1 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Ngu yê n h t t p : // www . Lr c - t nu . e du . v n ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TR Ƣ ỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM  NGUYỄN THỊ HẬU NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG KỸ THUẬT ĐÔNG LẠNH TINH DỊCH LỢN DẠNG CỌNG RẠ PHỤC VỤ TẠO VÀ NHÂN GIỐNG LỢN LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP THÁI NGUYÊN - 2009 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Ngu yê n h t t p : // www . Lr c - t nu . e du . v n 2 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TR Ƣ ỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM  NGUYỄN THỊ HẬU NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG KỸ THUẬT ĐÔNG LẠNH TINH DỊCH LỢN DẠNG CỌNG RẠ PHỤC VỤ TẠO VÀ NHÂN GIỐNG LỢN LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành: Chăn nuôi Mã số: 606240 Ngƣời h ƣ ớng dẫn khoa học : 1. TS. Nguyễn Mạnh Hà 2. TS. Đào Đức Thà THÁI NGUYÊN - 2009 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Ngu yê n h t t p : // www . Lr c - t nu . e du . v n 3 Lời cảm ơn Để hoàn thành báo cáo tốt nghiệp này, ngoài sự nỗ lực phấn đấu của bản thân, tôi còn nhận đƣợc sự giúp đỡ, hƣớng dẫn tận tình của nhiều cá nhân, đơn vị và tập thể khác. Nhân dịp này tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy giáo TS. Nguyễn Mạnh Hà Tr ƣ ờng Đại học Nông Lâm Thái Nguyên và TS. Đào Đức Thà Phó Bộ môn Sinh lý sinh hóa và tập tính vật nuôi Viện Chăn nuôi Quốc gia, những ngƣời đã dành nhiều thời gian, tâm huyết chỉ bảo, giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực tập. Tôi xin gửi tới các thầy giáo, cô giáo trong tr ƣ ờng Đại học Nông Lâm Thái Nguyên nói chung, khoa Chăn nuôi nói riêng những ngƣời đã giúp đỡ, giảng dạy tôi trong suốt quá trình học tập tại tr ƣ ờng. Tôi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo Viện Chăn nuôi và toàn thể cán bộ công nhân viên của Viện, đặc biệt các anh, các chị là cán bộ trong Bộ môn Sinh lý sinh hóa và tập tính vật nuôi Viên chăn nuôi, Trung tâm thực nghiệm và bảo tồn vật nuôi Viện chăn nuôi và Phòng thí nghiệm công nghệ tế bào động vật Viện Chăn nuôi, những ngƣời luôn hƣớng dẫn, giúp đỡ tôi hoàn thành tốt đề tài này. Xin bày tỏ lòng biết ơn tới ngƣời thân, bạn bè và đồng nghiệp luôn ở bên tôi, luôn giúp đỡ, động viên tôi trong suốt quá trình học tập và rèn luyện tại tr ƣ ờng Đại học Nông lâm Thái Nguyên và thực tập tại Viện Chăn nuôi! Hà Nội, ngày 20 tháng 10 năm 2009 Sinh viên Nguyễn Thị Hậu S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Ngu yờ n h t t p : // www . Lr c - t nu . e du . v n 4 LI CAM O AN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi . Các số liệu, kết quả nêu trong luận v ăn là trung thực và cha t ừng đợc ai công bố trong bất k ì công trình nào k hác . Tôi xin cam đoan rằng c á c thông tin t ríc h dẫn trong luận v ăn đề u đã đợc c hỉ rõ nguồn gố c . Tỏc gi Nguyn Th Hu Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Ngu yê n h t t p : // www . Lr c - t nu . e du . v n 5 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT A ( Progressive. Motility ) ASTT C cs ctv DAP DCL DSL I ( Immotile) Motility NST L ( Local motility ) TTNT TTON V VAC VCL VAP VSL : Hoạt lực của tinh trùng : Áp suất thẩm thấu : Nồng độ tinh trùng : Cộng sự : Cộng tác viên : Độ dài đƣờng trung bình : Độ dài đƣờng ziczăc : Độ dài đƣờng thẳng : Tinh trùng không hoạt động : Hoạt động của tinh trùng : Nhiễm sắc thể : Tinh trùng hoạt động tại chỗ : Thụ tinh nhân tạo : Thụ tinh ống nghiệm : L ƣ ợng tinh dịch trong một lần lấy tinh : Tổng số timh trùng tiến thẳng : Tốc độ chuyển động theo đƣờng ziczăc : Tốc độ chuyển động theo đ ƣ ờng trung bình : Tốc độ chuyển động theo đƣờng thẳng DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1: Một số chỉ tiêu chất lƣợng tinh nguyên trƣớc đông lạnh 52 Bảng 3.2. Khoảng cách và vận tốc của tinh trùng ở các giống lợn 58 Bảng 3.3. Đặc điểm của môi tr ƣ ờng ly tâm (n=60) 59 Bảng 3.4. Ảnh hƣởng của hai môi tr ƣ ờng ly tâm đến sức sống tinh trùng 60 Bảng 3.5. Ảnh hƣởng của môi tr ƣ ờng ly tâm đến sức sống tinh trùng của giống lợn Landrace 62 Bảng 3.6. Ảnh hƣởng của môi tr ƣ ờng ly tâm đến sức sống tinh trùng của giống lợn Yorkshire 62 Bảng 3.7. Ảnh hƣởng của môi tr ƣ ờng ly tâm đến sức sống tinh trùng của 63 giống lợn Duroc 63 Bảng 3.8. Ảnh h ƣ ởng của tốc độ ly tâm đến sức sống của tinh trùng……….65 Bảng 3.9. Sức sống tinh trùng sau ly tâm của các giống lợn 67 Bảng 3.10. Đặc điểm môi tr ƣ ờng cân bằng (n= 60) 68 Bảng 3.11. Chất lƣợng tinh dịch sau cân bằng của giống Landrace 69 Bảng 3.12. Chất lƣợng tinh dịch sau cân bằng của giống Yorkshire 70 Bảng 3.13. Chất lƣợng tinh dịch sau cân bằng của giống Duroc 70 Bảng 3.14. Ảnh hƣởng của thời gian đông lạnh đến sức sống của tinh trùng 71 (n= 70) 71 Bảng 3.15. Ảnh hƣởng của thời gian giải đông đến sức sống tinh trùng 73 (n=70) 73 Bảng 3.16. Chất lƣợng tinh dịch đông lạnh sau giải đông của các giống lợn 75 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ ĐỒ THỊ Biểu đồ 3.1: Biểu đồ so sánh thể tích tinh dịch của các giống lợn 53 Biểu đồ 3.2: Biểu đồ so sánh hoạt lực tinh trùng của các giống 54 Biểu đồ 3.3: Biểu đồ so sánh nồng độ C (tr/ml) của các giống 55 Biểu đồ 3.4: Biểu đồ so sánh VAC (tỷ) trong một lần lấy tinh 56 Biêủ đồ 3.5: Biêủ đồ so sánh Motility (%), A (Progressive.Motility %) tinh trùng trong 2 môi tr ƣ ờng ly tâm 61 Biêủ đồ 3.6: Biểu đồ so sánh hoạt lực (A) tinh trùng ở tinh nguyên và tinh pha trong môi tr ƣ ờng ly tâm (VCN). 64 Biêủ đồ 3.7: Biểu đồ so sánh hoạt lƣc (A ) tinh trùng ở các chế độ ly tâm 66 Biêủ đồ 3.8: Biểu đồ so sánh hoạt lực (A) tinh trùng tr ƣ ớc, và sau đông lạnh ở thời gian đông lạnh 10 phút và 20 phút 72 Biêủ đồ 3.5: Biểu đồ so sánh hoạt lƣc (A) tinh trùng ở thời gian giải đông 30 giây và 45 giây 74 Biêủ đồ 3.10: Biểu đồ so sánh hoạt lực (A) tinh trùng sau giải đông ở các giống lợn 76 Biêủ đồ 3.11: Biểu đồ so sánh độ dài các chuyển động của tinh trùng 77 Biêủ đồ 3.12: Biểu đồ so sánh vận tốc chuyển động của tinh trùng ở các dạng vận động 77 MỤC LỤC MỞ ĐẦU 10 1. TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI 10 2. MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU 11 3. Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI 11 CHƢƠNG 1 12 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 12 1.1. Vai trò của lợn đực giống và thụ tinh nhân tạo trong chăn nuôi lợn ở n ƣ ớc ta 1 2 1.2. Cơ sở của những nghiên cứu về tinh dịch và tinh trùng lợn 13 1.2.3. Một số đặc tính sinh lý của tinh trùng lợn 18 1.2.4. Một số chỉ tiêu chất lƣợng tinh dịch lợn 24 1.2.5. Các yếu tố ảnh h ƣ ởng đến chất lƣợng tinh dịch 27 1.3. Cơ sở khoa học của kỹ thuật đông lạnh tinh dịch lợn 31 1.3.1. Một số nguyên lý cơ bản về đông lạnh tinh dịch 32 1.3.2. Các yếu tố ảnh h ƣ ởng tới sức sống tinh trùng trong đông lạnh 35 1.3.3. Cơ sở khoa học của môi tr ƣ ờng đông lạnh tinh dịch lợn 37 1.3.4. Cơ sở khoa học về quy trình đông lạnh tinh dịch lợn 41 1.4. Tình hình nghiên cứu đông lạnh tinh dịch lợn trong nƣớc và ngoài nƣớc . 