Đang tải... (xem toàn văn)
Nghiên cứu nhằm lựa chọn một số loại thảo dược phổ biến có tính kháng với các vi khuẩn gây bệnh tiêu chảy trên lợn gồm E.coli, Sallmonela, Staphylococus. Hoạt tính kháng khuẩn của thảo dược được kiểm tra bằng kỹ thuật khoanh giấy kháng sinh trên môi trường đặc với mẫu thử là dịch chiết cồn ethanol 700 của các loại thảo dược ở dạng và dạng bột khô. Kết quả cho thấy, khả năng kháng khuẩn của các loại thảo dược khác nhau là khác nhau. Sức kháng của một loại thảo dược phụ thuộc vào chủng vi khuẩn thử nhiệm. Dịch chiết tươi của cỏ sữa, rẻ quạt, tỏi và riềng cho thấy sức kháng tốt nhất với các loại vi khuẩn thử nhiệm. Sấy khô làm ảnh hưởng tới khả năng kháng khuẩn của thảo dược. Hành, nghệ mất hoạt tính kháng khuẩn sau sấy khô. Các loại thảo dược khác cho thấy sức kháng khuẩn yếu hơn so với dịch chiết tươi. Dịch chiết bột khô của cỏ sữa, rẻ quạt và riềng cho thấy sức kháng tốt nhất với các vi khuẩn thử nhiệm.
1 ðÁNH GIÁ KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN GÂY BỆNH TIÊU CHẢY Ở LỢN CỦA MỘT SỐ LOẠI THẢO DƯỢC ðặng Hoàng Lâm Trường ðại học Hùng Vương, Tỉnh Phú Thọ 1. Mở ñầu Do những tác ñộng tiêu cực của việc sử dụng kháng sinh nhằm phòng bệnh và kích thích tăng trọng trong chăn nuôi, Việt Nam và nhiều nước trên thế giới ñã và ñang cấm sử dụng các sản phẩm này trong chăn nuôi. Vì vậy, lựa chọn các sản phẩm thay thế nhằm ñảm bảo năng suất vật nuôi là vô cùng cần thiết và thu hút ñược sự quan tâm, nghiên cứu của nhiều nhà khoa học. Thảo dược có tính kháng khuẩn là một trong nhiều các chế phẩm sinh học thay thế ñã ñược nghiên cứu, lựa chọn và sử dụng trong thức ăn chăn nuôi. Việc sử dụng thảo dược thay thế kháng sinh trong chăn nuôi mang lại hiệu quả cao. Các loại kháng sinh thảo dược ñã ñược chứng minh có khả năng làm giảm các bệnh tiêu chảy ở lợn, tăng khả năng tăng trọng, tăng hiệu quả sử dụng thức ăn và ñặc biệt là tạo ra các sản phẩm thịt an toàn với người tiêu dùng, nâng cao giá trị của sản phẩm chăn nuôi. Các sản phẩm thịt “thảo mộc” ñược ưa chuộng và ñang trở thành xu thế mới trong chăn nuôi, ñem lại lợi ích cho người chăn nuôi và cho sản phẩm thịt ñảm bảo an toàn vệ sinh thực phẩm. Xuất phát từ luận ñiểm trên, chúng tôi tiến hành nghiên cứu khả năng kháng khuẩn invitro của dịch chiết cồn một số loại thảo dược phổ biến trên ñịa bàn tỉnh Phú Thọ ñối với một số vi khuẩn gây bệnh tiêu chảy trên lợn. 2. Vật liệu và phương pháp nghiên cứu 2.1. Vật liệu nghiên cứu - Thảo dược: Cỏ sữa (Euphorbia thymifolia Burm), cỏ xước (Achyranthes aspera L), rẻ quạt (Belamcanda chinensis), rau sam (Portulacea oleracea), hành (Allium fistulosum), tỏi (Allium sativum), gừng (Zingiber offcinale Rosc), riềng (Apinia officinarum Hance), nghệ (Curcuma longa Lour) ở dạng tươi và bột khô - Vi khuẩn: E.coli, Sallmonela, Staphylococus từ Phòng thí nghiệm Vi sinh vật thú y, Khoa Thú y, Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội 2.2. Phương pháp nghiên cứu 2.2.1. Thu mẫu, sơ chế, sấy