NGHIÊN CỨU THU NHẬN COLLAGEN TỪ GÂN VÀ DA BÒ BẰNG COLLAGENASE TỪ VI SINH VẬT VÀ THỰC VẬT, ĐỊNH HƯỚNG ỨNG DỤNG TRONG BĂNG GẠC ĐIỀU TRỊ VẾT THƯƠNG HỞ

25 551 2
NGHIÊN CỨU THU NHẬN COLLAGEN TỪ GÂN VÀ DA BÒ BẰNG COLLAGENASE TỪ VI SINH VẬT VÀ THỰC VẬT, ĐỊNH HƯỚNG ỨNG DỤNG TRONG BĂNG GẠC ĐIỀU TRỊ VẾT THƯƠNG HỞ

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

Trong y học, vật liệu sinh học rất cần thiết khi điều trị cho bệnh nhân cần phẫu thuật, bệnh nhân tổn thương da do bỏng hoặc do nhiều nguyên nhân khác, giúp người bệnh được tiếp cận phương pháp chữa bệnh an toàn, rút ngắn thời gian chờ đợi, tạo tâm lý dễ chịu. Loại vật liệu sinh học có tiềm năng ứng dụng lớn trong điều trị các vết thương hở là collagen. Sử dụng băng gạc có bổ sung collagen đã phân cắt thành dạng kích thước nhỏ, hòa tan, sẽ giúp phóng thích collagen làm mau lành vết thương, giảm đáng kể nguy cơ xuất hiện sẹo. Đó là do collagen, đặc biệt là loại hòa tan, mạch ngắn, là thành phần chính trong lớp hạ bì và mạch máu, có chức năng chính là tăng tính đàn hồi và phục hồi các liên kết các mô tế bào. Collagen từ bò được chứng minh là có thành phần gần gũi với collagen từ con người, ít gây phản ứng miễn dịch trong quá trình điều trị, do vậy chủ yếu được nghiên cứu và sử dụng trong điều trị hơn so với collagen từ lợn và cá. Do collagen sản xuất bằng phương pháp vật lý, hóa học sẽ làm mất các chức năng sinh học của collagen, thời gian phân cắt kéo dài, nên phương pháp được quan tâm hiện nay là cắt liên kết các sợi collagen bằng collagenase, làm tăng các đoạn có kích thước nhỏ, rút ngắn thời gian, hiệu suất thu và sản phẩm collagen có tính hòa tan cao hơn, bảo toàn đặc điểm sinh học, thân thiện môi trường. Collagenase từ vi khuẩn có khả năng cắt hầu hết các loại collagen và tại nhiều vị trí trên sợi collagen. Các collagenase này hầu hết đều có nguồn gốc từ vi sinh vật gây bệnh cho người do vậy vẫn mang một đoạn protein của virus có khả năng làm loét rộng vết thương. Collagenase từ L. sphaericus vi khuẩn không gây bệnh cho người chưa được nghiên cứu rộng rãi ngoài thông tin công bố trình tự gene mã hóa collagenase trong hệ gen, nhưng không mang trình tự mã hoá của virus. Đây là một ưu điểm khi sử dụng enzyme từ vi khuẩn này tạo sản phẩm collagen không chứa các tác nhân gây miễn dịch hoặc dị ứng. Bên cạnh đó việc phối hợp protease từ thực vật như dứa hay đu đủ, giúp phân cắt các