Đề tài SVTH : VÕ THỊ ÁI GVHD : TS ĐẶNG ĐỨC LONG LỚP : 10SHLT NỘI DUNG Mở đầu Tổng quan tài liệu Vật liệu phương pháp nghiên cứu Kết thảo luận Kết luận kiến nghị MỞ ĐẦU Tách chiết DNA Hạt nano sắt từ - Giảm lượng hóa chất - Phân tách từ trường dễ dàng - Việt Nam chưa nghiên cứu nhiều Nghiên cứu chế tạo sử dụng hạt nano sắt từ để gắn kết với DNA - Tạo vật liệu - Gắn kết với DNA TỔNG QUAN TÀI LiỆU 2.1 Giới thiệu hạt nano sắt - Hai loại xít sắt nghiên cứu ứng dụng nhiều magnetite Fe3O4 maghemite γ – Fe2O3 Các phương pháp tạo hạt nano sắt từ Nghiền Đồng kết tủa Phỏng sinh học Hóa siêu âm Điện hóa Yêu cầu hạt nano từ tính dùng y sinh học : - Tính đồng hạt cao - Từ độ bão hịa lớn - Có tính tương hợp sinh học TỔNG QUAN TÀI LiỆU 2.2 Phương pháp tách chiết DNA Có giai đoạn : Phá bỏ màng tế bào màng nhân phương pháp hóa học, vật lý, học Loại bỏ protein dựa hòa tan khác phân tử khác (nucleic acid/protein) hai pha khơng hịa tan (phenol, chloroform/nước) Tủa nucleic acid nhằm thu nhận nucleic acid dạng cô đặc 2 TỔNG QUAN TÀI LiỆU 2.3 Ứng dụng hạt nano từ tính y sinh học - Tách DNA siêu vi Herpes hạt nano từ tính - Làm giàu DNA siêu vi viêm gan B hạt nano từ tính bọc SiO2 - Dẫn truyền thuốc Hình 1.6 : Sự khác biệt dẫn thuốc hạt nano 3.VẬT LiỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Quy trình thí nghiệm Tạo hạt nano sắt từ phương pháp đồng kết tủa (nồng độ 0,1 0,05 mol Fe (II) Nuôi vi khuẩn B subtilis Phương pháp thơng thường Khơng có CA Có gia nhiệt CA Tách chiết DNA Xác định kích thước hạt hệ thống TEM Chức hóa bề mặt ATPS Đo độ tinh (A260/A280) PCR Hạt amino-NP Điện di KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Kết tổng hợp hạt nano sắt từ Kết tủa Fe3O4 màu đen hình thành hai dung dịch muối sắt tiếp xúc với dung dịch NH4OH Phản ứng tạo thành kết tủa thể phương trình: Fe2+ + Fe3+ + 8OHFe3O4 ↓ + 4H2O [1] Hình 3.1 : Tủa đen Fe3O4 tạo thành sau dung dịch muối sắt tiếp xúc với NH4OH Hình 3.2 : Kết tủa Fe3O4 sau lọc KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Kết tổng hợp hạt nano sắt từ Mẫu khơng CA : Mẫu gia nhiệt có bổ sung CA : - Kết tủa màu đen lọc rửa - Kết tủa lắng màu đen sấy khô -Nghiền đũa thủy tinh tạo kích thước nhỏ mịn mẫu có CA phân tán nước tốt Hình 3.2 Kết tủa oxit sắt sau sấy khơ Hình 3.3.Tủa oxit sắt bọc CA Hình 3.4 Hạt nano sắt từ phân tán nước KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1.1 Kích thước hạt nano sắt từ Kết phân tích kích thước hạt nano sắt từ kính hiển vi điện tử dẫn (TEM) khoảng 20nm đến 30nm Hình 3.7: Hình ảnh hạt nano sắt từ không bọc CA chụp qua hệ thống TEM với độ phân giải x80000 Hình 3.8 : Hình ảnh hạt nano sắt từ có bọc CA chụp qua hệ thống TEM với độ phân giải x80000 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1.2 Tính từ hạt nano sắt từ Hình 3.5: Tính từ hạt Fe3O4 Kiểm tra nam châm cho thấy hạt sắt chạy theo đường cong từ trường Hạt nano sắt từ chúng tơi tổng hợp có