Đang tải... (xem toàn văn)
MỤC LỤCĐề mục TrangTrang bìa . . . . iNhiệm vụ luận vănNhận xét của giáo viên hướng dẫnNhận xét của giáo viên phản biệnLời cảm ơn . . . . iiTóm tắt luận văn . . . iiiMục lục . . . . ivDanh mục hình . . . . viiiDanh mục bảng . . . . xLỜI MỞ ĐẦU . . 1CHƯƠNG 1 GIỚI THIỆU . 21.1. KHÁI QUÁT . . . . 21.2. PHÂN LOẠI CÁC DẪN XUẤT PROTEIN Y SINH HỌC . 21.2.1. Theo cấu tạo hoá học . . . 21.2.2. Theo chức năng sinh học . . . 31.2.3. Theo khả năng ứng dụng . . . 3CHƯƠNG 2 KHẢ NĂNG ỨNG DỤNG CỦA PROTEIN Y SINH HỌC . 42.1. TRONG ĐIỀU TRỊ . . . 42.1.1. Insulin . . . . 42.1.2. Hormone tăng trưởng . . . 72.1.3. Kích tố sinh dục . . . 112.1.4. Oxytocin . . . 142.1.5. Cytokine . . . 162.1 .5.1. Các interferon (IFN) . . 202.1 .5.2. Các interleukin (IL) . . 252.1.5.3. Yếu tố hoại tử khối u (TNF) . . 272.1.5.4. Yếu tố kích thích tạo khuẩn lạc (CSF) . . 292.1.6. Kháng thể . . . 31PROTEIN Y SINH HỌC2.1 .6.1. Cấu trúc điển hình . . 322.1.6.2. Tính đặc hiệu của phản ứng kháng thểkháng nguyên . 332.1.6.3. Vai trò của kháng thể . . 342.1.6.4. Các lớp kháng thể (isotype) . . 352.1.6.5. Sự tổng hợp kháng thể . . 392.1.6.6. Ứng dụng của kháng thể . . 422.1.7. Các chất liên quan đến quá trình đông máu . . 452.1.7.1. Yếu tố VIII . . . 452.1.7.2. Chất hoạt hoá plasminogen tPA . . 472.2. TRONG CHẨN ĐOÁN . . . 482.2.1. PSA và ung thư tiền liệt tuyến . . 502.2.2 AFP và ung thư gan . . . 512.2.3. hCG và ung thư tinh hoàn . . 522.3. TRONG PHÂN TÍCH . . . 532.3.1. Glucose oxidase . . . 532.3.2. Cholesterol oxidase . . . 562.3.3. Alcohol dehydrogenase . . . 562.4. TRONG THỰC PHẨM CHỨC NĂNG . . 572.5. TRONG MỸ PHẨM . . . 592.6. MỘT SỐ ỨNG DỤNG KHÁC . . . 602.6.1. Kháng thể đơn dòng . . . 602.6.2. Protease . . . 60CHƯƠNG 3: PHƯƠNG PHÁP SẢN XUẤT PROTEIN Y SINH HỌC . 623.1. PHƯƠNG PHÁP TỔNG HỢP HOÁ HỌC . . 623.1.1. Bảo vệ nhóm amino . . . 633.1.2. Bảo vệ nhóm carboxyl . . . 633.1.3. Phương pháp tổng hợp peptide pha rắn . . 663.1.3.1. Giới thiệu . . . 663.1.3.2. Nguyên tắc . . . 663.1.3.3. Chất mang rắn . . . 673.1.3.4. Ví dụ . . . 683.1.4. Phương pháp tổng hợp peptide pha lỏng . . 70PROTEIN Y SINH HỌC3.2. PHƯƠNG PHÁP SẢN XUẤT COLLAGEN . . 713.3. PHƯƠNG PHÁP TÁI TỔ HỢP DNA . . 723.3.1. Thu nhận gene . . . 723.3.1.1. Tách các đoạn DNA từ bộ gene . . 733.3.1.2. Tổng hợp gene bằng phương pháp hóa học . 733.3.1.3. Lập ngân hàng c DNA . . 733.3.2. Vector chuyển gene . . . 753.3.2.1. Plasmid . . . 763.3.2.2. Phage ? . . . 763.3.2.3. Plasmid Ti . . . 763.3.2.4. Nhiễm sắc thể nhân tạo của nấm men YAC . 773.3.3. Enzyme cắt restriction endonuclease . . 783.3.4. Tạo plasmid tái tổ hợp . . . 793.3.4.1. Phương pháp đơn giản dùng các đầu cố kết . 793.3.4.2. Phương pháp dùng các đoạn nối . . 803.3.4.3. Phương pháp dùng enzyme terminal transferase . 813.3.5. Biến nạp DNA tái tổ hợp vào tế bào nhận . . 823.3.5.1. Hóa biến nạp . . . 823.3.5.2. Điện biến nạp . . . 823.3.5.3. Vi tiêm . . . 833.3.5.4. Bắn DNA vào tế bào . . 833.3.6. Hệ thống tế bào nhận . . . 833.3.6.1. Vi khuẩn Escherichia coli . . 833.3.6.2. Nấm men Sacchromyces cerevisiae . . 843.3.6.3. Tế bào thực vật . . . 853.3.6.4. Tế bào động vật . . . 853.3.7. Chọn lọc, tạo d òng và sự biểu hiện của gene . 863.3.7.1. Xác định dòng vi khuẩn chứa plasmid tái tổ hợp . 863.3.7.2. Sự biểu hiện của gene được tạo dòng . . 873.3.8. Ví dụ . . . . 873.3.8.1. Tổng hợp gen mpi mã hóa cho MPI biểu hiện trong E.colibằng phương pháp PCR . . 893.3.8.2. Tạo plasmid tái tổ hợp, biến nạp vào tế bào E.coli . 91PROTEIN Y SINH HỌC3.3.8.3. Nuôi cấy E.coli biểu hiện MPI bằng hệ thống lên men tựđộng . . . 923.4. PHƯƠNG PHÁP SẢN XUẤT KHÁNG THỂ ĐƠN DÒNG . 953.5. PHƯƠNG PHÁP SẢN XUẤT ENZYME TỪ VI SINH VẬT . 973.5.1. Thu nhận enzyme sạch từ phương pháp nuôi cấy bề mặt . 993.5.1.1. Chiết rút enzyme từ canh trường nuôi cấy bề mặt . 993.5.1.2. Tinh chế enzyme . . . 993.5.2. Thu nhận enzyme sạch từ phương pháp nuôi cấy bề sâu . 993.5.2.1. Phương pháp kết tủa enzyme bằng dung môi hữ u cơ hoặcmuối trung tính . . . 993.5.2.2. Phương pháp hấp phụ hoàn toàn bởi silicagen . 1003.6. NÂNG CAO CHẤT LƯỢNG PROTEIN . . 100CHƯƠNG 4: TINH SẠCH PROTEI N Y SINH HỌC . 1024.1. Xử lý sơ bộ để làm tăng nồng độ protein mong muốn . 1024.2. Tinh sạch protein . . . 1034.3. Đánh giá kết quả tinh sạch . . . 105CHƯƠNG 5: XỬ LÝ VÀ TỒN TRỮ PROTEIN Y SINH HỌC . 1075.1. Tính ổn định của protein . . . 1075.2. Hoàn nguyên và tồn trữ protein . . . 107KẾT LUẬN . . 109TÀI LIỆU THAM KHẢO . . 110