liên kết nội phân tử collagen sau khi bó sợi bị cắt bởi collagenase sẽ rút ngắn thời gian tạo các đoạn collagen ngắn, hòa tan. Nghiên cứu enzym để phân cắt các phụ phẩm như da và gân bò được công bố tập trung nhiều collagen hòa tan chưa có tại Việt Nam. Vì những lý do trên, đề tài “Nghiên cứu thu nhận collagen từ gân và da bò bằng collagenase từ vi sinh vật và thực vật, định hướng ứng dụng trong băng gạc điều trị vết thương hở” được đề xuất thực hiện. Mục đích đề tài là tìm ra quy trình thu nhận collagen từ phân cắt gân và da bò bằng enzyme đạt hiệu suất cao, đơn giản, phù hợp với điều kiện Việt Nam, thân thiện môi trường, biến các phụ phẩm chế biến trở thành nguồn nguyên liệu có giá trị

SỞ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO HÀ NỘI TRƯỜNGTHPT NGUYỄN THỊ MINH KHAI - QUẬN BẮC TỪ LIÊM ************** ĐỀ TÀI DỰ THI KHOA HỌC, KỸ THUẬT DÀNH CHO HỌC SINH TRUNG HỌC CẤP THÀNH PHỐ LẦN THỨ TƯ (NĂM HỌC 2014 - 2015). Tên đề tài:   !"# $ %& Lĩnh vực'()*+,-*'-*./0,1234545+06/4++78 NGƯỜI HƯỚNG DẪN 9:;8++<=>/?> 9@41<8345*A8'/0434545+06/4+ +78B/0424.CD(E TÁC GIẢ: FG4=/4+CD HI'JJJKFLM45'N5,OP4+<=/4+(+>/ Hà Nội, tháng 11 năm 2014 J MỤC LỤC Trang NQ:RS# K NQ:T UV#   W==X"Y# Z NQ:UX [($U\ ] :J: +,^4_<1-*./0,8? >5`4 ] :K: 5+/a48b,c/d,e/044,3/8fO*+g8++hIci*+,4+-4 8? >5`4>6`*j8+k451/e+,^4Lysinibacillus sphaericus Z l :Z: 5+/a48b,*+,4+-48? >5`4>6`*jL. sphaericus Z Jm :]: 5+/a48b,*+,4+-4IF?*`>6`*jc,ck12nb> JK :l: 5+/a48b,e+o4p45I+C48q*8? >5`48k>`4rOD*jL. sphaericus Zn<8+8+/s*c,ck12nb> Jl :t: 5+/a48b,c/d,e/04I+C48q*8? >5`4*jn>125C4_u Jt :v: @_w45+/a48b,c/d,e/04I+x+hI8+?*;?D2458? >5`4 Jy :y: 5+/a48b,*/4+6;8+`4rOD*j8+k45L. sphaericus Z12 nb> Km NQ:($ KZ z=(\ K] PHẦN I. LÝ DO CHỌN ĐỀ TÀI F?45O+781-*./0,6/4++78Ff*8G4*+/s*e+/c/d,*F<8+?_04+4+C48G4 I+{,*+,-*_04+4+C4*|4*+L@45n>n?_}45+?~8n?4+/d,45,Oa44+C4e+A8 5/•I45LM/_04+cLh8*/sI8-4I+L@45I+AI8+€>_04+>4*?24F•*45q4*+M/ K 5/>48+Mch/*;?*CD.•nP8+<,:?;/1-*./0,6/4++788‚*/dD4p45b45nƒ45 .H4*F?45c/d,*F<8A81s**+L@45+„.28? >5`4:…nƒ45_p455;88‚_|6,45 8? >5`4c†I+C48q**+24+n;45eg8+*+LH84+}+u>*>46‡5/•II+‚45*+g8+ 8? >5`4.2DD>,.24+1s**+L@455/oDcA45ei45,O8@ˆ,f*+/046‰?:‚.2 n?8? >5`4c~8_/0*.2.?;/+u>*>4D;8+45q4.2*+24+I+G48+g4+*F?45.HI +;_Š12D;8+DA,8‚8+b84p458+g4+.2*p45*g4+c24+‹/12I+ƒ8+‹/8A8./a4 es*8A8D3*s_2?:? >5`4*j_ucLh88+b45D/4+.28‚*+24+I+G45G45Œ/1H/ 8? >5`4*j8?445LM/g*5COI+o4b45D/P4n<8+*F?45•,A*FŠ4+c/d,*F<n?1-O 8+kOs,cLh845+/a48b,126…nƒ45*F?45c/d,*F<+@46?1H/8? >5`4*j.h412 8A:?8? >5`46o4ˆ,f*_Ž45I+L@45I+AI1-*.