1 PHẦN 1: TỔNG QUAN 1.1. Một số đặc điểm sinh học của cá chẽm Hệ thống phân loại Ngành động vật có xương sống: Vertebrata Lớp cá xương: Osteichthyes Bộ cá vược: Perciformes Họ cá sơn biển: Centropomidae Giống cá chẽm: Lates Loài cá chẽm: L. calcarifer Bloch, 1970 Tên tiếng Việt: cá chẽm, cá vược. Tên tiếng Anh: Barramundi, White Seabass, Giant Perch. Đặc điểm hình thái Cá chẽm có thân dài, dẹp, cuống đuôi khuyết sâu. Đầu nhọn, nhìn bên lõm phía lưng và lồi ở phía trước vây lưng. Miệng rộng, hàm trên chồm tới phía sau mắt. Vây lưng có 7 – 9 gai và 10 – 11 tia mềm. Vây hậu môn tròn có 3 gai, 7 – 8 tia mềm, vây đuôi tròn. Vẩy dạng lược rộng. Màu sắc: có hai giai đoạn, thường giai đoạn giống cá có màu oliu ở phía trên và màu bạc ở các bên. Giai đoạn trưởng thành cá có màu xanh lục hay màu vàng nhạt ở phần trên và màu bạc ở phần dưới. Đặc điểm phân bố Phân bố theo địa lý: cá chẽm phân bố rộng ở các vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới thuộc Tây Thái Bình Dương và Ấn Độ Dương, ngoài ra chúng còn phân bố ở khắp phần Bắc Châu Á, phía Nam kéo dài đến Queensland (Úc), phía Tây Châu Phi. Phân bố theo vùng sinh thái: Cá chẽm là loài rộng muối có thể sống được ở các vùng nước ngọt, lợ, mặn và có tính di cư xuôi dòng. Cá thành thục sinh dục thường tìm thấy ở các vùng cửa sông, hồ, hay các vùng nước lợ có độ mặn cao và ổn định 30 – 32ppt, độ sâu 10 – 15 m. Ấu trùng mới nở (10 – 15 ngày tuổi, chiều dài dưới 1cm) thường phân bố ở các vùng biển ven bờ gần các cửa sông nước lợ. Cá bột cỡ trên 1cm có thể gặp trong các thuỷ vực nước ngọt. Đặc điểm dinh dưỡng 2 Cá chẽm là loài cá dữ ăn thịt, tuy nhiên ở giai đoạn cá giống lại là loài ăn tạp. Khi phân tích dạ dày cá thu ngoài tự nhiên (cỡ 1 – 10 cm) thấy 20% là phiêu sinh vật, chủ yếu là nhóm tảo khuê và thực vật phù du, phần còn lại là tôm cá nhỏ. Đặc điểm sinh sản Mùa vụ sinh sản: Cá Chẽm đẻ quanh năm nhưng thời điểm chính vụ là tháng 4– tháng 8. Sức sinh sản của cá Chẽm liên quan đến kích thước và khối lượng của cá. Cá có khối lượng từ 5,5 – 11 kg cho khoảng 2,1 – 2,7 tr trứng. 1.2. T T ì ì n n h h h h ì ì n n h h n n g g h h i i ê ê n n c c ứ ứ u u v v ề ề t t u u y y ế ế n n ứ ứ c c c c ủ ủ a a c c á á t t r r ê ê n n t t h h ế ế g g i i ớ ớ i i v v à à t t ạ ạ i i V V i i ệ ệ t t N N a a m m 1 1 . . 2 2 . . 1 1 . . T T ì ì n n h h h h ì ì n n h h n n g g h h i i ê ê n n c c ứ ứ u u t t u u y y ế ế n n ứ ứ c c c c ủ ủ a a c c á á t t r r ê ê n n t t h h ế ế g g i i ớ ớ i i Tuyến ức của cá là tiêu điểm của các nghiên cứu miễn dịch từ vài thập kỷ trước. Các nghiên cứu tập trung vào nguồn gốc phát sinh, hình thái và chức năng thực sự của tuyến ức. Các loài cá được nghiên cứu khá phong phú bao gồm cả các loài có giá trị kinh tế cao như cá hồi vân Oncorhynchus mykis, cá chẽm Châu Âu Dicentrarchus labra, cá chép Cyprinus carpio, cá dĩa zebrafish… và các loài có giá trị kinh tế thấp nhưng thuận tiện cho việc nghiên cứu tuyến ức ở các giai đoạn phát triển cũng như các điều kiện môi trưòng khác nhau như killifish Notobranchius guentheri, cá bạc nam cực Pleuragramma antarcticum … Có thể tổng hợp các nghiên cứu về tuyến ức của cá theo một số vấn đề sau. 1.2.1.1. Vị trí, hình thái, cấu trúc tuyến ức Vị trí Tuyến ức của cá nằm ở mặt lưng của xoang mang phía dưới xoang thính giác (Vũ Trung Tạng và cộng sự (cs), 2005). Tuỳ từng loài cá mà tuyến ức có thể nằm ở túi mang từ 1-4, phổ biến nhất là ở túi mang thứ 2 (Bowden và cs, 2005 ). Ví dụ như ở cá hồi tuyến ức hầu hết phát triển trên cung mang thứ 1 và 2; ở cá chép là cung mang thứ 2,3; ở cá Harpagifer antacticus là cung mang thứ 2, 3, 4; trong khi tuyến ức ở cá mandarin, Siniperca chuatsi lại trải dài qua cung mang thứ 3,4,5 (Xie, 2006). Điều đáng chú ý là sự tiếp xúc khá chặt chẽ giữa tuyến ức và xoang mang. Thậm chí như ở cá Sicyases sanguieus có một cặp tuyến ức ở mỗi xoang mang thì vẫn có 1 tuyến nằm ở gần biểu mô mang (theo Zapata và cs, 1996). Một điểm khá khác biệt so với các động vật có vú là tuyến ức của cá xương nằm ở vi trí khá nông trên bề mặt. Chính vị trí này làm cho tuyến ức có khả năng phơi nhiễm 3 rất cao với dòng nước ra và vào xoang mang trong khi tuyến ức chỉ được bao phủ bởi một lớp tế bào đơn (Grace và Manning, 1980). Thậm chí ở cá bạc ấu niên còn thiếu sự bảo vệ từ nắp mang. Sự mỏng manh của rào chắn từ biểu mô này có thể tăng lên bởi sự hiện diện của các khe rỗng, như là quan sát của Chilmonczyk (1985) ở cá hồi vân ấu niên (dẫn theo O'Neill, 1989). Điều này sẽ được thảo luận tiếp ở phần sau. Hình thái Khác với động vật có vú, tuyến ức của cá gồm 2 thuỳ đối xứng ở 2 bên đầu (Đỗ Thị Hoà và cs, 2004; Press và cs, 1999). Ở một số loài cá số lượng tuyến ức có thể lớn hơn như ở cá cling, Sicyases sanguieus (có 4 thuỳ, mỗi bên của khoang mang có một cặp) hoặc nhỏ hơn như ở cá angler Lophius piscatorius (chỉ có 1 tuyến ức và nằm ở phía sau khoang mang) (Falk-Petersen và cs 2005). Hầu hết tuyến ức có dạng túi, túi dài hoặc dạng hình thoi. Hình thái của tuyến ức cũng đựơc báo cáo ở nhiều loài cá khác nhau. Ví dụ như ở cá halibut Atlantic, sự mở rộng của các tế bào tuyến ức làm tuyến ức thò ra trong khoang mang (Chantanachookin và cộng sự 1991) . Trong khi ở các loài cá khác, như cá chép hay cá chẽm Châu Âu, tuyến ức lại nằm ở trong (Brecuil và cs 1997) (dẫn theo Bowden và cs, 2005). Cấu trúc Trong các nghiên cứu về cấu trúc tuyến ức người ta thường quan tâm đến một số vấn đề sau. + Nang Như đã đề cập ở trên, tuyến ức của cá được bao ngoài bởi một lớp ngoại bì rất mỏng. Ở cá nhám là một lớp đơn các tế bào biểu mô. Thậm chí ở cá xương còn thấy các kẽ hở giữa các tế bào biểu mô bao quanh các mao mạch thậm chí ở cá hồi nhỏ còn thấy sự xuất hiện của những lỗ nhỏ trên bề mặt tưyên ức. Điều này đã dẫn Chylmonczyk tới giả thuyết rằng hàng rào tuyến ức, ít nhất là ở một vài loài cá xương, có thể có tính thấm thay đổi. Trong một tài liệu chưa xuất bản, tác giả này cũng báo cáo rằng chỉ các phân tử nhỏ (như peroxydase) tới được nhu mô tuyến ức của cá hồi vân sau khi tiêm tĩnh mạch hàng loạt vật chất có kích thước và khối lượng khác nhau. Trước đây, Tatner và Manning (1982) đã từng báo cáo rằng tuyến ức của cá hồi vân không được bảo vệ một cách tương đối và các kháng nguyên có thể đi vào phôi thai tuyến ức một cách trực tiếp từ khoang mang (dẫn theo Zapata và cs, 1996). Tuy nhiên, khi tiến hành ngâm cá hồi vân bột trong dung dịch ferrintin (một phức chất của sắt) ở 4 các thời gian khác nhau, Castillo (1998) đã thấy rằng mang (chứ không phải là tuyến ức phôi thai) là cơ quan chủ yếu liên quan đến việc giữ lại ferritin trong suốt quá trình phát sinh của cá hồi vân. Chỉ ở nhóm cá bột non nớt khi tiếp xúc với ferritin trong một thời gian dài mới thấy xuất hiện ferritin trong nhu mô tuyến ức. Trong trường hợp này, các tế bào biểu mô tuyến ức không chứa các tiểu thể ferritin, điều này gợi ý rằng các tế bào biểu mô có thể cản trở một cách thụ động sự đi vào qua màng cơ bản dưới lớp nang mô liên kết (các tế bào đánh dấu tập trung trong lớp nang này) hoặc qua các khoảng không gian bên trong tế bào cạnh vùng biên giới giữa mầm tuyến ức và biểu mô vùng hầu. Có