm để trị sốt Từ đảo Hải Nam đến Indonesia, nhân dân dùng nước sắc nước hãm Diệp hạ châu đắng làm thuốc lợi tiểu trị bệnh thận gan, bệnh hoa liễu, đau bụng làm thuốc long đờm cho trẻ em, hạ sốt, điều kinh trị tiêu chảy Nước sắc toàn thuốc bổ dày Lá giã nát làm thuốc trị dung giật bệnh da Ở Papua – Niu Ghine, nước hãm toàn để trị đau đầu, trị nhức nửa đầu 10 cách đáng kể, phát triển cân đối chiều cao tán đồng thời có cạnh tranh mạnh dinh dưỡng, đặc biệt vào thời kỳ sinh trưởng mạnh Điều làm cho phân cành kém, độ dài cành ngắn lại, số phía khơng thể nhận ánh sáng, nhanh chóng chuyển vàng hạn chế phát triển cá thể Khả tích lũy chất khơ L1 ln cao L2, tất giai đoạn, tất công thức, với mức LSD0,05 CV (%) tương ứng Điều cho thấy, ngun nhân đặc tính sinh trưởng loài khác biệt dẫn đến khác biệt khả tích luỹ chất khơ hai giống 4.1.6 Ảnh hưởng mật độ trồng đến số tiêu sinh trưởng, phát triển thời điểm thu hoạch Các tiêu sinh trưởng có liên quan chặt chẽ đến suất Diệp hạ châu Các tiêu biểu bên ngồi qua mức độ sinh trưởng, khả thích nghi Diệp hạ châu điều kiện cụ thể Theo dõi đánh giá ảnh hưởng mật độ đến động thái sinh trưởng phát triển diệp hạ châu cần xem xét toàn diện ảnh hưởng mật độ đến tiêu nông sinh học, tất thời kỳ Vì vậy, nghiên cứu ảnh hưởng mật độ đến sinh trưởng phát triển hai loài diệp hạ châu, theo dõi ảnh hưởng mật độ trồng đến số tiêu sinh trưởng hai loài diệp hạ châu thời điểm thu hoạch, kết thu trình bày bảng 39 Bảng 4.6 Ảnh hưởng mật độ trồng đến số tiêu sinh trưởng hai loài diệp hạ châu Loài Mật độ M1 M2 (Đ/C) M3 L1 M4 M5 M6 M1 M2 (Đ/C) M3 L2 M4 M5 M6 LSD0,05(L*M) CV(%) M1 TB M2(Đ/C) M3 Mật độ M4 M5 M6 LSD0,05(M) L1 TB Loài L2 LSD0,05(L) Đường kính thân (mm) 5,1 4,9 4,8 4,7 4,7 4,5 4,1 3,9 3,7 3,6 3,6 3,6 0,3 4,6 4,6 4,4 4,3 4,2 4,2 4,1 0,2 5,7 4,5 0,1 Số cành cấp (cành/cây) 34,6 36,1 37,8 35,5 33,1 30,2 21,2 21,7 21,8 19,6 17,4 14,6 1,2 6,6 27,9 28,9 29,8 27,6 25,3 22,4 0,8 34,6 19,4 0,5 Số cành cấp (cành/cây) 0 0 0 12,9 13,6 11,9 10,2 8,4 5,4 0,4 4,0 11,5 11,8 10,9 10,1 9,2 7,7 0,3 20,4 0,2 Qua số liệu bảng 4.6 cho thấy tiêu sinh trưởng diệp hạ châu có kết cụ thể sau: Đường kính thân trung bình lồi Diệp hạ châu giảm dần từ M1 đến M6, dao động khoảng 4,1 – 4,6 mm, đạt cao 4,6 mm (M1) thấp 4,1 mm (M6) cơng thức có mật độ trồng dày Điều mật độ trồng dày phát triển chiều cao mạnh, thường nhỏ bị vống nên 40 đường kính thân nhỏ Khi so sánh cơng thức với đối chứng có M3 cơng thức sai khác khơng có ý nghĩa thống kê Số cành cấp biến động từ 22,4 