Đang tải... (xem toàn văn)
Phân lập, tuyển chọn và tách dòng gen mã hóa enzym xylanase từ nấm mốc
61 Đồ án tốt nghiệp Trường đại học Bách Khoa Hà Nội MỤC LỤC MỤC LỤC 1 LỜI MỞ ĐẦU 3 PHẦN I. TỔNG QUAN 4 1.1. XYLAN 4 1.2. PHỨC HỆ ENZYM PHÂN CẮT XYLAN 5 1.3. KHÁI NIỆM VÀ PHÂN LOẠI XYLANASE 7 1.3.1. Khái niệm về xylanase 7 1.3.2. Phân loại xylanase 8 1.4. CẤU TRÚC CỦA XYLANASE 9 1.5. CƠ CHẾ XÚC TÁC CỦA XYLANASE 11 1.6. NGUỒN THU XYLANASE 13 1.6.1. Sinh tổng hợp xylanase từ vi khuẩn 13 1.6.2. Sinh tổng hợp xylanase từ nấm mốc 14 1.7. ỨNG DỤNG CỦA XYLANASE 17 1.7.1. Trong công nghiệp sản xuất thức ăn chăn nuôi 17 1.7.2. Trong sản xuất bánh 17 1.7.3. Trong sản xuất rượu vang 18 1.7.4. Trong sản xuất cồn nhiên liệu 18 1.7.5. Trong chất hoạt động bề mặt 19 1.7.6. Trong tẩy trắng giấy và bột giấy 19 1.8. TÁCH DÒNG VÀ BIỂU HIỆN GEN MÃ HOÁ XYLANASE 20 PHẦN II. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 21 2.1. VẬT LIỆU 21 2.1.1. Nguồn phân lập 21 2.1.2. Hóa chất 21 Nguyễn Thành Chung Lớp CNSH 2- K49 61 Đồ án tốt nghiệp Trường đại học Bách Khoa Hà Nội 2.1.3. Thiết bị 22 2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.2.1. Phương pháp phân lập 23 2.2.2. Xác định hoạt tính xylanase trên môi trường đặc 23 2.2.3. Xác định hoạt độ xylanase bằng phương pháp DNS 23 2.2.4. Phương pháp định tên nấm mốc 25 2.2.5. Phương pháp tách chiết DNA 25 2.2.6. Phương pháp điện di DNA trên gel agarose 27 2.2.7. Phương pháp khuếch đại một đoạn DNA bằng phản ứng PCR 27 2.2.8. Phương pháp tinh sạch một đoạn DNA 28 PHẦN III. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 3.1. PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN CHỦNG NẤM MỐC CÓ HOẠT TÍNH XYLANASE CAO 31 3.2. ĐỘNG HỌC SINH TỔNG HỢP ENZYM XYLANASE CỦA CHỦNG C1 VÀ B7 34 3.3. ĐỊNH TÊN BẰNG PHƯƠNG PHÁP SOI HÌNH THÁI 35 3.4. ĐỊNH TÊN BẰNG PHƯƠNG PHÁP SINH HỌC PHÂN TỬ 37 3.4.1. Tách chiết DNA tổng số 37 3.4.2. Khuếch đại đoạn ITS1-5,8S-ITS2 bằng phản ứng PCR 38 3.4.3. Giải trình tự đoạn được khuếch đại và phân tích trình tự 40 3.5. THIẾT KẾ ĐOẠN MỒI ĐỂ TÁCH DÒNG GEN MÃ HOÁ XYLANASE . 45 3.6. KHUẾCH ĐẠI GEN MÃ HOÁ XYLANSE 46 3.7. GIẢI TRÌNH TỰ ĐOẠN GEN ĐÃ ĐƯỢC KHUẾCH ĐẠI VÀ KIỂM TRA ĐỘ TƯƠNG ĐỒNG TRÊN NGÂN HÀNG GEN THẾ GIỚI 48 PHẦN IV. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO 55 PHỤ LỤC 60 Nguyễn Thành Chung Lớp CNSH 2- K49 61 Đồ án tốt nghiệp Trường đại học Bách Khoa Hà Nội LỜI MỞ ĐẦU Hiện nay trên trái đất, mỗi năm thực vật sản sinh ra một lượng sinh khối khổng lồ ước tính đạt tới bốn mươi tỷ tấn. Tất cả mọi hoạt động của con người cũng như các loài động vật đều cần đến thực vật. Chúng là nguồn lương thực để nuôi sống con người và động vật đồng thời là nguồn cung cấp nguyên, nhiên vật liệu cho các ngành công nghiệp. Để thay đổi tính chất của vật liệu đầu vào cho phù hợp với sản phẩm mong đợi người ta phải tìm cách thay đổi cấu trúc của thành tế bào thực vật. Tuy nhiên thành tế bào thực vật lại có cấu tạo khá vững chắc bởi cellulose, hemicellulose và lignin cho nên để phá hủy một phần hoặc toàn bộ chúng thì người ta thường sử dụng các hóa chất mạnh như axit mạnh hay kiềm mạnh. Do đó chi phí để sản xuất các sản phẩm như giấy thường cao và nhất là gây ảnh hưởng nghiêm trọng đến môi trường sinh thái. Chính vì vậy mà yêu cầu đặt ra là phải thay thế bằng các phương pháp an toàn hơn đối với môi trường. Và giải pháp cho vấn đề này là các loại enzym thủy phân các polyme sinh học kể trên. Một loại enzym hiện nay đang được rất nhiều nhà khoa học quan tâm là xylanase. Enzym này có khả năng thủy phân hiệu quả các xylan – là thành phần chủ yếu của hemicellulose trong thành tế bào thực vật. Xylanase có rất nhiều ứng dụng trong công nghệ chế biến giấy và bột giấy, công nghệ thực phẩm, công nghiệp sản xuất thức ăn chăn nuôi, hay ứng dụng trong sản xuất nhiên liệu sinh hoc (ethanol sinh học) từ phế thải nông nghiệp. Tuy được ứng dụng trong nhiều lĩnh vực của cuộc sống, nhưng việc sử dụng xylanase còn hạn chế do hiệu suất sinh tổng hợp của các chủng vi sinh vật tự nhiên sinh enzym này chưa cao. Thông qua đề tài nghiên cứu "Phân lập, tuyển chọn và tách dòng gen mã hóa enzym xylanase từ nấm mốc" hy vọng sẽ lựa chọn được gen mã hóa xylanase có hoạt tính cao, tiếp tục những nghiên cứu để sản xuất được xylanase có giá thành rẻ đáp ứng nhu cầu thị trường. Nguyễn Thành Chung Lớp CNSH 2- K49 61 Đồ án tốt nghiệp Trường đại học Bách Khoa Hà Nội PHẦN I. TỔNG QUAN 1.1. XYLAN Xylan, một trong những thành phần cơ bản của hemicellulose được tìm thấy trong thành tế bào thực vật là polysaccharide cơ bản thứ hai sau cellulose [1]. Thuật ngữ hemicellulose được dùng để chỉ những polysaccharide thành tế bào thực vật mà kết hợp chặt chẽ với cellulose và glucan. Trong thực tế, thành tế bào thực vật là một vật liệu phức tạp trong đó cellulose (35-50%), hemicellulose (20-30%) - một nhóm cacbonhydrat trong đó dạng xylan là loại chủ yếu - và lignin (20-30%) liên kết chặt chẽ với nhau. Xylan là một polysaccharide hỗn tạp có chứa các nhóm phụ là các gốc acetyl, 4-O-methyl-D-glucuronosyl và α-arabinofuranosyl liên kết với bộ khung được tạo bởi các gốc xylopyranose. Bộ khung này được liên kết với nhau theo kiểu β-1,4- glycozit. Lignin bao quanh xylan, liên kết với xylan bằng liên kết este bằng các gốc của axit 4-O-methyl-D-glucuronic [2, 3]. Hình 1. Cấu trúc của arabinoxylan của cỏ Graminiae [10] Nguyễn Thành Chung Lớp CNSH 2- K49 61 Đồ án tốt nghiệp Trường đại học Bách Khoa Hà Nội Xylan chiếm khoảng 30% vật liệu của thành tế bào của thực vật sống lâu năm, từ 15-30% đối với gỗ cứng và 7-10% đối với gỗ mềm. Với các cây gỗ mềm, các nhóm phụ của xylan chủ yếu là axit 4-O-methyl glucuronic và arabinose. Chúng liên kết với bộ khung xylan bằng liên kết α-1,3- glycozit. Hiếm khi thấy các nhóm acetyl trong xylan của gỗ mềm. Tỷ lệ arabinose so với xylose thường là 0,6 [4]. Hemicellulose trong gỗ cứng có nhóm phụ là axit 4- O-methyl glucuronic, axit acetic và axit uronic. Bộ khung của xylan gỗ cứng này gồm các gốc β-1,4-D- xylopyranose, trung bình cứ 10 – 20 gốc xylose thì có một axit 4- O-methyl glucuronic liên kết với nó theo kiểu α-1,2-glycozit. Xấp xỉ 60-70% các đơn vị xylose được este hóa với axit acetic ở nhóm hydroxyl của carbon thứ 2 hoặc thứ 3 và trung bình thì cứ mười đơn vị xylose thì có một nhóm axit uronic liên kết với gốc xylose theo kiểu α-1,2-glycozit [2, 4, 5]. 