Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp i BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI NGUYỄN MINH THANH NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ðẶC ðIỂM BỆNH LÝ CỦA LỢN MẮC HỘI CHỨNG RỐI LOẠN HÔ HẤP VÀ SINH SẢN NUÔI TẠI HUYỆN VĂN CHẤN – TỈNH YÊN BÁI, ỨNG DỤNG KỸ THUẬT RT-PCR TRONG CHẨN ðOÁN LUẬN VĂN THẠC SỸ NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI - 2013 Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ii BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI NGUYỄN MINH THANH NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ðẶC ðIỂM BỆNH LÝ CỦA LỢN MẮC HỘI CHỨNG RỐI LOẠN HÔ HẤP VÀ SINH SẢN NUÔI TẠI HUYỆN VĂN CHẤN – TỈNH YÊN BÁI, ỨNG DỤNG KỸ THUẬT RT-PCR TRONG CHẨN ðOÁN Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60.64.01.01 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS. Nguyễn Thị Lan Hà Nội - 2013 Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp i LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam đoan rằng, số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn này là trung thực và chưa từng được sử dụng để bảo vệ một học vị nào. Tôi xin cam đoan rằng, mọi sự giúp đỡ cho việc hoàn thành luận văn này đã được cảm ơn, các thông tin trích dẫn trong luận văn đã được ghi rõ nguồn gốc. Hà Nội, tháng 10 năm 2013 Tác giả luận văn Nguyễn Minh Thanh Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ii LỜI CẢM ƠN Cho đến nay tôi đã hoàn thành luận văn tốt nghiệp của mình. Nhân dịp này tôi xin được bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến toàn thể thầy cô giáo trong khoa Thú y, đặc biệt PGS.TS Nguyễn Thị Lan người hướng dẫn khoa học và tận tình giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài. Tôi xin chân thành cảm ơn các cán bộ trong Bộ môn Bệnh lý Thú y, phòng thí nghiệm Trọng điểm Công nghệ sinh học thú y, Ban quản lý Đào tạo đã tạo mọi điều kiện thuận lợi và giúp đỡ tôi hoàn thành luận văn này. Cuối cùng tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè đồng nghiệp đã giúp đỡ, động viên tôi trong suốt thời gian thực tập và hoàn thiện luận văn. Hà Nội, tháng 10 năm 2013 Tác giả luận văn Nguyễn Minh Thanh Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG BIỂU vii DANH MỤC HÌNH ẢNH viii MỞ ðẦU 1 Tính cấp thiết của đề tài 1 Mục đích của đề tài 2 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài 2 CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 1.1. Khái quát về lịch sử và tình hình nghiên cứu Hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản trên lợn 3 1.1.1. Khái quát về lịch sử hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản ở lợn (Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome - PRRS) 3 1.1.2 Tình hình nghiên cứu PRRS trên thế giới và trong nước 5 1.2. Virus PRRS 10 1.2.1 Hình thái cấu trúc của virus PRRS 10 1.2.2. Phân loại virus PRRS 12 1.2.3. Sức đề kháng của virus PRRS 13 1.3. Dịch tễ học của bệnh 13 1.3.1. Động vật cảm nhiễm 13 1.3.2. Phương thức lây truyền 14 1.3.3. Cơ chế sinh bệnh 15 1.4. Triệu chứng của lợn mắc PRRS 17 1.4.1. Lợn nái 17 1.4.2. Lợn đực giống 17 1.4.3. Lợn con theo mẹ 17 1.4.4 Lợn con cai sữa và lợn choai 18 Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp iv 1.5. Bệnh tích của lợn mắc PRRS 18 1.5.1. Lợn nái mang thai 18 1.5.2. Lợn nái nuôi con, lợn choai và lợn vỗ béo 18 1.5.3. Lợn con theo mẹ 18 1.6. Các phương pháp chẩn đoán PRRS 19 1.6.1. Chẩn đoán lâm sàng 19 1.6.2 Chẩn đoán bằng phương pháp giải phẫu bệnh 19 1.6.3. Chẩn đoán bằng phương pháp huyết thanh học 19 1.6.4. Kỹ thuật RT - PCR 20 CHƯƠNG II ðỐI TƯỢNG, ðỊA ðIỂM, NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1. Đối tượng và địa điểm nghiên cứu 22 2.2. Nội dung nghiên cứu 22 2.3. Nguyên liệu 22 2.3.1. Mẫu bệnh phẩm 22 2.3.2. Hóa chất 22 2.3.3. Dụng cụ 23 2.4. Phương pháp nghiên cứu 23 2.4.1 Phương pháp quan sát 23 2.4.2. Phương pháp mổ khám 23 2.4.3. Phương pháp làm tiêu bản kiểm tra bệnh tích vi thể 23 2.4.4. Phương pháp nhuộm hóa mô miễn dịch (Immunohistochemistry - IHC) 26 2.4.5. Phương pháp RT-PCR 27 CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 3.1. Khái quát về điều kiện Tự nhiên - Kinh tế - Xã hội huyện Văn Chấn 30 3.2. Tình hình chăn nuôi lợn tại huyện Văn Chấn. 33 3.3. Tình hình dịch bệnh và sử dụng các loại vaccine trên đàn lợn tại huyện Văn Chấn 35 3.4. Tình hình hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản trên đàn lợn nuôi tại huyện Văn Chấn 37 Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp v 3.4.1 Nguyên nhân, ổ dịch đầu tiên và diễn biến dịch hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản ở lợn trên địa bàn huyện Văn Chấn 37 3.4.2 Tổng hợp chung tình hình Hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản ở đàn lợn nuôi trên địa bàn huyện Văn Chấn năm 2012 37 3.5. Triệu chứng lâm sàng chủ yếu của lợn mắc PRRS 41 3.6. Biến đổi bệnh lý của lợn mắc PRRS 48 3.6.1 Bệnh tích đại thể của lợn mắc PRRS 48 3.6.2. Bệnh tích vi thể của lợn mắc PRRS 52 3.7. Kết quả nhuộm hóa mô miễn dịch trên một số cơ quan của lợn mắc PRRS 58 3.8. Kết quả xác định virus PRRS bằng phương pháp RT-PCR 63 3.8. Kết quả xác định virus PRRS bằng phương pháp RT-PCR 63 KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 65 Kết luận 65 Đề nghị…………………………………………………………………………… 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO 66 Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT STT Tên viết tắt Tên ñầy ñủ 1 CPE Cytopathogenic Effect 2 ELISA Enzyme linked immunosorbent assay 3 HE Hematoxyline Eosin 4 IHC Immunohistochemistry 5 IFA Immunofluorescent assay 6 PRRS Porcine reproductive and respiratory syndrome 7 PRRSV Porcine reproductive and respiratory syndrome virus 8 RT-PCR Reverse transcription polymerasae chain reaction 9 TCID 50 50% Tissue culture infective dose Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp vii DANH MỤC BẢNG BIỂU STT TÊN BẢNG TRANG Bảng 3.1 Tình hình đàn lợn tính đến cuối tháng 2/2012 tại 31 xã, thị trấn huyện Văn Chấn 34 Bảng 3.2 Tình hình sử dụng các loại vaccine trên đàn lợn nuôi tại huyện Văn Chấn. 36 Bảng 3.3. Tổng hợp tình hình Hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản ở đàn lợn trên địa bàn huyện Văn Chấn năm 2012 40 Bảng 3.4. Kết quả thu thập mẫu tại xã Phúc Sơn và Hạnh Sơn huyện Văn Chấn 41 Bảng 3.5. Triệu chứng lâm sàng của lợn nái mắc PRRS 42 Bảng 3.6. Triệu chứng