BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI VŨ VIỆT HẰNG NGHI£N CøU T¸C DơNG CđA chÕ phÈm "GI¸NG CHØ TI£U KH¸T LINH" ĐIềU TRị RốI LOạN LIPID MáU TRÊN động vật ĐáI THáO ĐƯờNG týp THựC NGHIệM Chuyờn ngnh : Y học cổ truyền Mã số : 62720201 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỘI - 2013 CÔNG TRÌNH ĐƢỢC HỒN THÀNH TẠI TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS Nguyễn Thị Hà PGS TS Đỗ Thị Phƣơng Phản biện 1: Phản biện 2: Phản biện 3: Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án cấp Trường họp Trường Đại học Y Hà Nội Vào hồi ngày … tháng năm Có thể tìm hiểu luận án 1- Thư viện Đại học Y Hà Nội 2- Thư viện Quốc gia 3- Thư viện thông tin Y học Trung ương ĐẶT VẤN ĐỀ Tính cấp thiết đề tài Hội chứng chuyển hố chuỗi yếu tố nguy tim mạch thay đổi chuyển hố liên quan với tình trạng tăng trọng lượng mỡ thể, RLLPM (RLLPM), rối loạn chuyển hoá (RLCH) carbohydrat, tăng huyết áp (THA) béo phì coi “bộ tứ chết người”; yếu tố nguy hàng đầu gây vữa xơ động mạch (VXĐM), bệnh tim mạch đột quỵ Ở bệnh nhân ĐTĐ lâu năm, tình trạng tăng glucose máu, RLLPM (tăng LDL-C, tăng triglycerid, giảm HDL-C) kéo dài dẫn đến nhiều RLCH đan xen nguyên nhân gây VXĐM để lại hậu xấu hệ tim mạch gây nên nhiều biến chứng mạn Do vậy, thuốc y học đại (YHHĐ) y học cổ truyền (YHCT) điều trị ĐTĐ nhằm kiểm soát glucose máu, điều chỉnh RLLPM để giảm nguy tiến triển biến chứng giảm nguy bệnh mạch vành, hạn chế tác dụng phụ thuốc ngày trở nên cấp thiết vấn đề quan tâm hàng đầu nhà khoa học Hiện nay, nhiều nhà khoa học Việt Nam giới có xu hướng tìm kiếm ứng dụng thuốc nguồn gốc tự nhiên có tác dụng điều trị ĐTĐ hạn chế rối loạn lipid nguồn dược liệu tự nhiên phong phú, dễ sử dụng tác dụng phụ, giá thành rẻ dùng thời gian lâu dài Theo lý luận y học cổ truyền (YHCT), ĐTĐ có nhiều điểm tương đồng với chứng tiêu khát RLLPM tương ứng với chứng đàm thấp Trên lâm sàng RLLPM bệnh nhân ĐTĐ có nhiều điểm tương đồng với chứng tiêu khát thể có đàm thấp Cho đến có nhiều vị thuốc, thuốc nghiên cứu ứng dụng điều trị chứng tiêu khát chứng đàm thấp “Giáng tiêu khát linh” bào chế dựa sở thuốc nghiệm phương “Giáng thang” sử dụng lâm sàng để điều trị chứng tiêu khát có đàm thấp (RLLPM bệnh nhân ĐTĐ) Do vậy, để có sở khoa học chắn khẳng định hiệu tính an tồn thuốc “Giáng tiêu khát linh”, đề tài: Nghiên cứu tác dụng chế phẩm “Giáng tiêu khát linh” điều trị RLLPM động vật ĐTĐ týp thực nghiệm thực nhằm mục tiêu sau: Mục tiêu luận án Nghiên cứu độc tính cấp bán trường diễn viên nang “Giáng tiêu khát linh” động vật thực nghiệm Nghiên cứu tác dụng viên nang “Giáng tiêu khát linh” số số lipid, glucose hệ thống chống oxy hoá máu động vật ĐTĐ týp thực nghiệm NHỮNG ĐÓNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN Gây ĐTĐ týp chế độ ăn tiêm STZ chuột cống trắng Nghiên cứu độc tính: Với liều uống tối đa chuột chịu đựng 53,57g cốm/1kg thân trọng, gấp 24,8 liều dùng người khơng có độc tính cấp chưa xác định LD50 GCTKL chuột nhắt trắng GCTKL liều 0,54g/kg/ngày 1,62 g/kg/ngày, uống liên tục tuần không gây độc tính bán trường diễn chức tạo máu, chức gan, thận hình thái gan thận thỏ Giáng tiêu khát linh với liều uống 840 1260mg/kg TT có tác dụng: - Tác dụng dự phòng điều trị RLLPM chuột cống trắng gây RLLPM chế độ ăn - Tác dụng điều trị RLLPM hạ glucose máu chuột cống trắng gây ĐTĐ týp sau 30 ngày hiệu rõ rệt sau 60 ngày uống thuốc - Cải thiện tình trạng chống oxy hố máu chuột cống trắng gây rối loạn lipid máu ĐTĐ týp BỐ CỤC CỦA LUẬN ÁN: Đặt vấn đề trang; Chương 1: Tổng quan 39 trang; Chương 2: Đối tượng phương pháp nghiên cứu 15 trang; Chương 3: Kết nghiên cứu 40 trang; Chương 4: Bàn luận 34 trang; Kết luận trang; Kiến nghị đề xuất trang Luận án có 33 bảng, 35 hình, biểu đồ sơ đồ, 134 tài liệu tham khảo (Tiếng Việt 55, tiếng Anh 61, tiếng Trung Quốc 18) Chƣơng 1: TỔNG QUAN 1.1 Rối loạn chuyển hoá lipid, hoạt động gốc tự vữa xơ động mạch ĐTĐ 1.1.1 ĐTĐ ĐTĐ hội chứng rối loạn chuyển hóa với tăng glucose máu thiếu tuyệt đối tương đối insulin Sự thiếu hụt insulin ảnh hưởng tới chuyển hóa carbohydrat, protein lipid; gây rối loạn định nội môi nước điện giải Tình trạng rối loạn kéo dài dẫn đến biến chứng bệnh nhân ĐTĐ nhiều quan đặc biệt thận, mắt, thần kinh mạch máu 1.1.2 Rối loạn chuyển hóa lipid ĐTĐ 1.1.2.1 Lipid lipoprotein máu Thành phần lipid máu acid béo tự do, triglycerid (TG), cholesterol toàn phần (TC) gồm cholesterol tự (FC) cholesterol este (CE), phospholipid (PL) 1.1.2.2 Chuyển hóa lipoprotein LP chuyển hóa theo hai đường ngoại sinh nội sinh với tham gia enzyme protein vận chuyển đóng vai trị sinh lý quan trọng chuyển hoá lipoprotein LPL (lipoprotein lipase), HL (hepatic lipase), LCAT (lecithin cholesterol acyl transferase) EL (endothelial lipase) Chylomicron: TG, TC, PL