1.2. PHỨC HỆ ENZYM PHÂN CẮT XYLAN Phân huỷ sinh học xylan là sự kết hợp hoạt động của nhiều loại enzym trong đó endo-β-1,4-xylanase (β-1,4-D-xylanxylanohydrolase, EC 3.2.1.8) thực hiện nhiệm vụ phân cắt mạch chính xylan bằng việc thủy phân ngẫu nhiên khung xylan tạo ra các oligosaccharide. Sau đó exo-β-1,4-D-xylosidase (β-1,4-D-xylan xylohydrolase EC 3.2.1.37) thủy phân các oligosaccharide thành các monomer. Các nhóm bên có mặt trong xylan được giải phóng bởi α-L-arabinofuranosidase, α-D- glucuronidase, galactosidase và acetyl xylan esterase. Nguyễn Thành Chung Lớp CNSH 2- K49 61 Đồ án tốt nghiệp Trường đại học Bách Khoa Hà Nội Hình 2. Vị trí tấn công của các enzym vào xylan của cỏ [2] Exo-β-1,4-D-xylosidase (EC 3.2.1.37) xúc tác thủy phân β-1,4-D-xylo- oligosaccharide bằng cách loại bỏ thành công xylose từ đầu không khử. Có nhiều công bố về Bacillus sp [6] và một số nấm [7] sinh tổng hợp β-xylosidase nội bào. Enzym α-Arabinofuranosidase (EC 3.2.1.55) thủy phân nhóm cuối cùng không khử α-L-arabinofuranosyl của arabinan, arabinoxylan và arabinogalactan. Một lượng lớn các vi sinh vật bao gồm nấm, xạ khuẩn và các loài vi khuẩn được công bố là có khả năng sinh tổng hợp α-arabinosidase. Rhodothermus marinus là loài chịu nhiệt có sinh enzym lớn nhất với hoạt độ 6,6 U/ml [8]. Enzym α-D-glucuronidase (EC 3.2.1.1) thủy phân liên kết α-1,2-glycosidic giữa xylose và D-glucuronic axit hoặc liên kết ete với 4-O-methyl. Sự thủy phân liên kết α-1,2 bền vững đóng vai trò quan trọng trong thủy phân xylan. Tương tự như liên kết giữa cacbonhydrat và lignin, dạng liên kết 4-O-methyl-glucuronidase Nguyễn Thành Chung Lớp CNSH 2- K49 61 Đồ án tốt nghiệp Trường đại học Bách Khoa Hà Nội với xylose là hàng rào trong sự phá hủy gỗ. Có nhiều vi sinh vật có khả năng sinh tổng hợp α-glucuronidase [9]. Để thủy phân hoàn toàn xylan tự nhiên cần có các esterase để loại bỏ liên kết của các axit acetic và axit phenolic với xylose. Esterase phá vỡ liên kết của xylose với axit acetic (acetyl xylan esterase (EC 3.1.1.6), các gốc chuỗi bên arabinose với axit ferulic (feruloyl esterase) và gốc chuỗi bên arabinose với axit p-coumaric (p- coumaroyl esterase). Phân cắt các nhóm acetyl, feruloyl và p-coumaroyl từ xylan thì thuận lợi cho sự loại bỏ lignin. Chúng có thể góp phần làm hòa tan lignin bởi sự phân cắt các liên kết este giữa lignin và hemicellulose. Nếu sử dụng cùng với xylanase và các enzym phân hủy xylan khác trong tẩy trắng bột giấy, các esterase có thể phá vỡ và làm lỏng lẻo một phần cấu trúc của thành tế bào [2]. 