lâm sàng của lợn con theo mẹ, lợn sau cai sữa, lợn choai mắc PRRS 43 Bảng 3.7. Kết quả nghiên cứu một số bệnh tích đại thể ở lợn mắc PRRS 48 Bảng 3.8. Bệnh tích vi thể ở phổi, hạch phổi của lợn mắc PRRS 54 Bảng 3.9. Bệnh tích vi thể ở gan, lách, thận của lợn mắc PRRS 55 Bảng 3.10. Bệnh tích vi thể ở ruột, hạch ruột, tử cung của lợn mắc PRRS 56 Bảng 3.11. Kết quả nhuộm hóa mô miễn dịch một số cơ quan của lợn mắc PRRS 61 Bảng 3.12. Kết quả chẩn đoán virus PRRS bằng kỹ thuật RT-PCR 64 Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp viii DANH MỤC HÌNH ẢNH STT TÊN HÌNH TRANG Hình 1.1. Bản đồ lịch sử xuất hiện PRRS trên thế giới 4 Hình 1.2. Hình thái Virus PRRS 11 Hình 1.3. Hình ảnh cấu trúc hệ gen của virus PRRS 11 Hình 1.4. Đại thực bào bình thường 16 Hình 1.5. Đại thực bào bệnh lý 16 Hình 1.6 . Mô hình nguyên lý của phản ứng RT-PCR 20 Hình 3.1. Nái bị sảy thai 47 Hình 3.2. Lợn sốt, chán ăn 47 Hình 3.3. Lợn khó thở 47 Hình 3.4. Tím tai 47 Hình 3.5. Lợn con tiêu chảy 47 Hình 3.6. Lợn bị phát ban 47 Hình 3.7. Phổi viêm, hoại tử 51 Hình 3.8.Tím tai 51 Hình 3.9. Hạch lâm ba sưng, tụ máu 51 Hình 3.10. Thận xuất huyết điểm 51 Hình 3.11. Hạch lâm ba sưng, tụ máu 51 Hình 3.12. Lách nhồi huyết 51 Hình 3.13. Viêm kẽ phồi 57 Hình 3.14. Viêm kẽ phồi 57 Hình 3.15. Hạch lâm ba viêm, hoại tử 57 Hình 3.16. Hạch lâm ba viêm, hoại tử 57 Hình 3.17. Thận xuất huyết 57 Hình 3.18. Thận xuất huyết 57 Hình 3.19. Virus tập trung ở phổi (IHCx10 62 Hình 3.20. Virus tập trung ở phổi (IHCx40) 62 Hình 3.21. Virus phân bố ở hạch (IHCx10) 62 Hình 3.22. Virus phân bố ở hạch (IHCx40) 62 Hình 3.23. Kết quả phản ứng RT- PCR với mồi ORF5 64 [...]... nuôi t i huy n Văn Ch n - t nh Yên Bái, ng d ng k thu t RT- PCR trong ch n ñoán " M c ñích c a ñ tài - Làm rõ m t s ñ c ñi m b nh lý ch y u c a l n m c h i ch ng r i lo n hô h p và sinh s n nuôi t i ñ a bàn huy n Văn Ch n - T nh Yên Bái - ng d ng k thu t RT- PCR ñ ch n ñoán b nh Ý nghĩa khoa h c và th c ti n c a ñ tài - Cung c p các thông tin nh m t o cơ s khoa h c cho vi c ch n ñoán, phòng và ch ng d ch... các nhà qu n lý, h chăn nuôi ñưa ra các bi n pháp tái ñàn nhanh chóng và b n v ng sau khi d ch x y ra, giúp nâng cao hi u qu trong chăn nuôi Trư ng ð i H c Nông Nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p 2 CHƯƠNG I T NG QUAN TÀI LI U 1.1 Khái quát v l ch s và tình hình nghiên c u H i ch ng r i lo n hô h p và sinh s n trên l n 1.1.1 Khái quát v l ch s h i ch ng r i lo n hô h p và sinh s n l... tiêm phòng vacxin (Anette, 1997) [14] 1.6.4 K thu t RT - PCR Dùng ph n ng RT - PCR phân tích m u máu (ñư c l y trong giai ño n ñ u c a pha c p tính) ñ xác ñ nh s có m t c a virus, ñây là ph n ng tương ñ i nh y và chính xác K thu t RT – PCR hay còn g i là ph n ng PCR ngư c là m t ph n ng nhân m t ño n gi i h n c a khuôn RNA, theo nguyên lý c a ph n ng PCR bao g m hai giai ño n: Giai ño n th nh t là chuy... m b nh lý, tri u ch ng lâm sàng c a l n nuôi t i ñ a bàn huy n Văn Ch n và nh ng h u qu do d ch gây ra trên ñàn l n là m t vi c quan tr ng ñ t ñó ñưa ra nh ng bi n pháp phòng ch ng d ch hi u qu và gi m thi u nh ng t n th t do d ch b nh gây ra Xu t phát t nh ng th c t trên chúng tôi ti