lẽ, trong các trạng thái thuộc chức năng của cơ thể, các vật chất mang tính kháng nguyên hoặc không mang tính kháng nguyên hiện diện trong khoang mang của tuyến ức đang phát triển bị bẫy bởi các tế bào mang trước khi chúng xâm nhập vào nhu mô tuyến ức. Qua thí nghiệm này Castillo đã chứng minh khả năng của các tế bào biểu mô bao bọc tuyến ức trong việc duy trì một môi trường ổn định trong màng. + Tủy - vỏ Nhu mô của tuyến ức là một mạng lưới các tế bào biểu mô mà trong đó chứa đầy các tế bào tự do (mà chủ yếu là các tế bào lympho ở các kích cỡ khác nhau). Ngoài ra còn có các đại thực bào, các tế bào hình cây (hoặc các tế bào đang vào nhau như những ngón tay), các tế bào cơ và một lượng ít các tế bào loại khác. Nhìn chung, tuyến ức của cá xương không thể hiện sự phân vùng tuỷ vỏ đặc trưng như tuyến ức ở các động vật có xương sống bậc cao (Zapata và cs, 1996). Tuy nhiên đây không phải là một đặc điểm cố định ở cá., thông thường có sự khác nhau tuỳ thuộc vào loài và giai đoạn phát triển. Trong một nghiên cứu kiểm tra một lượng lớn cá bơn đã báo cáo không có phần tuỷ ở cá 7 tháng tuổi trở về trước. Một nghiên cứu khác lại báo cáo rằng có thể phân biệt được các vùng trong tuyến ức ở cùng loài cá này. Vấn đề tương tự cũng gặp ở dĩa. Tuy nhiên, điều quan trọng là phải thấy rằng sự khác biệt đó có thể hiện các đặc điểm giữa các loài (hay trong cùng một loài) theo những kiểu khác nhau phụ thuộc vào độ tuổi hoặc các điều kiện khác hay không (Press, 1999). Schnieder (1983), khi nghiên cứu sự phát sinh các cơ quan lympho, đã báo cáo không có sự phân vùng trong tuyến ức cá chép nhỏ nhưng sau đó một sự hoà trộn phức tạp của vùng vỏ vào trong vùng tuỷ được mô tả ở cá chép đang phát triển khi bắt đầu sang tuần thứ 2 . Sự phân vùng có thể quan sát được ở cá turbot, halibut, yellowtail, redseabream, cá bơn Nhật 5 Bản …trong khi không thấy ở cá hồi. So sánh giữa cá hồi vân 5ngày tuổi và 1 năm tuổi cũng chỉ ra rằng không có sự phân vùng ở bất cứ tuổi nào. Ở cá dĩa có sự phân vùng khá rõ ràng với vùng vỏ có các tế bào chứa gen rag-1, và vùng tuỷ không chứa gen rag-1. Kết quả tương tự cũng thu đựoc ở cá chép (dẫn theo Zapata và cs, 1996). Trong vùng vỏ tuyến ức, các tế bào lympho nằm dày đặc trong các kẽ hở của mạng lưới 3 chiều được tạo ra bởi các tế bào biểu mô. Tuy nhiên cũng do sự tập trung với mật độ quá cao của các tế bào lympho mà rất khó có thể quan sát được mạng lưới này như ở vùng tuỷ. Tại vùng tuỷ, mật độ các tế bào tập trung ít hơn nên dễ nhận thấy các tế bào biểu mô, có khi còn thấy một mạng lưói phụ được hình thành từ các tế bào lưới và các tế bào biểu mô (sự khác nhau giữa 2 loại này là chiều dài của các mấu tế bào - các tế bào biểu mô có mấu ngắn hơn các tế bào lưới) (Press, 1999). Một điều thú vị là, một báo cáo đã nhấn mạnh rằng vùng tuỷ có thể được coi là một cơ quan lympho thứ cấp do nó có thể tới bắt các kháng nguyên ngoại lai và các tế bào lympho. Trong vùng tuỷ có các đại thực bào lớn có nhiệm vụ thực bào các tế bào lympho tự huỷ. Điều này sẽ hoàn thành một cách có hiệu quả việc tránh nguy cơ tự miễn từ những kích thích do kháng nguyên cơ thể như là trong chứng nhược cơ năng khi mà tuyến ức liên quan trong việc tự miễn với tế bào cơ (Abelli và cs, 1998) Các nghiên cứu trước đây thường báo cáo là không có các tiểu thể Hassall trong vùng tuỷ cá xương (Đỗ Thị Hòa và cs, 2004). Tuy nhiên gần đây khá nhiều tác giả báo cáo về sự xuất hiện của tiểu thể này hoặc các dạng tương tự như tiểu thể này trong vùng tuỷ của cá xương (Romano và cs, 1999 a và c; Bowden và cs, 2005). Sự nhuộm mầu