cành/cây (M6) đến 29,8 cành/cây (M3) Số cành cấp tăng dần từ M1 (27,9 cành/cây) đến M3 giảm dần từ M4 (27,6 cành/cây) đến M6 Điều mật độ trồng tăng lên sinh trưởng chiều cao mạnh với giảm tăng trưởng đường kính thân số cành cấp giảm Quy luật cho số cành cấp Các tiêu sinh trưởng P amarus ln cao P urinaria Đường kính thân, số cành cấp 1, số cành cấp P amarus đạt cao 5,1 mm (M3); 37,8 cành/cây thấp 4,5 mm (M6); 30,2 cành/cây (M6) Ở P urinaria đạt cao 4,1 mm (M1); 21,8 cành/cây (M3); 13,6 cành.cây (M2) thấp 3,6 mm (M4, M5, M6); 14,6 cành/cây (M6); 5,4 cành/cây (M6) Tuy nhiên P amarus lại khơng có phân cành cấp 2, đặc tính chung lồi Như vậy, mật độ trồng thưa khơng có cạnh tranh dinh dưỡng, ánh sáng tạo điều kiện cho phát triển đường kính thân, số cành cấp cấp tốt nhất, lộ tiềm giống 4.1.7 Ảnh hưởng mật độ trồng đến mức độ nhiễm sâu bệnh Diệp hạ châu Sâu bệnh yếu tố có tương quan nghịch với suất trồng Do vậy, việc xác định mật độ trồng hợp lý để bị sâu bệnh phá hại nhất, việc làm cần thiết tăng suất chất lượng trồng mà nâng cao hiệu kinh tế sản xuất Dược liệu an toàn mục tiêu hàng đầu người sản xuất, việc đánh giá thành phần sâu bệnh hại dược liệu nói chung diệp hạ châu nói riêng cấp thiết Theo dõi tình hình sâu bệnh hại hai lồi diệp hạ châu mật độ trồng khác kết thu thể bảng 4.7 41 Bảng 4.7 Ảnh hưởng mật độ trồng đến mức độ nhiễm sâu bệnh hai loài diệp hạ châu Giống Mật độ M1 M2 (Đ/C) M3 L1 M4 M5 M6 M1 M2 (Đ/C) M3 L2 M4 M5 M6 LSD0,05(L*M) CV(%) M1 M2(Đ/C) TB M3 M4 Mật độ M5 M6 LSD0,05(M) L1 TB Giống L2 LSD0,05(L) Sâu (%) 2,5 3,5 5,3 6,8 8,4 9,1 5,2 4,2 4,2 6,6 5,2 8,6 1,4 4,7 3,9 3,9 4,8 6,7 6,8 8,9 1,0 5,9 6,4 0,6 Sâu xám (%) 4,7 7,5 7,1 6,7 8,7 8,3 5,3 4,2 3,1 6,4 5,2 9,3 1,4 4,7 5,0 5,9 5,1 6,6 7,0 8,8 7,2 7,3 0,6 Sâu đo (%) 5,2 6,8 5,9 6,9 6,4 5,4 5,4 6,6 4,4 6,5 0,8 8,7 6,2 5,3 5,2 6,7 5,2 6,7 0,5 6,0 6,0 0,3 Bệnh vàng Sinh lý (%) 5,3 7,3 6,9 8,2 5,7 8,3 6,4 5,4 5,9 6,7 6,4 5,2 0,6 9,2 5,9 6,4 6,4 7,5 6,1 6,8 0,4 7,0 7,1 0,3 Kết bảng 4.7 cho thấy, diệp hạ châu bị sâu gây hại, điều thể đời sống hoang dại Tuy nhiên, trình thí nghiệm cho thấy, quần thể đồng diệp hạ châu, thấy xuất loại sâu chính: sâu lá, sâu xám, sâu đo, nhiên mức độ gây hại khơng nghiêm trọng ngưỡng phịng trừ Trong sâu mức gây hại trung 42 bình từ 3,9 (M1 M2)-8,9 % (M6), mức độ gây hại tăng theo quy luật từ mật độ thấp đến mật độ cao, quy luật L1 L2 Sâu xám có mức gây hại trung bình biến động từ 5,0 %(M1) đến 8,8% (M6), tỷ lệ L1 biến động từ M1 (4,7%) đến M6 (8,3%) L2 tăng từ M3 (3,1%) đến