n hành th c hi n ñ tài: " Nghiên c u m t s ñ c ñi m b nh lý c a l n m c h i ch ng r i lo n hô h p và sinh s n nuôi t... ñ i di n là ch ng virut 2332 Meng XJ và cs [26]; Kapur V và cs 1996 [23], b ng k t qu phân tích trình t nucleotid và axit amin c a VR 2332 và virut Lelystad cho r ng các virut này ñang ti n hoá do ñ t bi n ng u nhiên và do tái t h p trong gen K t qu nghiên c u c a Thanawongnuwech R và cs, 1998 [36] cho bi t th i gian nhi m trùng huy t, t c ñ bài th i và tái s n trong ñ i th c bào c a PRRSV l n 4 ñ... th i gian t n t i c a PRRSV trong qu n th : B ng gây b nh th c nghi m, Horter DC, 2002 [22] ñã phát hi n ñư c PRRSV trong 100% cá th trong t ng s 60 l n 3 tu n tu i sau 63 ngày gây nhi m và 90% sau 105 ngày gây nhi m N u l n m b nhi m b nh trong kho ng 85-90 ngày c a giai ño n mang thai, PRRSV có th nhi m sang bào thai, l n con sinh ra m c b nh b m sinh ngay sau khi sinh Trong nh ng trư ng h p này,... nh sang l n m n c m Wills R W và cs, 1997 [44] thông báo, các loài ñ ng v t có vú: Loài g m nh m, g u trúc M , chó, mèo, thú có túi, ch n hôi và các loài chim (chim s , sáo nuôi) có vai trò quan tr ng trong vi c làm lây lan PRRSV Không có loài nào là vector sinh h c Zimmerman và cs, 1997 [43] ñã gây b nh qua ñư ng mi ng cho gà, ngan, gà lôi v i kho ng 104 TCID50 PRRSV Không th y xu t hi n tri u ch ng... loài chim nào và chúng không có s thay ñ i ph n ng huy t thanh ñ i v i PRRSV Tuy nhiên có th phân l p ñư c PRRSV sau khi gây nhi m 5 ngày trong phân gà, 5-12 ngày trong phân gà lôi Theo Zimmerman và cs, 1997 [43] các loài thu c m di trú (v t tr i) là m t trong nh ng vector làm lây lan PRRSV trong các trang tr i Ông và các cs ñã phân l p ñư c virut này trong phân c a v t tr i Theo Dee và cs, ñó là do... cao hơn so v i khu v c chăn nuôi gia ñình (29,98%) - Trong 130 m u huy t thanh dương tính có 59,23% s m u nhi m ch ng B c M , 36,92% s m u nhi m c hai ch ng B c M và Châu Âu, ch có 3,8% s m u nhi m ch ng Châu Âu Nguy n Lương Hi n và cs, 2001 [5] ñi u tra tình hình H i ch ng r i lo n hô h p và sinh s n ñàn l n nuôi trên ñ a bàn Thành ph H Chí Minh và các t nh lân c n cho th y trong s 2036 m u huy t thanh... nh ñã x y ra trên ñ a bàn t nh Yên Bái, huy n Văn Ch n là m t trong nh ng huy n ch u nh hư ng l n t d ch tai xanh x y ra trên ñ a bàn t nh Văn Ch n là m t huy n mi n núi, n n kinh t ch y u d a vào các s n ph m tr ng tr t, chăn nuôi Do d ch x y ra l n ñ u tiên nên ngư i chăn nuôi chưa hi u h t v tính ch t nguy hi m c a d ch nên còn ch quan trong công tác phòng ch ng, không khai báo k p th i khi l n . loạn hô hấp và sinh sản nuôi tại huyện Văn Chấn - tỉnh Yên Bái, ứng dụng kỹ thuật RT-PCR trong chẩn ñoán ". Mục ñích của ñề tài - Làm rõ một số đặc điểm bệnh lý chủ yếu của lợn mắc hội. chứng rối loạn hô hấp và sinh sản nuôi tại địa bàn huyện Văn Chấn - Tỉnh Yên Bái. - Ứng dụng kỹ thuật RT-PCR để chẩn đoán bệnh. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của ñề tài - Cung cấp các thông. BỆNH LÝ CỦA LỢN MẮC HỘI CHỨNG RỐI LOẠN HÔ HẤP VÀ SINH SẢN NUÔI TẠI HUYỆN VĂN CHẤN – TỈNH YÊN BÁI, ỨNG DỤNG KỸ THUẬT RT-PCR TRONG CHẨN ðOÁN Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60.64.01.01 Người