từ lipid thức ăn hấp thu qua niêm mạc ruột non tạo thành; VLDL: Giàu TG, tạo thành gan 90% ruột non 10%, vào máu đến mơ ngoại vi, có vai trị vận chuyển TG nội sinh; IDL: Trở lại gan, gắn vào receptor đặc hiệu (ApoB, E) màng tế bào chịu tác động lipase gan; LDL: Là chất vận chuyển cholesterol máu, chủ yếu dạng CE, đến mô ngoại vi; HDL: Được tổng hợp gan(HDL sinh) từ thoái giáng VLDL CM máu HDL có vai trị vận chuyển cholesterol từ mô ngoại vi trở gan, yếu tố bảo vệ chống VXĐM 1.1.2.3 Rối loạn chuyển hóa lipoprotein Năm 1965, Fredrickson vào kỹ thuật điện di, siêu ly tâm thành phần lipid huyết phân thành týp dựa thay đổi thành phần LP RLLPM tiên phát di truyền thứ phát sau bệnh khác béo phì, nghiện rượu, rối loạn nội tiết (ĐTĐ, suy giáp trạng, ), hội chứng thận hư, suy thận mạn, sau dùng kéo dài số thuốc (các loại glucocorticoid, thuốc lợi tiểu,…) Chế độ ăn rối loạn chuyển hố lipoprotein: Người ta thấy có mối tương quan thuận mức tiêu thụ chất béo bão hòa với nồng độ cholesterol máu 1.1.2.4 Rối loạn chuyển hóa lipid ĐTĐ Các đặc điểm chung rối loạn chuyển hóa lipid bệnh ĐTĐ TG máu tăng, HDL-C giảm xuất phần tử LDL nặng nhỏ (tỷ trọng tăng kích thước nhỏ hơn) Người ta quan sát thấy tăng mức độ glycosyl hóa phản ứng khơng enzym với tất loại LP tuần hoàn, điều làm tăng khả gây VXĐM * Rối loạn chuyển hóa lipid ĐTĐ týp - Tăng TG huyết tương: bất thường phổ biến bệnh nhân ĐTĐ týp tăng TG huyết tương tăng VLDL Giảm HDL-C huyết tương thường gặp phối hợp với tăng TG máu * Rối loạn chuyển hóa lipid ĐTĐ týp Ảnh hưởng ĐTĐ týp chuyển hóa lipid lipoprotein phức tạp nhiều chịu tác động nhiều yếu tố tình trạng kháng insulin, béo phì, phương pháp điều trị, mức độ kiểm soát glucose máu, sử dụng thuốc điều trị rối loạn phối hợp điều trị biến chứng bệnh ĐTĐ Rối loạn chuyển hóa lipid đặc trưng ĐTĐ týp tăng TG, CT giảm HDL-C, xuất phần tử LDL nặng nhỏ (tỷ trọng tăng kích thước nhỏ hơn) huyết tương Tăng TG máu tăng tiết VLDL giảm hoạt độ enzym LPL, đặc trưng ứ đọng phần tử tàn dư sau thuỷ phân VLDL, yếu tố gây VXĐM 1.1.3 Stress oxy hoá bệnh ĐTĐ 1.1.3.1 Các dạng oxy hoạt động thể trình peroxi hóa lipid Các dạng oxy hoạt động bao gồm gốc tự có oxy ln sản sinh hoạt động sinh lý thể sống Anion superoxid (O2– ) tạo nên trình hô hấp tế bào gốc tự đầu tiên, từ sinh hàng loạt dạng oxy hoạt động khác hydroperoxid (H2O2), gốc hydroxyl (HO), oxy đơn bội (1O2), gốc peroxyl (LOO), gốc alkyl (L), gốc alkoxyl (LO) 1O2, H2O2, HO chất độc tế bào chúng cơng acid béo khơng bão hịa có lipid màng tế bào gây nên biến đổi màng tế bào biến đổi phân tử DNA, gây đột biến gen 1O2, HO có hoạt tính hố học mạnh, chúng thủ phạm gây peroxi hóa lipid màng, gốc HO oxy hóa hàng trăm phân tử acid béo khơng bão hịa nhiều nối đơi theo chế dây truyền trước bị dập tắt 1.1.3.2 Hệ thống chống oxy hóa thể Hệ thống chống oxy hố thể có vai trị ngăn ngừa, chống lại loại bỏ tác dụng độc hại gốc tự dạng oxy hoạt động khác * Hệ thống chống oxy hóa có chất enzym : Loại tồn chủ yếu tế bào; hoạt độ enzym chống oxy hóa thấp huyết tương, dịch sinh học khác dịch não tủy, bao hoạt dịch… Superoxid dismutase (SOD - EC.1.15.1.1): Enzym có tất tế bào có chuyển hóa oxy, xúc tác phân hủy anion superoxid Catalase: Là enzym chống oxy hóa biết đầu tiên, xúc tác phản ứng phân hủy hydroperoxid vô nồng độ cao Glutathion peroxidase (GPx – EC.1.11.1.9): Glutathion peroxidase (GPx) xúc tác phản ứng loại bỏ peroxid hữu H2O2 có nồng độ thấp GSH glutathion dạng khử, GSSG glutathion dạng oxy hóa, ROOH peroxid hữu vơ * Hệ thống chống oxy hóa có chất khơng enzym Gồm có nhóm nhóm polyphenol, nhóm thiol nhóm phối tử sắt hay đồng Chúng có sẵn thể đưa từ vào theo dạng thức ăn, nước uống 1.1.3.3 Stress oxy hóa bệnh ĐTĐ Các bệnh nhân ĐTĐ thường cho chịu tác động stress oxy hóa Khi nồng độ glucose tế bào cao gây độc chế tăng chuyển hoá glucose theo đường polyol, glucosamin, tạo thành sản phẩm tận AGE, tượng glycosyl hố khơng enzym, tạo thành hoạt hoá protein kinase C * Tăng chuyển hoá glucose theo đường Polyol Chuyển hoá glucose theo đường polyol góp phần gây glycosyl hố protein khơng enzym Khi nồng độ glucose tế bào cao, aldose reductase xúc tác phản ứng chuyển glucose thành polyalcol sorbitol cách khử nhóm aldehyd glucose sử dụng cofactor NADPH mức làm cạn kiệt NADPH tế bào, làm giảm lượng GSH * Hiện tượng Gluco-oxy hoá (gluco-oxidation) tạo thành gốc tự sản phẩm tận (AGE) Trong q trình glycosyl hố, oxy hoá 3-deoxyglucoson thành  glucose dạng dicarbonyl sản sinh gốc tự do: anion superoxid ( O ), hydroxy peroxid (H2O2) gốc tự hydroxyl (HO•) Các gốc tự mở đầu dây chuyền sản sinh gốc tự nhiều gấp bội Hiện tượng glycosyl hoá tăng nồng độ glucose cao Các sản phẩm glycosyl hố bị oxy hố tạo sản phẩm tận glycosyl (AGE) tích tụ lâu ngày gây tổn thương