BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI  TRẦN VĂN THỂ NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT CHẾ PHẨM KHÁNG THỂ LÒNG ðỎ CHỐNG GUMBORO LUẬN VĂN THẠC SĨ HÀ NỘI – 2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI  TRẦN VĂN THỂ NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT CHẾ PHẨM KHÁNG THỂ LÒNG ðỎ CHỐNG GUMBORO Chuyên ngành : THÚ Y Mã số : 60.64.01.01 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC : TS. NGUYỄN BÁ HIÊN HÀ NỘI – 2013 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… ii LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan rằng, ñây là công trình nghiên cứu của riêng tôi, số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn là trung thực và chưa từng ñược sử dụng ñể bảo vệ một học vị nào. Tôi xin cam ñoan, mọi sự giúp ñỡ cho việc thực hiện luận văn này ñã ñược cảm ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn ñã ñược chỉ rõ nguồn gốc. Hà Nội, ngày … tháng … năm 2013 Tác giả luận văn Trần Văn Thể Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… iii LỜI CẢM ƠN ðể hoàn thành Luận văn này, ngoài sự cố gắng của bản thân, tôi luôn nhận ñược sự quan tâm giúp ñỡ của các thầy cô giáo và bạn bè ñồng nghiệp. Nhân dịp này, trước tiên tôi xin chân thành cảm ơn sự giúp ñỡ của các thầy cô giáo khoa Thú y, Ban quản lý ñào tạo trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội ñã giảng dạy, giúp ñỡ tôi trong suốt thời gian học tập tại Trường. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy hướng dẫn: TS. Nguyễn Bá Hiên ñã tận tình giúp ñỡ, hướng dẫn tôi trong quá trình thực hiện và hoàn thành luận văn. Tôi xin trân trọng cảm ơn Ban lãnh ñạo và cán bộ công nhân viên chức của Xí nghiệp thuốc Thú y Trung ương ñã giúp ñỡ tôi thực hiện các thí nghiệm trong suốt thời gian qua. Tôi xin gửi lời cảm ơn tới người thân trong gia ñình và bạn bè ñồng nghiệp ñã luôn giúp ñỡ, ñộng viên giúp tôi hoàn thành luận văn này. Hà Nội, ngày … tháng … năm 2013 Tác giả luận văn Trần Văn Thể Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… iv MỤC LỤC Lời cam ñoan ii Lời cảm ơn iii Mục lục iv Danh mục bảng vii Danh mục hình viii Danh mục chữ viết tắt ix MỞ ðẦU 1 CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4 1.1 Bệnh gumboro 4 1.1.1 Lịch sử và ñịa dư bệnh 5 1.1.2 Nguyên nhân gây bệnh 6 1.1.3 Cơ chế sinh bệnh 9 1.1.4 Triệu chứng lâm sàng 10 1.1.5 Bệnh tích 10 1.1.6 Chẩn ñoán bệnh 14 1.1.7 Phòng bệnh Gumboro 14 1.2 Miễn dịch học bệnh gumboro 15 1.2.1 Khái niệm chung. 15 1.2.2 Cơ chế miễn dịch chống bệnh Gumboro 17 CHƯƠNG 2 NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 Nội dung nghiên cứu 23 2.1.1 Nghiên cứu quy trình sản xuất chế phẩm kháng thể chống Gumboro 23 2.1.2 Kiểm tra một số chỉ tiêu của chế phẩm 23 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… v 2.1.3 Bước ñầu ứng dụng thử nghiệm chế phẩm trong phòng và ñiều trị bệnh Gumboro ở gia cầm. 23 2.2 Nguyên liệu 23 2.3 Phương pháp nghiên cứu 24 2.3.1 