Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT Trương Ba Hùng NGHIÊN CỨU VÀ HOÀN THIỆN QUY TRÌNH SẢN XUẤT CHẾ PHẨM BỔ SUNG NEO-POLYNUT Chuyên ngành: Vi sinh vật Mã số: 60 42 40 LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS. PHẠM VIỆT CƯỜNG Hà Nội - 2010 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn MỤC LỤC Mở đầu 1 Chương I: Tổng quan tài liệu 3 1. Giới thiệu sơ lược về beta – glucan 3 1.1. Tình hình nghiên cứu beta-glucan trong và ngoài nước 3 1.2. Nguồn nguyên liệu chứa -glucan 4 1.3. Ứng dụng của -glucan 4 1.3.1. Ứng dụng trong thực phẩm 4 1.3.2. Ứng dụng  -glucan trong y dược, mỹ phẩm 5 1.3.3. Ứng dụng trong nuôi trồng thủy sản 6 2. Probiotics 7 2.1. Định nghĩa probiotics 7 2.2. Cơ chế tác động của probiotics 8 2.2.1. Sinh tổng hợp ra các chất kháng khuẩn 8 2.2.2. Cạnh tranh vị trí gắn kết 10 2.2.3. Cạnh tranh nguồn dinh dưỡng 11 2.2.4. Kích thích miễn dịch 11 2.3. Vi sinh vật probiotics 12 2.3.1. Vi khuẩn lactic 12 2.3.2. Bacillus spp 13 2.4. Các tiêu chuẩn chọn vi khuẩn probiotics 14 2.5. Ứng dụng của probiotics … 15 2.5.1. Trong thực phẩm và dược phẩm 15 2.5.2. Nông nghiệp 19 2.5.2.1. Nuôi trồng thủy hải sản. 19 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 2.5.2.2. Chăn nuôi 22 Chương II: Vật liệu và phương pháp nghiên cứu 27 2.1. Vật liệu 27 2.2 . Phương pháp nghiên cứu 29 Chương III: Kết quả 31 3.1. Hoàn thiện công nghệ lên men thu nhận sinh khối chủng saccharomyces cerevisiae 1 31 3.1.1. Lựa chọn môi trường tối ưu 31 3.1.2. Khảo sát các điều kiện tăng trưởng tối ưu 32 3.2. Hoàn thiện lên men các chủng probiotics bổ sung 35 3.2.1. Hoàn thiện công nghệ lên men thu nhận sinh khối chủng 35 3.2.1.1. Kết quả xác định đường cong sinh trưởng vi khuẩn l. acidophilus trong hai môi trường MRS và dịch chiết dứa tối ưu. 35 3.2.1.2. Kết quả xác định sự thay đổi pH theo thời gian của hai môi trường MRS và dịch chiết dứa tối ưu 36 3.2.1.3. Kết quả xác định hàm lượng đường giảm theo thời gian của hai môi trường lên men MRS và dịch chiết dứa tối ưu 37 3.2.1.4. Kết quả so sánh khả năng ức chế vi sinh vật chỉ thị của dịch nuôi cấy l. acidophilus trong môi trường MRS và dịch chiết dứa tối ưu. 39 3.2.1.5. Nghiên cứu trạng thái nuôi cấy 42 3.2.2. Hoàn thiện công nghệ lên men thu nhận sinh khối chủng bacillus subtilis B1 43 3.2.2.1. Xác định đường cong sinh trưởng của chủng bacillus subtilis B1 trên 2 loại môi trường 43 3.2.2.2. Nghiên cứu ảnh hưởng của một số yếu tố đến quá trình sinh trưởng của vi khuẩn bacillus subtilis 46 3.2.3. Hoàn thiện công nghệ tách chiết thu hồi thành tế bào Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn từ sinh khối saccharomyces cerevisie 53 3.2.4. Hoàn thiện công nghệ tách beta-glucan từ thành tế bào làm nguyên liệu cho thực phẩm chức năng 54 3.2.5. Hoàn thiện công nghệ thủy phân nấm men thu hồi acid amin tự do và protein 55 3.2.5.1. Tách thu hồi protein