hoá tế bào phân biệt trên tuyến ức chỉ ra rằng các tế bào bắt màu acid phosphatase ở màng nối tuỷ vỏ đan vào nhau như hình ngón tay (Zapata và cs, 1996). Tuy nhiên hầu hết các nghiên cứu đều báo cáo sự vắng mặt của lớp màng nối này ở cá xương. + Sự phân loại các tế bào trong tuyến ức Các tế bào biểu mô Các tế bào biểu mô của tuyến ức được phân loại dựa trên nhiều cơ sở như là: vị trí, hình thái, kích thước, hàm lượng keratin, chức năng giả định, nguồn gốc biểu mô… Tuy nhiên hiện nay vẫn chưa có sự phân loại thống nhất giữa các dạng biểu mô này. Người ta chỉ thống nhất với nhau về sự hỗn tạp của các thành phần biểu mô của tuyến 6 ức ở cả cá xương và cá nhám, xác định rằng hầu hết mô tuyến ức nguyên thuỷ chứa các loại tế bào rất giống với các tế bào được mô tả trong mô tuyến ức ở động vật có vú. Ở cá nhám, phần lớn các tế bào biểu mô tuyến ức tạo thành 1mạng lưới nâng đỡ trong cả vùng tuỷ và vùng vỏ. Nó mở rộng dưới lớp mô liên kết của bao nang (vỏ), bó cơ, và mạch máu; hình thành một vỏ bao ngoài tách các tế bào tuyến ức khỏi mô liên kết với một lớp màng cơ bản liên tục. Ngoài ra các tế bào có dạng tương tự các tế bào tiết, bắt màu nhợt nhạt, kích thước lớn cũng xuất hiện trong tuyến ức cá nhám. Chúng chứa mạng lưới nội Golgi phát triển mạnh. Tuy nhiên sự đan vào nhau như lớp màng bề mặt và sự xuất hiện của các thể liên kết cũng như các bó tơ cơ đã chứng tỏ bản chất biểu mô của các tế bào này. Các nang biểu mô của vùng tuỷ cũng thường gặp trong tuyến ức của cá nhám. Chúng xuất hiện như là các khoang nhỏ trong tế bào chất hoặc như là các phức hợp lớn gồm nhiều tế bào bao lại một khoang lớn có thể rỗng hoặc được làm đầy bởi các vật chất không xác định hoặc mảnh vụn tế bào. Một số lông tơ hoặc lông mao ngắn nhô vào trong khoảng rỗng của khoang. Thể Hassall bị thiếu trong tuyến ức của cá nhám mặc dù đôi khi chúng được báo cáo trong các nghiên cứu bằng kính hiển vi quang học. Ở cá xương, các dạng tế bào tuyến ức đã được nghiên cứu khá kỹ dù vậy vẫn có những tranh luận đáng kể về mức độ hỗn tạp của biểu mô tuyến ức. Một dạng đơn lẻ của tế bào biểu mô mà tạo thành khung nâng đỡ toàn bộ cơ quan được mô tả ở Rutilus rutilus và gobio gobio và Scyaces sanguineus. Gần đây, 2 dạng tế bào biểu mô khác nhau được xác định trong tuyến ức của Lophius piscatorius và Mugil auratus. Một dạng tương ứng với các tế bào hình sao được mô tả trước đây trong vùng vỏ tuyến ức cá nhám, và 1 dạng khác là các tế bào tiết phình to tương tự như các tế bào bắt màu nhợt nhạt xuất hiện trong vùng tuỷ của cá nhám (Zapata và cs, 1996, Press 1999). Trong một nỗ lực thống nhất những thuật ngữ của cá chép với động vật có vú và chim, nhóm của Bowden và cs đã phân ra 4 nhóm tế bào: tế bào biểu mô giới hạn, tế bào biểu mô lưới, tế bào dạng dinh dưỡng (nurse-like cells), và các cấu trúc giống tiểu thể Hassall. Sử dụng phép phân tích kích thích những kiểu hình bề mặt (như phương pháp được sử dụng để phân loại các tế bào nền của tuyến ức chuột) đã phân loại được: tế bào hình tua (3 nhóm), tế bào có nguồn gốc từ tuỷ (4nhóm), tế bào biểu mô vùng vỏ (5nhóm) , tế bào biểu mô vùng tuỷ (5nhóm), nguyên bào sợi (4 nhóm), tế bào nội mạc 7 (5nhóm). Cũng trên cá chép nhưng Romano (1999 b) lại có sự phân loại khác dù cũng dựa trên những đặc điểm tế bào học và sự phân bố cơ bản của các tế bào tuyến ức. Các tế bào đó bao gồm: tế bào biểu mô giới hạn phân bố trong vùng dưới bao nang, vùng ngoại vi của mạch máu và các dải cơ; tế bào biểu mô dạng lưới phân bố ở vùng vỏ và tuỷ; tế bào tương tự tế bào nuôi (nurse-like cells) ở vùng tiếp giáp