M6 (9,3%) Đối với hai loài sâu này, tỷ lệ bị bệnh cho thấy phân thành hai nhóm mật độ ứng với mức độ gây hại, mức gây hại thấp mật độ thấp từ M1-M3, mức gây hại cao từ M4-M6 Đối với loài sâu đo, tỷ lệ gây hại mức thấp, biến động từ 5,2% (M3;M4) đến 6,7% (M6) Trong thời gian bố trí thí nghiệm, bệnh hại phát diệp hạ châu bệnh vàng sinh lý, tỷ lệ gây hại mức thấp, ngưỡng phòng trừ biến động từ 5,9%(M1) đến 7,5%(M4) 4.1.8 Ảnh hưởng mật độ trồng đến suất dược liệu diệp hạ châu Năng suất yếu tố phản ánh kết sinh trưởng phát triển Trong thí nghiệm, suất tiêu dùng để đánh giá sai khác cơng thức thí nghiệm Với quan thu hoạch thân là, suất Diệp hạ châu không đơn phụ thuộc vào yếu tố, mà tổng hợp nhiều yếu tố, yếu tố ảnh hưởng trực tiếp đến suất chiều cao cây, số cành cấp 1, cành cấp 2, mật độ cây/đơn vị diện tích Các yếu tố cao, thấp khác tùy thuộc vào đặc điểm di truyền giống, thời vụ, điều kiện ngoại cảnh, kỹ thuật canh tác Qua theo dõi suất, thu kết bảng 4.8 biểu đồ Bảng 4.8 Ảnh hưởng mật độ trồng đến suất dược liệu hai loài Diệp hạ châu 43 Giống Mật độ M1 M2 (Đ/C) M3 L1 M4 M5 M6 M1 M2 (Đ/C) M3 L2 M4 M5 M6 LSD0,05(L*M) CV(%) M1 M2(Đ/C) TB M3 M4 Mật độ M5 M6 LSD0,05(M) L1 TB Giống L2 LSD0,05(L) Tỷ lệ khô/tươi (%) 38,60 37,20 37,50 36,20 36,30 34,30 38,90 38,10 35,80 38,20 35,60 37,40 2,94 4,66 38,75 37,65 36,65 37,20 35,95 35,85 3,11 36,68 37,33 1,24 Năng suất cá thể khô (g/cây) 12,41 12,33 11,41 9,04 6,13 5,36 8,84 8,63 8,34 8,05 6,62 4,12 2,53 3,62 10,63 10,48 9,88 8,55 6,38 4,74 3,15 9,45 7,43 1,34 44 Năng suất lý thuyết (tạ/ha) 24,82 36,99 39,94 36,16 27,59 26,80 17,68 21,58 25,02 28,18 26,48 18,54 1,35 2,65 21,25 29,28 32,48 32,17 27,03 22,67 3,23 32,05 22,91 1,25 Năng suất thực thu (tạ/ha) 18,37 27,37 29,55 26,76 20,41 19,83 13,08 15,97 18,51 20,85 19,60 13,72 15,73 21,67 24,03 23,80 20,00 16,78 23,72 16,95 - Kết bảng 4.8 cho thấy tỷ lệ khơ/tươi trung bình dược liệu biến động khoảng từ 35,85 – 38,75 % Đạt cao M1 (38,75%) thấp M6 (35,85%) nhiên sai khác loài mật độ với với đối chứng (M2) khơng có ý nghĩa thống kê Như mật độ khơng có ảnh hưởng đến tỷ lệ cho thấy đặc tính giống Biểu đồ 5: Ảnh hưởng mật độ đến suất hai lồi diệp hạ châu Năng suất cá thể trung bình (g/cây) dao động từ 4,74 – 10,63 g/cây Năng suất cá thể đạt cao M1 (10,63g/cây) thấp M6 (4,74 g/cây), mật độ lại dao động từ 6,38 – 10,48 g/cây cơng thức có M1 khơng có có sai khác ý nghĩa với công thức đối chứng M2 Như vậy, việc tăng mật độ làm giảm suất cá thể việc giảm mật độ không ảnh