BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI          VŨ VĂN ðẠI NGHIÊN CỨU NHÂN NHANH INVITRO CÂY CHUỐI TIÊU HỒNG LUẬN VĂN THẠC SĨ HÀ NỘI – 2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI          VŨ VĂN ðẠI NGHIÊN CỨU NHÂN NHANH INVITRO CÂY CHUỐI TIÊU HỒNG CHUYÊN NGÀNH : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Mà SỐ : 60.42.02.01 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC PGS.TS PHAN HỮU TÔN HÀ NỘI – 2013 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp …………………… ii LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan rằng số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn này là trung thực và không trùng lặp với các ñề tài khác. Tôi cũng xin cam ñoan rằng các thông tin trích dẫn trong luận văn ñều ñược ghi rõ nguồn gốc. Học viên Vũ Văn ðại Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp …………………… iii LỜI CẢM ƠN Trong quá trình thực hiện luận văn, tôi ñã nhận ñược sự quan tâm, giúp ñỡ của nhiều cá nhân và cơ quan ñơn vị. Nay luận văn ñã hoàn thành, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành, sâu sắc tới: PGS. TS. Phan Hữu Tôn, người ñã tận tình hướng dẫn và tạo mọi ñiều kiện, giúp ñỡ tôi nghiên cứu và thực hiện ñề tài. Các thầy giáo, cô giáo thuộc Khoa Công nghệ sinh học, trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội ñã nhiệt tình giảng dạy và tạo mọi ñiều kiện cho tôi hoàn thành khóa học. Các cán bộ, kỹ thuật viên phòng Ứng dụng tiến bộ KHCN– Sở Khoa học và Công nghệ Bắc Ninh ñã nhiệt tình hướng dẫn, giúp ñỡ và tạo mọi ñiều kiện cho tôi thực hiện luận văn. Phòng Công nghệ tế bào thực vật - Viện Di truyền Nông nghiệp Việt Nam ñã cung cấp mẫu vật nghiên cứu. Cuối cùng, tôi xin chân thành cảm ơn những người thân trong gia ñình và bạn bè ñã giúp ñỡ và ñộng viên tôi trong suốt thời gian học tập. Bắc Ninh, tháng 9 năm 2013 Học viên Vũ Văn ðại Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp …………………… iv MỤC LỤC Lời cam ñoan ii Lời cảm ơn iii Mục lục iv Danh mục các chữ viết tắt vii Danh mục bảng viii Danh mục hình ix MỞ ðẦU 1 CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4 1.1 VÀI NÉT VỀ PHÂN LOẠI VÀ ðẶC ðIỂM CỦA CHUỐI 4 1.1.1 ðặc ñiểm thực vật học của họ chuối 4 1.1.2 ðặc ñiểm thực vật học của chi chuối Tiêu. 6 1.1.3 ðặc diểm thực vật học của chuối Tiêu Hồng. 6 1.2 ỨNG DỤNG CỦA KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT TRONG CÔNG TÁC NHÂN GIỐNG CÂY TRỒNG 7 1.2.1 Các hướng nghiên cứu ứng dụng 7 1.2.2 Ưu thế của nhân giống in vitro 7 1.2.3 Các phương thức nhân giống in vitro 8 1.2.4 Quy trình nhân giống in vitro 9 1.3 MỘT SỐ NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CHUỐI BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY IN VITRO 11 1.3.1 Các nghiên cứu trong nước 11 1.3.2 Các nghiên cứu của nước ngoài 13 CHƯƠNG 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 VẬT LIỆU, ðỊA ðIỂM VÀ THỜI GIAN NGHIÊN CỨU 