1.3. KHÁI NIỆM VÀ PHÂN LOẠI XYLANASE 1.3.1. Khái niệm về xylanase Theo Hội hóa sinh và sinh học phân tử thế giới (the International Union of Biochemistry and Molecular Biology) enzym có mã số EC 3.2.1.8 có: Tên được công nhận là: endo-β-1,4-xylanase Phản ứng: thủy phân phía trong của các liên kết β-1,4-D-xylosidic trong xylan. Các tên khác gồm có: endo-β-1,4-xylan 4-xylanohydrolase; endo-1,4- xylanase; xylanase; β-1,4-xylanase; endo-1,4-xylanase; endo-β-1,4- xylanase; endo-1,4-β-D-xylanase; 1,4-β-xylan xylanohydrolase; β- xylanase; β-1,4-xylan xylanohydrolase; endo-1,4-β-xylanase; β-D- xylanase Tên hệ thống: 4-β-D-xylan xylanohydrolase [10] Nguyễn Thành Chung Lớp CNSH 2- K49 61 Đồ án tốt nghiệp Trường đại học Bách Khoa Hà Nội 1.3.2. Phân loại xylanase Wong và các cộng sự [11] phân loại xylanase thành hai nhóm dựa vào đặc tính lý hóa của chúng như là khối lượng phân tử và điểm đẳng điện và trên các đặc tính xúc tác khác nhau của chúng. Endo-xylanase có khối lượng phân tử cao với giá trị pI thấp thuộc về glycanase họ 10 (trước đây gọi là họ ‘F’), trong khi đó các endoxylanse khối lượng phân tử thấp với giá trị pI cao được phân loại thành glycanase họ 11 (trước đây là họ G) [12, 13]. Biely và các cộng sự [14] sau khi mở rộng phạm vi nghiên cứu trên sự khác biệt trong các đặc tính xúc tác giữa các họ xylanase kết luận rằng endo-xylanase của họ 10 khác với các thành viên của họ 11 là khả năng có thể tấn công các liên kết glycozit cạnh các điểm nhánh và hướng về đầu không khử [15]. Trong khi endo- xylanase của họ 10 cần hai gốc xylopyranosyl không thay thế giữa các nhánh, endo- xylanase của họ 11 cần có ba gốc xylopyranosyl liên tiếp không thay thế. Theo đó các endo-xylanase của họ 10 có nhiều các hoạt động xúc tác, cái mà tương ứng với β-xylosidase. Các endo-xylanase của họ 10 giải phóng các xylopyranosyl ở đầu tận cùng gắn với một gốc xylopyranosyl thay thế, nhưng chúng cũng thể hiện hoạt độ aryl-β-D-xylosidase. Sau khi kiểm tra một nghiên cứu phân tích tác nhân rộng rãi, Sapag và các cộng sự [12] đã ứng dụng một phương pháp mới mà không liên quan tới phân tích trình tự trước đó cho việc phân loại xylanase họ 11, để chia xylanase thành 6 nhóm chính. Nhóm I, II và III chứa chủ yếu các enzym của nấm. Các enzym nhóm I và II thường là các enzym có khối lượng khoảng 20 kDa được sinh tổng hợp từ các họ Ascomyceta và Basidiomyceta. Các enzym nhóm I có giá trị pI bazo trong khi đó nhóm II có giá trị pI ở phía axit. Các enzym của nhóm III chủ yếu được tạo ra bởi các nấm yếm khí. Trong khi đó, các xylanase của vi khuẩn được chia thành ba nhóm là A, B và C. Nhóm A là các xylanase được sinh tổng hợp bởi họ Nguyễn Thành Chung Lớp CNSH 2- K49 61 Đồ án tốt nghiệp Trường đại học Bách Khoa Hà Nội Actinomycetaceae và Acillaceae, hoàn toàn là những vi khuẩn hiếu khí gram dương. Nhóm B và C thì chứa các enzym chủ yếu từ các vi khuẩn yếm khí gram dương, những loài thường sống trong dạ cỏ [12]. 