1  TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Vũ Thị Trang PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ (LC-MS/MS) XÁC ĐỊNH DƢ LƢỢNG MỘT SỐ KHÁNG SINH NHÓM SULFONAMIDES TRONG THỊT GIA SÚC GIA CẦM  H- 2012  2 TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Vũ Thị Trang PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ (LC-MS/MS) XÁC ĐỊNH DƢ LƢỢNG MỘT SỐ KHÁNG SINH NHÓM SULFONAMIDES TRONG THỊT GIA SÚC GIA CẦM    60.44.29    - 2012 3 LỜI CẢM ƠN                c Hà Nội, năm 2012  Vũ Thị Trang 4 MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN3  3    3 4  6  8  9 As 9 1.2.1  10  .10 CHƢƠNG 2: NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19  19  19  19 .21 .26  26 2 26  27  28 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29  29  29  32  32  36  38 5 As 40  43  46  48  49  52   52 3 56  58  65 KẾT LUẬN 73 TÀI LIỆU THAM KHẢO 75 PHỤ LỤC 80  80  82  87   92  94             104 6 DANH MỤC CÁC BẢNG Trang  4  9 B tu kinh 29 B t 31  38  44  45  46  48  49   53  53  55  56    59   61       65   67 7 DANH MỤC HÌNH VẼ Trang  21  23  25  radient 1 33  34  34  35  35  36  37  37  37  39  45   47  47   49       SAs 50  0,5-500ppb 52  0,5-500ppb 52 8  2 = 1,0000) 54  2 = 0,9991) 54  2 = 0,9999) 55  2 = 0,9998) 56  57  57  58  60  62  64  72  73 9 DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT ACN Acetonitrile CE Collision energy  EI Electron Ionization  ESI Eelectrospray ionization  EU European Union  HPLC High performance liquid chromatography  IUPAC International Union of Pure and Applied Chemistry      LOD Limit of detection  LOQ Limit of quantity  MeOH Methanol metanol MRL Maximum Residue Limit  PSA Primary and secondary amine  RSD Relative standard deviation  SPE solid phase extraction Chi U.S. NRP United States National Residue Program        UPLC- MS/MS Ultral performance liquid chromatography tandem mass spectrometry   UV Ultraviolet  10 MỞ ĐẦU                     ,      .                             ,                                 .               ,      .                      ,        ,            ,                . Sulfonamid (SAs)                           tra t [...]... bị đắt tiền, mặt khác nhóm kháng sinh này phù hợp với tách bằng sắc ký lỏng Do vậy, chúng tôi tiến hành xác định dƣ lƣợng 10 kháng sinh nhóm SAs trong thịt gia súc gia cầm bằng phƣơng pháp sắc ký lỏng khối phổ (LC-MS/ MS) Đây là phƣơng pháp hiện đại, có độ nhạy và độ chính xác cao Cơ sở lý thuyết của phƣơng pháp đƣợc tóm tắt nhƣ sau 2.2.1 Nguyên tắc chung của sắc ký lỏng Sắc ký lỏng là quá trình tách... chính xác Vì vậy, chúng tôi đã tiến hành đề tài: Phương pháp sắc ký lỏng khối phổ( LC-MS /MS) xác đinh dư lượng một số kháng sinh nhóm Sulfonamid trong thịt gia súc gia cầm ” Với nội dung nghiên cứu nhƣ sau: - Tối ƣu các điều kiện chạy máy LC-MS/MS để tách và xác định các SAs - Tối ƣu quá trình xử lý mẫu - Ứng dụng phân tích trên một số mẫu thực tế 11 CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu về kháng sinh nhóm. .. CV% 3,6 – 19,5% Các phƣơng pháp: sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC (detector UV, huỳnh quang); điện di (CE); sắc ký khí GC thƣờng khá phức tạp và kém chính xác do ảnh hƣởng của nền mẫu Chúng tôi lựa chọn phƣơng pháp sắc ký lỏng khối phổ LC/MS/MS để xác định các SAs trong thịt gia súc, gia cầm Phƣơng pháp có độ nhạy, độ chọn lọc và độ chính xác cao 27 CHƢƠNG 2: NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tƣợng... sulfadimethoxine-d4) trong thịt gia súc gia cầm bằng sắc ký lỏng ghép nối khối phổ LC-MS/MS  Mục tiêu tiến hành nghiên cứu của đề tài:  Tối ƣu các điều kiện chạy máy LC-MS/MS để tách và xác định các SAs  Khảo sát, tối ƣu hóa quá trình xử lý mẫu  Tiến hành phân tích trên một số mẫu thực tế 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu Nhóm SAs là hợp chất trong phân tử có chứa nhóm (-SO2NH2-) phân cực nếu dùng phƣơng pháp sắc ký khí... hiện tƣợng kháng kháng sinh và tồn dƣ kháng sinh trong thịt, cá, tôm…do ngƣời nông dân sử dụng không đúng cách và quá nhiều thuốc kháng sinh và không đảm bảo thời gian ngƣng sử dụng trƣớc khi thu hoạch, làm cho kháng sinh tích tụ trong thịt Khi ngƣời tiêu dùng sử dụng thực phẩm có chứa dƣ lƣợng kháng sinh SAs trong thịt, tôm, cá, trứng, sữa sau một thời gian dài sử dụng chúng sẽ tích lũy trong cơ thể,... xác định dƣ lƣợng SAs trong thịt gia súc gia cầm đã đƣợc nhiều tác giả trên thế giới quan tâm Tuy nhiên, ở Việt Nam, vấn đề này vẫn chƣa đƣợc nghiên cứu sâu Việc nghiên cứu và đƣa ra phƣơng pháp xác định nhanh, chính xác SAs giúp cho công tác thanh tra kiểm tra đƣợc chặt chẽ, đảm bảo an toàn cho ngƣời tiêu dùng Phƣơng pháp sắc ký lỏng khối phổ là phƣơng pháp hiện đại, có độ nhạy cao, cho phép xác định. .. pháp nhỏ hơn 5 g/kg 1.2.2 Thế giới 1.2.2.1 Phương pháp sắc ký lỏng với detector UV 19 Phƣơng pháp sắc ký lỏng rất phù hợp cho việc xác định SAs nên nó đƣợc sử dụng rộng rãi Các tác giả nghiên cứu bằng phƣơng pháp sắc ký lỏng trên nhiều loại detector khác nhau Trong đó detector UV là loại detector thông dụng nhất Chất phân tích sau khi đƣợc tách khỏi cột sắc ký, dẫn vào flowcell đo đƣợc chiếu bởi một. .. fluoroquinolones, quinolones, ionophores and dinitrocarbanilide) trong thịt gia súc, gia cầm Các kháng sinh trong mẫu đƣợc chiết vào dung môi ACN chứa 1% acid acetic, loại nƣớc với Na2SO4 khan, ly tâm Dịch chiết đƣợc làm sạch trong ống dSPE chứa 500mg chất hấp thụ NH2 và định lƣợng trên hệ thống sắc ký lỏng khối phổ LC/MS/MS: cột sắc ký Synergi Fusion-RP Phenomenex (100mm × 2mm × 2.5µm), pha động:... 18 Thịt, gan , thận 20 Sữa 10 Nhật Bản Thịt, gan, thận Hàn Quốc 10 Thủy hải sản 1.2 Các phƣơng pháp xác định SAs Vấn đề tồn dƣ kháng sinh SAs trong thực phẩm đã và đang đƣợc nhiều quốc gia trên thế giới quan tâm Rất nhiều nhà khoa học đã tiến hành nghiên cứu nhóm kháng sinh này bằng nhiều phƣơng pháp khác nhau trên các đối tƣợng nhƣ thịt, sữa, trứng, mật ong, nƣớc thải… Dƣới đây là một số phƣơng pháp. .. tác giả Zengxuan Cai và cộng sự [26] đã sử dụng phƣơng pháp sắc kí lỏng siêu hiệu năng kết nối khối phổ (Ultral performan liquid chromatography tandem mass spectrometry UPLC-MS /MS) xác định kháng sinh SAs trong thịt Mẫu thịt đƣợc chiết bằng acetonitril và loại chất béo bằng n-hexan, chiết lỏng- lỏng bằng ethyl acetate, phƣơng pháp đã tách 24 SAs trong 15 phút thông qua theo dõi nguồn ion hóa phun electron .      : Phương pháp sắc ký lỏng khối phổ( LC-MS /MS) xác đinh dư lượng một số kháng sinh nhóm Sulfonamid trong thịt gia súc gia cầm ”.  . TỰ NHIÊN Vũ Thị Trang PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ (LC-MS/ MS) XÁC ĐỊNH DƢ LƢỢNG MỘT SỐ KHÁNG SINH NHÓM SULFONAMIDES TRONG THỊT GIA SÚC GIA CẦM   . NHIÊN Vũ Thị Trang PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ (LC-MS/ MS) XÁC ĐỊNH DƢ LƢỢNG MỘT SỐ KHÁNG SINH NHÓM SULFONAMIDES TRONG THỊT GIA SÚC GIA CẦM 