Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT o0o NGUYỄN VĂN TRỮ NGHIÊN CỨU CHỌN TẠO DÒNG MÍA HÀM LƢỢNG ĐƢỜNG CAO BẰNG CHỈ THỊ SSR LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC Hà Nội, 2012 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT o0o NGUYỄN VĂN TRỮ NGHIÊN CỨU CHỌN TẠO DÒNG MÍA HÀM LƢỢNG ĐƢỜNG CAO BẰNG CHỈ THỊ SSR Chuyên ngành : Công nghệ Tế bào Thực vật Mã số : 60. 42. 30 LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN: TS. LÊ THỊ BÍCH THỦY Hà Nội, 2012 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn LỜI CẢM ƠN Để có thể hoàn thành được luận văn tốt nghiệp này, tôi xin bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc tới TS. Lê Thị Bích Thủy, Trưởng Phòng Di truyền Tế bào Thực vật - Viện Công nghệ Sinh học, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam đã tạo mọi điều kiện, tận tình hướng dẫn và giúp đỡ tôi trong suốt thời gian qua. Tôi muốn gửi lời cảm ơn đến Ban Lãnh đạo Viện Công nghệ Sinh học, Ban lãnh đạo Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật, Ban giám hiệu Trường Đại học Thái Nguyên, cùng các thầy cô giáo tham gia giảng dạy đã tạo mọi điều kiện giúp đỡ, truyền đạt kiến thức cho tôi trong suốt quá trình học tập và nghiên cứu. Bên cạnh đó, tôi cũng đã nhận được sự ủng hộ nhiệt tình và các ý kiến đóng góp của các anh chị, các bạn đồng nghiệp của phòng Di truyền Tế bào Thực vật. Nhân dịp này, tôi xin chân thành cảm ơn sự giúp đỡ quý báu đó. Cuối cùng, tôi xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè và người thân đã luôn ở bên cạnh chia sẻ, động viên, giúp đỡ và tạo điều kiện tốt nhất cho tôi học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn của mình. Hà nội, ngày 20 tháng 12 năm 2012 Học viên Nguyễn Văn Trữ Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn này là hoàn toàn trung thực. Mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn này đã được cảm ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn đã được chỉ rõ nguồn gốc. Nguyễn Văn Trữ Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn MỞ ĐẦU Mía (Saccharum L.) thuộc chi mía (Saccharum), họ hòa thảo (Poaceae), bộ lúa (Poal.,es), lớp một lá mầm (Monocotyledoneae). Chúng là những cây có thân to, mập, chia đốt cao từ 2 - 6 m. Tất cả các giống mía đang đượ c trồ ng trên thế giới đều được lai tạo từ 2 loài S. officinarum và S. Spontaneum. Việc sử dụng hạn chế nguồn vật liệu cho lai tạo trong suốt một thời gian dài làm cho các giống mía hiện đại có quan hệ rất gần gũi về mặt di truyền. Ngày nay, mía được trồng trên 200 quốc gia và vùng lãnh thổ. Cây mía trở thành một trong những cây công nghiệp quan trọng của ngành công nghiệp sản xuất đường. Ngoài ra, mía còn là loại cây có tác dụng bảo vệ đất rất tốt, đặc biệt là chống xói mòn đất cho các vùng đồi trung du. Hơn nữa, mía là cây rễ chùm và phát triển mạnh trong tầng đất từ 0 - 60 cm (1 ha mía tốt có thể cho 13 - 15 tấn rễ sau thu hoạch), đây là nguồn chất hữu cơ quý làm tăng