hưởng đến suất cá thể Điều cho L1 L2 Năng suất lý thuyết trung bình đạt cao M3 (32,48 tạ/ha) thấp M1 (21,25 tạ/ha) Tuy nhiên M3 khơng có sai khác có ý nghĩa với M4 (32,17 tạ/ha) mức LSD0,05(L*M), CV(%) tương ứng Các mật độ cịn lại, suất trung bình lý thuyết nằm khoảng từ 22,67 tạ/ha (M6) – 29,28 tạ/ha (ĐC) Như M3 M4 cho suất lý thuyết cao Tuy nhiên, ảnh hưởng mật độ đến loài khác khác nhau: Đối với loài L1, suất lý thuyết thực thu đạt cao M3 (39,94 22,37 tạ/ha) cao hẳn so với công thức đối chứng M2 (36,99 27,37 45 tạ/ha) cơng thức cịn lại mức LSD 0,05(L*M)= 2,65 CV(%)=1,55 Ở loài L1 suất thấp mật độ M1 (24,82 18,37 tạ/ha) Kết cho phép khẳng định rằng, công thức M3 công thức mật độ hợp lý để sản xuất diệp hạ châu thân xanh cho suất cao nhất, đồng thời việc giảm mật độ (M1) so với đối chứng làm giảm suất, việc tăng mật độ vượt mức M3 làm giảm suất diệp hạ châu thân xanh Ở loài L2, suất lý thuyết suất thực thu đạt cao công thức M4 (28,18 20,85 tạ/ha) cao hẳn so với M2 (21,50 20,85 tạ/ha) cơng thức cịn lại Cơng thức M5 (26,48 19,60 tạ/ha) cao M2 (ĐC) mức có ý nghĩa với LSD CV(%) tương ứng Kết rằng: mật độ hợp lý cho sản xuất diệp hạ châu thân tím M4 tức 35 vạn cây/ha, tăng mật độ lên đến M5, nhiên suất thấp M4 Nếu tăng mật độ vượt M4 giảm xuống mật độ M2(ĐC) làm giảm suất diệp hạ châu thân tím So sánh suất cá thể, suất lý thuyết thực thu hai lồi cơng thức mật độ khác mức trung bình, kết bảng 4.8 cho thấy, L1 ln có số cao hẳn so với L2 Kết cho phép đánh giá góc độ suất tiềm năng suất, loài L1 chiếm ưu hẳn L2 4.2 Ảnh hưởng thời vụ đến sinh trưởng, phát triển, suất hàm lượng hoạt chất Phyllathin Diệp hạ châu 4.2.1 Ảnh hưởng thời vụ đến giai đoạn sinh trưởng Diệp hạ châu Ở lồi dược liệu sử dụng thân nói chung thuốc thuộc chi Phyllanthus nói riêng, tổng thời gian sinh trưởng tính từ gieo hạt đến thu hoạch làm thuốc Thời gian sinh trưởng ln biến động theo giống, lồi điều kiện sinh thái, biện pháp kỹ thuật canh tác, đặc biệt theo mùa vụ Theo dõi thời gian sinh trưởng lồi sở để bố trí mùa vụ công thức luân canh hợp lý nhằm đem lại hiệu kinh tế cao 46 suất, chất lượng dược liệu Đặc biệt thuốc, thời gian thu hoạch thời điểm thu hoạch yếu tố quan trọng, ảnh hưởng không nhỏ đến hàm lượng hoạt chất có Kết nghiên cứu thời gian sinh trưởng Diệp hạ châu thời vụ trình bày bảng 4.9 Bảng 4.9 Ảnh hưởng thời vụ đến thời gian sinh trưởng hai loài Diệp hạ châu Giốn g Thời vụ TV1 (Đ/C) TV2 L1 TV3 TV4 TV1 (Đ/C) TV2 L2 TV3 TV4 LSD0,05(L*TV) CV(%) TV1 (Đ/C) TB TV2 Thời TV3 vụ TV4 