14 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp …………………… v 2.1.1 Vật liệu thực vật 14 2.1.2 Hóa chất và thiết bị 14 2.1.2 ðịa ñiểm và thời gian nghiên cứu. 14 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 15 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.3.1 Phương pháp bố trí thí nghiệm 15 2.3.2 Phương pháp pha môi trường và nuôi cấy 15 2.3.2 Phương pháp ra cây 16 2.3.3 Phương pháp bố trí thí nghiệm 17 2.3.4 Phương pháp thu thập số liệu và xử lý số liệu 23 2.3.5 Phương pháp tính toán kết quả 24 CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 25 3.1 So sánh ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy MS, B5 và Phytamax tới sự phát sinh chồi và tạo cụm chồi chuối Tiêu Hồng. 25 3.2 Ảnh hưởng của các chất kích thích sinh trưởng thuộc nhóm cytokinin tới sự phát sinh chồi và tạo cụm chồi chuối Tiêu Hồng. 27 3.2.1 Ảnh hưởng của BAP tới sự phát sinh chồi và tạo cụm chồi chuối Tiêu Hồng. 27 3.2.2 Ảnh hưởng của kinetin lên sự phát sinh chồi và tạo cụm chồi ở chuối Tiêu Hồng. 30 3.3 Ảnh hưởng của các chất kích thích sinh trưởng thuộc nhóm auxin tới sự phát sinh rễ chuối Tiêu Hồng. 32 3.3.1 Ảnh hưởng của chất kích thích sinh trưởng α-NAA ñến sự phát sinh rễ của chuối Tiêu Hồng. 32 3.3.2 Ảnh hưởng của chất kích thích sinh trưởng IAA ñến sự phát sinh rễ của chuối Tiêu Hồng. 33 3.3.3 Ảnh hưởng của chất kích thích sinh trưởng IBA ñến sự hình thành rễ của chuối Tiêu Hồng. 34 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp …………………… vi 3.4 Ảnh hưởng của tổ hợp các chất kích thích sinh trưởng thuộc nhóm cytokinin và auxin ñến sự sinh trưởng của chuối Tiêu Hồng. 36 3.4.1 Ảnh hưởng của tổ hợp chất kích thích sinh trưởng BAP và α- NAA ñến sự sinh trưởng của chuối Tiêu Hồng. 36 3.4.2 Ảnh hưởng của tổ hợp chất kích thích sinh trưởng BAP và IAA ñến sự sinh trưởng của chuối Tiêu Hồng. 37 3.4.3 Ảnh hưởng của tổ hợp chất kích thích sinh trưởng BAP và IBA ñến sự sinh trưởng của chuối Tiêu Hồng. 38 3.4.4 Ảnh hưởng của tổ hợp chất kích thích sinh trưởng kinetin và α- NAA ñến sự sinh trưởng của chuối Tiêu Hồng. 39 3.4.5 Ảnh hưởng của tổ hợp chất kích thích sinh trưởng kinetin và IAA ñến sự sinh trưởng của chuối Tiêu Hồng. 41 3.4.6 Ảnh hưởng của tổ hợp chất kích thích sinh trưởng kinetin và IBA ñến sự sinh trưởng của chuối Tiêu Hồng. 42 3.5 Ảnh hưởng của giá thể ñến sự sinh trưởng của chuối Tiêu Hồng. 44 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 46 KẾT LUẬN 46 KIẾN NGHỊ 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO 48 PHỤ LỤC 51 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp …………………… vii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT α-NAA ABA BAP IAA IBA KC MS RE VW Axit α-naphthaleneacetic Axit abscisic Benzylamino purine Axit indol axetic Axit indol butyric Knudson C Murashige and Skoog Robert Ernst Vacin and Went Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp …………………… viii DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang 3.1 So sánh ảnh hưởng của môi trường MS, B5 và Phytamax tới sự phát sinh chồi và tạo cụm chồi ở chuối Tiêu Hồng. 25 3.2 Ảnh hưởng của BAP tới sự phát sinh chồi và tạo cụm chồi ở chuối Tiêu Hồng. 29 3.3 Ảnh hưởng của kinetin tới sự phát sinh chồi và tạo cụm chồi ở chuối Tiêu Hồng. 31 3.4 Ảnh hưởng của α-NAA tới sự phát sinh rễ chuối Tiêu Hồng 32 3.5 Ảnh hưởng của IAA tới sự phát sinh rễ ở chuối Tiêu Hồng 33 3.6 Ảnh hưởng của IBA tới sự phát sinh rễ ở chuối Tiêu Hồng. 35 3.7 Ảnh hưởng của tổ hợp chất kích thích sinh trưởng BAP và α- NAA tới sự sinh trưởng của chuối Tiêu Hồng. 37 3.8 Ảnh hưởng của tổ hợp chất kích thích sinh trưởng BAP và IAA tới sự sinh trưởng của chuối Tiêu Hồng. 38 3.9 Ảnh hưởng của tổ hợp chất kích thích sinh trưởng BAP và IBA tới sự sinh trưởng của chuối Tiêu Hồng. 39 3.10 Ảnh hưởng của tổ hợp chất kích thích sinh trưởng kinetin và α- NAA tới sự sinh trưởng của chuối Tiêu Hồng. 40 3.11 Ảnh hưởng của tổ hợp chất kích thích sinh trưởng kinetin và IAA tới sự sinh trưởng của chuối Tiêu Hồng. 41 3.12 Ảnh hưởng của tổ hợp chất kích thích sinh trưởng kinetin và IBA tới sự sinh trưởng của chuối Tiêu Hồng. 43 3.13 Kết quả ra cây 44 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp …………………… ix DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang 3.1 So sánh ảnh hưởng của môi trường MS, Phytamax và B5 tới sự phát sinh chồi và tạo cụm chồi chuối Tiêu Hồng. 27 3.2 Ảnh hưởng của kinetin tới sự phát sinh chồi và tạo cụm chồi ở chuối Tiêu Hồng 31 3.3 Ảnh hưởng của các chất kích thích sinh trưởng thuộc nhóm auxin tới sự phát sinh rễ của chuối Tiêu Hồng. 35 3.4 Hình ảnh sinh trưởng của chuối Tiêu Hồng trên giá thế ñất + cát + trấu hun (1:1:1) 45 [...]... nhi t ñ làm s ch b nh là nguyên li u t t cho nhân gi ng K thu t nhân nhanh ñư c ng d ng nh m ph c v cho các m c ñích chính như: duy trì và nhân nhanh các ki u gen quý hi m, làm v t li u cho công tác ch n gi ng; duy trì và nhân nhanh các cá th ñ u dòng ñ cung c p h t gi ng cho các lo i cây tr ng khác nhau như cây lương th c có c , cây rau, cây c nh ; nhân nhanh ñi u ki n vô trùng cách ly tái nhi m k... cây chu i nhân nhanh in vitro vào t i t nh nh m h giá thành cây gi ng và ch ñ ng cung c p cây gi ng ñáp ng nhu c u s n xu t là c n thi t Xu t phát t yêu c u ñó chúng tôi ti n hành nghiên c u ñ tài: Nghiên c u nhân nhanh invitro cây chu i Tiêu H ng (M.acuminata)” trong ñi u ki n th c t phòng thí nghi m c a ñ a phương nh m nhân nhanh gi ng chu i Tiêu H ng s ch b nh, góp ph n nâng cao hi u qu cho ngư i... t o ra t c ñ nhân nhanh cao nh t trong ñi u ki n nuôi c y Thành ph n và ñi u ki n môi trư ng c n t i ưu hoá ñ t o ñư c m c tiêu nhân nhanh ð i v i môi trư ng nhân ch i, ngư i ta s d ng các ch t kích thích sinh trư ng thu c nhóm cytokinin (BAP, kinetin) v i n ng ñ khác nhau tuỳ t ng ñ i tư ng cây Quy trình c y chuy n ñ nhân