độ phì của đất. Phần bã mía chứa nhiều cellulose có thể dùng làm nguyên liệu đốt lò, hoặc làm bột giấy, bìa các tông, ép thành ván dùng trong kiến trúc Sản phẩm cặn bã còn lại sau khi chế biến đường (bùn lọc) có thể sử dụng để sản xuất nhựa, xêrin, làm sơn, xi đánh giầy phế phẩm còn lại dùng làm phân bón rất tốt. Trong tương lai bã mía còn có thể làm nguồn nguyên liệu sản xuất bột giấy, làm sợi thay thế các loại cây rừng bị giảm đi. Ở Việt Nam, mía được coi là cây trồng chủ đạo trong ngành công nghiệp đường của cả nước. Bên cạnh đó, cây mía cũng góp phần xóa đói giảm nghèo ở nhiều vùng trung du, miền núi nước ta (Nguyễn Đức Quang và công sự. 2005). Hiện nay, nước ta có tới trên 60% các giống mía là những giống cũ như: ROC1, ROC10, F156, F127… hoặc các dạng cây lai ghép nội chi phức tạp (Nguyễn Thị Bạch Mai và công sự. 2005), mặc dù các giống này có đặc điểm dễ canh tác, thích nghi rộng với nhiều vùng sinh thái của Việt Nam, nhưng trữ lượng đường rất thấp, đang đứng trước nguy cơ suy thoái nguồn gen và giống cây trồng. Đối với các giống mía nhập nội tuy có trữ lượng đường cao nhưng không phù hợp với khí hậu Việt Nam, dễ bị nhiễm bệnh. Để làm giảm đến mức tối thiểu những hậu quả xấu của S. Spontaneum và duy trì khả năng cho sucrose cao của S. officinarum. Một loạt Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn phép lai ngược đã được thực hiện giữa con lai triể n vọ ng vớ i loà i S . officinarum. Điề u nà y bướ c đầ u man g lạ i nhữ ng thà nh công trong việ c cả i thiệ n hà m lượ ng đườ ng, kháng bệnh và khả năng mọc chồi cao . Tuy nhiên, về sau do gầ n nhau v ề mặt di truyền nên nhữ ng tiế n bộ trong việ c lai mí a tạ o hầ u như không đượ c cả i thiệ n (Sreenivasan et al., 1987; Lima et al., 2002; Pan et al., 2004). Thêm và o đó , việ c cá c giố ng có nguồ n gố c di truyề n gầ n nhau khi bị nhiễ m tá c nhân gây bệ nh mớ i khả năng bù ng phá t th ành dịch trên diện tích r ộng và nhanh chóng là rất cao , điề u này gây thiệ t hạ i lớ n (Đỗ Ngọc Diệp và cộng sự. 2005). Do vậ y, yêu cầ u cấ p thiế t lú c này với ngành mí a đườ ng là nghiên cứ u đa dạ ng di truyề n cá c giố ng mí a , để làm nguồn vật liệu cho lai tạo. Mặc dù vậy, việc chọ n lọ c cá c cá thể c ó mức độ đa d ạng di truyền cao dựa trên nguồn gốc địa lý, các tính trạng nông học, theo dõ i ph ả hệ cho kết quả không chính xác, tiêu tốn nhiều thời gian và sức lực. Đánh giá đa dạng di truyền dựa trên các đặc điểm hình thái thường không chính xác do ảnh hưởng bởi môi trường. Vì vậy, việc chọn lựa kỹ thuật để xác định được mối quan hệ di truyền và chọn lọc được các tính trạng mong muốn, mà không ảnh hưởng bởi bất kỳ yếu tố môi trường là hết sức cần thiết cho việc nghiên cứ u đa dạ ng di truyề n. Trong những năm gần đây, nhiều loại chỉ thị ADN đã được sử dụng trong các nghiên cứu chọn giống cây trồng: RADP, RFLP, SSR. Trong đó, kỹ thuậ t SSR đã nhanh chóng trở thành kỹ thuật hữu hiệu và được sử dụng rộng rãi trong các nghiên cứu. SSR