42 1.4.1. Tình hình nghiên cứu ngoài nƣớc 42 1.4.2. Tình hình nghiên cứu trong n ƣ ớc 44 CHƢƠNG 2 45 ĐỐI TƢỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG 45 VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 45 2.1. Đối t ƣ ợng, vật liệu nghiên cứu 45 2.1.1. Tinh dịch lợn đực 45 2.1.2. Hoá chất và các dụng cụ thí nghiệm. 45 2.2. Yêu cầu 45 2.3. Thời gian và địa điểm nghiên cứu 45 2.4. Nội dung và ph ƣ ơng pháp nghiên cứu 46 2.4.1. Nghiên cứu một số chỉ tiêu đánh giá chất lƣợng của tinh dịch lợn tr ƣ ớc khi đông lạnh 47 2.4.3. Nghiên cứu sử dụng tinh dịch lợn đông lạnh 51 2.5. Ph ƣ ơng pháp xử lý số liệu 51 CHƢƠNG 3 52 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 52 3.1. Kết quả nghiên cứu về một số chỉ tiêu chất lƣợng tinh dịch lợn trƣớc khi đông lạnh. 52 3.2. Kết quả nghiên cứu về kỹ thuật đông lạnh tinh dịch lợn 59 3.2.1.Kết quả nghiên cứu kỹ thuật ly tâm 59 3.2.2. Kết quả nghiên cứu kỹ thuật cân bằng tinh dịch 68 3.2.3. Kết quả nghiên cứu đông lạnh tinh dịch trong hơi nitơ. 71 3.2.4. Kết quả nghiên cứu nhiệt độ và thời gian giải đông tinh dịch đông lạnh 73 Nhƣ vậy kết quả sử dụng tinh đông lạnh phối giống cho lợn nái trong sản xuất cần phải nghiên cứu sâu hơn nhằm nâng cao hiệu quả. Tuy nhiên với kết quả bƣớc đầu nhƣ trên cũng đã khẳng định đƣợc thành công của kỹ thuật đông lạnh tinh dịch lợn 80 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 81 [...]... phục vụ công tác tạo và nhân giống lợn 2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU - Xác định đƣợc kỹ thuật đông lạnh tinh dịch lợn dạng cọng rạ - Sử dụng tinh dịch đông lạnh dạng cọng rạ trong sản xuất và thụ tinh trong ống nghiệm 3 Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI - Đề tài sẽ đề xuất đƣợc một kỹ thuật mới trong kỹ thuật thụ tinh nhân tạo - công nghệ đông lạnh tinh dịch lợn dạng cọng rạ - Phục vụ chƣơng trình tạo. .. áp dụng trong sản xuất Để góp phần làm phong phú thêm các kỹ thuật và công nghệ mới trong sinh sản và thụ tinh nhân tạo lợn, đồng thời áp dụng những kết quả nghiên cứu vào sản xuất, chúng tôi tiến hành đề tài: Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật đông lạnh tinh dịch lợn dạng cọng rạ phục vụ tạo và nhân giống lợn Thuộc đề tài công nghệ sinh học cấp nhà nước: Nghiên cứu ứng dụng tổ hợp công nghệ sinh sản phục. .. truyền mầm bệnh Đồng thời k ỹ thuật đông lạnh tinh dịch sẽ góp phần bảo tồn lâu dài tinh dịch của một số giống địa phƣơng quý hiếm Ở nƣớc ta kỹ thuật đông lạnh tinh dịch bò đã đƣợc nghiên cứu, sản xuất, áp dụng rộng rãi trong sản xuất, tuy nhiên kỹ thuật đông lạnh tinh dịch lợn mới bƣớc đầu đƣợc nghiên cứu Một số nghiên cứu kỹ thuật đông lạnh tinh dịch lợn theo công nghệ Nhật Bản và Mỹ đã đƣợc tiến hành,... dịch Trên thế giới, kỹ thuật đông lạnh tinh dịch lợn đã đƣợc nghiên cứu và ứng dụng trong sản xuất, thành công kỳ diệu về đông lạnh tinh dịch lợn đã đƣa kỹ thuật thụ tinh nhân tạo (TTNT) lên một vị trí mới, đã