giữa vùng vỏ và vùng tuỷ; và các cấu trúc tương tự thể Hassall phân bố ở vùng tuỷ. Để mô tả rõ hơn các thành phần biểu mô tuyến ức của cá rainbow trout, nhóm của Zapata và cs chia các tế bào nền ra làm 2 nhóm theo khả năng chứa hay không chứa keratin của chúng. Trong số các tế bào không chứa keratin có các nguyên bào sợi từ vỏ tuyến ức và vách ngăn, đaị thực bào từ vách ngăn và nhu mô tuyến ức. Các tế bào chứa keratin được phân loại dựa vào tính kiềm hay acid với emzyme phosphatase và vị trí phân bố của chúng trong tuyến ức. Nhóm tế bào này gồm các tế bào biểu mô ngoại vi và giới hạn, các tế bào biểu mô lớn ở vùng dưới bao nang, các tế bào biểu mô hình sao của vùng trong, các tế bào biểu mô hình trứng của vùng trong, các tế bào biểu mô ưa acid của vùng ngoài, các tế bào nang ở vùng ngoài. Dạng tế bào biểu mô nền (tương ứng với các tế bào hình sao như đề cập trước đây) là chủ yếu nhất hình thành mạng lưới nền của vùng như ở vùng trong của tuyến ức. Các tế bào này có lẽ tương tự với các tế bào biểu mô vùng vỏ của tuyến ức động vật có vú mặc dù chúng âm tính với enzyme phosphatase kiềm. Các tế bào biểu mô giới hạn và các tế bào biểu mô xung quanh vách ngăn có hình thái tương tự các tế bào hình sao nhưng biểu hiện của kiểu enzyme hơi khác một chút. Các tế bào hình trứng ở vùng trong tuyến ức giống về mặt hình thái với các tế bào biểu mô phình to của Mugil aratus và Lophius piscatorius và dường như liên quan đến sự hình thành các nang biểu mô. Các tế bào dương tính với keratin khác thì tương ứng với các tế bào biểu mô lớn của vùng dưới bao nang (là vùng chứa các tế bào lympho cỡ lớn và trưng bình) và các tế bào biểu mô ưa axit của vùng ngoài. Về nguốn gốc phôi học của các tiểu quần thể các tế bào biểu mô này, Castillo và cs đề xuất rằng các tế bào biểu mô của cả vùng ngoài và vùng dưới bao nang có thể phát sinh từ biểu mô lót phần đường tiêu hoá của vùng hầu hoặc các biểu mô bao phủ lên mặt trong của nắp mang. Cả 2 loại này đều có nguồn gốc từ lá phôi ngoài và đáng chú ý là chúng tương đồng về mặt mô học với biểu bì cá xương. Mặt khác, các thành phần biểu mô của vùng trong có thể có nguồn gốc từ vùng hầu thuộc mang, vùng mà vẫn 8 được cho là có nguồn gốc từ lá phôi trong. Đặc điểm 2 nguồn gốc của các thành phần biểu mô tuyến ức này mang tính chất của hầu hết các động vật bậc cao bao gồm cả con người . Các tế bào khác Đại thực bào phổ biến trong cả vùng vỏ và vùng tuỷ của tuyến ức cá nhưng tập trung nhiều ở vùng tiếp nối của vỏ - tuỷ. Chúng được mô tả đặc trưng bởi các vật chất nằm trong ngưyên sinh chất của mình. Trong tuyến ức của cá hồi vân, các đại thực bào dưong tính mạnh với acid phosphatase, 5’-nucleitidase và xuất hiện một cách rải rác trong khu vực giới hạn giữa vùng tuỷ và vùng vỏ, giữa vùng vỏ và biểu mô vùng hầu. Sự xuất hiện của các đại thực bào ở vùng trong và vùng dưới vỏ có thể liên quan đến sự dọn sạch các tế bào tuyến ức không còn khả năng tồn tại (Catherine và cs,1999; Zapata và cs; 1996). Các bạch cầu đơn nhân, các tế bào khổng lồ chứa nhiều hạt, các đại thực bào chứa melanin cũng tồn tại trong tuyến ức cá xương. Đôi khi một lượng nhỏ các tế bào chứa các hạt tế bào chất đậm màu cũng được tìm thấy mặc dù chức năng của chúng trong tuyến ức là chưa được rõ (Falk-Petersen và cs, 2005) Các tế bào cơ cũng xuất hiện trong tuyến ức của cá. Có sự khác nhau về số lượng các tế bào cơ được báo cáo trong các lớp động vật có xương sống và số lượng các tế bào cơ ở một vài loài cá. Tuy nhiên, cũng giống như các nhóm động vật có xương sống bậc cao, hiện nay người ta vẫn chưa