khô Thảo dược sau khi ñược thu hái, ñem chọn lọc lấy những phần tươi không bị thối hỏng, ñem cắt nhỏ, rồi ñem sấy khô ở tủ sấy ở nhiệt ñộ 50 0 C trong 4 ngày. Mẫu khô ñược nghiền nhỏ, kích thước hạt 0,5mm. 2.2.2. Phương pháp thử hoạt tính kháng khuẩn - Dịch chiết cồn ethanol 70 0 của các loại thảo dược ñược chuẩn bị theo hướng dẫn của ðỗ Trung ðàm (2006) về phương pháp Chuẩn bị mẫu thử ñối với các mẫu thử dược liệu trong Nghiên cứu khả năng kháng khuẩn invitro của thảo dược (Viện dược liệu, 2006). - Thử hoạt tính kháng khuẩn của các loại thảo dược sử dụng kỹ thuật khoanh giấy kháng sinh trên môi trường ñặc theo hướng dẫn của ðỗ Trung ðàm (2006). 2.2.3. Phương pháp xử lý số liệu 2 Xử lý số liệu bằng phương pháp so sánh phương sai một nhân tố (ANOVA One Way) trên phần mềm Minitab 16. 3. Kết quả và thảo luận 3.1. Khả năng kháng khuẩn của một số loại thảo dược ở dạng tươi Kết quả khảo sát khả năng kháng khuẩn của một số loại thảo dược ở dạng tươi ñược trình bày ở bảng 1. Kết quả bảng 1 cho thấy, khả năng kháng khuẩn của các loại thảo dược khác nhau là khác nhau. Tỏi, rẻ quạt, cỏ sữa và riềng có sức khá mạnh với cả 3 chủng vi khuẩn thử nhiệm. Rau sam không cho thấy sức kháng với các vi khuẩn gram (-) (E.coli và Salmonella). Nghệ tuy ñã cho thấy khả năng kháng với các vi khuẩn thử nhiệm nhưng ñường kính vòng vô khuẩn nhỏ nhất trong các loại thảo dược thử nhiệm. Bảng 1. Khả năng kháng khuẩn của một số loại thảo dược ở dạng tươi STT Vi khuẩn Thảo dược E.coli Salmonella Staphylococus 1 Cỏ sữa 17,5 c ± 1,4 19,5 b ± 0,9 21,3 b ± 1,5 2 Cỏ xước 10,5 e ± 1,1 14,1 cd ± 0,9 0 3 Rẻ quạt 26,2 b ± 1,5 23,4 a ± 1,0 20,0 b ± 1,2 4 Rau sam 0 0 12,2 e ± 1,1 5 Hành 13,8 d ± 1,3 0 13,2 de ± 0,9 6 Tỏi 19,8 c ± 1,2 20,2 ab ± 0,7 23,4 a ± 1,3 7 Gừng 13,3 d ± 0,7 12,4 d ± 0,9 14,5 d ± 0,9 8 Riềng 18,2 c ± 1,0 12,7 d ± 1,2 22,7 ab ± 1,5 9 Nghệ 0 8,7 e ± 1,0 9,3 f ± 0,8 10 Gentamycin 30 a ± 0,9 16,5 c ± 1,3 17,1 c ± 0,8 Kết quả nghiên cứu của chúng tôi cho thấy, khả năng kháng khuẩn của cỏ xước tương ñương báo cáo của Kaur và cs (2005) về khả năng kháng khuẩn của chất chiết từ thân và rễ của cây cỏ xước ñối với vi khuẩn E.coli và Klebsila. Pandey và cs (2014) cũng ghi nhận kết quả ñối với vi khuẩn E.coli và Staphylococus khi thử khả năng kháng khuẩn của chất chiết từ lá của cây cỏ xước. ðối với cây rau sam, Chowdhary và cs (2013) tổng hợp các nghiên cứu trước ñó về cây rau sam cũng cho biết, cây này có khả năng kháng mạnh với các vi khuẩn Staphylococus aureus, Bacillus cereus và Klebsilla pneumonia. Tác giả này cũng cho biết, rau sam có khả năng ức chế khả năng phát triển của các vi khuẩn gây bệnh và các nhiễm trùng của cơ thể. Kết quả về kích thước vòng vô khuẩn của cỏ sữa trong nghiên cứu của chúng tôi cao hơn báo cáo của Jayaveera và cs (2010) về khả năng kháng khuẩn của dịch chiết trong dung môi cồn ethanol của cỏ sữa ñối với Staphylococus và E.coli nhưng tương ñương với báo cáo của Tullanithi và cs (2010) ñối với chất chiết ethanol