LSD0,05(TV) L1 TB Giống L2 LSD0,05(L) Tỷ lệ sống (%) 95 96 98 98 94 96 98 98 5,4 3,1 94,5 96,0 98,0 98,0 3,8 96,8 96,5 2,7 Thời gan từ…(ngày) Hồi TrồngMọcxanhHồi Trồng Thu xanh hoạch 34 72 33 70 32 70 31 72 33 11 70 32 69 32 71 32 69 1,2 0,4 2,8 2,0 2,5 2,2 33,5 10 71 32,5 69,5 32,0 70,5 31,5 7,5 70,5 0,8 0,3 2,0 32,5 8,5 71 32,3 8,25 69,8 0,6 0,2 1,4 Gieomọc 10 11 0,4 3,0 10,0 9,5 5,5 7,5 0,3 7,8 8,5 0,2 Tổng TGST 124 122 118 115 125 120 116 116 5,4 2,5 124,5 121,0 117,0 115,5 3,8 119,8 119,3 2,7 Qua bảng cho thấy : Tỷ lệ sống sau trồng công thức cao đạt từ 94 – 98% Tỷ lệ tăng dần từ thời vụ đến thời vụ loài L1 L2, chênh lệch thời vụ khơng đáng kể khơng có ý nghĩa thống kê 47 Thời gian từ gieo – mọc từ trồng – hồi xanh loài Diệp hạ châu đạt cao thời vụ thời vụ (9,5 – 10 ngày – 10 ngày), sau giảm dần thời vụ thời vụ (5,5 – 7,5ngày – 7,5 ngày) Điều thời vụ đầu thời tiết lạnh,nhiệt độ thấp làm cho hạt chậm nảy mầm kéo dài thời kỳ bén rễ hồi xanh Do tổng thời gian sinh trưởng lồi khác giao động từ 115,5 – 124,5 ngày, nhiên thời gian sinh trưởng loài lại gần khơng có sai khác Như thời vụ khác ảnh hưởng đến thời gian sinh trưởng Diệp hạ châu Trong loài P amarus thời gian sinh trưởng dài thời vụ (124 ngày) ngắn thời vụ (115 ngày), quy luật cho lồi P urinaria có thời gian sinh trưởng dài thời vụ (125 ngày) thấp thời vụ (116 ngày) 4.2.2 Ảnh hưởng thời vụ đến động thái tăng trưởng chiều cao Diệp hạ châu Là thuốc có phận sử dụng chủ yếu thân lá, việc nghiên cứu động thái tăng trưởng chiều cao chiều cao loài diệp hạ châu thời điểm trước thu hoạch gắn với thời vụ cần thiết chiều cao có mối quan với phát triển thân diệp hạ châu Nghiên cứu ảnh hưởng thời vụ đến tăng trưởng chiều cao số đo chiều cao trước thu hoạch giúp có thêm sở để lựa chọn thời vụ trồng diệp hạ châu hợp lý Theo dõi động thái tăng trưởng chiều cao hai loài diệp hạ châu, kết thu trình bày bảng 4.10 biểu đồ Bảng 4.10 cho thấy chiều cao trung bình lồi Diệp hạ châu tăng dần thời vụ đến thời vụ 3, sau giảm xuống thời vụ Quy luật cho tất giai đoạn từ 15 – 75 ngày sau trồng 48 Bảng 4.10 Ảnh hưởng thời vụ đến động thái tăng trưởng chiều cao hai loài Diệp hạ châu Đơn vị: cm Giống Thời vụ TV1 (Đ/C) TV2 L1 TV3 TV4 TV1 (Đ/C) TV2 L2 TV3 TV4 LSD0,05(L*TV) CV(%) TV1 (Đ/C) TV2 TB Thời vụ TV3 TV4 LSD0,05(TV) L1 TB Giống L2 LSD0,05(L) 15 17,8 16,5 17,5 15,6 11,5 13,8 17,5 16,7 1,0 3,3 14,7 15,2 17,5 16,2 0,7 16,9 14,9 0,5 Thời gian sau trồng …(ngày) 30 45 60 46,1 73,2 85,7 43,6 72,8 86,6 51,5 74,9 92,8 49,3 70,8 