BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM VŨ HOÀNG HIỆP NGHIÊN CỨU TẠO ĐỘT BIẾN IN VITRO VÀ ĐÁNH GIÁ SINH TRƯỞNG, PHÁT TRIỂN, SAI KHÁC DI TRUYỀN CỦA CÁC DÒNG ĐỘT BIẾN GIỐNG HOA CẨM CHƯỚNG QUẬN CHÚA (DIANTHUS CARYOPHYLLUS L.) CHUYÊN NGÀNH : KHOA HỌC CÂY TRỒNG MÃ SỐ : 62.62.01.10 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÀ NỘI – 2014 Công trình hoàn thành tại: HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM Người hướng dẫn: PGS.TS. NGUYỄN THỊ LÝ ANH Phản biện 1: PGS.TS. Nguyễn Thị Phương Thảo Học viện Nông nghiệp Việt Nam Phản biện 2: PGS.TS. Lê Huy Hàm Viện Di truyền Nông nghiệp Phản biện 3: TS. Đặng Văn Đông Viện Nghiên cứu Rau quả Luận án sẽ được bảo vệ tại hội đồng chấm luận án cấp Học viện họp tại: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Vào hồi , ngày tháng năm 2014 Có thể tìm hiểu luận án tại thư viện: - Thư viện Quốc gia Việt Nam - Thư viện Học viện Nông nghiệp Việt Nam 1 M ĐU 1. Tính cp thit ca đ tài Cẩm chướng là một trong bốn loài hoa cắt cành được trồng phổ biến trên thế giới, chiếm 17% tổng sản lượng hoa cắt (Nguyễn Thị Kim Lý, 2012). Đây cũng là loại hoa có nhiều triển vọng trong sản xuất nội tiêu cũng như xuất khẩu ca Việt Nam.  nước ta hiện nay, ch yếu trồng các giống cẩm chướng nhập nội từ nước ngoài do đó không ch động và chi phí sản xuất cao, đặc biệt là không thể m rộng sản xuất và xuất khẩu bi không có bản quyền giống. Vì vậy, việc nghiên cu chọn tạo những giống hoa cẩm chướng mới đáp ng được nhu cầu thị trưng, phù hợp với điều kiện sinh thái và có bản quyền ca Việt Nam là yêu cầu bc thiết. Đối với cây hoa việc chọn tạo giống tập trung ch yếu là tạo giống có màu sắc mới. Điều này được thực hiện thông qua con đưng lai xa và gây tạo đột biến. Tuy nhiên đối với cây hoa cẩm chướng  nước ta việc lai xa rất khó thực hiện bi khả năng thụ phấn thụ tinh rất khó. Vì vậy việc tạo giống có màu sắc mới chỉ có thể thực hiện thông qua con đưng gây tạo đột biến. Phương pháp chọn tạo giống bằng gây tạo đột biến được phát triển từ giữa thế kỷ 20 và ngày càng phát triển rộng rãi mang lại những thành tựu to lớn trong công tác chọn tạo giống cây trồng. Hơn thế nữa, việc gây tạo đột biến nhân tạo kết hợp với nuôi cấy mô tế bào thực vật in vitro đã tr thành công cụ hữu hiệu giúp giảm thiểu chi phí và thi gian chọn tạo giống cây trồng mới. Kỹ thuật này đã làm tăng tần số xuất hiện đột biến với các tính trạng có giá trị kinh tế  các loài thực vật nói chung và cây hoa nói riêng, góp phần không nhỏ cho việc cải tiến giống cây trồng. (Okamura, 2006; Shu, 2009; IAEA, 2009, 2013). Xuất phát từ những vấn đề nêu trên chúng tôi thực hiện đề tài “Nghiên cu to đt bin in vitro vƠ đánh giá sinh trng, phát triển, sai khác di truyn ca các dòng đt bin ging hoa cẩm chớng Qun Chúa (Dianthus caryophyllus L.)”. 