của lá cỏ xước với E.coli. Khả năng kháng khuẩn của tỏi, nghệ trong nghiên cứu này phù hợp với các công bố trước ñó của Chu Mạnh Thắng và cs (2010), Nguyễn Thị Thanh Loan (2012). Mahmood (2012) cung cho biết các kết quả tương tự về khả năng kháng khuẩn của dịch chiết của tỏi, gừng và hành tây có khả năng kháng khác nhau với các vi khuẩn khác nhau. Báo cáo của Anbu Jeba Sunilson và cs (2009) về khả năng kháng khuẩn của gừng, nghệ và riềng cũng cho kết quả tương tự nghiên cứu này. 3.2. Khả năng kháng khuẩn của một số loại thảo dược ở dạng khô 3 Sấy khô là một biện pháp phổ biến và cơ bản nhất ñể bảo quản thảo dược sau thu hoạch bởi vì ñây là biện pháp ñơn giản nhất cho phép nhanh chóng bảo vệ ñược các hoạt chất có trong thảo dược. Sấy khô cũng là biện pháp bảo quản thảo dược kinh tế nhất do ñầu tư thấp, giá thành năng lượng rẻ và có thể sản xuất số lượng lớn (Muller and Heindl, 2006). Nghiên cứu của tác giả này cũng cho biết, nhiệt ñộ thích hợp nhất ñể sấy khô thảo dược ở 50 0 C bởi chất lượng thảo dược sẽ suy giảm nếu sấy ở nhiệt ñộ cao hơn. Sấy khô cũng thuận tiện cho quá trình sử dụng các sản phẩm thảo dược này trong quá trình sản xuất thức ăn chăn nuôi. Xuất phát từ những luận ñiểm trên, chúng tôi lựa chọn phương pháp sấy khô thảo dược sử dụng trong thí nghiệm theo các bước: thu hái, rửa sạch, cắt ngắn và sấy khô ở nhiệt ñộ 50 0 C, kết quả ñược trình bày ở bảng 2. Kết quả bảng 2 cho thấy, quá trình sấy khô ñã làm giảm khả năng kháng khuẩn của hầu hết các loại thảo dược. Hành, nghệ không cho thấy khả năng kháng với các vi khuẩn thử nhiệm. Tỏi và gừng mất hoạt tính kháng với vi khuẩn E.coli. Kích thước ñường vô khuẩn của các loại thảo dược dạng khô ñều nhỏ hơn so với dịch chiết ở dạng tươi. Cỏ sữa, rẻ quạt và riềng vẫn cho thấy tính kháng khuẩn tốt hơn so với các loại khác trong thí nghiệm. Kết quả của các thí nghiệm cho thấy, sức kháng khuẩn của thảo dược là khác nhau ñối với các loại vi khuẩn khác nhau. ðiều này có thể lý giải do những nguyên nhân sau: (1) Do cơ chế về khả năng kháng khuẩn ñối với các loại vi khuẩn khác nhau của các hợp chất tự nhiên là khác nhau. Dễ thấy ở ñây, E.coli và Salmonella là hai vi khuẩn gram (-), Staphylococus là một vi khuẩn gram (+) nên cấu tạo bề mặt tế bào của chúng khác nhau dẫn tới khả năng mẫn cảm khác nhau với các dịch chiết thảo dược. (2) Phương pháp sấy khô và nghiền thảo dược làm mất ñi hoạt tính kháng khuẩn của các hợp chất có trong thảo dược. Bảng 2. Khả năng kháng khuẩn của một số loại thảo dược khô Vi khuẩn Thảo dược E.coli Salmonella Staphylococus Cỏ sữa 13,5 c 0,6 14,2 bc ± 0,5 17,0 ab ± 0,7 Cỏ xước 11,8 cd ± 1,4 9,8 d ± 0,8 0 Rẻ quạt 20,2 b ± 1,5 19,9 a ± 1,0 18,2 a ± 0,9 Rau sam 0 0 10,2 c ± 1,1 Hành 0 0 0 Tỏi 0 19,3 a ± 1,4 14,4 b ± 1,3 Gừng 0 13,2 c ± 1,5 14,5 b ± 0,9 Riềng 10,3 d ± 1,1 11,8 cd ± 1,5 13,1 b ± 1,5 Nghệ 0 0 0 Gentamycin 30 a ± 0,9 16,0 b ± 1,3 17,1 ab ± 0,8 4 Nồng ñộ thành phần hóa học của thảo dược ñược chế biến bằng các phương pháp