1.4. CẤU TRÚC CỦA XYLANASE Cấu trúc bậc ba của endoxylanase họ 10 và 11 được xác định cho hàng loạt các enzym, từ cả vi khuẩn và nấm mốc. Endo-xylanase 1BCX từ Bacillus circulans có nét đặc trưng của họ 11 [16,17]. Nếp gấp domain xúc tác là do hai nếp gấp β tạo thành (A và B) chủ yếu là bởi các mặt β đối song và một chuỗi xoắn α ngắn và tương tự như một phần bàn tay phải được đóng lại [12]. Sự khác nhau trong hoạt động xúc tác của các endo-xylanase của họ 10 và 11 được cho là do sự khác nhau trong cấu trúc bậc ba của chúng. Cấu trúc bậc 3 của endo-xylanase chủ yếu được sắp xếp từ các mảnh β [18, 19]. Cấu trúc toàn thể của domain xúc tác của xylanase họ 10 như là một cái thùng hình trụ được tạo thành từ 8 mảnh β [20]. Vị trí liên kết cơ chất của endo-xylanase họ 10 ở khe xúc tác không sâu như với endo-xylanase họ 11. Điều này cùng với tính linh động hình thể lớn hơn của các enzym lớn hơn so với của những enzym nhỏ hơn có thể giải thích nguyên nhân của tính đặc trưng cơ chất thấp hơn của endo-xylanse họ 10 [16, 17]. Nguyễn Thành Chung Lớp CNSH 2- K49 61 Đồ án tốt nghiệp Trường đại học Bách Khoa Hà Nội Hình 3. Cấu trúc không gian 3 chiều của Xylanase họ 10 từ Bacillus halodurans [21] Các thành viên của họ F11 có dạng domain xúc tác từ các mảnh nếp gấp β cái mà làm thành một vùng lõm hai lớp xung quanh vị trí xúc tác. Vũng lõm này được so sánh với lòng bàn tay và các ngón tay trong khi cái vòng giống như ngón cái của tay phải. Cái vòng (loop) nhô ra thành vùng lõm và giới hạn trong một phân tử isoleusin [16, 17]. Hình 4. Cấu trúc không gian 3 chiều của xylanase họ 11 [22] Nguyễn Thành Chung Lớp CNSH 2- K49 [...]... cỏc nghiờn cu thng tin hnh tỏch dũng gen bng vic tỏch chit RNA v khuch i gen mong mun bng phn ng RT-PCR i vi gen mó hoỏ enzym xylanase cng nh vy, trong gen ny cú cha mt intron gia Tuy nhiờn trong nghiờn cu ny, tụi mun i theo mt hng tip cn khỏc tỏch dũng gen mó hoỏ enzym xylanase t nm mc ú l tỏch dũng t chớnh genom ca nm mc bng phn ng PCR Vỡ vic tỏch dũng gen t genom bng phn ng PCR l mt phng phỏp tit... tng hp xylanase t nm mc Cỏc enzym xylanase c sinh tng hp t nm mc thng cú pH ti u thp hn so vi cỏc xylanase cú ngun gc t vi khun Giỏ tr pH ti u ca xylanase t nm mc thy phõn xylan thỡ thng dao ng t pH 3 n 8 v n nh pH 5 (bng 2) Giỏ tr pH ti u ca xylanase vi khun nhỡn chung cao hn so vi pH ti u ca xylanase t nm Trong cụng ngh sn xut giy v bt giy, s dng xylanase t nm mc cn phi h pH xung thp do ú m xylanase. .. Nhm tỏch dũng c gen mó hoỏ enzym xylanase cú hot tớnh cao, quỏ trỡnh nghiờn cu thc hin qua cỏc bc theo s hỡnh 7 Phõn lp, tuyn chn chng Nguyn Thnh Chung K49 nh tờn 61 Lp CNSH 2- ỏn tt nghip Trng i hc Bỏch Khoa H Ni Xỏc nh ng hc STH xylanase Thit k mi Tỏch chit DNA, RNA Dựng PCR, RT-PCR K gen xylanase Gii trỡnh t Hỡnh 7 S quy trỡnh thớ nghim Nm mc l vi sinh vt nhõn chun nờn trong b gen cú cha cỏc... nghiờn cu T hm lng ng kh ta suy ra c hot ca endo--1,4 -xylanase vi c cht l xylan 0,5% pha trong m citrate pH=4,5 Phn ng enzym c tin hnh 50oC trong 15 phỳt Mt n v hot ca enzym xylanase c nh ngha l lng enzym cú kh nng thy phõn xylan to 1 àmol xylose trong thi gian 1 phỳt iu kin 50 oC Hỡnh 6 ng chun xylose theo phn ng DNS Cụng thc tớnh hot enzym xylanase: H= (ODtn ODkc) ì f (U/ml) 0,0036 ì 15 ì 0,1... khi cha c ti u iu kin sinh enzym Hot thu c cú th s cao hn