mô 1.1.4 ĐTĐ vữa xơ động mạch * Thế vữa xơ động mạch VXĐM bệnh động mạch lớn vừa, thể hai loại tổn thương đặc trưng mảng vữa xơ giàu cholesterol mơ xơ hình thành lớp nội mạc phần lớp trung mạc; làm hẹp lòng động mạch, cản trở máu đến nuôi dưỡng tổ chức Có nhiều yếu tố nguy gây nên VXĐM RLCH lipid, THA, béo phì, ĐTĐ,…trong rối loạn chuyển hóa lipid đóng vai trị chủ yếu * ĐTĐ vữa xơ động mạch Đối với bệnh nhân ĐTĐ týp 2, chế VXĐM phức tạp Ngoài yếu tố nêu cịn có tham gia thúc đẩy trình VXĐM THA, nồng độ cao glucose máu, kháng insulin, giảm nhạy cảm insulin, sản phẩm tận q trình glycosyl hóa, 1.2 ĐTĐ VÀ RỐI LOẠN CHUYỂN HOÁ LIPID THEO Y HỌC CỔ TRUYỀN 1.2.1 ĐTĐ theo quan niệm Y học cổ truyền Y học cổ truyền khơng có bệnh danh “ĐTĐ”; đối chiếu với chứng trạng lâm sàng, bệnh quy vào phạm vi chứng “tiêu khát” Chứng tiêu khát YHCT chứng nhiều nguyên nhân gây ra, lâm sàng lấy triệu chứng uống nhiều, ăn nhiều, tiểu tiện nhiều, gầy sút, mệt mỏi nước tiểu có vị gọi chứng “Tam đa thiểu”(Nội kinh tố vấn) “Tiêu” có ba hàm ý, thức ăn nước uống tiêu nhanh nên mau đói uống nhiều, hai tiêu hao tân dịch nhiều làm cho tân dịch nuôi dưỡng, âm không thắng dương, hỏa nhiệt nội sinh, ba hình thể yếu gầy, nhục teo nhẽo, sút cân 1.2.1.2 Cơ chế bệnh sinh Theo Hải Thượng Lãn Ông: "Chứng tiêu khát phần nhiều hoả làm tiêu hao chân âm, năm chất dịch khơ kiệt mà sinh ra" tạng phế, tỳ, thận chủ yếu Cơ chế bệnh sinh chứng tiêu khát tóm tắt sơ đồ sau: ẨM THỰC BẤT TÖC TIÊN THIÊN BẤT TÖC NGŨ TẠNG HƯ NHƯỢC TÁO NHIỆT THƯƠNG PHẾ TỔN THƯƠNG TỲ VỊ TÌNH CHÍ THẤT ĐIỀU KHÍ UẤT HĨA HỎA LAO LỰC QUÁ ĐỘ ÂM DỊCH TIÊU HAO ÂM HƯ NỘI NHIỆT TÂN DỊCH MẤT PHÂN BỐ ĐA ẨM PHẾ VỊ TÁO NHIỆT TRUNG TIÊU NHIỆT MẠNH TIÊU CỐC ĐA THỰC TỲ VỊ KHÍ HƯ THẤP NHIỆT TINH VI BÂT SINH, TỨ CHI THẤT DƯỠNG GÀY MÕN CAN THẬN ÂM HƯ TÀNG CHỨA ĐA THẤT ĐIỀU, CỐ NIỆU NHIẾP VÔ NĂNG 1.2.2 Quan niệm YHCT hội chứng RLLPM 1.2.2.1 Chứng đàm thấp, nguyên nhân, chế bệnh sinh Đàm thấp sản phẩm bệnh lý, đàm chất đặc, thấp không đặc đàm, đàm thấp sau sinh gây chứng bệnh Nguồn gốc sinh đàm thấp vận hoá bất thường tân dịch ngưng tụ biến hoá mà thành Bình thường vận hố thủy thấp thể điều hoà tạng tỳ, phế, thận Bởi đàm thấp có liên quan đến tạng tỳ, phế, thận Chứng thuộc tỳ chứng quan trọng vấn đề chế sinh chứng đàm trệ Đàm thấp tỳ dương chức vận hoá, làm chuyển hoá tân dịch bị ngưng trệ lại thành thấp, thấp thắng sinh đàm … Có loại đàm: đàm hữu hình đàm vơ hình Đàm hữu hình chất đàm sinh từ phế, thận Hội chứng RLLPM theo YHCT đàm vơ hình gây bệnh Biểu lâm sàng đa dạng Đàm thấp người béo phì, lại nặng nề 1.2.2.3 Sự tương đồng chứng đàm thấp hội chứng RLLPM Căn biểu lâm sàng, người ta thấy hội chứng RLLPM chứng đàm thấp có tương đồng sâu sắc bệnh nguyên, bệnh sinh nguyên tắc trị liệu Chứng đàm thấp phát sinh nguyên nhân chủ yếu sau: + Yếu tố thể chất tiên thiên định, thường tiên thiên bất túc + Yếu tố ăn uống: ăn nhiều chất cao lương, thức ăn béo làm tổn thương tỳ vị, khiến vận hoá thất điều, đàm thấp nội sinh mà gây bệnh + Yếu tố vận động thể lực: nằm nhiều hại khí, ngồi nhiều hại nhục Thương khí dẫn đến khí hư, thương nhục dẫn đến tỳ hư, tỳ khí hư suy mà gây bệnh + Yếu tố tinh thần (thất tình) lo nghĩ hại tỳ, giận hại can, can mộc vượng khắc tỳ thổ làm tỳ vị rối loạn, hư yếu, cơng vận hố suy giảm, đàm trọc ứ trệ kinh mạch mà sinh bệnh Đây yếu tố stress YHHĐ 1.3 ĐIỀU TRỊ ĐTĐ VÀ RLLPM THEO Y HỌC HIỆN ĐẠI VÀ Y HỌC CỔ TRUYỀN 1.3.1 Y học đại điều trị ĐTĐ RLLPM Ở bệnh nhân ĐTĐ RLCH đan xen phức tạp RLLPM vừa yếu tố nguy cơ, vừa hệ tình trạng thiếu insulin tăng glucose máu bên cạnh yếu tố nguy khác, chiến lược điều trị cần thiết phải song song mục tiêu là: (1) Kiểm soát glucose máu (2) Điều trị RLLPM 1.3.2 Y học cổ truyền điều trị ĐTĐ RLLPM 1.3.2.1 Điều trị chứng tiêu khát Căn vào chế phát bệnh âm hư sinh nội nhiệt, nội nhiệt tiêu, âm hư gốc bản, điều trị thuốc dựa vào nguyên tắc "Bổ hư" thực chất dưỡng âm, bổ hư thận thủy, tả: thực dương nhiệt tâm hỏa, trừ táo nhiệt trường vị Vậy chứng tiêu khát cần bổ âm hư, trừ nhiệt, ích khí, sinh tân, hoạt huyết, hóa ứ" 1.3.2.2 Điều trị chứng đàm thấp: - Nguyên tắc trị liệu: (1)Vì bệnh có đặc điểm "bản hư tiêu thực" điều trị phải ý tiêu, (2) Phải trọng phép chữa đàm đàm thấp có vai trị quan trọng chế bệnh sinh (3) Trị đàm phải ý nguyên tắc "trị đàm tiên trị khí, khí thuận đàm tự tiêu" Gồm phương pháp, bệnh nhẹ dùng hoá đàm, bệnh nặng dùng tiêu đàm, đàm chỗ khơng phải dùng phép điều đàm Vì đàm hội chứng RLLPM vơ hình, lưu hành ứ đọng huyết mạch nên dùng pháp hoá đàm để điều trị nguyên nhân sinh đàm, làm cho đàm tự hết không dùng đến phép tiêu điều đàm - Các phương pháp điều trị bản: có phương pháp Hoạt huyết hố ứ;Tư âm dưỡng huyết; Trừ đàm hố trọc; Thư can bình can; Lợi thuỷ thẩm thấp; Thanh nhiệt giải