tính từ KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1.3 Chức hóa bề mặt Tạo nhóm amoni bề mặt hạt nano sắt từ N N N SiO2 Fe3O4 N N N N N Hình 3.11 : Ngun lí chức hóa bề mặt hạt nanơ từ tính có cấu trúc vỏ/lõi Lõi hạt xít sắt, vỏ lớp silica,các nhóm chức bên ngồi amino Hình 3.12 : Hạt Fe3O4 sau chức hóa bề mặt KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.2 Kết đo độ tinh DNA Độ acid nucleic = A260/A280 Tỷ lệ đạt từ 1,8 đến DNA xem tinh Bảng 3.1: Kết đo độ tinh mẫu DNA TTM A260/A280 0,292 0,163 1,79 0,301 0,151 1,99 0,332 0,184 1,80 Mẫu DNA tách hạt amino-NP A280 Mẫu DNA tách phương pháp thông thường A260 0,421 0,239 1,76 0,314 0,173 1,82 0,149 0,113 1,31 0,218 0,210 1,04 0,209 0,187 1,12 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.3 Kết điện di DNA tách chiết sản phẩm PCR từ B.subtilis Giếng : sản phẩm PCR Giếng : thang DNA Giếng : mẫu DNA tách hạt amoni-NP Giếng : mẫu DNA tách phương pháp thơng thường Hình 3.9 : Kết điện di DNA B.subtilis KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.3 Kết điện di DNA tách chiết sản phẩm PCR từ B.subtilis - Kết điện di gel agarose hình 3.9 cho thấy băng điện di thu có dạng vệt dài (smear) rõ nét gel -DNA tách hạt amino-NP giếng thứ nhìn thấy rõ với mẫu DNA tách phương pháp thông thường giếng thứ - Sản phẩm PCR gel cho thấy có kích thước đoạn gen khuếch đại 680 bp, với trình tự mồi thiết kế Hình 3.9 : Kết điện di DNA B.subtilis KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Đã tổng hợp hạt nano sắt từ có kích thước 20nm đến 30nm phương pháp đồng kết tủa FeCl2.4H2O, FeCl3.6H2O NH4OH 25% Tính từ hạt nano sắt từ xác định nam châm Tạo nhóm amino bề mặt hạt nano sắt từ Sử dụng hạt nano sắt từ tổng hợp để tách chiết DNA từ tế bào vi khuẩn B.subtillis có độ tinh protein (A260/A280) 1,8; 1,82 Việc tách lọc DNA từ hạt nano sắt từ tiến hành từ trường nên thao tác dễ dàng hơn, đỡ tốn hóa chất thiết bị li tâm 5 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.2 Kiến nghị Cần tiến hành xác định tính siêu thuận từ hạt nano sắt từ từ kế mẫu rung Nghiên cứu tối ưu hóa thời gian giai đoạn hấp thụ DNA lên hạt nano sắt từ Nghiên cứu cố định đoạn phân tử DNA lên hạt nano sắt từ để tạo đầu dò phương pháp lai DNA để thấy rõ ưu việt hạt nano sắt từ ứng dụng sinh học phân tử ... nano sắt từ từ kế mẫu rung Nghiên cứu tối ưu hóa thời gian giai đoạn hấp thụ DNA lên hạt nano sắt từ Nghiên cứu cố định đoạn phân tử DNA lên hạt nano sắt từ để tạo đầu dò phương pháp lai DNA để. .. Nghiên cứu chế tạo sử dụng hạt nano sắt từ để gắn kết với DNA - Tạo vật liệu - Gắn kết với DNA TỔNG QUAN TÀI LiỆU 2.1 Giới thiệu hạt nano sắt - Hai loại xít sắt nghiên cứu ứng dụng nhiều magnetite... ảnh hạt nano sắt từ có bọc CA chụp qua hệ thống TEM với độ phân giải x80000 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1.2 Tính từ hạt nano sắt từ Hình 3.5: Tính từ hạt Fe3O4 Kiểm tra nam châm cho thấy hạt sắt chạy