Phương pháp gây tối miễn dịch cho ñàn gà mái ñẻ ñể lấy trứng sản xuất chế phẩm kháng thể chống bệnh Gumboro 24 2.3.2 Phương pháp lấy máu và chế huyết thanh 25 2.3.3 Phương pháp làm phản ứng trung hoà trên tế bào xơ phôi gà một lớp 25 2.3.4 Phương pháp kiểm tra chỉ tiêu vô trùng chế phẩm 26 2.3.5 Phương pháp kiểm tra chỉ tiêu an toàn của chế phẩm 26 2.3.6 Phương pháp xác ñịnh hiệu lực của chế phẩm 28 2.3.7 Phương pháp xác ñịnh thời gian thu hoạch trứng sản xuất chế phẩm sau khi gây tối miễn dịch trên ñàn gà 28 2.3.9 Phương pháp xử lý số liệu 29 CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 3.1 Nghiên cứu quy trình sản xuất chế phẩm kháng thể chống Gumboro 30 3.1.1 Nghiên cứu quy trình gây tối miễn dịch cho gà mẹ 30 3.1.2 Kết quả xác ñịnh thời gian thu hoạch trứng sản xuất chế phẩm sau khi gây tối miễn dịch trên ñàn gà. 32 3.1.3 Quy trình sản xuất chế phẩm kháng thể ñặc hiệu chống Gumboro 34 3.2 Kết quả kiểm nghiệm chế phẩm kháng thể chống Gumboro 38 3.2.1 Kết quả kiểm tra vô trùng chế phẩm kháng thể chống Gumboro 38 3.2.2 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu an toàn của chế phẩm 39 3.2.3 Kết quả kiểm tra hiệu lực của chế phẩm 43 3.2.4 Kết quả kiểm tra ñộ dài miễn dịch của chế phẩm 48 3.2.5 Kết quả xác ñịnh thời gian bảo quản của chế phẩm 50 3.3 Kết quả ứng dụng thử nghiệm chế phẩm 52 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… vi 3.3.1 Kết quả ứng dụng thử nghiệm chế phẩm ñiều trị bệnh Gumboro 53 3.3.2 Kết quả ứng dụng thử nghiệm chế phẩm phòng bệnh Gumboro 55 KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 57 1 Kết luận 57 2 ðề nghị 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… vii DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang 3.1 Kết quả xác ñịnh quy trình tối miễn dịch cho gà 31 3.2 Kết quả xác ñịnh khoảng thời gian bắt ñầu thu trứng ñể sản xuất kháng thể 33 3.3 Xác ñịnh thời gian thu hoạch trứng sản xuất chế phẩm sau khi gây tối miễn dịch trên ñàn gà bằng phương pháp trung hoà trên gà 36 3.4 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu vô trùng của chế phẩm kháng thể chống Gumboro 38 3.5 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu an toàn của chế phẩm trong phòng thí nghiệm 41 3.6 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu an toàn của chế phẩm trên ñàn gà tại thực ñịa ở xã Thọ Xuân, ðan Phượng, Hà Nội 42 3.7 Kết quả xác ñịnh liều tiêm thích hợp 45 3.8 Kết quả xác ñịnh hiệu lực của chế phẩm bằng phương pháp công cường ñộc 47 3.9 Kết quả xác ñịnh ñộ dài miễn dịch của chế phẩm bằng phương pháp công cường ñộc 49 3.10 Kết quả xác ñịnh tính thời gian bảo quản của chế phẩm 51 3.11 Kết quả ñiều trị bệnh Gumboro bằng chế phẩm trên ñàn gà sau khi biểu hiện bệnh 2-5 ngày 54 3.12 Kết quả phòng bệnh Gumboro trong vùng dịch bằng chế phẩm kháng thể lòng ñỏ 56 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… viii DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang 1.1 Vùng Gumboro, ñịa hạt Sussex bang