khác nhau là khác nhau. Khi thử nhiệm khả năng kháng khuẩn của tỏi sau khi chế biến bằng các phương pháp khác nhau cho thấy, dịch ép tỏi tươi có khả năng kháng mạnh nhất với S.aureus, bột tỏi có sức kháng yếu nhất ñặc biệt là với vi khuẩn E.coli. Kết quả ñược ghi nhận trong quá trình chế biến hành tây, các thành phần hóa học của hành và khả năng kháng khuẩn của hành ñã giảm ñáng kể sau khi chế biến ở dạng bột hành khô (Chu Mạnh Thắng và cs., 2010). Sấy khô thảo dược cũng ảnh hưởng tới phổ kháng khuẩn của chúng. Nguyễn Thị Kim Loan (2012) thử nhiệm hoạt tính kháng khuẩn của cao chiết từ bột tỏi ñã gia nhiệt ở 80 0 C cho thấy, khả năng kháng khuẩn của tỏi giảm ñi từ 2 -3 lần trong khi ñó khả năng kháng khuẩn của nghệ giảm không ñáng kể. Như vậy, nhiệt ñộ ñã làm biến tính allicin trong tỏi (thành phần chủ yếu tạo nên khả năng kháng khuẩn của tỏi) làm giảm hiệu quả kháng khuẩn của tỏi. Sasidharan và Menon (2010) thử nhiệm khả năng kháng khuẩn của dịch chiết gừng từ hai dạng tươi và khô. Kết quả cho thấy, thành phần hóa học của gừng ñã bị thay ñổi sau khi làm khô. Các hợp chất oxygenated trong gừng ñã giảm từ 29% ở dạng tươi xuống còn 14% ở dạng khô. Hydrocarbon trong gừng khô cao hơn trong gừng tươi. Gừng khô có chứa nhiều hợp chất sesquiterpene hydrocarbon hơn là trong dùng tươi. Gừng tươi chứa nhiều hợp chất oxygenate hơn trong gừng khô. Các báo cáo trước ñó cũng cho thấy các hợp chất monoterpen có khả năng kháng khuẩn tốt hơn các hợp chất sesquiterpene. Các hợp chất hydrocarbon có khả năng kháng khuẩn yếu hơn các hợp chất oxygenated. Thử nhiệm khả năng kháng khuẩn của 2 dịch chiết gừng từ nguyên liệu tươi và khô cho thấy, khả năng kháng khuẩn của dịch chiết gừng tươi giảm dần từ Aspergillus niger, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis. Dịch chiết gừng khô có sức kháng giảm dần với Pseudomonas aeruginosa, Aspergillus niger, Bacillus subtilis. Sấy khô ảnh hưởng tới khả năng kháng khuẩn của tinh dầu thảo dược do quá trình này ảnh hưởng tới thành phần hóa học của thảo dược. Nhiều nghiên cứu cho thấy, sấy khô làm giảm nồng ñộ monoterpence trong khi nồng ñộ sesquiterpenes không ñổi. Sự suy giảm nồng ñộ monoterpence là do chúng có khối lượng phân tử nhẹ và dễ bay hơi. Hoạt tính kháng khuẩn của tinh dầu có mối tương quan cao với thành phầm monoterpences so với các hợp chất hóa học phổ biến khác và các phân tử oxy hóa kháng hydrocacbon. Vì vậy, tỷ lệ monoterpence/sesquiterpene sẽ quyết ñịnh chất lượng tinh dầu thảo dược. (Bendelaid và cs., 2006). 4. Kết luận Khả năng kháng khuẩn của các loại thảo dược khác nhau là khác nhau. Ở dạng tươi, chất chiết của tỏi, rẻ quạt, cỏ sữa và riềng có tính kháng mạnh nhất với các vi khuẩn thử nghiệm. Sấy khô, nghiền nhỏ làm giảm hoạt tính kháng khuẩn của các loại thảo dược. Hành, nghệ mất hoạt tính kháng khuẩn sau khi sấy khô. Cỏ sữa, rẻ quạt và riềng cho thấy sức kháng tốt với các vi khuẩn thử nhiệm sau khi sấy khô. Tài liệu tham khảo Tài liệu tiếng Việt 1. ðỗ Trung ðàm (2006), Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý của thuốc từ thảo dược. Nhà xuất bản khoa học và kỹ thuật, tr 231-260. 