rõ về vai trò của các nhóm tế bào này. Các tế bào cơ thoái hoá cũng được cho là các tế bào bị ảnh hưỏng bởi đại thực bào (Romano, 1999 a, Xie và cs, 2006) Sự hiện diện của các tế bào sinh chất trưởng thành và các tế bào có kháng thể trong tuyến ức cũng đã đựơc chứng minh ở tất cả các động vật có xương sống bao gồm cả cá, mặc dù nguồn gốc và chức năng của chúng vẫn đang bị tranh cãi. Các nghiên cứu phân loại sử dụng kháng huyết thanh đã thể cho thấy một lượng lớn tế bào biểu hiện kháng nguyên trong tuyến ức của cả cá nhám và cá xương. Việc sử dụng kháng thể đơn dòng kháng lại kháng nguyên này cũng đã xác định được sự tồn tại chúng. Thêm nữa, các nghiên cứu in vitro đã xác định sự xuất hiện các tế bào sinh chất trong tuyến ức. Các tế bào này có thể phát triển (trong điều kiện thí nghiệm) trong vi môi trường được tạo ra bởi các tế bào tuyến ức nếu cơ quan này (tuyến ức) chứa các mầm tế bào B hoặc các tế bào này có thể di cư tới đây một cách ngẫu nhiên hoặc chúng có 9 thể liên quan đến nhóm tế bào lympho B trưởng thành tuần hoàn (các tế bào này có một lượng nhỏ và cân xứng di cư vào và ra khỏi tuyến ức, ít nhất là ở động vật có vú) (Zapata và cs, 1996, Press và cs, 1996). + Sự phân bố mạch máu Có rất ít thông tin có sẵn về sự phân mạch trong tuyến ức của cá. Chilmonczyck đã báo cáo rằng sự phân mạch trong tuyến ức cá xương dường như có nguồn gốc từ hệ mạch mang và theo đó nó có thể có nguồn gốc động mạch. Theo đó máu cung cấp cho tuyến ức cá hồi là từ động mạch tuyến ức, một nhánh của đoạn động mạch đi vào từ động mạch mang dẫn vào cung mang thứ 2 và thứ 3. Sau khi vào phần đầu của cơ quan, động mạch phân ra liên tục để hình thành mạng lưới mao mạch dày đặc trên toàn bộ cơ quan. Những mao mạch này tập hợp lại vào trong tĩnh mạch tuyến ức và sau đó được thu lại vào tĩnh mạch chủ trước (dẫn theo Zapata và cs, 1996; O'Neill, 1989). + Sự phân bố dây thần kinh Chỉ có một vài dữ liệu hiện có về sự phân bố các dây thần kinh trong tuyến ức của cá. Lagabrielle đã chứng minh rằng sự phân bố các dây thần kinh trong tuyến ức cá xương là dựa vào hệ thống thần kinh giao cảm. Nhìn từ bên ngoài, dựa vào vị trí của tuyến ức trong biểu mô của khoang mang mà hạch thần kinh giao cảm thứ 4 (ở Salmo salar) hoặc thứ 5 (ở Corvina umbra ) phân bố các dây thần kinh vào trong tuyến ức (dẫn theo Zapata và cs, 1996). 1.2.1.2. Sự phát triển của tuyến ức Tuyến ức xuất hiện phụ thuộc vào sự tương tác giữa 3 lá phôi: lá phôi trong, lá phôi ngoài và lá phôi giữa. Ở động vật có vú, tuyến ức hình thành từ tương tác giữa lá phôi trong ở túi hầu thứ 3 và đỉnh thần kinh cuả lá phôi giữa ở túi hầu thứ 3 và thứ 4. Cá xương phát triển 7cung hầu. Từ đó hình thành xương hàm dưới, sụn dưới lưỡi và 5 bộ cung mang. Thông thường túi hầu thứ 2, 3, 4 có liên hệ với sự hình thành tuyến ức như đã đề cập ở trên Các tế bào đỉnh thần kinh (bao gồm các tế bào tiền sụn) di chuyển tới vùng này. Chúng sinh ra mầm tiếp xúc với cả bề mặt của lá phôi ngoài và vùng hầu của lá phôi trong nhưng lại được bao quanh bởi 1 nang có nguồn gốc từ lá phôi giữa. Những mầm này tiếp tục phát triển, phân chia và di cư (điểm giữa, mặt bụng và phần cuối ở cả chuột và người) tới vị trí cuối cùng cuả chúng là đường trung bình phía trên tim. Ở chim, sự di cư của tuyến ức được kéo đến tận vùng kéo dài của cổ, kết quả là nhiều thùy tuyến ức dọc theo vùng cổ. Gen Pax9 chịu trách nhiệm về sự 10 thụt vào và nội bộ hoá (internalisation) của tuyến ức. Chuột không có Pax9 nên vẫn không mất những mô tuyến ức lạc vị trong thanh quản. Sự thiếu hụt Pax 1 sẽ ngăn cản sự di