87,9 26,5 38,3 50,1 31,4 43 54,4 35,8 46,6 59,6 36,4 45,8 57,9 1,1 3,3 6,8 5,5 36,3 55,8 67,9 37,5 57,9 70,5 43,7 60,8 76,2 42,9 58,3 72,9 0,7 1,7 47,6 72,9 88,3 32,5 43,4 55,5 0,5 1,2 75 92,5 97,1 103,6 96,3 62,6 64,9 68,2 63,8 2,5 7,5 77,6 81,0 85,9 80,1 2,2 97,4 64.9 1,6 Biểu đồ 5: Ảnh hưởng thời vụ trồng đến khả tăng trưởng chiều cao loài diệp hạ châu 49 Tốc độ tăng trưởng chiều cao trung bình tăng dần từ thời vụ đến thời vụ tốc độ tăng trưởng chiều cao đạt cao giai đoạn từ 15 – 30 ngày sau trồng giảm dần thời kỳ Như vậy, quy luật tăng trưởng chiều cao loài diệp hạ châu cho thấy, sau bén rễ hồi xanh (15 ngày sau trồng) 30-45 ngày sau trồng, tốc độ tăng trưởng chiều cao hai giống diệp hạ châu cao nhất, phần lớn chiều cao hoàn thiện thời kỳ Đến thời điểm 45 ngày sau trồng, chiều cao trung bình lồi L1 72,9 cm, chiếm khoảng 75% chiều cao thời điểm trước thu hoạch 97,4 cm (75 ngày sau trồng) Chiều cao trung bình lồi L2 thời điểm 43,4 cm chiếm khoảng chiếm khoảng 67% chiều cao thời điểm trước thu hoạch 64,9 cm (75 ngày sau trồng) Như vậy, tốc độ tăng trưởng chiều cao lồi L1 cao L2, có xu hướng hoàn thiện chiều cao sớm Động thái tăng trưởng chiều cao thường gắn liền với động thái tăng trưởng số chính/thân quan sinh dưỡng khác, sở quan trọng để xem xét việc tác động phân bón biện pháp kỹ thuật khác cách phù hợp để đạt sinh trưởng hai loài diệp hạ châu đến tối ưu suất hiệu kinh tế Tại thời điểm 75 ngày sau trồng, chiều cao loài L1 thấp thời vụ ĐC (92,5 cm), cơng thức cịn lại cao ĐC mức sai khác có ý nghĩa với LSD0,05(L*TV) = 2,5 CV(%) = 7,5 Chiều cao đạt cao TV3 (103,6 cm) Ở loài L2, chiều cao thấp thời vụ ĐC (62,6 cm), thấp tất cơng thức cịn lại mức sai khác có ý nghĩa, chiều cao cao công TV3 (68,2 cm) Thời vụ thời vụ thuận lợi cho tăng trưởng chiều cao hai loài diệp hạ châu So sánh chiều cao loài diệp hạ châu tất thời kỳ sinh trưởng thời vụ khác nhau, số liệu bảng cho thấy, lồi L2 ln thấp lồi L1 mức sai khác có ý nghĩa Như vậy, điều kiện thời vụ cụ thể, việc khác biệt chiều cao đặc tính giống 50 4.2.3 Ảnh hưởng thời vụ đến động thái tăng trưởng số lá/thân Diệp hạ châu Tiếp tục theo dõi động thái tăng trưởng số lá/thân chính, kết thu trình bày bảng 4.11 biểu đồ Bảng 4.11 Ảnh hưởng thời vụ đến động thái hình thành số số lá/thân hai lồi Diệp hạ châu Giống Thời vụ TV1 (Đ/C) TV2 L1 TV3 TV4 TV1 (Đ/C) TV2 L2 TV3 TV4 LSD0,05(L*TV) CV(%) TV1 (Đ/C) TV2 TB Thời vụ TV3 TV4 LSD0,05(TV) L1 TB Giống L2 LSD0,05(L) 15 16,1 18,3 22,5 19,3 10,4 12,1 15,8 13,9 0,9 3,3 13,3 