•+‚>+786‡.2DDf*8A88+b8 4p456/4++788k>8? >5`4*+M/5/>4I+C48q*e•?n2/4a4I+L@45I+AIcLh8 •,>4*CD+/044>O.28q*./a4es*8A86h/8? >5`4_Ž458? >5`4>6`.2D*p458A8 c?;48‚eg8+*+LH84+}F•*45q4*+M/5/>4+/0,6,f**+,126o4I+^D8? >5`4 8‚*g4++u>*>48>? +@4 _o?*?24c~8c/iD6/4++78*+C4*+/04D3/*FLM45: ? >5`4>6`*j1/e+,^48‚e+o4p458q*+G,+s*8A8.?;/8? >5`412*;/4+/d,1< *Fg*Fa46h/8? >5`4:A88? >5`4>6`42O+G,+s*cd,8‚45,‹45•8*j1/6/4+ 1-*5CO_04+8+?45LM/n?1-O1{4D>45Dw*c?;4IF?*`/48k>1/F,6 8‚e+o 4p45.2D.?•*Fw451s**+L@45:? >5`4>6`*jL. sphaericus91/e+,^4e+345 5CO_04+8+?45LM/98+L>cLh845+/a48b,Fw45F†/45?2/*+345*/48345_• *FŠ4+*‘5`4`D†+‚>8? >5`4>6`*F?45+05`44+L45e+345D>45*FŠ4+*‘D† +?A8k>1/F,6.CO.2Dw*L,c/iDe+/6…nƒ45`4rOD`*j1/e+,^442O*;?6o4 I+^D8? >5`4e+3458+b>8A8*A84+C45COD/P4n<8++?~8n<b45:a48;4+c‚ 1/08I+•/+hIIF?*`>6`*j*+‘81-*4+Lnb>+>Oc,ck5/•II+C48q*8A8./a4es* 4w/I+C4*…8? >5`46>,e+/_‚6h/_<8q*_„/8? >5`4>6`6‡F•*45q4*+M/5/>4 *;?8A8c?;48? >5`445q4+u>*>4: 5+/a48b,`4rODciI+C48q*8A8I+ƒ I+^D4+Ln>125C4_ucLh88345_•*-I*F,454+/d,8? >5`4+u>*>48+L>8‚ *;//0*>D:Š4+€45.•n?*Fa4cd*2/’5+/a48b,*+,4+-48? >5`4*j5C4 12n>_u_Ž458? >5`4>6`*j1/6/4+1-*12*+‘81-*c<4++LH45b45nƒ45*F?45 _p455;8c/d,*F<1s**+L@45+„“cLh8cdˆ,f**+‘8+/04:=ƒ8cg8+cd*2/.2*ŠD F>•,O*FŠ4+*+,4+-48? >5`4*jI+C48q*5C412n>_u_Ž45`4rOD`c;*+/0, 6,f*8>?c@45/o4I+x+hI1H/c/d,e/04/0*>D*+C4*+/04D3/*FLM45_/s4 8A8I+ƒI+^D8+s_/s4*F„*+24+45,‹445,Oa4./0,8‚5/A*F<: PHẦN II. TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU VÀ ĐIỂM MỚI, SÁNG TẠO CỦA ĐỀ TÀI F?45O+788? >5`4*+kOI+C46o4ˆ,f**j_uc†cLh883454+-4.2Dw* .?;/*+,•8,•4512*+,•8*/aD>4*?24nx458+?8?445LM/:j4pDJ”yJ+>/ nu45*+,•8*/aD8? >5`4+u>*>4.?;/12*/4+e+/s*6o4ˆ,f**jn>_u1H/*a4 Z *+L@45D;/.2•On`FD12•OI.>6*c†cLh86…nƒ45Fw45F†/8+?c/d,*F<8A8_f* *+LM45cLM451/d4D3DdD:/044>O8? >5`4*/4+e+/s**j_ucLh86…nƒ45 *F?454524+834545+/0I*+^DD)4+Ln>12Fp4512c/d,*F<8A8_04+e+HI5C4 126ƒ4cLh8cA4+5/A+/0,•,o*F?45c/d,*F<I+ƒ8+‹/8A81s*_}456C,12Fw45: ? >5`48+/sDt–*+i*F7458k>5C4e+?o45vm–8f,*F•8n>12cLh8I+C4_• 8+kOs,„.HI+;_Š8k>n>:†8‚K”.?;/8? >5`4cLh88345_•8? >5`4+u> *>4.?;/.2I+|_/s44+f*12*+LM45„*F?458A8D3./a4es*4+Ln>ˆL@455C4: ? >5`442O8‚e+o4p45.2D*p45*g4+c24+‹/12I+ƒ8+‹/8A8./a4es*„8A8 D3*s_2?:? >5`4>6`.2`4rOD`I+C48q*./a4es*I`I*/n`*Fa4_‚6h/8? >5`4 *;?8? >5`4+u>*>4:? >5`4>6`*j 1/ e+,^48‚*g4+L,1/0* .2  I+C48q* 8? >5`4+u>*>412e+345+u>*>48q*+G,+s*8A8.?;/8? >5`4124+/d,1<*Fg *Fa46h/8? >5`4:? >5`4>6`*jClostridium histolyticumcLh845+/a48b,12 6o4ˆ,f**j4pDJ”ly8+?cs44>O:A88? >5`4>6`*jPseudomonas aeruginosa —J”vl˜*j1/6/4+1-*_/i4Vibrio6I:12Achromobacter iophagus—J””t˜+G, +s*cd,.21/6/4+1-*5CO_04+8+?45LM/1{4D>45Dw*c?;4IF?