chuyển theo hướng lưng đuôi. Ở cá thấy sự nội bộ hoá của tuyến ức nhưng không rõ rằng cá có biểu hiện những protein đó hay không. Ở cá dĩa, quá trình phát triển này đã được chỉ ra là có liên quan đến các tế bào đỉnh thần kinh có nguồn gốc từ ngoại bì thần kinh của vùng quả trám thứ 6 của não sau, tại đó chúng tương tác với nội bì. Kết quả là tuyến ức của cá này vẫn còn tiếp nối với vùng hầu của lá phôi trong hơn động vật có xương sống bậc cao. Ở cá angler Lophius piscatorius, tuyến ức chỉ có 1 thuỳ và phân bố ở phía sau khoang mang. Quan sát này đã dẫn đến phỏng đoán rằng đây có thể là biểu hiên của bước đầu tiên trong quá trình nội bộ hóa đã xuất hiện trong suốt quá trình tiến hoá của động vật có xương sống (Bowden và cs, 2005). Quá trình phát sinh mô tuyến ức đã được Deanesly mô tả khá chi tiết ở cá hồi Salmo fario tại những thời điểm khác nhau như sau.  Trong quá trình phát triển phôi, khi sụn bắt đầu phát triển và nắp mang đã hình thành phía sau cung mang thứ nhất thì biểu mô vùng hầu cũng bắt đầu dày lên ỏ vị trí 3 cung mang đầu tiên tạo thành các nốt phồng mà Maurer gọi là mầm tuyến ức. Những tế bào hình thành mầm mất đi sự sắp xếp bình thường tạo thành những kẽ hở giữa chúng, Rìa tế bào không phân biệt rõ như biểu mô bên cạnh trong khi nhân lại rất dễ thấy bởi chúng bắt màu thuốc nhuộm đậm hơn. Sau đó nhân mất dần kết cấu chặt chẽ dạng tròn và lan vào trong những khối bắt màu bất thường. Tuy những nhân này vẫn giữ đặc trưng chung giống các nhân xung quanh nhưng hình dạng thì không phân biệt được nữa, chỉ có thể thấy những dạng trung gian giữa nhân bắt màu thuốc nhuộm đậm nhất và nhân nguyên thuỷ của biểu mô. Sự phân bào ở đây không phổ biến hơn phần lớn biểu mô vùng hầu. Không thấy có những tế bào lạ di chuyển vào vùng mà tuyến ức sẽ phát triển.  Khoảng 8 ngày trước khi nở, 3 mầm tuyến ức này lan rộng và hình thành một vùng tuyến ức liên tục. Dễ thấy vùng này tối hơn biểu mô xung quanh ở độ phóng đại thấp. Tuyến ức lớn nhất trong lát cắt ngang qua vùng nó phát sinh đầu tiên (vùng dày lên trong biểu mô ở vị trí 3 cung mang đầu tiên). Trong một vài lát cắt giữa khoảng này, có thể thấy tất cả những dạng chuyển biến giữa các nhân biểu mô (bắt màu nhợt nhạt có nhân nhỏ sẫm màu) với các nhân đã biệt hóa (chứa trong khối bắt màu đậm [...]... DUNG NGHIÊN C U Theo dõi s phát tri n tuy n c c a cá ch m t khi n t i khi hoàn thi n 2.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U S d ng phương pháp mô h c theo sơ sau Thu m u X lý m u úc parafin C t lát m u Nhu m Hematoxyline và Eosin c tiêu b n Hình 1: Sơ phương pháp nghiên c u Thu m u Cá dùng cho nghiên c u ư c thu m u ng u nhiên trong b ương t cá n khi t 20 ngày tu i, m i ngày thu 4 l n, m i l n cách nhau 6h T t c cá. .. khác như stress môi trư ng, chu kỳ hormone, mùa v … ư c c p là cũng có nh hư ng lên tuy n c nhưng chưa th y có các nghiên c u chi ti t v v n này Như vây, m c dù ã có khá nhi u nghiên c u v tuy n c c a cá xương trên th gi i song các nghiên c u này thư ng ch t p trung vào các loài cá vùng ôn c các loài cá kinh t vùng nhi t i Tuy n i như cá ch m Lates calcarifer chưa ư c nghiên c u 1.2.2 Các nghiên c u v... tuy n c c a cá Vi t Nam T i nư c ta chưa có nghiên c u nào v tuy n c c a cá nói chung và c a cá ch m nói riêng 20 PH N 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U 2.1 TH I GIAN VÀ A I M NGHIÊN C U 1 Th i gian nghiên c u: 20/1/2008 2 n 8/11/2008 a i m nghiên c u:Phòng thí nghi m B nh h c b môn B nh h c Th y S n khoa Nuôi Tr ng Th y S n trư ng 2.2 i h c Nha Trang I TƯ NG NGHIÊN C U: Tuy n c c a