độc; Ơn kinh thơng dương; Bổ ích nguyên khí: 1.3.2.3 Thể bệnh kết hợp chứng tiêu khát thể trạng đàm thấp Trong thể lâm sàng chứng tiêu khát, thể có biểu lâm sàng nguyên nhân chế bệnh sinh theo YHCT tương ứng với chứng tiêu khát người bệnh trạng đàm thấp là: Thể tỳ vị khí hư thể thấp nhiệt trung trở 1.4.1 Mơ hình gây ĐTĐ thực nghiệm týp Để gây mơ hình ĐTĐ týp động vật thực nghiệm, người ta sử dùng hoá chất gây phá huỷ tế bào β tuyến tuỵ Hai thuốc thường sử dụng alloxan streptozotocin (STZ) 1.4.2 Mơ hình gây ĐTĐ týp - Bằng chọn lọc tự nhiên lai tạo giống chủng: chuột cống GK (Gotokakizaki), chuột cống ZDF (Zucker Diabectic Fatty), chuột nhắt chủng KK-Ay, chuột nhắt Db/Db…Gần đây, phương pháp chuột nuôi chế độ ăn giàu lipid gây béo phì, RLLPM sau tiêm STZ với liều từ 50-100mg/kg thể trọng liều 1.4.3 Streptozotocin mơ hình gây ĐTĐ động vật thực nghiệm STZ có tên hố học 2deoxy-2 (3methyl-3nitrosoureido)-D-glucopyranose, phân lập lần đầu năm 1960 từ Streptozotocin achromogenes Dùng STZ nhiều liều thấp tăng glucose máu xuất từ từ có thâm nhiễm tế bào lympho đảo tuỵ (viêm đảo tuỵ) Dùng STZ nhiều liều thấp dường có chế bệnh sinh giống ĐTĐ týp người Trong năm gần đây, STZ nhà khoa học giới Việt nam dùng gây ĐTĐ thực nghiệm Năm 2000, Reed M.J cộng tạo mơ hình động vật ĐTĐ týp chuột cống trắng cách tiêm STZ cho chuột nuôi dưỡng chế độ ăn giàu chất béo gây béo phì 1.5 Xuất xứ thuốc Bài thuốc nghiên cứu xuất phát từ thuốc nghiệm phương "Giáng thang" trích từ “Thiên gia diệu phương” thành phần gồm: Đan sâm 8g, hồng tinh 4g, hà thủ đỏ 8g, trạch tả 8g, sơn tra 6g trị chứng đàm trệ gia thêm vị: sinh hoàng kỳ 8g, linh chi 8g, thiên hoa phấn 8g, hoàng liên 4, ngưu tất 6g, trị chứng tiêu khát (ĐTĐ) ích trí nhân 4g để ơn bổ tì vị Bài thuốc cơng bổ kiêm tả, lấy bổ làm gồm: Bổ khí (hồng kỳ), Bổ huyết (Hà Thủ Ơ), Bổ âm, sinh tân (Hoàng tinh, Thiên hoa phấn); Tả pháp gồm: hoạt huyết (ngưu tất, đan sâm), nhiệt hoá thấp (hoàng liên) Các vị thuốc hỗ trợ gồm: Sơn tra tác dụng tiêu tích trệ, hố đàm, thấp ứ trệ, giải độc; Ích trí nhân tác dụng điều hồ ích vị, ơn ấm tỳ vị, giảm bớt tính lạnh vị thuốc khác CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Chất liệu đối tƣợng nghiên cứu 2.1.1 Thuốc nghiên cứu: Cốm “Giáng tiêu khát linh” Liều dùng người 50kg 30 – 60 ngày: Liều 1: 18 viên 500mg (9g cốm)/ngày (tương đương thang thuốc sắc uống/ngày) Liều 2: 12 viên 500mg (6g cốm)/ngày Liều lượng thuốc uống cho chuột nghiên cứu thực nghiệm: hệ số chuyển đổi tương đương người chuột cống 1:7 liều uống 1260mg/1kg thân trọng/ngày liều uống 840mg cốm /1kg thân trọng/ngày 2.1.2 Đối tƣợng nghiên cứu 2.1.2.1 Độc tính cấp bán trường diễn: - Chuột nhắt trắng chủng Swiss, hai giống, khoẻ mạnh, nặng 18-22g; Thỏ chủng Newzealand White, lông trắng, giống, khoẻ mạnh, 1,7 - 2,2kg - Hố chất máy móc: Kit định lượng enzym chất chuyển hố máu: ALT, AST, bilirubin tồn phần, albumin, cholesterol Dung dịch xét nghiệm máu ABX Minidil LMG hãng ABX - 11 2.2.3.5 Đánh giá tác dụng điều trị „„Giáng tiêu khát linh” số glucose, lipid máu, trạng thái chống oxy hố máu thay đổi mơ bệnh học chuột cống trắng gây ĐTĐ týp Các lô 6, 7, chuột ăn chế độ ăn giàu lipid (40% lipid) suốt q trình thí nghiệm Ngày thứ 31, chuột gây ĐTĐ cách tiêm STZ liều vào màng bụng với liều 50mg/kg Sau 48-72 lấy máu đuôi chuột định lượng nồng độ glucose, nồng độ glucose ≥ 11mmol/L xem chuột ĐTĐ Chuột gây ĐTĐ, hàng ngày trước ăn 30 phút chuột uống: Lô (n=14) uống dung dịch NaCl 0,9% liều 1ml/100gam Lô (n=14) Lô (n=14) uống GCTKL liều 840mg/kg 1260mg/kg/ngày Các thời điểm ngày thứ 31, 61, 91 nghiên cứu (Sau 30, 60 ngày uống GCTKL), lô chuột giết chuột lô, lấy máu tim xác định nồng độ TG, TC, LDL-C, HDL-C, TAS huyết hoạt độ SOD hồng cầu GPx máu toàn phần Ngày thứ 91 nghiên cứu, lô chọn ngẫu nhiên chuột xác định mô bệnh học ĐMC 2.3 Các kỹ thuật đƣợc sử dụng nghiên cứu Tiến hành Khoa Hố sinh BV Việt Nam–Thuỵ Điển, ng bí - Kỹ thuật định lượng glucose, TC, TG, HDL-C, LDL-C, TAS huyết tương, hoạt độ SOD hồng cầu, GPx máu toàn phần THb máy phân tích hóa sinh tự động Olympus-AU 400 (Nhật Bản) thuốc thử hãng - Kỹ thuật mô bệnh học: Kỹ thuật vi thể thực Bộ môn Giải phẫu bệnh Trường ĐHY Hà Nội 2.4 Xử lý số liệu * Nghiên cứu độc tính cấp bán trường diễn Kết xử lý thống kê theo phương pháp t – test Student test trước sau Số liệu biểu diễn dạng: X ± SD Sự khác biệt có ý nghĩa p < 0,05 * Nghiên cứu tác dụng thuốc Kết nghiên cứu xử lý thuật toán thống kê Y học, biểu diễn dạng giá trị trung bình, độ lệnh chuẩn giá trị trung vị So sánh khác biệt nhóm sử dụng thuật tốn wilcoxon rank-sum test (Mann-Whitney) CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Kết nghiên cứu độc tính cấp bán trƣờng diễn giáng tiêu khát linh 3.1.1 Kết nghiên cứu độc tính cấp