*`/48k>1/F,* 8‚e+o4p45.2DD„Fw451s*.?•*8k>1s*_}45: Lysinibacillus sphaericus .21/ e+,^48‚.h/12cLh8ˆ`D4+L*A84+C4n/0*D,™/6/4++78nx45*F?45e/iD6?A* n<8+6•*ˆ,f*+,Os*6•*F•*:? >5`4>6`*jL. sphaericus8+L>cLh845+/a48b, Fw45F†/45?2/*+345*/48345_•*FŠ4+*‘5`4`D†+‚>8? >5`4>6`*F?45+05`4 8k>1/e+,^442O4+L45e+345D>45c?;45`4D†+‚>8k>1/F,6:(+/6…nƒ45 `4rOD`*j1/e+,^442O*;?6o4I+^D8? >5`4D;8+45q4+u>*>46‡e+345 8+b>8A8*A84+C45COD/P4n<8++?~8n<b45: Điểm mới, sáng tạo của đề tài: …nƒ4545,‹41-*./0,5/A*+24+Fšn‹/ n2?„/0*>D.25C412n>_uci*;?8? >5`4D;8+45q44+MI+C48q*_Ž45 8? >5`4>6`*jL. sphaericus.21/e+,^4e+3455CO_04+8+?45LM/8+L>8‚ 45+/a48b,42?./a4•,>4cs4+?;**g4+8? >5`4>6`8k>1/e+,^442O.…nƒ45 *+aDDw*6•`4rOD`*j*+‘81-*Fš*/d46›48‚—nb>c,ck˜4C458>?e+o4p45 I+C48q*8? >5`4F•*45q4*+M/5/>4*+C4*+/041H/D3/*FLM45+@48?4cLM45 I+C48q*_Ž45+‚>+78:;?•,O*FŠ4+6o4ˆ,f*8? >5`4e+•Ieg413*Fx45c`D .;/+/0,•,oe/4+*s8>?12>4*?24I+x+hI1H/c/d,e/04*F?454LH8*-4nƒ45 124C458>?5/A*F<8k>8A8I+ƒI+^D8+s_/s4:CO.2Dw*+LH4545+/a48b, DH/*;//0*>D8‚•45+œ>e+?>+7812*+‘8*/P48‚*/dD4p45b45nƒ458>?: PHẦN III. QUÁ TRÌNH NGHIÊN CỨU VÀ KẾT QUẢ Nội dung nghiên cứu • 5+/a48b,c/d,e/044,3/8fO*+g8++hIci*+,4+-48? >5`4>6`*j 8+k451/e+,^4L. sphaericusZ: ] • 5+/a48b,*+,4+-48? >5`4>6`*j8+k451/e+,^4 L. sphaericus Z: • 5+/a48b,*+,4+-4IF?*`>6`*jc,ck12nb>: • 5+/a4  8b,  e+o  4p45  I+C4  8q* 8? >5`4 8k>  `4rOD *+3 *j L. sphaericusZ12n<8+8+/s*c,cknb>: • 5+/a4 8b,  c/d,  e/04  I+C4 8p•*  5C4 12 n>  _u  _Ž45  `4rOD *j L. sphaericusZ12c,cknb>: • 5+/a48b,*A8+8+/s*8? >5`4>6`*j8+k45 L. sphaericus Z 12 IF?*`>6`*jc,cknb>: • 5+/a48b,c/d,e/04*+g8++hI8+?*;?D2458? >5`4: • ‘>8+748A8*+24+I+G4_|6,45*+g8++hI8+?D2458? >5`4nx45 *F?45c/d,*F<_}45: • +…45+/0DD2458? >5`4*Fa4*+}c†5CO_}45*+‘845+/0D: • žCOn‘45•,O*FŠ4+*+,4+-48? >5`4e+•Ieg413*Fx45c@45/o4: III.1. Chuẩn bị vật liệu collagen III.1.1. Dụng cụ, thiết bị và hóa chất 9ƒ458ƒ'8•8c?45JmmmD.4+‘>+wI4+‘>c‘45n>Ÿ5C4_u_Š4+*+kO*/4+ c‘45+™4+hIn<8+8? >5`4*+3: 9+/s*_<'*k.;4+?6+/_>—+-*˜DAOˆ>O*+<*—/0*>D˜DAO.O*CD—?F1>  =)˜DAOc?I—=`**.`F?.`n?4+˜ 9‚>8+f*'4LH88f*n,45n<8+> K N ] mml=—Jv”mv5Ÿ˜>8`*/8>8/nml= —ZmmKl5Ÿ˜lD=—JytJ5Ÿ˜8‹4vm ? III.1.2. Tạo vật liệu collagen -*./0,8? >5`4nx45*F?458A8*+g45+/0DcLh88+,^4_<4+L6>,' 9LH8J' …>6;8+n>Ÿ5C4_u_Ž454LH88f*6>,c‚_Ž458‹4vm ? 