cá ch m (Lates calcarifer. .. như các th có c u trúc khác nhau Tuy nhiên do trình và và trang thi t b h n ch , chúng tôi ã không phân lo i ư c các d ng t bào cũng như các c u trúc l này Do v y c n có các nghiên c u sâu hơn v i s h tr c c a kính hi n vi i n t làm rõ nh ng v n này 36 Trong i u ki n c a nư c ta hi n nay, phương pháp mô h c t ra là m t phương pháp thích h p xác nh s phát tri n tuy n c c a cá Tuy n c c a các loài cá. .. c Nh ng con cá này có kích thư c nh hơn nh ng con cá có tuy n c phát tri n và tương t nh ng con cá 10, 11 tu i m i có tuy n c i u này ch ra r ng s khác nhau v th i gian xu t hi n tuy n c gi a các cá th liên quan n s phát tri n không u v n có trong qu n àn cá ch m và dư ng như kích thư c cá có tương quan ch t ch v i s phát tri n tuy n c hơn là tu i cá M t s nghiên c u khác l i cho r ng sư phát tri n... cá nuôi v s nhi t th p (17,3oC) Trong i u ki n thí nghi m cá nuôi nhi t cao Bowden cũng báo cáo c ch s n sinh và ho t hoá các t bào T kh i thu cá nheo Trong m t nghiên c u so sánh s phát tri n c a tuy n c 2 loài cá khác nhau là cá b c Nam C c và cá ch m Châu Âu (cá vùng nư c m), các tác gi báo cáo v s suy gi m áng k năng l c mi n d ch loài cá b c Nam C c dù cho chúng ã có m t th i gian dài thích nghi... dán nhãn 2.5 PHƯƠNG PHÁP X LÝ S Các m u cá ư c c t và xác y LI U nh s có m t c a tuy n c trong m i con cá Các k t qu này ư c th ng kê l i theo tu i cá Xác nh th i i m tuy n c xu t hi n 100% trong qu n àn b ng cách so sánh trung bình trên m u v i giá tr 1 gi th b ng ph n m m Microsoft xcel 2003 nh c a t ng 23 PH N 3: K T QU NGHIÊN C U VÀ TH O LU N 3.1 c i m mô h c s phát tri n tuy n c cá ch m T sau... quan i m này khi nh n th y s xu t hi n các mô t o lympho trong th n Các ông ã mô t th n cũng là m t cơ quan lympho trung ương như tu xương cá xương v i vai trò tương t ng v t có vú nghĩa là nó có kh năng sinh ra các t bào lympho m m Ngoài ra, các tác gi này còn ưa ra m i quan h phát sinh gi a th n c a cá và tu xương các ng v t b c cao Dù còn nhi u tranh cãi song các tác gi u th ng nh t v vai trò quan... hành thu m u liên t c 6h/l n Do v y, nghiên c u này ã xác n khi cá 20 ngày tu i nh ư c hình thái tuy n c ngay khi v a m i xu t hi n cũng như h u h t các giai o n phát tri n c a cơ quan này cá ch m S phát tri n tuy n c c a cá ch m bao g m 4 giai o n: s xu t hi n c a m m tuy n c, s xu t hi n c a các t bào lympho, s m r ng c a các t bào lympho trong tuy n c và s phân vùng mô h c tuy n c Giai o n 1: S xu t... trình hình thành vùng tu u r t d phát hi n lát c t ngang và lát c t d c, không có nghi ng gì khi cho r ng tu tuy n c là trung bì ch không ph i xu t phát t nh ng t bào bi u mô v n còn t n t i trong tuy n c (16) S phát tri n c a tuy n c còn ươc khá nhi u tác gi nghiên c u Romano (1999 a) khi nghiên c u mô h c và t bào h c cá Diplodus puntazzo ã báo cáo m m u tiên c a tuy n c phát tri n 20 ngày sau khi th . TƯỢNG NGHIÊN CỨU: Tuyến ức của cá chẽm (Lates calcarifer Bloch 1970) 2.3 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU Theo dõi sự phát triển tuyến ức của cá chẽm từ khi nở tới khi hoàn thi n. 2.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU. nghiên cứu. 1.2.2 Các nghiên cứu về tuyến ức của cá ở Việt Nam Tại nước ta chưa có nghiên cứu nào về tuyến ức của cá nói chung và của cá chẽm nói riêng. 20 PHẦN 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU. Tuyến ức của cá là tiêu điểm của các nghiên cứu miễn dịch từ vài thập kỷ trước. Các nghiên cứu tập trung vào nguồn gốc phát sinh, hình thái và chức năng thực sự của tuyến ức. Các loài cá