nhanh ch i thư ng trong kho ng 1-2 tháng tuỳ loài cây T l nhân nhanh kho ng... Nhân gi ng thương m i quy mô l n ñã ñ t ñư c m t s cây tr ng như nhân nhanh chu i, nhân nhanh khoai tây s ch b nh, nhân nhanh các gi ng mía nh p n i… Quy trình công ngh nhân nhanh gi ng chu i và gi ng mía ñã ñư c B Nông nghi p và Phát tri n Nông thôn công nh n và áp d ng [2] Các nghiên c u v nhân gi ng chu i trư c ñây ch chú tr ng các bi n pháp k thu t nhân b ng c và tách ch i Nh ng k thu t này hi n còn... M T S NGHIÊN C U NHÂN GI NG CHU I B NG K THU T NUÔI C Y IN VITRO 1.3.1 Các nghiên c u trong nư c Ngày nay phương pháp nuôi c y mô t bào th c v t không ch ñư c s d ng trong nghiên c u mà còn ñư c áp d ng r ng rãi vào th c ti n ch n gi ng, không ch cây ngũ c c mà còn cây rau, hoa cây c nh và cây ăn qu Nuôi c y mô và t bào th c v t ph c v nhân gi ng cây tr ng ñã tri n khai trên 20 năm nư c ta Nhân gi... ñưa các cây lai và các cây t nhiên có ñ c ñi m t t; b o qu n t t t p ñoàn gi ng vô tính v các loài cây giao ph n trong ngân hàng gen [2], [19] 1.2.2 Ưu th c a nhân gi ng in vitro H s nhân cao, rút ng n th i gian ñưa gi ng vào s n xu t T m t cây trong vòng 1-2 năm có th t o thành hàng tri u cây Nhân ñư c s lư ng cây l n trong m t di n tích nh , trong 1m2 có th ñ 18000 cây [19], [26] Làm s ch b nh cây tr... c a cây khi chuy n t trong ng nghi m ra vư n ươm quy t ñ nh hi u qu kinh t c a phương pháp nhân gi ng in vitro Do ñó, m t quy trình ra cây ñ t hi u qu cao có ý nghĩa r t l n 2.3.2.1 ðưa cây ra ngoài môi trư ng Các bình cây ñư c m nút, cho nư c vào ngâm 10-15 phút, sau ñó l c nh cho th ch r i ra kh i cây, dùng panh nh nhàng g p cây ra kh i bình, c g ng ñ cây ñư c nguyên v n không b d p nát Ngâm cây. .. N i dung 5: Nghiên c u tìm ra lo i giá th thích h p nh t cho ra cây chu i Tiêu H ng Thí nghi m 13: Nghiên c u nh hư ng c a giá th ñ t, cát, tr u hun thích h p nh t cho ra cây chu i Tiêu H ng Khi cây con có b r kh e, lá xanh t t ñư c ti n hành hu n luy n ñưa Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p …………………… 22 cây tr ng ngoài t nhiên b ng cách ñ các bình cây ra nơi có... (1995), Ph m Kim Thu và ð ng Th Vân (1997) ñ u s d ng môi trư ng MS ñ nuôi c y mô cây chu i Tuy nhiên nghiên c u môi trư ng nuôi c y cây chu i Tiêu H ng thì r t ít tác gi nghiên c u Do ñó ñ nghiên c u nh hư ng c a môi trư ng ñ n s hình thành ch i và c m ch i trong nuôi c y mô cây chu i Tiêu H ng chúng tôi ti n hành nghiên c u trên 3 lo i môi trư ng: MS cơ b n, B5 và Phytamax b sung saccharose 30g/l... phôi vô tính Giai ño n này ph thu c vào t ng ñ i tư ng ñem nhân gi ng, thông thư ng kéo dài t 2-12 tháng ho c ít nh t 4 l n c y chuy n [19] Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p …………………… 9 1.2.4.3 Nhân nhanh ch i ðây là giai ño n s n xu t cây nhân gi ng quy t ñ nh hi u qu c a quá trình nuôi c y mô, cây ñư c nhân nhanh theo nhu c u c a ngư i nuôi c y Khi m u c y s ch ñã