45CD5C4Ÿn> *F?458‹4vm ? :06/4+nƒ458ƒ12DAOˆ>O_Ž458‹4vm ? 9LH8K'5CDn>Ÿ5C4_uc†ˆ>O*F?45> K N ] mml=„Iyv9”J„] ?  *F?45K]5/M*+>On<8+45CDKcs4Z.G4*F?45•,A*FŠ4+45CD 9LH8Z'?;/_}n<8+45CD12*+>O_Ž45>8`*/8>8/nml= lD= 9LH8]'O*CD.?;/_}8~4—I+G48? >5`4e+345_<8q*ŸI+G4IF?*`/4e+345 I+o/8? >5`4˜*+,cLh8+™4+hIn<8+8? >5`4*+3: 9LH8l'+,n<8+e`?8? >5`4*+312_o?•,o4*F?45*k.;4+] ? cinx458+? 8A8*+g45+/0D: l Hình 1. Gân và da bò Hình 2. Keo collagen thô III.2. Nghiên cứu điều kiện nuôi cấy thích hợp để thu nhận collagenase từ chủng vi khuẩn Lysinibacillus sphaericus VN3 III.2.1. Lựa chọn môi trường thích hợp cho sinh trưởng và sinh collagenase của chủng L. sphaericus VN3 Dụng cụ, thiết bị và hóa chất: 9ƒ458ƒ'_Š4+*>D5/A8n,45*g8+KlmD.—y8A/˜•,`8fOcG,*Fu4—J8A/˜ 9+/s*_<'*kfD4,3/1/6/4+1-*—¡F/?8` b8˜4‹/e+…*Fx45—N+-*˜ DAO•,>45I+|—>_?D`nCO>4+>˜: 9‚>8+f*'8? >5`4—/5D>=)˜8A8+?A8+f*8‚*F?45*+24+I+G4D3/*FLM45 Thí nghiệm: 9+,^4_<D3/*FLM454,3/8fO' =3/*FLM45.}45'8+,^4_<K.?;/8‚_|6,4512e+345_|6,458? >5`4 +24+I+G4+‚>8+f* 2D.Lh45—5Ÿ.˜ >?D`4 l FOI*?4 Jm >. l ? >5`4 Jm LH88f* *H/JmmmD. I v9vK =3/*FLM45e+?A45N”8‚_|6,4512e+345_|6,458? >5`4 +24+I+G4+‚>8+f* 2D.Lh45—5Ÿ.˜ — ] ˜ K  ] Kt] ( K N ] KZy ( K N ] ltl =5 ] J ? >5`4 Jm =,•/1/.Lh45 JD. LH88f* JmmmD. I ty9v t +,^4_<JmmD.n,45n<8+D,•/1/.Lh45 +24+I+G4+‚>8+f* F?45.Lh45—5Ÿ.˜ , ] mt] ¡` ] mJJ =4. K mv” •4 ] mJl LH88f* JmmD. +/>D3/*FLM4512?8A8_Š4+*>D5/A8D™/_Š4+KlD.1/s**a4D3/*FLM45 *Fa4*+24+_Š4+12*Fa45/fO_>?4•*_3456>,c‚c`De+…*Fx45„JKJ ? *F?45 ]mI+•*:,45n<8+D,•/1/.Lh45cLh8c‘45*F?45_Š4+*>D5/A8lmmD.12e+… *Fx458x45D3/*FLM45:i45,w/D3/*FLM45c†e+…*Fx45_|6,451/.Lh45 *FLH8e+/8fO5/•45: 9fO5/•45'.fODw*1u45•,`8fO6/4+e+•/8+k451/e+,^4L. sphaericus Z *j•45*+;8+45+/a458+,Oi412?D3/*FLM45.}45*F?45_Š4+*>D5/A8c†cLh8 ci45,w/:+,Oi48A8_Š4+*>D5/A8c†8fO8+k4512?DAO.q8*•8cwKKm 1u45ŸI+•*4,3/„Zv ? *F?45K]5/M: 9(/iD*F>es*•,o'(+/es**+•84,3/8fO*/s4+24+cA4+5/ADb8cw6/4+*FL„45 _Ž458A8+c?n<8+4,3/8fO*Fa4DAO•,>45I+|„_LH86‚45tmm4D126‘ 6/4+*|45+hI8? >5`4>6`:=3/*FLM458+?5/A*F<12+?;**g4+8? >5`4>6` 8>?4+f*6‡cLh8.‘>8+74cinx45*F?458A8*+g45+/0D*/sI*+`?: A8+c?5/A*F<tmm4D'F…>8,1`*_Ž454LH88f*•ID/0458,1`*ˆ,•45 5/fO*+fD8+?+•*+s*4LH8nx45I/I`*_@DJD.4LH88f*12?8,1`*c~*12? DAOch/D24+Š4++/04.a45/A*F<c?4+f4ŸcicL>1d5/A*F<m¢c|4LH8F>12 •ID/0458,1`*ˆ,•455/fO*+fD4+L*Fa4_@DJD.n<8+8G4c?cw+fII+ƒc~* 12?DAO5+/.;/5/A*F<+/i4*+<*Fa4D24+Š4+: N+L@45I+AIˆA8c<4++?;**g4+8? >5`4>6`£v¤' ?;**g4+8? >5`4>6`cLh8ˆA8c<4+_Ž458A8+c?.Lh45`,8/4`5/o/I+‚45F> *j8@8+f*8? >5`4•,>•,A*FŠ4+k1H/n<8+`4rOD`*+3:=w*c@41<+?;**g4+ `4rOD`cLh8c<4+45+œ>.2.Lh45`4rOD`8G4ci5/o/I+‚45F>J¥D?.