đượ c sử dụ ng rộ ng rãi trong nghiên cứu nhờ các đặc tính ưu việt của chúng: sự phân bố rộ ng trong hệ gen , tính di truyền đồng trội , tính lặp lại, bản chất đa allen và vị trí đặc hiệu ở nhiễm sc thể . Ở Việt Nam , việc chọn tạo giống mía hàm lượng đường cao mớ i đượ c tiế n hà nh bằ ng việ c quan sá t cá c tí nh trạ ng hì nh thái: số thân trên khó m, trọng lượng cây, đườ ng kí nh cây, khả năng kháng bệnh dựa trên quan sá t đồ ng ruộ ng và mộ t số chỉ tiêu hó a sinh khá c : hàm lượng đườ ng, độ Pol, độ Brix và xơ dự a trên nguồ n gố c cá c giố ng mí a : Cu Ba , Thái Lan , Trung Quố c Do vậy, xuất phát từ nhu cầu thực tiễn và khoa học, chúng tôi đã chọn đề tài nghiên cứu “Nghiên cứu chọn tạo dòng mía hàm lƣợng đƣờng cao bằ ng chỉ thị phân tử SSR”. Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Mục tiêu của đề tài - Đánh giá đa dạng di truyền của tập đoàn giống mía hàm lượng đường cao được trồng ở Việt Nam. - Chọn được các cặp lai ưu tú với tính trạng hàm lượng đường cao. - Chọn lọc được một số dòng lai ưu tú có hàm lượng đường cao bằng các chỉ thị SSR liên kết với tính trạng hàm lượng đường cao để đem trông khảo nghiệm. Nội dung của đề tài Đề tài sẽ bao gồm một số nội dung chính với các vấn đề cần giải quyết sau: - Đánh giá đa dạng di truyền của tập đoàn 42 giống mía nghiên cứu. - Sử dụng chỉ thị SSR liên kết với tính trạng hàm lượng đường cao để chọn lọc các dòng lai có hàm lượng đường cao. Thời gian và địa điểm nghiên cứu - Thời gian: từ 3/2011 đến 10/2012 - Địa điểm: phòng Di truyền Tế bào Thực vật – Viện Công nghệ Sinh học- Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn PHẦN I. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1. Phân loại, đặc điểm hình thái và sinh trƣởng của mía Mía (Saccharum L.) thuộc chi mía (Saccharum), họ hòa thảo (Poaceae), bộ lúa (Poal.,es), lớp một lá mầm (Monocotyledoneae). Chúng là những cây có thân to, mập, chia đốt cao từ 2 - 6 m. Các loại thực vật trong chi này đa số là các loại cỏ sống lâu năm bao gồm khoảng 6 - 37 loài tùy theo hệ thống phân loại, sống chủ yếu ở khu vực nhiệt đới và ôn đới trên thế giới. Mía được trồng để thu hoạch với mục đích sản xuất đường. Trên cây mía, thông thường phần ngọn sẽ nhạt hơn phần gốc (trong chiết nước mía). Đó là đặc điểm chung của thực vật: chất dinh dưỡng (hàm lượng đường) được tập trung nhiều ở phần gốc (vừa để nuôi dưỡng cây vừa để dự trữ). Đồng thời, do sự bốc hơi nước của lá mía, nên phần ngọn cây lúc nào cũng phải được cung cấp nước đầy đủ cho lá. Tỷ lệ nước ở phần ngọn nhiều hơn phần gốc làm cho ngọn cây mía nhạt hơn. Mía là loại cây nhiệt đới nên đòi hỏi điều kiện độ ẩm rất cao. Nhiệt độ bình quân thích hợp cho sự sinh trưởng của cây mía là 15-26 0 C. Giống mía nhiệt đới sinh trưởng chậm khi nhiệt độ dưới 21 0 C và ngừng sinh trưởng khi nhiệt độ 13 0 C và dưới 5 0 C thì cây sẽ chết. Những giống mía á nhiệt đới tuy chịu rét tốt hơn nhưng nhiệt độ thích hợp cũng giống như mía nhiệt đới. Thời kì nảy