2 2. Mục tiêu ca đ tài Nghiên cu phương pháp xử lý đột biến in vitro nhằm xác định được phương pháp xử lý đột biến hiệu quả và tạo được các dòng biến dị di truyền làm nguồn nguyên liệu cho công tác chọn tạo giống hoa cẩm chướng mới. 3. Yêu cầu của đề tài - Xác định khả năng nhân giống in vitro cho cây cẩm chướng giống Quận Chúa, làm cơ s cho việc tái sinh và tạo cây hoàn chỉnh các mẫu xử lý đột biến in vitro bằng tác nhân gây đột biến. - Xác định hiệu quả xử lý gây tạo đột biến cho cây hoa cẩm chướng trong nuôi cấy mô mang lại hiệu quả cao: + Xác định nồng độ, thi gian xử lý EMS thích hợp cho chồi nhân in vitro cây hoa cẩm chướng. + Xác định liều lượng xử lý tia gamma nguồn 60 Co thích hợp cho chồi nhân in vitro cây hoa cẩm chướng. + Xác định hiệu quả ca xử lý phối hợp EMS và tia gamma nguồn 60 Co cho chồi nhân in vitro cây hoa cẩm chướng. - Phân lập các thể đột biến qua các thế hệ nhân chồi in vitro. - Sàng lọc các dạng biến dị ca cây cẩm chướng sau xử lý trong điều kiện tự nhiên. - Đánh giá sự sai khác di truyền ca một số dòng đột biến có triển vọng đã phân lập bằng chỉ thị SSR. - Xác định phương pháp khử trùng mẫu, môi trưng nhân nhanh, môi trưng ra rễ và giá thể ra cây thích hợp cho một số dòng đột biến có tiềm năng được tuyển chọn. 4. Ý nghĩa khoa học và thực tin ca đ tài 4.1. Ý nghĩa khoa học Kết quả nghiên cu ca đề tài đã cung cấp các dẫn liệu khoa học có giá trị về việc ng dụng nhân giống in vitro và phương pháp tạo giống mới thông qua xử lý đột biến in vitro ca cây hoa cẩm chướng. Các kết quả nghiên cu ca đề tài là cơ s để tiếp tục nghiên cu tạo dòng đột biến làm nguồn nguyên liệu di truyền cho việc chọn tạo giống cẩm chướng mới. Đồng thi là tư liệu có giá trị cho việc nghiên cu lĩnh vực công nghệ sinh học và chọn tạo giống cây trồng. 3 4.2. Ý nghĩa thực tin Đề tài đã xây dựng được quy trình nhân giống in vitro cho một số dòng, giống hoa cẩm chướng, góp phần giải quyết khó khăn trong thực tiễn về nhân giống hiện nay; ng dụng thành công phương pháp xử lý đột biến in vitro và xây dựng được quy trình xử lý gây tạo đột biến kết hợp nuôi cấy in vitro cho cây hoa cẩm chướng bằng tác nhân EMS và chiếu xạ tia gamma nguồn 60 Co; tạo được các vật liệu khi đầu phục vụ cho công tác nghiên cu chọn tạo giống hoa cẩm chướng mới và chọn lọc được một số dòng đột biến có triển vọng. 5. Những đóng góp mới ca lun án Các kết quả nghiên cu đã xác định được tác nhân gây đột biến EMS và tia gamma cho hiệu quả cao trong việc gây tạo biến dị có tiềm năng có thể làm vật iệu cho công tác chọn tạo giống hoa cẩm chướng mới. Đề tài đã tạo ra các dòng đột biến có tiềm năng và đánh giá được đặc điểm sinh trưng phát triển ca các dòng đột biến mới về mầu sắc hoa trong điều kiện tự nhiên. Các dòng đột biến này cũng đã được đánh giá sự sai khác di truyền bằng chỉ thị phân tử SSR và xác định