từ dịch tế bào nấm men 56 3.2.5.2. Thủy phân protein tách axit amin tự do 57 3.2.6. Hoàn thiện và ổn định công nghệ sản xuất chế phẩm thức ăn bổ sung phục vụ chăn nuôi và nuôi trồng thủy sản 58 Sơ đồ quy trình công nghệ sản xuất chế phẩm chức năng cho chăn nuôi và nuôi trồng thủy sản 62 Chương IV. Kết luận 67 Tài liệu tham khảo 68 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1: Mật độ tế bào của chủng nấm men S.cerevisae 1 trên hai môi trường nghiên cứu. Bảng 3.2: Ảnh hưởng của pH ban đầu lên sinh khối S.cerevisiae1 sau 30 giờ Bảng 3.3: Ảnh hưởng của nhiệt độ đến sự phát triển của chủng S. cerevisiae1 Bảng 3.4: Mật độ tế bào của chủng S.cerevisiae1 sau khoảng thời gian lên men Bảng 3.5: Các thông số tối ưu lên men thu hồi sinh khối chủng S.cerevisiae1 Bảng 3.6: Tính toán giá thành cho 1 lít môi trường dịch chiết dứa tối ưu (2009) Bảng 3.7: Xác định mật độ L.acidophilus VN1 dưới các trạng thái nuôi khác nhau Bảng 3.8 Mật độ chủng vi khuẩn nghiên cứu trong các loại môi trường khác nhau theo thời gian Bảng 3.9. Sinh khối của chủng vi khuẩn nghiên cứu theo thời gian Bảng 3.10. Sinh khối của chủng vi khuẩn nghiên cứu với các nguồn cacbon khác nhau Bảng 3.11. Ảnh hưởng của nguồn nitơ lên sinh trưởng của chủng vi khuẩn nghiên cứu Bảng 3.12. Ảnh hưởng của nhiệt độ nuôi cấy lên sinh trưởng của B.subtilis Bảng 3.13. Sinh khối của chủng vi khuẩn nghiên cứu dưới các điều kiện pH ban đầu khác nhau Bảng 3.14: Đánh giá sự phát triển của B.subtilis B1 Bảng 3.15: Điều kiện lên men tối ưu cho 2 chủng probiotics Bảng 3.16: Thực hiện thu hồi và sản xuất nguyên liệu bột probiotic Bảng 3.17: Hàm lượng protein và hexose trong sản phẩm glucan tách chiết từ thành tế bào của chủng nấm men nghiên cứu Bảng 3.18: Ảnh hưởng của pH đến hàm lượng protein thu được trong dịch thủy phân Bảng 3.19: Ảnh hưởng của nhiệt độ trong quá trình thủy phân thu nhận axit amin Bảng 3.20: Thông số lên men của các chủng vi sinh vật probiotic Bảng 3.21: Đánh giá khả năng sấy phun Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Bảng 3.22: Công thức phối trộn cho 100 kg sản phẩm NEO-POLYNUT DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 3.1: Mối tương quan giữa pH ban đầu của môi trường đến sinh khối chủng S.cerevisiae1 Hình 3.2: Ảnh hưởng của nhiệt độ đến sinh trưởng của chủng S. cerevisiae1 Hình 3.3: Đường cong sinh trưởng của S.cerevisiae1 Hình 3.4: Đồ thị biểu diễn đường công sinh trưởng của vi khuẩn L. acidophilus nuôi trong hai môi trường MRS và dịch chiết dứa tối ưu Hình 3.5: Đồ thị biểu diễn sự thay đổi pH theo thời gian của hai môi trường lên men MRS và dịch chiết dứa tối ưu Hình 3.6: Đồ thị biểu diễn mối quan hệ giữa hàm lượng đường và OD Hình 3.7: Đồ thị biểu diễn hàm lượng đường tổng thay đổi theo thời gian lên men của hai môi trường MRS và dịch chiết dứa tối ưu Hình 3.8: Môi trường dịch chiết dứa tối ưu không sinh H 2 O 2 Hình 3.9 : Đồ thị biểu diễn khả năng ức chế vi sinh vật chỉ thị (E.coli) của dịch nuôi cấy L. acidophilus trên môi trường MRS và dịch chiết dứa tối ưu Hình 3.10. Đồ thị đường cong sinh trưởng của chủng Bacillus subtilis B1 trong MT1 Hình 3.11. Đồ thị đường cong sinh trưởng của chủng Bacillus subtilis B1 trong MT2 Hình 3.12. Biểu đồ biểu hiện ảnh hưởng của các nguồn cacbon khác nhau tới sinh khối của B.subtilis B1 Hình 3.13. Biểu đồ biểu hiện ảnh hưởng của các nguồn nitơ khác nhau tới tích luỹ sinh khối 15 20 24 20 43 48 63 68 73 78 7X10 9 4X10 9 7X10 9 7X10 9 7X10 9 7X10 9 7X10 9 7X10 9 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 1 MỞ ĐẦU Việc kết hợp giữa các chất có hoạt tính sinh học và các chủng probiotic trong các công nghệ sản xuất chế phẩm sinh học phục vụ đời sống nói chung và trong sản xuất nông nghiệp nói riêng hiện đang là hướng đi tích cực và có tính khả quan. Các chất có hoạt tính sinh học đang được rất nhiều nhà khoa học trên thế giới cũng như trong nước quan tâm trong đó có polysaccharide. Polysaccharide là thành phần quan trọng trong phần lớn các chất trùng hợp sinh học (biopolymer), chúng có vai trò chính trong việc tạo cấu trúc và tính toàn vẹn của vi khuẩn và nấm (Bohn & Bemiller, 1995, Sakurai et al., 1996, Vetvika et al., 1997).  -glucan là một polysaccharide cũng rất được chú ý bởi những đặc tính sinh học của nó có, như hiệu quả mạnh trong việc củng cố hoạt động của miễn dịch không đặc hiệu, có đặc điểm kháng khối u mạnh, có hiệu ứng kháng virut và kháng khuẩn, và cuối cùng chúng giúp cho vết thương mau lành và chống nhiễm sau khi bị thương hoặc sau khi phẫu thuật. Bên cạnh đó việc sử dụng các chế phẩm sinh học bổ sung vào thức ăn chăn nuôi để cải thiện năng suất, thay thế kháng sinh , hóa dược và nâng cao chất lượng sản phẩm chăn nuôi đang là một su hướng tất yếu của các nước trong khu vực và trên thế giới (Hill, 1990; Charteris và cs,1998; Chang và cs, 2001). Trong nước đã có những nghiên cứu sản xuất probiotic bổ sung vào thức ăn để giảm tiêu chảy, cải thiện khả năng tiêu hóa (Phạm Văn Toản,1996; Đỗ Trung Cứ và cs, 2000; Phan Ngọc Kính, 2001; Nguyễn Như Pho và Trần Thị Thu Thủy, 2003; Võ Thị Hạnh, 2003). Nhưng các nghiên cứu này mới là bước đầu, chưa có sự hợp tác triệt để giữa các chuyên gia công nghệ vi sinh và dinh dưỡng thức ăn để tạo ra sản phẩm có tính ổn định cao và sử dụng hiệu quả cho vật nuôi [7]. Hiện nay ở Việt nam việc kết hợp giữa các nhóm vi khuẩn probiotic và -glucan để tạo chế phẩm bổ sung thức ăn chăn nuôi vẫn là một hướng nghiên cứu còn nhiều mới mẻ. Do đó chúng tôi lựa chọn đề tài : “Nghiên cứu và hoàn thiện quy trình sản xuất chế phẩm bổ sung NEO-POLYNUT”, nhằm hướng tới mục đích tạo ra một chế Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 2 phẩm sinh học chức năng, bổ sung vào thức ăn chăn nuôi giúp tăng khả năng chuyển hóa thức ăn, tăng cường hệ thống miễn dịch cho vật nuôi, hạn chế các nguy cơ gây bệnh, và giảm chi phí chăn nuôi thông qua việc giảm hệ số tiêu thụ thức ăn. Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 3 CHƢƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1. Giới thiệu sơ lƣợc về Beta - Glucan 1.1. Tình hình nghiên cứu beta-glucan trong và ngoài nƣớc Từ đầu những năm 1970, một số viện nghiên cứu ở Nhật Bản đã thử tách chiết -glucan từ nấm lớn và nó trở thành hướng chính ở Nhật Bản. Những năm gần đây, beta-glucan phân lập từ thành tế bào nấm men ngày càng được chú ý. Các hợp chất này có nhiều hoạt tính sinh học khác nhau như tăng cường miễn dịch, kháng khối u và là tác nhân bảo vệ phóng xạ, kích thích hệ thống miễn dịch (Bohn & Bemiller 1995, Sakurai et al. 1996, Vetvika et al. 1997). Theo Paulsen et al. (2001, 2003) sử dụng -glucan nấm men cho cá hồi Atlantic và cá hồi cầu vồng sẽ làm tăng hoạt tính lysozym huyết thanh của chúng. Khoa Công nghệ Sinh học, trường tổng hợp Hàn Quốc đã tách chiết được glucan tan trong kiềm từ thành tế bào Sacchromyces cerevisiae chủng dại và chủng đột biến có độ tinh sạch cao (Ha et al.,2002). Thái Lan, cũng như Australia, beta-glucan cũng đã được chiết từ nấm men và sử dụng như một chất kích thích miễn dịch tiềm năng cho Penaeus monodon và Salmo salar L. (Suphantharika et al., 2003, Paulsen et al., 2000). Ngoài ra, ở nhiều nước khác như Nhật Bản, Mỹ, Canađa, Tiệp Khắc, Nga cũng tiến hành khá nhiều nghiên cứu trong lĩnh vực này phục vụ nuôi trồng thuỷ sản. Trong giai đoạn 2004-2005 của chương trình công nghệ sinh học, với sự tài trợ của đề tài KC-04-28, lần đầu tiên ở Việt Nam, nhóm nghiên cứu thuộc Viện Công nghệ sinh học đã bắt tay nghiên cứu quy trình công nghệ tách chiết -glucan từ thành tế bào Sacchromyces cerevisiae, bước đầu đã thu được sản phẩm có độ tinh khiết cao. Sản phẩm beta-glucan từ chủng nấm men S.cerevisiae 1 chỉ có một loại mạch bêta-1,6. Sản phẩm beta - glucan từ chủng nấm men S.cerevisiae 3 có hai loại mạch bêta-1,6 và bêta- 1,3. Chế phẩm Bêta glucan từ chủng S.cerevisiae 1 có trên 80% hexoza và 0.99% protein. Chế phẩm beta - glucan từ chủng S.cerevisiae 2 và S.cerevisiae 3 có hàm lượng protein khoảng 1,2% và hơn 50% hexoza. Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 4 Chế phẩm -glucan được thử nghiệm trên chuột có tác dụng phục hồi số lượng tế bào bạch cầu máu ngoại vi và khả năng thực bào của đại thực bào ổ bụng của động vật gây suy giảm miễn dịch thực nghiệm bằng chiếu xạ. Chế phẩm  - glucan từ chủng S.cerevisiae 1 có tác dụng tốt đối với hệ thống miễn dịch không đặc hiệu ở nồng độ nghiên cứu. Hiện nay, Liên hiệp Khoa học sản xuất Công nghệ sinh học và Môi trường đã sử dụng beta - glucan trong chế phẩm Neo-Polynut phục vụ chăn nuôi và nuôi trồng thủy sản. Chế phẩm Neo-Polynut đã được Bộ thủy sản công nhận chất lượng và cho phép sản xuất lưu hành. 1.2. Nguồn nguyên liệu chứa -glucan Glucan thu được từ các nguồn khác nhau như: thực vật, tế bào nấm men, nấm nói chung được miêu tả như polymer của glucoza. Glucan có một số hoạt tính sinh học như hoạt hóa hệ miễn dịch, chống ung thư, kích thích sinh trưởng. -glucan tìm thấy trong nấm lớn có phân nhánh chỉ với một phân tử glucoza và chỉ tăng cường miễn dịch đến một mức nào đó. Bên cạnh đó, - glucan chiết từ thành tế bào nấm men bánh mỳ phân nhánh rất mạnh và nó có khả năng tăng hoạt tính miễn dịch mạnh nhất trong tất cả các loại - glucan. -1,3-D-Glucan đã được chiết từ thành tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae và được đặt tên vào đầu năm 1960 bởi nhóm nghiên cứu ở Mỹ (trường Tổng hợp Tulane, khoa Y học, chuyên ngành sinh lý học). -Glucan đã được tách chiết từ các chủng nấm men như Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces delbrueckii, Candida albicans, Candida cloacae, Candida tropicalis, Hansenula henricii Đặc biệt - Glucan đã được tách từ xác nấm men lên men bia với nồng độ Glucan lên tới 92%. 1.3. Ứng dụng của -glucan 1.3.1. Ứng dụng trong thực phẩm - Cung cấp nguồn xơ thực phẩm. [...]... vật gây bệnh ở heo đã được nghiên cứu rộng rãi và khuyến khích sử dụng Kế hoạch HEALTHYPIGUT của EU đề ra vào giữa 2001 và 2004, trong nghiên cứu này có sự kết hợp giữa nấm và Pediococccus acidilactici bổ sung vào trong chế độ ăn của heo con, kết quả giúp hòan thiện chức năng mô cơ trong hệ tiêu hóa heo con [43] Baird (1977) đã nghiên cứu thành công bổ sung lactobacillus vào thức ăn giúp tăng trọng... hoá còn phụ thuộc vào chế độ dinh dưỡng trong cơ thể Trong cơ thể luôn tồn tại các vi khuẩn cơ hội, khi gặp điểu kiện thuận lợi nó sẽ phát triển đủ số lượng và gây độc cho cơ thể Vi khuẩn probiotics được rộng rãi trong các sản phẩm khác nhau trên khắp thế giới, chúng được bổ sung vào thực phẩm, tạo ra các chế phẩm thuốc và bổ sung vào thức ăn cho vật nuôi Thực phẩm probiotics là thực phẩm chứa các vi... khuẩn sản sinh ra acid lactic Từ xưa con người đã biết cách sử dụng các vi khuẩn có lợi bổ sung vào các sản phẩm lên men, chủ yếu thuộc loài L casein và một vài chủng L acidophilus Cách đây khoảng 40 năm và 30 năm ở Đức vi khuẩn lactic đã được ứng dụng bổ sung vào trong các sản phẩm sữa lên men Hai loài “Lactobacillus acidophilus” và “Bifidobacterium bifidum” được giới thiệu rất phổ biến ở Đức vào cuối... 29-99 và Streptococcus iniae 00-318 kết quả cho thấy Aeromonas sobria GC2 có khả năng kháng Lactococcus garvieae 2999 và Streptococcus iniae 00-318 ( là hai chủng gây bệnh chết ở cá hồi và được phân lập Viện Nghiên Cứu Thủy Sản ) Sau đó tiến hành thực nghiệm, bổ sung thức ăn cá hồi bị bệnh với liều lượng 5x10-7 tế bào/ gam thức ăn, kết quả thiệt hại 75% đến 100% khi không bổ sung probiotics vào thức... [38] Dựa vào khả năng sinh bacteriocins của Lactobacillus, mà Lactobacillus được sử dụng rất nhiều trong các sản phẩm rau