chuột nhắt trắng Giáng tiêu khát linh 53,57 gam/kg thể trọng chuột, gấp 24,8 lần liều tương đương dùng người (tính chuột nhắt trắng hệ số ngoại suy liều 12) thuốc thử biểu độc tính cấp; chuột khơng có tượng đặc biệt: chuột ăn uống, vận động bình thường, chuột khơng bị khó thở, khơng bị ỉa, khơng có chuột chết Chưa xác định LD50 12 “Giáng tiêu khát linh” chuột nhắt trắng đường uống theo phương pháp Litchfield – Wilcoxon 3.1.2 Kết nghiên cứu độc tính bán trƣờng diễn thỏ 3.1.2.2 Đánh giá chức tạo máu Bảng 3.2 Ảnh hưởng Giáng tiêu khát linh đến số lượng hồng cầu, hàm lượng huyết săc tố, hematocrit, thể tích trung bình hồng cầu Lơ chuột (n=10) Lơ chứng Lô trị Lô trị Thời gian Số lƣợng hồng cầu (T/l) p(1,2) > 0,05 5,18 ± 0,44 5,14 ± 0,42 5,27 ± 0,45 Trƣớc uống thuốc > 0,05 5,29 ± 0,58 5,20 ± 0,38 5,38 ± 0,46 Sau tuần uống thuốc > 0,05 5,19 ± 0,31 5,25 ± 0,34 5,30 ± 0,46 Sau tuần uống thuốc > 0,05 > 0,05 > 0,05 p (trước - sau) Hàm lƣợng huyết sắc tố (g/l) p(1,2) > 0,05 97,5 ± 7,9 97,6 ± 5,9 97,1 ± 6,9 Trƣớc uống thuốc > 0,05 98,3 ± 10,8 97,9 ± 8,0 97,4 ± 6,1 Sau tuần uống thuốc > 0,05 98,9 ± 6,6 98,5 ± 5,6 98,3 ± 4,8 Sau tuần uống thuốc > 0,05 > 0,05 > 0,05 p (trước - sau) Hematocrit (L/L) p(1,2) > 0,05 31,17 ± 2,53 30,90 ±2,59 31,41 ± 3,01 Trƣớc uống thuốc > 0,05 30,97 ± 3,65 31,84 ±1,84 32,32 ± 2,26 Sau tuần uống thuốc > 0,05 31,38 ± 2,79 32,13 ±3,56 32,45 ± 2,91 Sau tuần uống thuốc > 0,05 > 0,05 > 0,05 p (trước - sau) Thể tích trung bình hồng cầu (fL) p(1,2) > 0,05 62,40 ± 2,59 62,30 ± 2,58 61,80 ± 1,48 Trƣớc uống thuốc > 0,05 62,50 ± 1,84 62,80 ± 1,55 61,90 ± 1,60 Sau tuần uống thuốc > 0,05 62,90 ± 0,88 62,30 ± 2,50 62,00 ± 2,11 Sau tuần uống thuốc p (trước - sau) > 0,05 > 0,05 > 0,05 3.1.2.3 Đánh giá chức gan Bảng 3.9 Ảnh hưởng Giáng tiêu khát linh đến hoạt độ AST, ALT máu thỏ Hoạt độ AST (U/L) Lô (n=10) Lô chứng Lô trị Lô trị Thời gian Hoạt độ AST (U/L) p(1,2) > 0,05 34,11 ± 7,94 34,92 ± 5,82 34,36 ± 5,04 Trƣớc uống thuốc > 0,05 34,55 ± 5,50 35,42 ± 5,36 34,97 ± 8,55 Sau tuần uống thuốc > 0,05 35,70 ± 8,41 36,20 ± 5,35 37,00 ± 4,90 Sau tuần uống thuốc > 0,05 > 0,05 > 0,05 p (trước - sau) Thời gian Hoạt độ ALT (U/L) p(1,2) > 0,05 52,07 ± 9,23 53,62 ± 6,62 52,90 ± 4,58 Trƣớc uống thuốc > 0,05 53,71 ± 8,62 53,70 ± 5,89 53,61 ± 3,58 Sau tuần uống thuốc > 0,05 53,50 ± 4,79 54,60 ± 4,03 54,70 ± 5,08 Sau tuần uống thuốc > 0,05 > 0,05 > 0,05 p (trước - sau) 13 3.1.2.4 Đánh giá chức thận Bảng 3.14 Ảnh hưởng Giáng tiêu khát linh đến nồng độ creatinin máu thỏ Creatinin (µmol/l) Thời gian p(1,2) Lơ chứng Lơ trị Lô trị (n=10) (n=10) (n=10) > 0,05 10,3 ± 1,2 10,3 ± 0,9 10,6 ± 0,7 Trƣớc uống thuốc > 0,05 10,6 ± 0,5 10,5 ± 0,5 10,4 ± 0,7 Sau tuần uống thuốc > 0,05 > 0,05 > 0,05 p(trước - sau) > 0,05 10,4 ± 0,5 10,5 ± 0,5 10,5 ± 0,5 Sau tuần uống thuốc > 0,05 > 0,05 > 0,05 p (trước - sau) 3.2 Tác dụng giáng tiêu khát linh mức glucose máu chuột cống trắng 3.2.1 Tác dụng Giáng tiêu khát linh mức glucose máu chuột cống trắng bình thƣờng Bảng 3.15 Tác dụng Giáng tiêu khát linh mức glucose máu chuột cống trắng bình thường Lơ (n = 7) Lô C1 Lô 1A Lô 1B Trƣớc uống thuốc 5,71 ± 1,03 5,87 ± 0,73 5,76 ± 0,96 Nồng độ glucose máu (mmol/l) thời điểm Sau Sau Sau p p p GLU GLU GLU 5,63±0,97 > 0,05 5,53±0,97 > 0,05 5,50±0,98 > 0,05 5,67±0,71 > 0,05 5,59±0,69 > 0,05 5,48±0,72 > 0,05 5,49 ±0,89 > 0,05 5,36±0,90 > 0,05 5,21±0,87 > 0,05 Lô C1 uống NaCl 0,9%, lô 1A uống GCTKL 840mg, lô 1B uống GCTKL 1260mg/kg 3.2.2 Tác dụng Giáng tiêu khát linh mức glucose máu chuột cống trắng gây ĐTĐ týp Nồng độ glucose (mmol/l) Lô C2: ĐTĐ + NaCl 0,9% Lô 2A: ĐTĐ + GCTKL 840mg 30 25 Lô 2B: ĐTĐ + GCTKL 1260mg 20 15 10 Thời điểm 0h 2h 4h 6h 8h 10h 12h 14h Biểu đồ 3.1 Nồng độ glucose máu chuột cống trắng ĐTĐ týp uống Giáng tiêu khát linh liều 840mg/kg 1260mg 14 3.3 Ảnh hưởng chế độ ăn giàu chất béo số lipid trạng thái chống oxy hoá máu chuột cống trắng 3.3.1 Ảnh hƣởng chế độ ăn giàu chất béo lên cân nặng chuột cống trắng Bảng 3.17 Ảnh hưởng chế độ ăn giàu chất béo lên cân nặng chuột cống trắng Lô (n=7) Trƣớc thực nghiệm 124,3  7,9 125,7  12,7 > 0,05 Chứng Lô p Cân nặng (g) Sau 30 ngày Sau 60 ngày (D31) (D61) 175,8  16,2 224,3  9,8 181,4  15,7 241,4  15,7 > 0,05 > 0,05 Sau 90 ngày (D91) 275,7  19,9 291,4  27,9 > 0,05 3.3.2 Ảnh hƣởng chế độ ăn giàu chất béo số lipid máu chuột cống trắng Bảng 3.18 Ảnh hưởng chế độ ăn giàu chất béo số lipid máu chuột cống trắng Thời điểm Các số lipid (mmol/L) TC HDL-C LDL-C TV TV TV TV X ± SD X ± SD X ± SD X ± SD Chứng 0,81±0,26 0,7 1,41±0,19 1,4 0,82±0,13 0,85 0,36±0,11 0,33 1,49±0,20 1,5 1,96±0,3 1,9 0,74±0,26 0,72 0,58±0,26 0,53 Lô p < 0,01 < 0,01 > 0,05 > 0,05 1,±0,05 1,4 0,88±0,09 0,88 0,33±0,06 0,33 Chứng 0,86±0,15 0,8 2,37±0,29 2,5 2,39±0,26 2,4 0,71±0,15 0,65 