mối quan hệ di truyền với cây mẹ. Đề tài đã xây dựng được quy trình nhân giống in vitro cho 2 dòng đột biến có triển vọng (dòng H6 và dòng H7) trong số các dòng đột biến nêu trên, phục vụ cho các nghiên cu tiếp theo để phát triển hai dòng này thành giống hoa cẩm chướng mới. 6. Giới hn ca đ tài - Thi gian nghiên cu từ năm 2009 – 2013. - Địa điểm nghiên cu: Viện Sinh học Nông nghiệp – Học viện Nông nghiệp Việt Nam. 7. B cục ca lun án Nội dung chính ca luận án được thể hiện trong 130 trang, gồm: 4 trang m đầu, 34 trang tổng quan, 17 trang vật liệu nội dung và phương pháp nghiên cu, 73 trang kết quả và thảo luận, 2 trang kết luận và kiến nghị. 126 tài liệu tham khảo, trong đó 32 tài liệu tiếng Việt, 94 tài liệu tiếng Anh. Kết quả nghiên cu có 34 bảng số liệu và 41 hình. Phần phục lục hình ảnh minh họa và kết quả xử lý số liệu. 4 Chng 1 TNG QUAN TÀI LIU Cẩm chướng là loại hoa có giá trị kinh tế cao, chiếm tỷ lệ lớn trong các loài hoa cắt cành trên thế giới (chiếm 17%) và trong các loài hoa xuất khẩu  nước ta. Việc đẩy mạnh sản xuất và nâng cao chất lượng sản phẩm hoa cẩm chướng  Việt Nam còn nhiều hạn chế, trong đó đề bản quyền giống đang là khó khăn trong việc tiếp cận thị trưng hoa thế giới. Đột biến đóng vai trò quan trọng trong chọn giống cây trồng, nh vào quá trình đột biến mà chúng ta đã tạo ra nhiều giống hoa mới, đặc sắc có năng suất cao, khả năng chống chịu tốt, kháng sâu bệnh, trên lĩnh vực hoa cảnh nói riêng và trong ngành chọn giống nói chung. Xử lý gây tạo đột biến kết hợp nuôi cấy in vitro có nhiều ưu điểm so với phương pháp chọn giống truyền thống: tần số đột biến cao và khả năng thu nhận những thể đột biến đồng nhất về kiểu gen dễ dàng hơn; có thể xử lý một số lượng lớn tế bào, mô, cây con mà không đòi hỏi diện tích lớn; có thể sử dụng nhiều bộ phận khác nhau ca cây (tế bào, mô sẹo, chồi in vitro, đoạn thân, hạt, …); có khả năng rút ngắn thi gian so phương pháp truyền thống (chỉ cần 3 - 6 thế hệ). Các kết quả nghiên cu ca các tác giả về chọn tạo giống đột biến hoa cẩm chướng cho thấy việc ng dụng kỹ thuật gây tạo đột biến nhân tạo đối với cây trồng nói chung và cây hoa cẩm chướng nói riêng mang lại hiệu quả rất lớn. Có rất nhiều giống hoa cẩm chướng mới với những tính trạng mới được tạo ra nh xử lý gây tạo đột biến. Vì vậy, có thể nói rằng, phương pháp chọn giống cẩm chướng và các loại hoa nói chung bằng xử lý đột biến là một phương pháp đầy triển vọng trong công tác chọn tạo giống hoa mới cho sản xuất. Chng 2 ĐI TNG, NI DUNG VÀ PHNG PHÁP NGHIÊN CU 2.1. Vt liu nghiên cu - Mắt ng ca chồi in vitro cây hoa cẩm chướng thơm giống Quận Chúa (Tên khoa học Dianthus caryophyllus “Princess”; tên thương mại Princess). - Các thiết bị dụng cụ hóa chất trong nuôi cấy mô tế bào. 5 - Phản ng PCR-SSR được tiến hành 20 mồi SSR ca hãng Bioneer (theo Smulders et al., 2003, Tetsuya et al., 2009). - Hóa chất dùng trong nghiên cu sinh học phân tử như Tris bazơ, agarose, isopropanol, Ethanol, chloroform, isoamylalcohol, CH 3 COONa, SDS, CTAB, Nacl, ETDA,… - Các hóa chất cho phản ng PCR gồm deoxynucleotit triphosphat (dNTPs) ca Sigma, Taq-DNA polymeraza ca Fermentas. 