mầm mía cần nhiệt độ trên 15 0 C tốt nhất là từ 26-33 0 C. Mía nảy mầm kém ở nhiệt độ dưới 15 0 C và trên 40 0 C. Từ 28-35 0 C là nhiệt độ thích hợp cho mía vươn cao. Sự dao động biên độ nhiệt giữa ngày và đêm liên quan tới tỉ lệ đường trong mía. Giới hạn nhiệt độ thích hợp cho thời kì mía chin từ 15-20 0 C. Vì vậy tỉ lệ đường trong mía thường đạt ở mức cao nhất cho các vùng có khí hậu lục địa và vùng cao. Mía là cây nhạy cảm với ánh sáng và đòi hỏi cao về ánh sáng. Thiếu ánh sáng, mía phát triển không tốt, hàm lượng đường thấp. Mía cần thời gian tối thiểu là 1200 giờ tốt nhất là trên 2000 giờ. Quang hợp của cây mía tỉ lệ thuận với cường độ và độ dài chiếu sáng. Thiếu ánh sáng cây hút phân kém, do đó phân đạm, lân và kali chỉ hiệu quả khi ánh sáng đầy đủ. Vì vậy ở vùng nhiệt đới và á nhiệt đới mía vươn Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn cao mạnh nhất khi bt đầu vào mùa hè có độ dài ngày tăng lên. Chính vì vậy, nó là nhân tố quan trọng quyết định năng suất và sản lượng mía. Mía là cây cần nhiều nước nhưng lại sợ úng nước. Mía có thể phát triển tốt ở những vùng có lượng mưa từ 1500 mm/năm. Giai đoạn sinh trưởng mía yêu cầu lượng mưa từ 100-170 mm/tháng. Khi chín cần khô ráo, mía thu hoạch sau một thời gian khô ráo khoảng 2 tháng sẽ cho tỉ lệ đường cao. Bởi vậy các nước nằm trong vùng khô hạn nhưng vẫn trồng mía tốt còn những nơi mưa nhiều và phân bố đều trong năm thì việc trồng mía không hiệu quả. Gió bão làm cây đổ dẫn đến làm giảm năng suất, giảm phẩm chất của cây. Chính vì vậy gió cũng là dấu hiệu quan trọng trong công tác dự báo lên kế hoạch và chế biến làm sao tốn ít chi phí mà giá trị sản xuất cũng như phẩm chất của mía nguyên liệu vẫn cao. 1.2. Diện tích và năng suất trồng mía ở Việt Nam và trên thế giới Hiện nay có khoảng 200 quốc gia và vùng lãnh thổ trên thế giới trồng và sản xuất mía đường, sản lượng trung bình đạt khoảng 13.246 triệu tấn (gấp 6 lần so với củ cải đường). Năng suất trung bình của mía trên thế giới năm 2009 khoảng 70,3 tấn trên một hecta. Trong đó, khu vực có năng suất mía tốt nhất là các nông trại mía ở Peru với năng suất trung bình khoảng 125,5 tấn trên một hecta. Brazil là quốc gia trồng mía lớn nhất thế giới, với sản lượng hàng năm khoảng 672.000.000 tấn một năm, năng suất trung bình khoảng 87 tấn trên hecta (Food And Agricultural Organization of United Nations. 2009). Bảng 1: Sản lượng mía của 10 nước đứng đầu thế giới năm 2009 Tên quốc gia Sản lượng (tấn) Brazil 672,157,000 india 285,029,000 Thái lan 66,816,400 Pakistan 50,045,400 Mexico 49,492,700 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Colombia 38,500,000 Philippines 32,500,000 Australia 30,284,000 Argentina 29,000,000 Tổng sản lƣợng mía thế giới 1,743,068,525 Ở Việt Nam, mía là cây trồng chủ đạo trong ngành công nghiệp đường của cả nước. Theo số liệu thống kê diện tích mía cả nước năm 2012 là 283,222 ha, tăng hơn vụ trước 11,822 ha, diện tích mía của 25 tỉnh có nhà máy đường