Delaware của Mỹ, nơi ñầu tiên phát hiện bệnh Gumboro 6 1.2 Cấu trúc của hạt IBDV dưới kính hiển vi ñiện tử 7 1.3 Virus Gumboro thường tập hợp thành từng cụm nằm trong tế bào lympho B bị nhiễm 7 1.4 Bệnh tích túi Fabricius và hệ cơ 11 1.5 Ảnh vi thể của các tế bào ñại thực bào trong túi Fabricius bị virus Gumboro tấn công 13 3.1 Ly tâm ñể thu hoạch kháng thể lòng ñỏ trứng 35 3.2 Phản ứng trung hòa trên tế bào 35 3.3 Gà chết, mất nước trầm trọng 53 3.4 Xuất huyết thành vệt ở cơ ñùi 53 3.5 Túi Fabricius sưng to 53 3.6 Túi Fabricius xuất huyết 53 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… ix DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT CPE: Cytopathogenic effect Cs: Cộng sự ELISA: Enzyme linked immunosorbent assay ELD 50 : Embyo Lethal Dose 50% IBD: Infectious Bursal Disease IBDV: Infectious Bursal Disease Virus ICT: Immunochromatographic test, LD 50 : Lethal Dose 50% MEM Minium Esential Medium OIE: Office International des Epizooties PBS Phosphate Buffered Saline PCR: Polymerase chain reaction RNA: Ribonucleic acid RT-PCR : Reverse transcriptase Polymerase chain reaction TCID 50 : Tissue Culture Infective Dose 50% VP: Viral protein vvIBDV: very virulent IBDV [...]... Hà N i, chúng tôi ti n hành nghiên c u ñ tài: Nghiên c u quy trình s n xu t ch ph m kháng th lòng ñ ch ng Gumboro 2 M c tiêu nghiên c u - Nghiên c u ñư c quy trình s n xu t ch ph m kháng th ch ng b nh Gumboro - ng d ng th Gumboro nghi m ch ph m cho vi c phòng và ñi u tr b nh gia c m 3 Ý nghĩa khoa h c và th c ti n - Là cơ s khoa h c ñ có thêm các bi n pháp phòng tr b nh Gumboro - Cung c p m t ch ph... Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 22 Chương 2 N I DUNG, NGUYÊN LI U VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U 2.1 N i dung nghiên c u 2.1.1 Nghiên c u quy trình s n xu t ch ph m kháng th ch ng Gumboro - Nghiên c u quy trình gây t i mi n d ch cho gà m - Xây d ng quy trình thu ho ch và ki m nghi m ch ph m - Xác ñ nh th i gian thu ho ch tr ng s n xu t ch ph m sau khi gây t i mi n d ch... sóc, nuôi dư ng Nhưng quan tr ng hơn c v n là b n ch t c a kháng nguyên Khi kháng nguyên xâm nh p vào cơ th l n sau, các t bào sinh kháng th l n ñ u ch vi c “nh l i” ñ sinh kháng th , các kháng th ñ c hi u này s k t h p v i kháng nguyên t o thành m t ph c h p kháng nguyên - kháng th và k t qu là kháng nguyên b lo i tr Hi n tư ng các t bào sinh kháng th “nh l i” g i là hi n tư ng “trí nh mi n d ch” D... d ng kháng th lòng ñ ñ ñi u tr và phòng nhi u b nh cho v t nuôi có hi u qu cao Khi gà ñư c tiêm ch ph m kháng th Gumboro, n u gà ti p xúc ho c c m nhi m v i virus Gumboro, cơ th con v t ñã có s n kháng th ñ c hi u ñ trung hòa virus Khi gà ñang m c b nh, tiêm ch ph m cho gà thì kháng th s tác ñ ng tr c ti p lên virus này và trung hòa virus Vì v y vi c nghiên c u ñ s n xu t ñư c m t lo i kháng th kháng. .. nh, chưa ñư c tiêm vacxin Gumboro ∗ Quy trình 1: Trên lô gà 1 Ti n hành tiêm vacxin Gumboro vô ho t