na nu chỳng ta tip tc nghiờn cu ti u iu kin sinh tng hp enzym ca chng Thng thỡ vi nm mc hot cao nht ca enzym c thu nhn sau 3 ngy Tuy nhiờn, vi xylanase l mt ngoi l, ngi ta thng thu c hot xylanase cao nht t nm mc sau 2 ngy nuụi cy [35] Vic xỏc nh ng hc sinh tng hp xylanase khụng ch giỳp ỏnh giỏ s b kh nng sinh xylanase ca chng nm mc nghiờn... sinh tng hp c xylanase cú hot 49 U/ml trong mụi trng xylan Bacillus sp NCL 87-6-10 tng hp c xylanase vi hot 93 U/ml trong mụi trng cú cm ng zeolit v cú hiu qu hn khi s dng Tween 80 Mt chng khỏc l Bacillus circulans AB16 tng hp xylanase cú hot 19,28 U/ml khi sinh trng trờn mụi trng rm go Streptomyces sp QG-11-3 cú kh nng sinh enzym xylanase cú hot 96 U/ml Cỏc sinh vt khỏc sinh tng hp xylanase c a... b l cú kh nng sn xut xylanase [11,25] Tuy nhiờn, cú nhiu nghiờn cu v xylanase cú ngun gc t thc vt, vớ d, s sinh tng hp endoxylanase trong qu lờ Nht Bn trong sut giai on chớn ca qu Cleemput v cỏc cng s [26] ó tinh ch c mt loi endo -xylanase vi khi lng phõn t l 55 kDa t bt mỡ ca cõy lỳa mỡ chõu u Mt s loi ng vt thõn mm di nc cng cú kh nng sinh tng hp xylanase [27] 1.6.1 Sinh tng hp xylanase t vi khun Vi... thỡ õy li l mt u th rt ln ca xylanase nm mc vỡ mụi trng cho enzym hot ng l mụi trng axit Gomes v cỏc cng s ó cụng b thu c hot xylanase l 188,1 U/ml vi pH ti u 4,5 t Trichoderma viride Tng t vi T viride, T reesei cng c bit n vi kh nng sinh tng hp xylanase cao vi hot 960 U/ml Ging nh Trichoderma sp, Schizophillum commune cng l mt trong nhng loi tng hp xylanase cao vi hot xylanase l 1244 U/ml Nm trong... lm gim lng bó ộp lc u tng Multifect v Enzeko l tờn thng mi ca mt s cỏc xylanase thng mi c c s dng trong cụng ngh lm bỏnh Novozyme a ra mt s cỏc enzym xylanase mi, cú th l kt hp vi cỏc enzym Nguyn Thnh Chung K49 Lp CNSH 261 ỏn tt nghip Trng i hc Bỏch Khoa H Ni khỏc, ci thin bt nho, c bit l trong cỏc nh mỏy bỏnh m Mt s cỏc enzym xylanase thng mi nh Celluclast BG, Fungamyl Super AX, Fungamyl Super MA... mt dung dch cha xylanase 12% X lý enzym cng lm loi b mt lng nh ca lignin lm gim giỏ tr kappa ca bt giy i 3% S tng tớnh nht cú th l do cỏc phõn t polysaccharide khi lng phõn t cao c lm giu, din ra khi xylan c loi b [33] Nguyn Thnh Chung K49 Lp CNSH 261 ỏn tt nghip Trng i hc Bỏch Khoa H Ni 1.8 TCH DềNG V BIU HIN GEN M HO XYLANASE Mc dự tớnh chu nhit cú th tt cho quỏ trỡnh sn xut ca cỏc enzym bn nhit, . " ;Phân lập, tuyển chọn và tách dòng gen mã hóa enzym xylanase từ nấm mốc& quot; hy vọng sẽ lựa chọn được gen mã hóa xylanase có hoạt tính cao, tiếp tục những nghiên cứu để sản xuất được xylanase. hợp xylanase từ nấm mốc Các enzym xylanase được sinh tổng hợp từ nấm mốc thường có pH tối ưu thấp hơn so với các xylanase có nguồn gốc từ vi khuẩn. Giá trị pH tối ưu của xylanase từ nấm mốc thủy. DNA 28 PHẦN III. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 3.1. PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN CHỦNG NẤM MỐC CÓ HOẠT TÍNH XYLANASE CAO 31 3.2. ĐỘNG HỌC SINH TỔNG HỢP ENZYM XYLANASE CỦA CHỦNG C1 VÀ B7 34 3.3. ĐỊNH TÊN