2.2. Ni dung nghiên cu. 2.2.1. Nghiên cứu nhân giống in vitro cho cây cẩm chướng giống Quận Chúa - Nghiên cu ảnh hưng ca phương pháp khử trùng đến tỷ lệ sống ca mẫu. - Nghiên cu ảnh hưng ca môi trưng nuôi cấy đến hệ số nhân, sự sinh trưng ca chồi in vitro: + Nghiên cu ảnh hưng ca BA và kinetin trong môi trưng MS đến hệ số nhân, sự sinh trưng ca chồi in vitro. + Nghiên cu ảnh hưng ca tổ hợp cytokinin và auxin đến hệ số nhân, sự sinh trưng ca chồi in vitro. - Nghiên cu ảnh hưng ca α-NAA và than hoạt tính trong môi trưng MS tới khả năng ra rễ ca chồi in vitro. - Nghiên cu ảnh hưng ca giá thể ra cây đến tỷ lệ sống và sinh trưng ca cây in vitro ngoài vưn ươm. 2.2.2. Nghiên cứu các phương pháp xử lý gây to đột biến in vitro cho cây cẩm chướng - Nghiên cu xử lý EMS cho cây hoa cẩm chướng in vitro. - Nghiên cu xử lý tia gamma nguồn 60 Co cho cây hoa cẩm chướng in vitro. - Nghiên cu xử lý kết hợp EMS và tia gamma nguồn 60 Co cho cây cẩm chướng in vitro. 2.2.3. Nghiên cứu phân lập các dng chồi in vitro biến dị sau xử lý và đánh giá sự sinh trưởng phát triển của các dng chồi - Nghiên cu phân lập các dạng chồi biến dị về mặt hình thái. - Nghiên cu khả năng ra rễ ca các dạng chồi phân lập sau xử lý. - Nghiên cu khả năng sinh trưng phát triển ca các dạng chồi 6 trong điều kiện vưn ươm. 2.2.4. Nghiên cứu sự sinh trưởng phát triển và phân lập các dng biến dị của cây cẩm chướng sau xử lý trong điều kiện tự nhiên Cây cẩm chướng sau xử lý được đưa ra trồng tại nhà lưới, theo dõi phân lập các dạng biến dị. 2.2.5. Nghiên cứu đánh giá sự sai khác di truyền của một số dòng biến dị có triển vọng đ̃ phân lập bằng chỉ thị SSR Chọn lọc một số dòng biến dị có tiềm năng đánh giá sự sai khác di truyền  mc độ phân tử bằng chỉ thị SSR. 2.2.6. Nghiên cứu quy trình nhân giống in vitro cho một số dòng đột biến được tuyển chọn - Nghiên cu ảnh hưng ca thi gian khử trùng đến tỷ lệ sống ca mẫu - Nghiên cu ảnh hưng ca môi trưng nuôi cấy đến hệ số nhân, sinh trưng ca chồi in vitro. - Nghiên cu ảnh hưng ca auxin trong môi trưng MS tới khả năng ra rễ ca chồi in vitro. - Nghiên cu ảnh hưng ca giá thể ra cây đến tỷ lệ sống và sinh trưng ca cây in vitro ngoài vưn ươm. 2.3. Phng pháp nghiên cu. 2.3.1. Phương pháp bố trí thí nghiệm Các thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên với 3 lần nhắc lại. 2.3.2. Phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật. Sử dụng phương pháp nuôi cấy in vitro trên môi trưng cơ bản MS (Murahige and Skoog, 1962) với 6,5 g/l agar, 30 g/l