nhũ d u cho 10 gà mái ñ 2 l n, m i l n cách nhau 1 tu n v i li u 1ml/con Sau14 ngày, tiêm ch ng virus Gumboro cư ng ñ c 3 l n v i li u 100TCID50/50 l, m i l n cách nhau 1 tu n, ki m tra hi u giá kháng th b ng phương pháp trung hòa ∗ Quy trình 2: Trên lô gà 2 Ti n hành tiêm vacxin Gumboro vô ho t nhũ d u... m c b nh Gumboro t nhiên, gà chưa ñư c tiêm phòng Gumboro (chưa mi n d ch v i b nh) D ng c và hóa ch t thư ng quy trong phòng thí nghi m vi sinh v t D ng c và hóa ch t nuôi c y t bào fibroblast phôi gà 2.3 Phương pháp nghiên c u 2.3.1 Phương pháp gây t i mi n d ch cho ñàn gà mái ñ ñ l y tr ng s n xu t ch ph m kháng th ch ng b nh Gumboro Ti n hành gây t i mi n d ch trên 3 lô gà theo 3 quy trình khác... t nhũ d u, ñàn gà con ñư c ch ng vacxin như c ñ c Kháng th Gumboro do vacxin kích thích t o ra có th ñư c phát hi n sau khi dùng vacxin 14 ngày và ñ n 24 ngày 100% s gà trong ñàn có kháng th , ki m tra sau nhi m 2-5 tu n cho k t qu là kháng th trung hoà trong lòng ñ cao hơn trong huy t thanh gà b m cũng như gà con m i n S xu t hi n kháng th d ch th Gumboro trong máu có th phát hi n và ñ nh lư ng b... nh c l i” Theo Becht và c ng s (1985) thì: C hai Serotype c a virus Gumboro ñ u có kháng nguyên ñ c hi u type, các kháng nguyên này có kh năng kích thích s n sinh ra kháng th trung hoà virus Tác gi cũng cho r ng nh ng gà có kháng th ñ i v i virus Gumboro thu c Serotype 2 không có kh năng b o v ñ ch ng l i virus c a Serotype 1 Khi nghiên c u tính gây b nh c a các ch ng virus thu c Serotype 2, Jackwood... thanh gà m sang lòng ñ tr ng ð n ngày th 14 sau khi p, phôi gà ñã phát tri n hoàn ch nh thì kháng th t lòng ñ tr ng qua n i bì vào m ch máu t i gà con và t n t i trong m t th i gian Kháng th th ñ ng có tác d ng ngăn ch n s xâm nhi m c a virus cư ng ñ c Gumboro gây b nh gà con trong nh ng ngày tu i ñ u, và ñ ng th i ch ng l i s suy gi m mi n d ch do virus Gumboro gây ra nh ng gà con ñã có kháng th th ñ... c ng s (1979) kháng th th ñ ng có trong gà con gi m ñi 1/2 sau 3 - 5 ngày tu i và sau 7 - 10 ngày thì ñào th i hoàn toàn ra kh i cơ th Khi hi u giá kháng th Gumboro nh hơn 1:100 thì 100% ñàn gà m n c m v i virus Gumboro, nghĩa là ñàn gà có kh năng nhi m b nh Hi u giá t 1:100 ñ n 1:600 ñàn gà ñư c b o h 40%, còn n u hi u giá kháng th trên 1:600 thì ñàn gà ñư c b o h t t Vi c nghiên c u kháng th th ñ . nghiên cứu ñề tài: Nghiên cứu quy trình sản xuất chế phẩm kháng thể lòng ñỏ chống Gumboro . 2. Mục tiêu nghiên cứu - Nghiên cứu ñược quy trình sản xuất chế phẩm kháng thể chống bệnh Gumboro. . trình sản xuất chế phẩm kháng thể ñặc hiệu chống Gumboro 34 3.2 Kết quả kiểm nghiệm chế phẩm kháng thể chống Gumboro 38 3.2.1 Kết quả kiểm tra vô trùng chế phẩm kháng thể chống Gumboro 38 3.2.2. PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 Nội dung nghiên cứu 23 2.1.1 Nghiên cứu quy trình sản xuất chế phẩm kháng thể chống Gumboro 23 2.1.2 Kiểm tra một số chỉ tiêu của chế phẩm 23 Trường ðại học Nông nghiệp