2. Nguyễn Thị Kim Loan (2012), Ảnh hưởng của tỏi, nghệ lên khả năng kháng bệnh và tăng trưởng của heo 30 -90 ngày tuổi và heo thịt, Luận án tiến sĩ nông nghiệp, ðại học Nông lâm TP Hồ Chí Minh. 5 3. Chu Mạnh Thắng, Lê Thị Hồng Thảo, ðỗ Viết Minh, Nguyễn Thành Long (2010), Nghiên cứu ảnh hưởng của các phương pháp chế biến và bảo quản (dịch chiết, bột khô, dung dịch) ñến khả năng kháng khuẩn của tỏi và hành tây, Báo cáo khoa học thường niên Viện Chăn nuôi. Tài liệu nước ngoài 4. Anbu Jeba Sunilson J., Suraj R., Rejitha G., Anandarajagopal K., Anita Gnana Kumari A.V. and Prowichit P. (2009). Invitro antimicrobial evaluation of Zingiber officinale, Curcuma longa and Alpinia galangal extract as natural food preservatives. American Journal of Food Technology 4(5): 192-200. 5. Benbelaid F., Abdoune M.A., Khadir A., Bendhou M., 2013. Drying effect on yield and antimicrobial activity of essential oils. International Journal Aromal plants, vol. 3, No. 1, pp. 93-101. 6. Chowdhary C.V., Meruva A., Naresh K., Elumalai R.K.A., (2013). A review on phytochemical and pharmacological profile of Portulaca oleracea Linn (Purslane). IJRAP 4(1), Jan-Feb, pages 34-37. 7. Jayaveera K.N., Yoganandham E.K., Yadav G., Kumanan R. (2010). Phytochemical screenings, antibacterial activity and physic chemical constants of ethanolic extract of Euphobial thymifolia Linn. International Journal of Pharmacy and Pharmacultical Sciences Vol 2, Issue 3. 8. Kaur M., Thakur Y. and Rana R.C. (2005). Antiomicrobial properties of Achyranthes aspera. Ancient science of life VolL XXIV (4) April, May, June, pages 168 – 173. 9. Mahmood Khan Yousufi, 2012. To Study Antibacterial Activity of Allium Sativum, Zingiber Officinale and Allium Cepa by Kirby-Bauer Method. IOSR Journal of Pharmacy and Biological Sciences (IOSR-JPBS) Volume 4, Issue 5 (Nov. – Dec. 2012), PP 06-08. Online: www.iosrjournals.org 10. Muller J. and Heindl A., 2006. Drying of medicinal plants. Medicinal and aromatic plants, 237:252. 11. Pandey G., Rao Ch.V., Gupta S.S., Verman K.K and Singh M. (2014). Antioxidant and antibacterial activities of leaf extract of Achyranthes aspera Linn (Prickly chaff flower). European Journal of Medicinal Plants 4(6): 695-708. . 1 ðÁNH GIÁ KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN GÂY BỆNH TIÊU CHẢY Ở LỢN CỦA MỘT SỐ LOẠI THẢO DƯỢC ðặng Hoàng Lâm Trường ðại học Hùng Vương, Tỉnh Phú Thọ 1. Mở ñầu Do những tác ñộng tiêu cực. 3.1. Khả năng kháng khuẩn của một số loại thảo dược ở dạng tươi Kết quả khảo sát khả năng kháng khuẩn của một số loại thảo dược ở dạng tươi ñược trình bày ở bảng 1. Kết quả bảng 1 cho thấy, khả. tự về khả năng kháng khuẩn của dịch chiết của tỏi, gừng và hành tây có khả năng kháng khác nhau với các vi khuẩn khác nhau. Báo cáo của Anbu Jeba Sunilson và cs (2009) về khả năng kháng khuẩn