`,8/4` *j8@8+f*8? >5`4*F?45c/d,e/04*+g45+/0D:…nƒ454/4+OnF/4129`,8/4` —I+>„8A84‹45cwmK¢m]¢mt¢my¢J¢JK¥D?.ŸD.˜ˆCOn‘45cLM458+,^4: v Hình 3. Đường chuẩn Leucine Chuẩn bị các dung dịch: 0DlmD='I+>lmD.5‹D'KlD.F/6.JmmD= I¦y¢mlD. KmD=¢]vD.4LH88f*¢J”y5>. K ¢mJl5>.: ,45n<8+4/4+OnF/4]–'8C4]5I+>*F?45ZKD.4LH88f*12tyD.`*+>4?. ,45n<8+8@8+f*'8+b>J–—§Ÿ1˜8? >5`4*F?45c0D ?;**g4+8? >5`4>6`*F?45n<8+`4rOD`*+3cLh8ˆA8c<4+_Ž458A8+c? .Lh45`,8/4`6/4+F>*F?45+™4+hII+o4b454+MI+L@45I+AI6?D2,*+`? •,O*FŠ4+6>,'mlD.n<8+8@8+f*8? >5`4cLh8I+o4b451H/mlD.n<8+4,3/ 1/e+,^4L. sphaericus Z8+b>`4rOD`*+3„Zv ? *F?45K5/M:O*CDvmmm 1u45ŸI+•**F?45JlI+•*12*+,n<8+4|/:•*mlD.n<8+4|/12?•45`¨¨I`4n?¨ 6>,c‚_|6,45mKD.4/4+OnF/4]–—§Ÿ1˜12c?cw+fI*+ƒA4+6A45„_LH8 6‚45lvm4D: ?;*cw8? >5`4>6`cLh8ˆA8c<4+*+`?8345*+b86>,' ?;*cw`4rOD`¦ —O©mv˜Ÿ—mv©mKl˜—,ŸD.˜ F?45c‚' O'N+L@45*FŠ4+cLM458+,^4`,8/4`'O¦—Km”l©ˆ mml]t˜—¥D?.ŸD.˜¢ ˆ'5/A*F< lvm4D (s*•,o*+,cLh88+?*+fOD3/*FLM45.}458‚_|6,45J–8? >5`4 *+38+?e+o4p456/4+*FL„458>?4+f*—tmm¦Jvvv˜12N”.}458‚_| 6,45J–8? >5`48+?+?;**g4+8? >5`4>6`8>?4+f*c;*JKKyŸD.:žA8c<4+ c<4+*g4+8? >5`4>6`8+?*+fO*Fa4D3/*FLM45N”*+;8+8‚_|6,45J– 8? >5`48‚1u45I+C45/o/8? >5`41H/cLM45eg4+KJ8D—o45JŠ4+]12 l˜:+L1-O8‚*+i.‘>8+74D3/*FLM45N”_|6,45J–8? >5`4*+3ci4,3/ 8fO8+k45L. sphaericus Z 8+?6/4+8? >5`4>6`:=3/*FLM45cLh8.‘> 8+74.2D3/*FLM454+C45/•45*;?6/4+e+•/8+?.a4D`48? >5`4>6`: y Bảng 1. Sinh trưởng và sinh tổng hợp collagenase của chủng L. sphaericus VN3 trên các môi trường khác nhau =3/*FLM45 (+o  4p45  6/4+  *FL„45 —tmm4D˜ ?;*  *g4+  8? >5`4>6` —ŸD.˜  JJK 9 N” mlKy 9  J–8? >5`4 Jvvv tZ] N” J–8? >5`4 Jm]K JKKy Hình 4. Hoạt tính phân giải collagen của Hình 5. Chủng VN3 sinh trưởng trên chủng VN3 trên môi trường thạch ISP9 môi trường lỏng III.2.2. Lựa chọn pH, nhiệt độ và nồng độ NaCl thích hợp cho sinh trưởng và sinh collagenase của chủng L. sphaericus VN3 Dụng cụ, thiết bị và hóa chất: 9ƒ458ƒ'_Š4+*>D5/A8n,45*g8+KlmD.—t8A/˜•,`8fOcG,*Fu4—J8A/˜ 9+/s*_<'*kfD4,3/1/6/4+1-*—¡F/?8` 4+˜4‹/e+…*Fx45—N+-*˜ 9‚>8+f*'8A8+?A8+f*8‚*F?45*+24+I+G4D3/*FLM45N” Thí nghiệm: iˆA8c<4+e+o4p456/4+*FL„458k>1/e+,^4L. sphaericus VN3 „8A8 c/d,e/04e+A84+>,1/e+,^4cLh84,3/8fO*Fa4D3/*FLM45N”.}45„Zv ?  8‚_|6,45J–8? >5`4e+345+u>*>4124‹45cw>.*p45nG4*jJ9Jm– +?