Sơ lược về lịch sử • Áp dụng trên hoa lan – 1 năm/1 lần. • Nhân qua protocorms, 1,000,000/năm. Chồi phát sinh từ protocorm Tái sinh thành cây hoàn chỉnh Các phương pháp nhân giống vô tính in vitro • Chồi nách • Tạo chồi bất định • Tạo phôi soma Nuôi cấy chồi nách Ngọn Chồi nách trên trục của lá Thân Lá Lựa chọn mẫu nuôi cấy Các đặc tính mong muốn: • Dễ tiệt trùng • Non • Phản ứng tốt với môi trường nuôi cấy • Ngọn (mô phân sinh đỉnh) • Chồi nách • Hạt • Lá Môi trường • Khi cắt mẫu nuôi cấy ra khỏi cây mẹ, lấy đi nguồn dinh dưỡng ⇒ cần phải cung cấp các chất này cho mẫu nuôi cấy. Ngọn - Auxin và Gibberellin Rễ - Nước, vitamins Chất khoáng và cytokinin Lá - Đường, GA Thành phần môi trường • Môi trường khoáng cơ bản • Đường • Vitamins • Nước • Hormon sinh trưởng TV - auxin, cytokinin, GA • Các chất tạo gel • Các thành phần không xác định Đường • Khi nuôi cấy mô thường quang hợp không đủ cung cấp đủ đường ⇒ thêm saccaroza 2-3% w/v. • Glucoza hay hỗn hợp glucoza và fructoza. • Khi nuôi cấy công nghiệp, các nguồn carbon khác (rỉ đường, dịch thủy phân tinh bột) có thể sử dụng. Nuôi cấy tự dưỡng • Sinh trưởng không có nguồn carbon ⇒ cần kích thích quang hợp • Cường độ ánh sáng lớn (90-150µMole/m 2 /s) điều kiện tự nhiên (30-50). • Nồng độ CO 2 lớn (1000ppm) thông thường 369.4ppm. • Ức chế sự nhiễm VSV và cây dễ thích ứng khi chuyển vào nhà kính. Môi trường khoáng cơ bản • Bao gồm các nguyên tố đa lượng (>mg/l) và vi lượng (<mg/l). • Tồn tại rất nhiều môi trường khoáng cơ bản. • Môi trường MS (Murashige và Skoog, 1965) là môi trường nuôi cấy chồi phổ biến nhất. • Môi trường Gamborgs B5 được sử dụng phổ biến cho canh trường huyền phù tế bào (không chứa NH 4 ). Vitamin • Chức năng là các coenzyme (vitamin nhóm B). • Mẫu nuôi cấy càng nhỏ, nhu cầu vitamin càng chính xác. • Thường sử dụng hỗn hợp vitamin (Nicotinic acid, glycine, Thiamine, pyridoxine). • Inositol thường sử dụng với nồng độ lớn gấp hàng trăm lần (100mg/l) [...]... định Rễ Mô sẹo Auxin Điều kiện trong nuôi cấy mô TBTV • Vật liệu nuôi cấy khởi đầu phải phù hợp (một số loại mô phản ứng tốt hơn so với các mô khác) • Môi trường thích hợp • Điều kiện vô trùng • Cấy chuyển Các giai đoạn trong nuôi cấy mô TBTV Các giai đoạn nuôi cấy mô TBTV • Chọn vật liệu khởi đầu: thường từ các mô non, chưa bị phân hóa từ các cây mẹ khỏe, sạch bệnh Các giai đoạn nuôi cấy mô TBTV •... mẫu nuôi cấy: sử dụng tác nhân oxy hóa, clo hoạt động, kim loại nặng, rượu kết hợp với các chất tẩy rửa • Đảm bảo điều kiện vô trùng sau tiệt trùng và trong khi cấy chuyển: tủ cấy vô trùng gió thổi ngang áp suất dương Các giai đoạn nuôi cấy mô TBTV • Đưa mẫu nuôi cấy lên môi trường nuôi cấy thích hợp (mỗi loài, giống cây trồng có môi trường riêng) → Nhân nhanh trong ống nghiệm Các giai đoạn nuôi cấy mô. .. sự phân chia tế bào và sự tăng kích thước Tạo rễ • Được tổng hợp ở mô phân sinh đỉnh Cytokinin • Không thể thay thế • Trong tự nhiên có 1 chất: Zeatin Dẫn xuất tổng hợp: Benyzladenine (BA), Kinetin • Kích thích sự phân chia tế bào • Tạo chồi • Được tổng hợp ở rễ Gibberellin • Tổ hợp 70 hợp chất tương tự gọi là các axit Gibberellic • Thường sử dụng GA3 và GA4+9 • Kích thích sự kéo dài tế bào ⇒ chiều... non Ethylene • Kiểm soát quá trình chín của quả • Tổng hợp ở tất cả các tế bào làm tăng chiều dày thân và gây héo lá • Ngăn cản quá trình tạo chồi bất định ⇒ sử dụng AgNO3 hay norbonadien Axit Abscisic (ABA) • Có duy nhất 1 chất • Kích thích sự héo của lá và ngủ của hạt • Kiểm soát sự đóng khí khổng và tính chịu hạn ở thực vật • Giúp tạo phôi soma Các chất tương tự hormon • Polyamin – vai trò quan... Đưa mẫu nuôi cấy lên môi trường nuôi cấy thích hợp (mỗi loài, giống cây trồng có môi trường riêng) → Nhân nhanh trong ống nghiệm Các giai đoạn nuôi cấy mô TBTV • Đưa cây vào vườn ươm Các ứng dụng nuôi cấy mô TBTV • Nhân nhanh giống cây • Bảo tồn các giống, loài cây quí hiếm • Cho phép sản xuất quanh năm, không phụ thuộc vào mùa vụ • Làm sạch bệnh virut • Sản phẩm dễ được vận chuyển đi xa . định Rễ Mô sẹo Điều kiện trong nuôi cấy mô TBTV • Vật liệu nuôi cấy khởi đầu phải phù hợp (một số loại mô phản ứng tốt hơn so với các mô khác) • Môi trường thích hợp • Điều kiện vô trùng • Cấy. phôi soma Nuôi cấy chồi nách Ngọn Chồi nách trên trục của lá Thân Lá Lựa chọn mẫu nuôi cấy Các đặc tính mong muốn: • Dễ tiệt trùng • Non • Phản ứng tốt với môi trường nuôi cấy • Ngọn (mô phân. phần môi trường • Môi trường khoáng cơ bản • Đường • Vitamins • Nước • Hormon sinh trưởng TV - auxin, cytokinin, GA • Các chất tạo gel • Các thành phần không xác định Đường • Khi nuôi cấy mô thường