0,91±0,27 0,90 Lô p < 0,01 < 0,01 < 0,05 < 0,01 Chứng 0,94±0,25 0,9 1,31±0,20 1,4 0,81±0,15 0,83 0,26±0,07 0,27 2,73±0,37 2,7 3,57±0,56 3,5 0,70±0,14 0,65 1,66±0,62 1,85 Lô p < 0,01 < 0,001 > 0,05 < 0,01 Lô chứng: ăn chế độ ăn 12% lipid, lô 1: ăn chế độ ăn 40% lipid (TV: Trung vị) Lô n=7 Sau 30 ngày -D31 Sau 60 ngày D61 Sau 90 ngày D91 TG HDL/L DL X 2,44 1,42 < 0,05 2,77 0,87 < 0,01 3,10 0,50 < 0,01 3.3.3 Ảnh hƣởng chế độ ăn giàu chất béo hoạt độ SOD hồng cầu, GPx máu toàn phần TAS huyết tƣơng chuột cống trắng Bảng 3.19 Ảnh hưởng chế độ ăn giàu chất béo nồng độ TAS huyết tương, hoạt độ SOD, GPx chuột cống trắng có chế độ ăn giàu lipid Thời điểm Lơ (n =7) TAS (mmol/l) SOD (U/gHb) TV X ± SD X ± SD Chứng 1,43  0,08 1,47 2239  177 Sau 30 ngày Lô 1,49  0,13 1,48 2290  497 (D31) p > 0,05 Chứng 1,54  0,11 1,51 2298  181 Sau 60 ngày Lô 1,37  0,09 1,35 2105  151 (D61) p < 0,05 < 0,05 Sau 90 Chứng 1,59  0,30 1,51 2239  135 ngày Lô 1,38  0,10 1,36 2126  164 (D91) > 0,05 p TV GPx (U/gHb) THb (g/L) X ± SD 752  74 774  153 TV X ± SD 2177 2352 745 799 155  13 157  31 2241 2110 745  68 620  41 755 639 154  11 153  15 759 621 158  147  < 0,05 2309 2133 765  50 621  < 0,05 15 Lô chứng: ăn chế độ ăn 12% lipid, lô 1: ăn chế độ ăn 40% lipid (TV: Trung vị) 3.4 Tác dụng dự phòng giáng tiêu khát linh số lipid trạng thái chống oxy hoá máu chuột cống trắng 3.4.2 Tác dụng dự phòng Giáng tiêu khát linh số lipid máu chuột cống trắng với chế độ ăn giàu lipid Bảng 3.21 Tác dụng dự phòng RLLPM Giáng tiêu khát linh số lipid máu chuột cống trắng sau 30 ngày nghiên cứu Lô n=7 Chứng Lô Lô Lô p (1,2) p (1,3) Các số lipid (mmol/L) sau 30 ngày nghiên cứu (D31) HDL /LDL TG TC HDL-C LDL-C TV TV TV TV X 0,81 ± 0,26 0,7 1,41 ± 0,19 1,4 0,82 ± 0,13 0,85 0,36 ±0,11 0,33 2,44 1,49 ± 0,20 1,5 1,96 ± 0,29 1,9 0,74 ± 0,26 0,72 0,58 ± 0,26 0,53 1,42 0,42 ± 0,08 0,4 1,81 ± 0,30 1,8 1,06 ± 0,15 1,09 0,54 ± 0,11 0,53 1,99 0,80 ± 0,38 0,7 1,29 ± 0,17 1,3 0,78 ± 0,04 0,79 0,59 ± 0,15 1,35 1,41 < 0,01 < 0,05 > 0,05 < 0,01 < 0,05 > 0,05 > 0,05 < 0,01 > 0,05 < 0,01 Bảng 3.22 Tác dụng dự phòng Giáng tiêu khát linh số lipid máu chuột cống trắng sau 60 ngày nghiên cứu Lô n =7 TG Chứng 0,86 ± 0,15 Lô 2,37 ± 0,29 0,51 ± 0,14 Lô 21,5%  0,66 ± 0,27 Lô 27,8%  < 0,01 p(1,2) < 0,01 p(1,3) Các số lipid (mmol/L) sau 60 ngày nghiên cứu (D61) TC HDL-C LDL-C TV TV TV 1, ± 0,05 0,8 1,4 0,88 ± 0,09 0,88 0,33 ± 0,06 2,5 2,39 ± 0,26 2,4 0,71 ± 0,15 0,65 0,91 ± 0,27 0,5 1,69 ± 0,30 1,7 1,17 ± 0,23 1,08 0,32 ± 0,12 70,7%  164,8%  35,2%  0,30 ± 0,14 0,5 1,81 ± 0,40 1,9 1,32 ± 0,24 1, 75,7%  185,9%  33,0%  < 0,01 < 0,05 < 0,01 < 0,01 < 0,01 < 0,01 TV 0,33 0,9 0,29 HDL/ LDL X 2,77 0,87 3,94 0,25 4,91 < 0,01 < 0,01 3.4.3 Tác dụng dự phòng GCTKL nồng độ TAS huyết tƣơng, hoạt độ SOD hồng cầu GPx máu toàn phần chuột cống trắng chế độ ăn giàu lipid Bảng 3.23 Tác dụng dự phòng Giáng tiêu khát linh số TAS huyết tương, hoạt độ SOD GPx chuột cống trắng có chế độ ăn giàu lipid Thời điểm TAS (mmol/l) SOD (U/gHb) GPx (U/gHb) THb (g/L) Nhóm (n =7) TV TV TV Chứng 1,47 2177 752  74 745 155  13 1,43  0,08 2239  177 Lô 1,48 2352 774  153 799 157  30 1,49  0,13 2290  497 Sau 30 Lô 1,43 2259 803  89 802 1,47  0,15 2260  249 142  ngày Lô 1,44 2157 713  78 724 140  17 1,40  0,11 2137  217 (D31) p (1,2) > 0,05 > 0,05 > 0,05 p (1,3) > 0,05 > 0,05 > 0,05 Chứng 1,51 2241 745  68 755 154  11 1,54  0,11 2298  181 Lô 1,35 2110 620  41 639 153  15 1,37  0,09 2105  151 Sau 60 Lô 1,55 2260 741  71 747 1,56  0,95 2212  325 147  ngày Lô 1,51 2216 724  38 716 153  15 1,53  0,08 2184  308 (D61) p (1,2) < 0,01 > 0,05 < 0,01 p (1,3) < 0,01 > 0,05 < 0,01 Lô uống NaCl 0,9%; lô uống GCTKL liều 840 mg; lô uống GCTKL liều 1260 mg (TV: Trung vị) 16 3.5 Tác dụng điều trị giáng tiêu khát linh số lipid trạng thái chống oxy hoá máu chuột cống trắng 3.5.2 Tác dụng điều trị RLLPM Giáng tiêu khát linh số lipid huyết tương chuột cống trắng với chế độ ăn giàu lipid Bảng 3.25 Tác dụng điều trị RLLPM Giáng tiêu khát linh chuột cống trắng sau 30 ngày điều trị liều 840mg 1260mg Lô n=7 Lô Lô Lô p (1,4) p (1,5) Các số lipid (mmol/L) sau 30 ngày điều trị (D61) HDL/ LDL TC HDL-C LDL-C TV TV TV TV X 2,37 ± 0,29 2,5 2,39 ± 0,26 2,4 0,71 ± 0,15 0,65 0,91 ± 0,27 0,90 0,87 2,07 ± 0,50 0,8 1,76 ± 0,48 1,9 0,96 ± 0,27 0,96 0,86 ± 0,61 0,41 1,58 0,90 ± 0,05 0,9 1,42 ± 0,16 1,5 0,79 ± 0,19 0,79 0,68 ± 0,15 0.32 1,97 TG < 0,05 < 0,01 < 0,05 < 0,01 >0,05 >0,05 >0,05 >0,05 >0,05 >0,05 Lô uống NaCl 0,9%, lô : uống GCTKL liều 840 mg; lô 5: uống GCTKL liều 1260 mg Bảng 3.26 Tác dụng điều trị RLLPM Giáng tiêu khát linh chuột cống trắng sau 60 ngày điều trị liều 840mg 1260mg Các số lipid (mmol/L) sau 60 ngày điều trị (D91) HDL/L Lô DL TG TC HDL-C LDL-C n=7 TV TV TV TV X Lô 2,72 ± 0,37 2,7 3,57 ± 0,55 3,5 0,70 ± 0,14 0,65 1,66 ± 0,62 1,85 0,50 0,90 ± 0,39 1,1 1,86 ± 0,69 1,9 1,14 ± 0,46 1,16 0,38 ± 0,14 0,36 2,93 Lô 33,1%  52,1%  162,9%  22,9%  1,09 ± 0,38 1,1 1,79 ± 0,19 1,8 1,28 ± 0,08 1,29 0,27 ± 0,05 0,26 4,78 Lô 40,1%  50,1%  182,9%  16,3%  < 0,001 < 0,01 < 0,001 > 0,05 < 0,001 p (1,4) < 0,001 < 0,01 < 0,01 < 0,001 < 0,001 p (1,5) < 0,01 > 0,05 > 0,05 > 0,05 p (4,5) Lô uống NaCl 0,9%, lô : uống GCTKL liều 840 m; lô 5: uống GCTKL liều 1260 mg Biểu đồ 3.3: Sự thay đổi nồng độ lipid huyết tương chuột cống trắng gây RLLPM sau 60 ngày điều trị GCTKL liều 840mg 1260mg 17 3.5.3 Tác dụng điều trị Giáng tiêu khát linh nồng độ TAS huyết tƣơng, hoạt độ SOD hồng cầu GPx máu toàn phần chuột cống trắng RLLPM Bảng 3.27 Tác dụng điều trị Giáng tiêu khát linh nồng độ TAS huyết tương, hoạt độ SOD GPx chuột cống trắng có chế độ ăn giàu lipid Thời điểm Nhóm (n =7) TAS (mmol/l) TV 1,51 Lơ 1,59  0,30 1,38  0,10 Lô 1,41  0,73 Chứng Sau 60 ngày điều trị (D91) SOD (U/gHb) TV 2309 1,36 2239  135 2126  164 1,39 2220  124 2180 2133 GPx (U/gHb) THb(g/L) TV X 765  50 759 158  621 147  621  754  85 726 154  13 714  100 723 155  Lô 1,43  0,12 1,37 2168  360 2217 > 0,05 > 0,05 < 0,01 p (1,4) > 0,05 > 0,05 < 0,05 p (1,5) Lô uống NaCl 0,9%, lô uống GCTKL liều 840 mg; lô uống GCTKL liều 1260 mg 3.6 Tác dụng giáng tiêu khát linh số glucose, lipid trạng thái chống oxy hoá máu chuột cống trắng gây ĐTĐ týp 3.6.3 Tác dụng Giáng tiêu khát linh số glucose lipid máu chuột cống trắng gây ĐTĐ týp Bảng 3.30 Tác dụng Giáng tiêu khát linh nồng độ glucose máu chuột cống trắng ĐTĐ sau 30 60 ngày điều trị Lô n=7 Nồng độ Glucose (mmol/L) Sau 30 ngày điều trị (D61) Sau 60 ngày điều trị (D91) TV TV % so với lô 5,63 ± 1,15 5,57 ± 0,96 5,6 5,4 16,35 ± 1,43 17,70 ± 1,64 16,5 17,4 13,20 ± 2,16 14,13 ± 0.90 13,5 14,7 79,8%  12,51 ± 1,76 12,01 ± 2,45 12,8 12,8 67,8%  Lô Lô Lô Lô < 0,01 < 0,01 p(6,7) < 0,01 < 0,01 p(6,8) Lô uống NaCl 0,9%, lô uống GCTKL liều 840mg; lô uống GCTKL liều 1260mg Bảng 3.31 Tác dụng Giáng tiêu khát linh nồng độ lipid máu chuột cống trắng ĐTĐ sau 30 ngày điều trị (D61) Lô n=7 TG Lô Lô Lô Lô p(6,7) p(6,8) p(7,8) 2,37±0,29 2,52±0,37 1,19±0,25 1,02±0,24 < 0,001 < 0,001 > 0,05 Các số lipid sau 30 ngày điều trị (mmol/L) HDL/L DL TC HDL-C LDL-C TV TV TV TV X 2,5 2,38±0,26 2,4 0,71±0,15 0,65 0,91±0,27 0,91 0,87 2,72±0, 2,1 7,32±1,08 7,5 0,47±0,08 0,5 2,88 0,18 1,3 4,52±0,38 4,7 0,76±0,11 0,79 2,33±0,22 2,43 0,33 1,0 3,73±0,56 3,8 0,85±0,13 0,83 1,98±0,26 1,97 0,43 < 0,01 < 0,01 > 0,05 < 0,01 < 0,001 < 0,01 < 0,05 < 0,01 < 0,05 > 0,05 < 0,05 < 0,05 18 Lô uống NaCl 0,9%, lô uống GCTKL liều 840mg; lô uống GCTKL liều 1260mg Bảng 3.32 Tác dụng Giáng tiêu khát linh nồng độ lipid máu chuột cống trắng ĐTĐ sau 60 ngày điều trị (D91) Lô n=7 Lô Lô Lô Lô p(6,7) p(6,8) p(7,8) TG X ± SD 2,72±0,37 2,67±0,22 1,06±0,17 39,7%  0,96±0,15 36,0%  < 0,001 < 0,001 >0,05 Các số lipid sau 60 ngày điều trị (mmol/L) HDL/L DL TC HDL-C LDL-C TV TV TV TV X ± SD X ± SD X ± SD X 2,7 3,57±0,55 3,5 0,70±0,14 0,65 1,66±0,62 1,85 0,50 2,7 8,90±0,92 8,8 0,59±0,18 0,57 2,84±0,24 2,81 0,21 1,0 4,70±0,41 4,8 0,87±0,16 0,89 2,42±0,18 2,45 0,36 52,8%  147,5%  85,2%  0,9 3,57±0,61 3,4 0,92±0,11 0,96 1,80±0,34 1,89 0,52 40,1%  155,9%  63,4%  < 0,01 < 0,001 < 0,05 < 0,01 < 0,01 < 0,05 < 0,01 < 0,01 >0,05 < 0,01 < 0,001 < 0,05 Lô uống NaCl 0,9%, lô uống GCTKL liều 840mg; lô uống GCTKL liều 1260mg Biểu đồ 3.5: Sự thay đổi nồng độ lipid huyết tương chuột cống trắng gây ĐTĐ týp điều trị GCTKL liều 840mg 1260mg 3.6.4 Tác dụng Giáng tiêu khát linh hoạt độ SOD hồng cầu, GPx máu TAS huyết tƣơng chuột cống trắng ĐTĐ týp Bảng 3.33 Tác dụng điều trị Giáng tiêu khát linh nồng độ TAS huyết tương hoạt độ SOD, GPx chuột cống trắng ĐTĐ týp Thời điểm Sau 60 ngày điều trị (D91) Nhóm (n =7) Chứng Lô Lô Lô p (6,7) p (6,8) TAS (mmol/l) TV 1,59  0,30 1,51 1,36  0,13 1,39 1,42  0,17 1,32 1,46  0,10 1,47 >0,05 >0,05 SOD (U/gHb) TV 2239  135 2309 2066  185 2249 2221  142 2006 2234  165 2192 >0,05 >0,05 GPx (U/gHb) THb (g/L) TV 765  50 759 158  613  56 618 159  17 715  45 710 163 14 709  47 712 166  15 < 0,01 < 0,01 Lô uống NaCl 0,9%, lô uống GCTKL liều 840mg; lô uống GCTKL liều 1260mg 3.7 Ảnh hƣởng giáng tiêu khát linh thay đổi mô bệnh học chuột cống trắng 3.7.1 Hình thái vi thể động mạch chủ chuột cống trắng thực nghiệm Hình 3.15: Hình thái vi thể ĐMC chuột lơ RLLP gây ĐTĐ sau 90 ngày nghiên cứu (HE x Hình 3.17: Hình thái vi thể ĐMC chuột lơ ĐTĐ sau 60 ngày điều trị GCTKL 1260mg/kg 19 400) (sưng phồng rải rác tế bào nội mô) (HE x 400) (không thấy tổn thương) CHƢƠNG 4: BÀN LUẬN 4.1 Độc tính cấp bán trƣờng diễn giáng tiêu khát linh 4.1.1 Độc tính cấp GCTKL chuột nhắt trắng GCTKL cho chuột nhắt trắng uống tới nồng độ tối đa thể tích