~84,3/„4+/0*cw—] ? ¢Jm ? ¢Km ? ¢Zm ? ¢Zv ? 12]l ? ˜12Ie+A84+>,—*j I]m9Jmm˜:U,>46A*6‘I+A**F/i412ˆA8c<4+e+o4p456/4+8? >5`4>6`8k> 1/e+,^4*Fa4D3/*FLM456>,J9Z452O4,3/8fO: Bảng 2. Ảnh hưởng của pH, nhiệt độ và nồng độ NaCl đến sự sinh trưởng và sinh collagenase của chủngL. sphaericus VN3 ” U,>•,A*FŠ4+*+g45+/0D8+?*+fO—o45KŠ4+t˜8+k451/e+,^4Z .28+k45L>fDI+A**F/i4„4+/0*cw*jKm ? cs4Zv ? 12I+A**F/i4*•*„Zv ? : &] ? 12Jm ? 8+k451/e+,^4e+345I+A**F/i4e+/4+/0*cw.a4*H/]l ? 8+k45 1/e+,^445j45I+A**F/i4:+k451/e+,^4Ze+345I+A**F/i4„I>ˆ/*„ I*jtcs4Jm8+k458‚e+o4p45I+A**F/i4I+A**F/i4*•*„e+?o45I*jvcs4 y:(+/I*p45.a4Jme+o4p456/4+*FL„458k>8+k45Z5/oDD;4+:&4‹45 cw>.*+fIe+o4p456/4+*FL„458k>8+k45*•*e+/4‹45cw–>.*F?45 D3/*FLM45*p45.a4e+o4p456/4+*FL„458k>8+k455/oDnG4:;/4‹45cw*Fa4 v–8+k45_<b88+s6/4+*FL„45:+L1-O.‘>8+74c/d,e/044,3/8fO 8+k451/ e+,^4L. sphaericusZ.2„Zv ? >.ªl–12I¦v: Jm /d,e/044,3/8fO /4+*FL„45—tmm˜ ?;**g4+8? >5`4>6`—ŸD.˜ NaCl (%) J ZyJK JK]m K Zm”t JKZv Z Zmlt JKZ] ] Km] JmKy l Jyy yvl t JZt tJK v mm”K ]mJ y myK 9 ” m]K 9 Jm mZm] 9 Nhiệt độ ( o C) ] ?  9 9 Jm 9 9 Km m”Z] lKt Zm KJZ JmlZ Zv ZyJK JKZ] ]l 9 9 pH ] 9 9 l 9 9 t m]K] Zyv v ZtyZ JKZ] y ZlJK JKJv ” Kyl JJmK Jm mylJ 9 [...]... trộn enzym và collagen thích hợp Chuẩn bị các mẫu thủy phân collagen từ gân và da bò trong bình tam giác 100 ml như sau: Mẫu 1: Dịch chiết enzym đu đủ + collagen từ gân, da bò, tỉ lệ 4:1 Mẫu 2: Dịch chiết enzym dứa+ collagen từ gân, da bò, tỉ lệ 4:1 Mẫu 3: Dịch enzym thô chủng VN3+ collagen từ gân, da bò, tỉ lệ 4:1 Mẫu 4: Dịch enzym thô chủng VN3 + dịch chiết enzym đu đủ + collagen từ gân, da bò, tỉ lệ... chiết enzym dứa + collagen từ gân, da bò, tỉ lệ 2:2:1 Mẫu 6: Dịch collagenase chuẩn (12,5U/ml) + collagen từ gân, da bò, tỉ lệ 4:1 17 Mẫu 7: Nước cất + collagen từ gân, da bò, tỉ lệ 4:1 Mẫu 8: Dịch enzym thô chủng VN3 + 1% collagen Sigma Trong đó mẫu 6, 7, 8 là mẫu đối chứng Quan sát sự dịch hóa và xác định hàm lượng protein trong phần dịch của hỗn hợp hàng ngày Kết quả đo giá trị OD595 nm cho thấy... để thu nhận collagenase từ chủng vi khuẩn L sphaericus VN3 là ISP9 (g/l): (NH4)2 SO4 2,64; KH2PO4 2,38; K2HPO4 5,65; MgSO4 1; Muối vi lượng 1ml; Collagen 10; pH=7, nhiệt độ 37oC, NaCl dịch chiết enzym dứa > Hình 9 Hoạt tính phân giải collagen của chủng VN3 và dịch chiết enzym đu đủ dịch chiết đu đủ, dứa 16 III.6 Nghiên cứu điều kiện phân cắt collagen từ da và gân bò VI. 6.1 