saccarose và 100 mg/l innositol) có bổ sung các chất điều tiết sinh trưng. Các thí nghiệm nhân nhanh, tạo cây hoàn chỉnh mẫu được nuôi cấy  nhiệt độ 20 – 22 0 C, cưng độ chiếu sáng 2.000 lux, thi gian chiếu sáng 16 gi/ngày. Các công thc thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên, mỗi công thc thí nghiệm bố trí 150 mẫu, chia làm 3 lần nhắc lại. 2.3.3. Phương pháp gây to đột biến in vitro Phương pháp gây tạo đột biến được tiến hành theo quy trình ca Novak and Brunner (1992) có cải tiến. Mỗi công thc thí nghiệm xử lý 3 lần nhắc lại mỗi lần 60 mẫu với liều lượng xử lý như sau: - Xử lý gây to đột biến bằng tác nhân EMS: Mẫu được xử lý  7 các mc nồng độ EMS 0,2; 0,4; 0,6; 0,8; 1,0% với 3 mc thi gian 1, 2 và 3 gi. - Xử lý gây to đột biến bằng tia gamma nguồn 60 Co: Mẫu được xử lý với các liều hấp thụ 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 Gᵧ. - Xử lý gây to đột biến bằng EMS kết hợp tia gamma nguồn 60 Co: Mẫu được xử lý EMS với nồng độ 0,1; 0,2; 0,3; 0,4% trong thi gian 2 gi kết hợp tia gamma nguồn Co 60 với liều hấp thụ 10, 20, 30 Gᵧ. 2.3.4. Phương pháp đánh giá sự sai khác di truyền của các dòng đột biến bằng chỉ thị phân tử SSR Để tiến hành phân tích và đánh giá sự sai khác di truyền ca các giống hoa cẩm chướng  mc độ phân tử, DNA ca 7 mẫu hoa cẩm chướng được nhân bản bằng phương pháp PCR với 20 mồi SSR. Các sản phẩm được điện di trên gel agarose 3,5%. 2.3.4.1. Phương pháp chiết tách DNA Trong thí nghiệm này chúng tôi chiết tách DNA tổng số ca các mẫu cẩm chướng dựa theo phương pháp ca Obara – Okeyo P. and Kako (1998) có cải tiến. 2.3.4.2. Phương pháp PCR – SSR Phản ng PCR được thực hiện với nhiều chu kì, nhiệt độ biến tính DNA 95 0 C, nhiệt độ gắn mồi 37- 55 0 C tuỳ theo từng mồi, nhiệt độ tổng hợp chuỗi DNA 72 0 C. 2.3.4.3. Phương pháp điện di trên gel agarose Sản phẩm ca phản ng PCR-SSR được kiểm tra trên gel agarose 1% và soi gel dưới ánh sáng đèn UV, nhận biết sản phẩm khuếch đại dựa vào thang chuẩn DNA 1Kb. 2.3.4.4. Phương pháp phân tích số liệu Các số liệu này được đưa vào xử lý theo chương trình NTSYSpc 2.1 ca Rohlf (2002) để tính ma trận tương đồng giữa các cặp mẫu. ảệ số PIC - Chỉ số thông tin đa hình (Nei, 1973).         Trong đó: pi là tần số xuất hiện alen th i. 8 Tỷ lệ dị hợp tử (ả%) H%= Số mồi xuất hiện ≥2 alen/ 1locus SSR Tổng số mồi sử dụng-Số mồi khuyết số liệu x 100 2.3.5. Phương pháp theo dõi, đánh giá đặc điểm nông, sinh học Các chỉ tiêu đánh giá ngoài đồng ruộng theo Quy phạm khảo nghiệm tính khác biệt, tính đồng nhất và tính ổn định ca Hiệp hội Quốc tế về bảo hộ giống cây trồng mới (Hiệp hội Quốc tế về bảo hộ giống cây trồng mới, 2008). 