cung cấp cho các nhà máy chế biến niên vụ 2011/2012 là 270,961 ha. Năng suất mía bình quân cả nước đạt 61,7 tấn/ha tăng so với vụ trước gần 2 tấn/ha, sản lượng mía cả nước được 17,5 triệu tấn. Sản lượng mía ép công nghiệp đạt 14,5 triệu tấn, sản xuất được 1.306.240 tấn đường. So với vụ trước, lượng mía ép công nghiệp tăng gần 2 triệu tấn, sản lượng đường tăng 155,780 tấn. Mía được phân bố chủ yếu ở các vùng sinh thái sau đây: Đồng bằng Sông Hồng, Đông Bc, Tây Bc, Bc Trung Bộ, Duyên Hải Nam Trung Bộ, Tây Nguyên, Đông Nam Bộ và Đồng bằng sông Cửu Long. Diện tích trồng mía tập trung ở vùng Bc Trung bộ, Đông Nam bộ và đồng bằng sông Cửu Long. Các tỉnh miền núi phía Bc và đồng bằng sông Hồng có diện tích trồng mía ít, phân tán năng suất thấp. Về chất lượng mía, Theo báo cáo của các đơn vị chế biến đường: chữ đường cao nhất ở Công ty CP mía đường Sông Con là 11,8 CCS và thấp nhất ở Công ty CP NIVL là 8,0 CCS còn lại hầu hết dao động trong khoảng từ 8,5 đến 10 CCS. Trên cơ sở kết quả lượng mía đưa vào chế biến và lượng đường thu được thì trữ lượng đường bình quân khi chế biến đạt khoảng 9,6 CCS giảm hơn năm 2011(Báo cáo hiện trạng và giải pháp phát triển ổn định ngành Mía đường 2012). [...]... đặc trưng và các chỉ tiêu liên quan đến hàm lượng đường, đã chọn lọc được 2 chỉ thị có khả năng nhận biết các dòng mía có hàm lượng đường cao Các băng đặc trưng của 2 chỉ thị có kích thước là: 230 và 500 bp Ngoài ra, còn có một chỉ thị có khả năng nhận biết dòng có hàm lượng đường thấp, với sự có mặt của băng đặc trương kích thước khoảng 920 bp Một số bản đồ chỉ thị phân tử của cây mía đã được lập (Ming... http://www.lrc-tnu.edu.vn mía Chúng không những giúp hạn chế khối lượng mía cần vận chuyển mà còn giảm lượng bã mía trong quá trình nghiền Kết quả nghiên cứu ghi nhận trong khoảng 1 tấn bã mía có chứa trung bình 20 kg sucrose Tuy nhiên, việc đốt mía trước khi thu hoạch cũng làm ảnh hưởng đến chất lượng mía bảo quản Điều này được chứng minh qua sự sụt giảm hàm lượng đường trong các mẫu mía Hàm lượng đường giảm ở mẫu mía. .. 2010) Điều này cho phép sử dụng chỉ thị phân tử trong chọn tạo giống mía có hàm lượng đường cao Với việc sử dụng một loạt các chỉ thị phân tử như AFLP, SRAP, TRAP Alwala và cộng sự (2009) đã phát hiện ra một số chỉ thị liên kết với một số tính trạng liên quan đến hàm lượng đường ở thời kỳ sinh trưởng sớm cũng như muộn của mía Liên quan đến khả năng tích lũy sucrose trong cây mía chín, Lingle và Irvine... dụng chỉ thị phân tử trong chọn giống là sự phát triển mạnh mẽ về loại cũng như số lượng chỉ thị phân tử Các loại và số lượng chỉ thị phân tử rất phong phú và đa dạng Chỉ thị phân tử phân bố khắp nơi trong hệ gen, với các đặc tính riêng cho từng cá thể cũng như từng quần thể 1.4.2 Tiêu chuẩn của chỉ thị phân tử sử dụng trong chọn giống Trong thực tế có rất nhiều loại chỉ thị, ngay trong một loại chỉ thị. .. centimorgan (cM) Một chỉ thị sẽ được sử dụng trong chọn lọc khi khoảng cách tới gen