có những ngân hàng tinh dịch đông lạnh năng suất cao Sự hiện diện của các ngân hàng tinh dịch đông lạnh đã giúp cho việc vận chuyển, trao đổi, mua bán giống trên thế giới trở nên thuận tiện và. .. nay, kỹ thuật thụ tinh nhân tạo gia súc nói chung và kỹ thuật thụ tinh nhân tạo lợn nói riêng đã đƣợc nghiên cứu và áp dụng rộng rãi trên toàn thế giới Để có vật liệu cung cấp cho thụ tinh nhân tạo, trƣớc hết phải có một quy trình bảo quản nhằm giữ cho tinh trùng vẫn đảm bảo chất lƣợng khi ở ngoài cơ thể Quy trình đó bao gồm các kỹ thuật nhƣ: kỹ thuật pha loãng, kỹ thuật bảo tồn và kỹ thuật đông lạnh tinh. .. trình tạo và nhân giống lợn, làm cơ sở và góp phần trong bảo tồn quỹ gen (bảo tồn tinh dịch những giống lợn quý hiếm) - Bổ sung vào tài liệu và nghiên cứu khoa học CHƢƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Vai trò của lợn đực giống và thụ tinh nhân tạo trong chăn nuôi lợn ở nƣớc ta Lợn đực giống có vai trò quan trọng trong việc đƣa nhanh tiến bộ di truyền Một con đực giống sử dụng trong thụ tinh nhân tạo cho... phản xạ xuất tinh Thể tích tinh dịch phụ thuộc vào yếu tố: giống, loài, độ tuổi, cá thể, kỹ thuật khai thác tinh, tần xuất lấy tinh và mùa vụ lấy tinh Trong tinh dịch lợn có chứa một lƣợng khá lớn hạt thể selatin, chiếm tỷ lệ 20 - 30% lƣợng tinh dịch, chúng là sản phẩm của tuyến Cowper Khi xuất tinh, những hạt thể selatin gặp enzim vegikinaza của tuyến tinh nang rồi đọng lại thành những tinh thể lớn... trong đó tinh trùng đƣợc hình thành Tất cả các ống sinh tinh đều hƣớng về vách giữa của dịch hoàn + Mạng tinh (rate testis) và thể Haimo (Highmor): khi đi vào vách giữa của dịch hoàn, những ống sinh tinh uốn khúc biến thành những ống sinh tinh thẳng và đan chéo vào nhau tạo thành mạng tinh Mạng tinh cùng với vách giữa của dịch hoàn tạo thành thể Haimo - Dịch hoàn phụ (Epididymis): ở lợn đực dịch hoàn... cấu tạo Acrosome của tinh trùng liên kết rất lỏng lẻo với đầu, đầu tinh trùng liên kết lỏng lẻo với phần cổ - thân Vì vậy, các phần của tinh trùng rất dễ bị bong ra Từ đặc điểm này cần chú ý trong quá trình sản xuất và vận chuyển tinh dịch lợn cần tránh những tác động cơ học nhằm hạn chế ảnh hƣởng của tác động cơ học lên tinh trùng 1.3 Cơ sở khoa học của kỹ thuật đông lạnh tinh dịch lợn Tinh dịch lợn. .. tối đa khi tinh trùng còn tƣơi Sự già cỗi của tinh trùng dần tạo lên nguy cơ về hình thái tinh trùng, acrosome biến dạng và biến mất Tinh trùng có thể mất khả năng vận động và chết sau khi acrosome nổi lên những mụn nƣớc, làm vỡ màng sinh chất và chất liệu acrosome trào ra ngoài 1.2.4 Một số chỉ tiêu chất lượng tinh dịch lợn 1.2.4.1 Thể tích tinh dịch (V ml) Thể tích tinh dịch là số ml tinh dịch sau . sản phục vụ công tác tạo và nhân giống lợn . 2. MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU - Xác định đƣợc kỹ thuật đông lạnh tinh dịch lợn dạng cọng rạ. - Sử dụng tinh dịch đông lạnh dạng cọng rạ trong sản xuất và. tiến hành đề tài: Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật đông lạnh tinh dịch lợn dạng cọng rạ phục vụ tạo và nhân giống lợn . Thuộc đề tài công nghệ sinh học cấp nhà nước: Nghiên cứu ứng dụng tổ hợp công. trƣớc khi đông lạnh. 52 3.2. Kết quả nghiên cứu về kỹ thuật đông lạnh tinh dịch lợn 59 3.2.1.Kết quả nghiên cứu kỹ thuật ly tâm 59 3.2.2. Kết quả nghiên cứu kỹ thuật cân bằng tinh dịch 68 3.2.3.