15,2 19,2 16,6 0,7 19,1 17,6 0,5 Đơn vị: sớ lá/thân Thời gian sau trồng …(ngày) 30 45 60 75 23,9 44,8 59,4 64,6 26,5 46,7 62,1 68,4 30,2 52,1 67,2 72,3 28,7 49,5 65,6 70,8 15,7 28,9 37,5 43,7 17,3 31,4 41,1 45,9 20,6 37,4 46,3 50,1 19 34,7 43,3 46,2 0,9 1,1 1,7 3,3 6,8 7,4 5,5 19,8 36,9 48,5 54,2 21,9 39,1 51,6 57,2 25,4 44,8 56,8 61,2 23,9 42,1 54,5 58,5 0,7 0,8 1,2 1,6 27,3 48,3 63,6 69,0 25,3 44,3 58,1 63,8 0,5 0,6 0,9 1,1 Cùng với tăng trưởng chiều cao hình thành số Kết theo dõi động thái tăng trưởng số lá/thân bảng 4.11 cho thấy động thái tăng trưởng số trung bình lồi Diệp hạ châu tương tự động thái tăng trưởng chiều cao Trong số L1 L2 cao thời vụ đạt 72,3 50,1 lá/thân chính, thấp thời vụ 1, đạt 64,6 43,7 lá/thân chính, sai khác số thời vụ có ý nghĩa thống kê 51 Biểu đồ 6: Ảnh hưởng thời vụ đến động thái lá/thân diệp hạ châu tất cơng thức Như thời vụ có ảnh hưởng tới tăng trưởng số Diệp hạ châu Với lồi L1, số lá/thân khác biệt thời vụ thời điểm 15 ngày sau trồng, thời vụ đạt cao (22,5 lá/thân chính), thấp thời vụ (16,1 lá/thân chính) Các cơng thức cịn lại có số lá/thân cao hẳn so với công thức đối chứng Sự chênh lệch trì suốt thời gian sinh trưởng loài thời vụ khác dẫn đến khác biệt số lá/thân thời điểm trước thu hoạch Tại thời điểm 75 ngày sau trồng, số lá/thân thời vụ Về tốc độ tăng trưởng số lá/thân thời kỳ cho thấy, tốc độ tăng số trì mức cao từ ngày thứ 15 sau trồng đến ngày thứ 60 sau trồng Đến thời điểm 60 ngày sau trồng, lồi L1 hình thành 91% so với trước thời điểm thu hoạch, tức số đạt 63,6 lá/thân so với 69,0 lá/thân thời điểm trước thu hoạch (75 ngày sau trồng) Tương tự L2, số thời điểm đạt 92% số thời điểm trước thu hoạch Trong giống, thời vụ khác có tác động dẫn đến khác biệt tốc độ tăng trưởng số số thời điểm trước thu hoạch Tốc độ tăng 52 trưởng số mạnh TV3 cao hẳn so với thời vụ khác giai đoạn sinh trưởng 53 ... bệnh hại suất loài diệp hạ châu - Đánh giá ảnh hưởng thời vụ đến sinh trưởng phát triển, mức độ nhiễm sâu bệnh hại suất loài diệp hạ châu - Đánh giá ảnh hưởng thời vụ đến hàm lượng hoạt chất Phyllanthine... cho loài diệp hạ châu Xuất phát từ lý đó, chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài: ? ?Nghiên cứu ảnh hưởng mật độ thời vụ đến sinh trưởng, phát triển, suất hàm lượng hoạt chất Phyllanthin hai loài Diệp. .. loài L1 chi? ??m ưu hẳn L2 4.2 Ảnh hưởng thời vụ đến sinh trưởng, phát triển, suất hàm lượng hoạt chất Phyllathin Diệp hạ châu 4.2.1 Ảnh hưởng thời vụ đến giai đoạn sinh trưởng Diệp hạ châu Ở loài