đích < 5 cM 1.5 Chỉ thị SSR Trong những năm gần đây, chỉ thị phân tử đã được ứng dụng rãi trong chọn giống cây trồng nhờ những đặc điểm ưu việt và hiệu quả mà chúng mang lại Chỉ thị phân tử được sử dụng trong nhiều lĩnh vực: nghiên cứu đa dạng di truyền, lập bản đồ liên kết tính trạng, chọn lọc phân tử, nghiên cứu di truyền... triển chỉ thị SSR Chỉ thị SSR được ứng dụng rất nhiều trong chọn giống cây trồng Tuy nhiên, sự phát triển của chúng mới chỉ tập trung vào một số loại cây trồng Nguyên nhân của sự hạn chế này là do việc xây dựng và phát triển chỉ thị này trên một đối tượng mới gặp nhiều khó khăn Theo phương pháp truyền thống, để xây dựng được một chỉ thị SSR cho một loài mới cần có một thư viện genome của loài đó Chỉ thị. .. tạo giống (Breseghello et al., 2006b) 1.6 Thành tựu nghiên cứu chọn giống mía có hàm lƣợng đƣờng cao nhờ sự trợ giúp của chỉ thị phân tử 1.6.1 Thành tựu nghiên cứu đa dạng di truyền các giống mía Hiệu quả của các chương trình lai tạo phụ thuộc nhiều vào mức độ đa dạng di truyền của bố me Phương pháp đánh giá mức độ đa dạng di truyền bằng các chỉ thị phân tử đem lại kết quả chính xác hiệu quả, qua đó... chúng như: không cần biết trình tự của đối tượng nghiên cứu, mức độ đa hình của chỉ thị cao, kết quả nghiên cứu chúng được phát triển thành các chỉ thị đặc trưng liên kết với các tính trạng mong muốn Sử dụng 16 cặp mồi AFLP nghiên cứu trên 36 giống mía trồng ở Pháp, Perera và cộng sự thu được thu được tổng cộng 995 băng, số băng trung bình trên mỗi chỉ thị là 62 băng Trong đó có 193 băng đa hình, tỷ... các chỉ thị này cũng chỉ phủ kín 60% genome Những bản đồ này đã được sử dụng để phân tích các QTL bước đầu cho một số tính trạng liên quan đến hàm lượng đường (Ming et al., 2001, 2002b; Hoarau et al., 2002) và phát hiện nhiều QTL đóng góp phần nhỏ sự tích luỹ hàm lượng đường trong cây mía Sự nhận biết những QTL cho việc tăng cường tích luỹ hàm lượng đường có thể cải thiện có hiệu quả chương trình chọn. .. hai dòng i và j n: Tổng số băng thu được Jij: Hệ số tương đồng Jaccard giữa hai dòng i và j Sau đó các mẫu nghiên cứu được xử lý tiếp trong NTSYS – SIMQUAL để tính hệ số tương đồng di truyền và được biểu hiện trên biểu đồ quan hệ di truyền giữa các đối tượng nghiên cứu 2.3.5 Phương pháp phân tích hàm lượng đường Hàm lượng đường được xác định theo chỉ số CCs (content commercial sugar) Để xác định chỉ . giống mía hàm lượng đường cao được trồng ở Việt Nam. - Chọn được các cặp lai ưu tú với tính trạng hàm lượng đường cao. - Chọn lọc được một số dòng lai ưu tú có hàm lượng đường cao bằng các chỉ. đoàn 42 giống mía nghiên cứu. - Sử dụng chỉ thị SSR liên kết với tính trạng hàm lượng đường cao để chọn lọc các dòng lai có hàm lượng đường cao. Thời gian và địa điểm nghiên cứu - Thời gian:. NGHIÊN CỨU CHỌN TẠO DÒNG MÍA HÀM LƢỢNG ĐƢỜNG CAO BẰNG CHỈ THỊ SSR Chuyên ngành : Công nghệ Tế bào Thực vật Mã số : 60. 42. 30 LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN: TS. LÊ THỊ