Dụng cụ, thiết bị và hóa chất - Dụng cụ: bình tam giác 100 ml (20 cái) - Thiết bị: tủ nuôi vi sinh vật 37oC (Friocell, Đức) - Hóa chất: dịch keo collagen thô (từ gân. .. vòng/phút ở 37 o C trong thời gian 30 giờ Môi trường lên men sử dụng là ISP9 + 1% collagen thô, pH = 7 Trong quá trình lên men lấy 10 ml mẫu định kỳ mỗi 3 giờ để xác định sự sinh trưởng (giá trị OD600) và hoạt tính collagenase (U/ml), kết quả thu được cho thấy từ giờ thứ 12 chủng bắt đầu sinh collagen và hoạt tính cao nhất tại 24 giờ, như vậy thời điểm thích hợp nhất để dừng lên men và thu collagenase là... các tỉ lệ còn lại, trong quá trình ủ có thể do lượng dịch ít nên không thấy rõ sự dịch hóa, ở mẫu có tỉ lệ 1:1 collagen trương lên trong quá trình ủ tạo thành một khối A B C Hình 10 Thủy phân collagen thô từ gân, da bò bởi enzym từ dứa (A), đu đủ (B) và chủng VN3 (C) Trên cơ sở chọn được tỉ lệ phối trộn 4:1, tiến hành nghiên cứu điều kiện phân cắt collagen thô từ gân và da bò trong 7 ngày, để tìm... thô từ chủng L sphaericus VN3: dịch chiết dứa: collagen thô tỉ lệ 2:2:1, thời gian phân cắt 4 ngày, nhiệt độ 30 oC, pH=7 - Tại pH=7 tạo màng collagen tốt nhất, màng tạo thành trong, mịn, có độ dai, khô nhanh - Kết tủa collagenase từ dịch nuôi chủng L sphaericus VN3 và protease từ dứa sử dụng (NH4)2 SO4 với 70 và 60% nồng độ bão hòa Tinh sạch collagenase, protease từ kết tủa dùng sephadex 150 và phân... thành trong, mịn, có độ dai, khô nhanh hơn nên có thể tách khỏi tấm mica sớm hơn dịch ở pH axit hơn Như vậy là collagen sau phân cắt bằng enzym từ chủng VN3 và dứa có thể tạo được thành màng tại pH =7, vấn đề đặt ra là sản phẩm màng hướng tới ứng dụng trong điều trị nên cần phải sạch Bước nghiên cứu tiếp theo là tinh sạch enzym, sau đó dùng cho phân cắt keo collagen thô 20 Hình 13 Thí nghiệm tạo màng collagen. .. được trên bảng 9 và 10 cho thấy hàm lượng (NH 4)2SO4 thích hợp cho kết tủa enzym từ dịch nuôi chủng VN3 và dịch chiết cuống dứa là 70 và 60% nồng độ bão hòa Tại đó lượng protein kết tủa nhiều nhất, hoạt tính enzym thu được cao nhất Bảng 9 Hàm lượng protein và hoạt tính collagenase trong dịch tủa Nồng độ Protein Tổng Collagenase Tổng Hoạt tính (NH4)2SO4 (mg/ml) protein (U/ml) collagenase collagenase (%)

Ngày đăng: 24/12/2014, 16:01

Từ khóa liên quan

Mục lục

  • Nhân giống vi khuẩn cho lên men

  • Phương pháp lên men

Tài liệu cùng người dùng

Tài liệu liên quan