tối đa mà chuột chịu đựng 53,57 g cốm/kg TT chuột khơng có chuột khơng chết, khơng thấy có biểu độc tính cấp, khơng thể xác định liều chết 50% (LD50) Nếu so với liều dùng người thang/ngày tương đương với g cốm/ngày với liều tối đa gấp 24,8 lần liều dùng người (tính chuột nhắt trắng hệ số ngoại suy liều 12) 4.1.2 Độc tính bán trƣờng diễn * Ảnh hưởng Giáng tiêu khát linh với trọng lượng thể thỏ: * Ảnh hưởng Giáng tiêu khát linh đến hệ thống tạo máu, chức gan chức thận thỏ: Thỏ uống thuốc liên tục tuần với liều 0,54g /kg /ngày liều 1,62g /kg/ngày (tương đương với liều cho người gấp lần liều thường dùng cho người) khơng gây thay đổi có ý nghĩa tình trạng chung, chức phận tạo máu chức phận hóa sinh gan, thận 4.2 Ảnh hƣởng chế độ ăn giàu lipid số lipid máu trạng thái chống oxy hoá máu chuột cống trắng Sau 30 ngày thực nghiệm, so với lô chứng nồng độ TG tăng gấp 1,84, TC tăng 1,39 lần tỷ lệ HDL-C/LDL-C giảm đáng kể (p0,05 4.6.3 Lý giải tác dụng Giáng tiêu khát linh trạng thái chống oxy hoá máu Một số nghiên cứu với Linh chi (Ganoderma lucidum), Hoàng kỳ (Radix astagali), Hoàng liên (Rhizoma Coptidis) … cho thấy tác dụng chống oxy hoá vị thuốc Hoạt chất tanshinone IIA định lượng Giáng tiêu khát linh cho thấy có tác dụng chống oxy hoá Tanshinone IIA nghiên cứu có tác dụng thúc đẩy hoạt động chống viêm, chống oxy hóa, chống độc tế bào, tạo trình apoptosis 4.7 Bàn tác dụng giáng tiêu khát linh số thuốc y học cổ truyền điều trị ĐTĐ có RLLPM ĐTĐ týp thường kèm với RLLPM, vòng soắn bệnh lý gây biến chứng diễn biến bệnh tật phức tạp Điều trị RLLPM cần song song với việc kiểm soát glucose máu Giáng tiêu khát linh gồm có nhiều vị có tác dụng vừa hạ glucose máu, vừa có tác dụng điều chỉnh lipid máu chống oxy hoá Đan sâm, Linh chi, Hoàng kỳ, Ngưu tất Nhiều nghiên cứu tác dụng kép vị phân tích phần bàn luận kiểm nghiệm phân tích thành phần có cốm Giáng tiêu khát linh (phụ lục 3) lý giải hiệu điều chỉnh lipid máu đồng thời hạ glucose máu Giáng tiêu khát linh điều trị ĐTĐ có RLLPM Một số thuốc chứng minh tác dụng thông qua nghiên cứu sau cho thấy rõ ưu phối ngũ vị thuốc theo biện chứng luận trị y học cổ truyền điều trị ĐTĐ có RLLPM nghiên cứu "Bài thuốc Lục vị địa hoàng hoàn", thuốc " Bổ dương hoàn ngũ thang"cho thấy tác dụng cải thiện tình trạng bệnh nhân tiểu đường, tăng cường khả đề kháng, giảm lipid máu 4.8 Bàn liều dùng giáng tiêu khát linh Trong nghiên cứu chọn hai liều dùng chuột cống để thực nghiệm: 24 Liều 1: 1260mg /kg thân trọng/ngày tương đương với liều cho người nặng 50kg dùng lâm sàng thang/ngày Liều 2: 840mg/kg thân trọng/ngày (bằng 2/3 liều 1) Chọn liều nghiên cứu nhằm mục đích đánh giá tác dụng thuốc thực nghiệm để giảm liều thuốc chiết xuất so với liều thuốc thang hay không? Kết cho thấy dù tác dụng dự phòng hay điều trị RLLPM chuột cống trắng cần dùng liều 840mg/kgTT/ngày đủ để có hiệu tốt tác dụng dự phòng tác dụng điều trị thực nghiệm chuột cống trắng KẾT LUẬN Độc tính cấp bán trường diễn Giáng tiêu khát linh + GCTKL với liều uống tối đa mà chuột chịu đựng 53,57g cốm/1kg thân trọng chuột, gấp 24,8 liều dùng người khơng có độc tính cấp chưa xác định LD50 Giáng tiêu khát linh chuột nhắt trắng đường uống theo phương pháp Litchfield – Wilcoxon GCTKL liều 0,54g/kg/ngày 1,62g/kg/ngày, uống liên tục tuần khơng gây độc tính bán trường diễn chức tạo máu, chức gan, thận hình thái gan thận thỏ Tác dụng Giáng tiêu khát linh chuột cống trắng gây rối loạn lipid máu đái tháo đường týp thực nghiệm: 2.1 GCTKL đường uống có tác dụng dự phòng điều trị rối loạn lipid máu chuột cống trắng gây rối loạn lipid máu sau 30 ngày hiệu rõ rệt sau 60 ngày: + GCTKL dự phòng liều 840mg/kg 1260 mg/kg/ngày sau 60 ngày có tác dụng giảm số lipid máu 21,5 27,8% (TG), 70,7% 75,7% (TC), 35,2 33% (LDL-C), tăng 164,8% 185,9% (HDL-C) + GCTKL điều trị liều 840mg 1260mg/kg/ngày sau 60 ngày có tác dụng giảm số lipid máu cịn 33,1% & 40.1 (TG), 52,1 50,1% (TC), 22.9% 16,3% (LDL-C), tăng 162,9% 182.9 (HDL-C) + Tác dụng dự phòng điều trị rối loạn lipid máu GCTKL liều 840mg 1260mg/kg/ngày 2.2 GCTKL đường uống có tác dụng hạ glucose máu, điều chỉnh RLLPM sau 30 ngày hiệu rõ rệt sau 60 ngày điều trị chuột cống trắng ĐTĐ týp thực nghiệm: + GCTKL liều 840mg 1260mg/kg/ngày sau 60 ngày điều trị có tác dụng giảm số còn: 79,8% 67,8% (Glucose), 39,7% 36%(TG), 52,8% 40,1% (TC), 85,2% 63,4% (LDL-C), tăng 147% 155,9% (HDL-C) huyết GCTKL liều 1260mg/kg/ngày có tác dụng hiệu so với liều 840 mg/kg/ngày số: Glucose, TC, LDL-C tác dụng số TG, HDL-C huyết 2.3 Tác dụng trạng thái chống oxy hoá chuột cống trắng rối loạn lipid máu đái tháo đường týp thực nghiệm: + Hoạt độ GPx máu chuột rối loạn lipid máu chuột đái tháo đường điều trị liều 840mg 1260mg/kg/ngày giảm so với chuột không điều trị, khác biệt với p