2.4. Phng pháp xử lý s liu Số liệu được xử lý theo phương phân tích phương sai (ANOVA) theo chương trình Irristat 5.0S và Excel. Số liệu phân tích SSR được xử lý bằng phần mềm NTSYS pc2.1. Sử dụng thuật toán nội suy lagrange để xây dựng mô hình toán học. Sử dụng phương pháp Reed and Muench (1983), Behrens and Karber (1935) để xác định liều gây chết 50% mẫu thí nghiệm (LD 50 ). Chng 3 KT QU NGHIÊN CU VÀ THO LUN 3.1. Nghiên cu nhân ging in vitro cho cây cẩm chớng ging Qun Chúa 3.1.1. Nghiên cứu to vật liệu khởi đầu Kết quả nghiên cu cho thấy, đối với cây cẩm chướng giống Quận Chúa sử dụng hóa chất HgCl 2 0,1% để khử trùng mẫu có hiệu quả tốt hơn so với NaOCl (5%). Trong các công thc thí nghiệm được nghiên cu công thc 2 (sử dụng HgCl 2 0,1% trong thi gian 7 phút) cho hiệu quả tốt nhất. 3.1.2. Nghiên cứu nhân nhanh chồi in vitro 3.1.2.1. nh hưởng của BA và kinetin trong môi trường MS đến hệ số nhân, sinh trưởng của chồi in vitro cây cẩm chướng Kết quả nghiên cu cho thấy: các công thc có bổ sung kinetin hoặc BA đều cho sự phát sinh chồi cao hơn đối chng. Tuy nhiên,  mỗi nồng độ BA hoặc kinetin bổ sung khác nhau thì số chồi phát [...]... c sai khác di truyền lớn nhất là dòng H1-H3 (khoảng cách di truyển là 0,4902) Cặp giống ĐC và dòng H4 có sự tương đồng di truyền cao nhất (khoảng cách di truyền 0,1707) Từ sơ đồ hình cây về mối quan hệ di truyền giữa các mẫu giống cẩm chướng cho thấy m c độ sai khác di truyền giữa các giống có sự khác nhau m c tương đồng 0,75 có thể chia 7 dòng, giống cẩm chướng thành 6 nhóm: Nhóm 1: Gồm giống ĐC và. .. hợp tử cao nhất dòng đột biến H3 (29,41%) tiếp theo là dòng H2, H6, H1, H4, ĐC và H7 Tỷ lệ dị hợp tử thấp nhất dòng H7 (14,29%) Kết quả này cho thấy các dòng, giống cẩm chướng nghiên c u có độ thuần di truyền rất cao 3.5.4 ảệ số đồng d ng và mối quan hệ di truyền giữa các dòng, giống cẩm chướng Kết quả nghiên c u cho thấy hệ số tương đồng di truyền c a 6 dòng đột biến và giống Quận Chúa dao động trong... thu 20 Gγ Trong các phương pháp gây tạo đột biến in vitro được nghiên c u, phương pháp xử lý gây tạo đột biến in vitro bằng hóa chất EMS cho hiệu quả tốt hơn, cho tỷ lệ biến dị cao và xuất hiện nhiều biến dị có tiềm năng 5) Đề tài đã chọn lọc được 6 dòng đột biến về màu sắc có tiềm năng phát triển thành giống mới (dòng H1, H2, H3, H4, H6 và H7) Đánh giá sự sai khác di truyền các dòng đột biến bằng chỉ... các dòng đột biến về màu sắc có sự khác biệt về mặt di truyền so với giống gốc Trong đó dòng H3 có sự sai khác di truyền lớn nhất (hệ số tương đồng di truyền H3 - H1: 0,5098) và sự sai khác di truyền thấp nhất là dòng H4 (hệ số tương đồng di truyền H4 - ĐC: 0,8293) 6) Do có sự khác nhau về cấu trúc di truyền nên sự cảm ng với môi trư ng nuôi cấy in vitro giữa dòng H6 và H7 có sự khác nhau Để nhân giống. .. di truyền H4-ĐC: 0,8293) Trong 20 cặp mồi SSR được lựa chọn để nghiên c u, mồi CB001a, CDB221 không phân biệt được sự sai khác về mặt di truyền giữa các dòng, giống hoa cẩm chướng được