quả, thịt, và cá lên men Khả năng sinh bacteriocins của lactobacillus được khám phá vào 1975, và nhiều loại bacteriocins khác đã được biết đến Hiện nay lactobacillus được ứng dụng rộng rãi trong các sản phẩm cá, bơ sữa, và thịt trong vấn đề bảo quản và nâng cao chất lượng sản phẩm Hầu... biện pháp tốt nhất là sử dụng probiotics trong phòng và chữa bệnh ở tôm Probiotics được dùng với nhiều hình thức như tiêm trực tiếp, bom vào đường ruột, nhúng vào dung dịch probiotics, bổ sung vào thức ăn Phương pháp hữu hiệu nhất là nhúng tôm vào dung dich probiotics ( tôm ở giai đoạn ấu trung hoặc bổ sung vào thức ăn hàng ngày cho tôm) - Vi khuẩn và nấm được sử dụng nhiều nhất có vai trò như probiotics... đường tiêu hóa và hô hấp Sử dụng S cerevisiae và A oryzae được sử dụng trộn lẫn vơi nhau trong thức ăn làm tăng lượng sữa tiết ra ở bò cái Một số nghiên cứu sử dụng probiotics bổ sung vào thức ăn làm tăng lượng chất khô, năng suất sữa và một số thành phần quan trọng trong sữa Tuy nhiên một khuynh hướng tốt để hòan thiện khả năng phát triển và tiết nhiều sữa bằng cách kết hợp giữa probiotics và prebiotic,... Agar ủ 24h ở 300C Kết quả cho thấy vòng kháng của hai chủng C2 và B6 có vòng phân giải lớn nhất là 8.0 ± 0.5mm và 6.0 ± 0.6 [13].Theo nghiên cứu của Lara-Flores et al (2003), ông sử dụng hai chủng probiotics là nấm ( Saccharomyces cerevisiae) bổ sung vào thức ăn cho cá bột Nile tilapia (Oreochromis niloticus), kết quả nghiên cứu giảm tỷ lệ chết ở cá bột, cá tăng trưởng nhanh hơn [15] 2.5.2.2 Chăn nuôi... giảm khả năng hoạt động của vi khuẩn phân hủy urê, tổng hợp vitamin, kích thích hệ thống miễn dịch, duy trì hệ vi sinh đường ruột, hòan thiện hệ tiêu hóa [43] Những sản phẩm probiotics đã được biệt đến rất nhiều qua các sản phẩm sữa lên men và sản phẩm bơ sữa Các sản phẩm probiotics được ứng dụng trong chăn nuôi ở các nộng trại chỉ được giới thiệu cách nay khoảng hai thập niên với mong đợi là giúp nâng... chất và sau đó enzyme được tiết ra gây trở ngại cho quá trình trao đồi chất của vi khuẩn gây bệnh Một vài vi khuẩn thuộc chi Bifidobacteria cũng có khả năng sản xuất ra bacteriocins gây độc cho cả vi khuẩn gram âm và gram dương Đặc biệt probiotics còn kích thích các tế bào biểu mô ruột sản xuất ra các chất kháng khuẩn [37] Acid hữu cơ cũng có tác dụng ức chế sự phát triển của vi khuẩn gây bệnh, được sản . 3.2.6. Hoàn thiện và ổn định công nghệ sản xuất chế phẩm thức ăn bổ sung phục vụ chăn nuôi và nuôi trồng thủy sản 58 Sơ đồ quy trình công nghệ sản xuất chế phẩm chức năng cho chăn nuôi và nuôi. BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT Trương Ba Hùng NGHIÊN CỨU VÀ HOÀN THIỆN QUY TRÌNH SẢN XUẤT CHẾ PHẨM BỔ SUNG NEO-POLYNUT. một hướng nghiên cứu còn nhiều mới mẻ. Do đó chúng tôi lựa chọn đề tài : Nghiên cứu và hoàn thiện quy trình sản xuất chế phẩm bổ sung NEO-POLYNUT , nhằm hướng tới mục đích tạo ra một chế Số