nghiên c u Mồi CB016a 20 chỉ cho sự sai khác giữa mẫu đối ch ng và các dòng khác, không có sự sai khác giữa các dòng biến dị được nghiên c u Mồi DCA221, CB047a, có thể sử dụng để phân biệt dòng H7 với các dòng khác và. .. vòi nhụy các dạng không có sự khác nhau tuy nhiên độ dài c a vòi nhụy c a dạng H1 và dạng H3 vòi nhụy dài hơn 3.5 Nghiên c u đánh giá sự sai khác di truy n c a m t s dòng cẩm ch ớng bằng kỹ thu t SSR 3.5.1 Kết qu phân tích sự nhân b n DNA với các cặp mồi Kết quả phân tích và đánh giá sự sai khác di truyền c a các giống hoa cẩm chướng m c độ phân tử, DNA c a 7 mẫu hoa cẩm chướng (gồm 6 dòng đột biến H1,.. .sinh và sự sinh trư ng thân lá c a các chồi cũng có sự khác nhau khác nhau Trong các công th c thí nghiệm công th c CT6 (MS + 1,0 mg/l kinetin) cho hệ số nhân chồi cao nhất 3.1.2.2 nh hưởng của của tổ hợp kinetin và auxin đến hệ số nhân, sinh trưởng của chồi in vitro cây cẩm chướng Số liệu cho thấy, khi cố định nồng độ kinetin thay đổi nồng độ IAA và α-NAA với các m c 0,25; 0,50; 0,75 và 1,0... lý 3.2.2 Nghiên cứu xử lý gây t o đột biến cho cây hoa cẩm chướng nuôi cấy in vitro bằng chiếu x tia gamma nguồn 60Co 3.2.2.1 Nghiên cứu nh hưởng của xử lý chiếu x tia gamma nguồn 60 Co tới sự phát sinh và sinh trưởng của cây hoa cẩm chướng in vitro Kết quả nghiên c u cho thấy, các công th c thí nghiệm cho 12 thấy có sự phụ thuộc tuyến tính giữa liều lượng xử lý chiếu xạ tia gamma nguồn 60Co và tỷ lệ... tương ng là 13 và 11 3.5.2 Kết qu phân tích hệ số PIC với các cặp mồi Kết quả cho thấy hệ số PIC dao động từ 0,0 (các cặp mồi chỉ có đơn hình) đến giá trị cao nhất là 0,83 cặp mồi CB004a Hệ số PIC trung bình c a 20 cặp mồi trên 7 dòng cẩm chướng nghiên c u là 0,26 cho thấy các locus gen khá đa dạng 3.5.3 Đánh giá độ thuần di truyền của các dòng cẩm chướng nghiên cứu Các dòng, giống cẩm chướng nghiên c u... Proceedings, Hội nghị Khoa học Công nghệ sinh học toàn quốc 2013, Quyển 2: Công nghệ sinh học Vi sinh, công nghệ sinh học Thực vật, NXB Khoa học tự nhiên và Công nghệ: 817 - 821 2 Vũ Hoàng Hiệp và Nguyễn Thị Lý Anh (2013) Ảnh hưởng của xử lý đột biến in vitro bằng Ethyl methane sulphonate (EMS) kết hợp chiếu xạ tia gamma đến sự biến dị ở cây hoa cẩm chướng (Dianthus caryophyllus L.), Tạp chí Khoa học phát . BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM VŨ HOÀNG HIỆP NGHIÊN CỨU TẠO ĐỘT BIẾN IN VITRO VÀ ĐÁNH GIÁ SINH TRƯỞNG, PHÁT TRIỂN, SAI KHÁC DI TRUYỀN. 2.3.4. Phương pháp đánh giá sự sai khác di truyền của các dòng đột biến bằng chỉ thị phân tử SSR Để tiến hành phân tích và đánh giá sự sai khác di truyền ca các giống hoa cẩm chướng  mc độ. giống in vitro cho 2 dòng đột biến có triển vọng (dòng H6 và dòng H7) trong số các dòng đột biến nêu trên, phục vụ cho các nghiên cu tiếp theo để phát triển hai dòng này thành giống hoa cẩm