Đang tải... (xem toàn văn)
Lilium thuộc họ liliaceae, có khoảng 85 loài phân bố chủ yếu ở c ác vùng ôn đới và cận nhiệt đới thuộc phía bắc b án cầu lily là một trong c ác loài hoa đẹp đang rất đợc a chuộng trên thị trờng hoa hiện nay. Với kiểu d áng đẹp sang trọng, một số chủng loại có hơng thơm quyến rũ và độ bền hoa rất cao (915 ngày), dễ thuhoạch, bảo quản trên thế giới lilium cùng với tulip, freesia là ba loại hoa dang thân củ chủ yếu, quan trọng trong ngành hoa thơng mại, chiếm 24% gi á trị sản phẩm hoa thơng mại (Robinson và Pizarobady, 1993) ở Việt Nam hiện nay, hoa lily đã đợc trồng thành công ở nhiều tỉnh ở nớc ta nh Lâm Đồng, Hà Nội và hầu hết c ác tỉnh miền Bắc và hiệu quả kinh tế rất cao, có thể xuất khẩu quy mô lớn. Tuy nhiên điều kiện khí hậu nóng ẩm, ma nhiều của nơc ta đã tạo điều kiện rất thuận lợi cho c ác loài cỏ dại ph át triển đây là một trong những yếu tố hạn chế chủ yếu đến sản xuất hoa lily. Chính cỏ dại làm cho giảm n ăng xuất, phẩm chất, đặc biệt nó cạnh tranh dinh dỡng với cây. để có thể trừ bỏ cỏ thì cần tốn nhiều công lao động, để giảm bớt công lao động con ngời đã phải dùng đến c ác loại thuốc trừ cỏ nhng chính điều này đã gây ảnh hởng không nhỏ đến cây hoa lily. Để có thể vừa trừ đợc cỏ mà lại không gây ảnh hởng đến cây thì việc nghiên cứu chuyển gen kh áng thuốc trừ cỏ PPT vào cây hoa lily là đòi hỏi của sản xuất , xuất
Phần I Mở đầu I. Đặt vấn đề Trong khi sự an toàn của con ngời đối với thực phẩm biến đổi gen vẫn còn cha đợc khẳng định chắc chắn thì việc nghiên cứu hệ thống chuyển gen hiệu quả cho các loài hoa cây cảnh từ đó chuyển đợc các gen mong muốn tạo ra các đặc tính mới lạ (mầu sắc, cấu trúc hoa, hơng thơm, tuổi thọ của hoa cắm, các đặc tính kháng sâu và bệnh hại, chống chịu với điều kiện bất thuận) luôn là mong muốn của các nhà chọn tạo giống. Lilium thuộc họ liliaceae, có khoảng 85 loài phân bố chủ yếu ở các vùng ôn đới và cận nhiệt đới thuộc phía bắc bán cầu lily là một trong các loài hoa đẹp đang rất đợc a chuộng trên thị trờng hoa hiện nay. Với kiểu dáng đẹp sang trọng, một số chủng loại có hơng thơm quyến rũ và độ bền hoa rất cao (9-15 ngày), dễ thu hoạch, bảo quản trên thế giới lilium cùng với tulip, freesia là ba loại hoa dang thân củ chủ yếu, quan trọng trong ngành hoa thơng mại, chiếm 24% giá trị sản phẩm hoa thơng mại (Robinson và Pizarobady, 1993) ở Việt Nam hiện nay, hoa lily đã đợc trồng thành công ở nhiều tỉnh ở nớc ta nh Lâm Đồng, Hà Nội và hầu hết các tỉnh miền Bắc và hiệu quả kinh tế rất cao, có thể xuất khẩu quy mô lớn. Tuy nhiên điều kiện khí hậu nóng ẩm, ma nhiều của nơc ta đã tạo điều kiện rất thuận lợi cho các loài cỏ dại phát triển đây là một trong những yếu tố hạn chế chủ yếu đến sản xuất hoa lily. Chính cỏ dại làm cho giảm năng xuất, phẩm chất, đặc biệt nó cạnh tranh dinh dỡng với cây. để có thể trừ bỏ cỏ thì cần tốn nhiều công lao động, để giảm bớt công lao động con ngời đã phải dùng đến các loại thuốc trừ cỏ nhng chính điều này đã gây ảnh hởng không nhỏ đến cây hoa lily. Để có thể vừa trừ đợc cỏ mà lại không gây ảnh hởng đến cây thì việc nghiên cứu chuyển gen kháng thuốc trừ cỏ PPT vào cây hoa lily là đòi hỏi của sản xuất , xuất Hoa lily thuộc Liliaceae là một trong những loài hoa đẹp và có giá trị trên thị trờng hiện nay. Các nỗ lực chính trong nghiên cứu chuyển gem vào cây lily đã đợc thực hiện bởi các phơng pháp chuyển gen trực tiếp nh bắn gen (Nishihara và cộng sự, 1993; Sanford và cộng sự ; 1993 ; Wilmink và cộng sự, 1995 ; Tsuchiya và cộng sự, 1996), xung điện (Miyoshi và cộng sự, 1995) và gần đây đã tạo đợc cây Lilium longiflorum chuyển gen nhờ phơng pháp bắn gen. Trong một số năm gần đây, sự thành công trong nghiên cứu chuyển gen nhờ vi khuẩn 1 Agrobacterium đã đợc công bố trên một số loài thuộc họ Liliace bao gồm: Asparagus officinalis (Kiasaka và Kameya, 1998), Allium sativum (Kondo và cộng sự, 2000), Allium cepa (Eady và cộng sự, 2000), Agapanthus praecox (Suzuki và cộng sự, 2001) và Muscari armeniacum (Suzuki và Nakano,2002). Gần đây nhất, Y. Hoshi và cộng sự đã nghiên cứu thành công quy trình tạo cây chuyển gen cho cây Oriental hybrid lily, Lilium ev. Acapulco bằng vi khuẩn Agrobacterium. Các kết quả nghiên cứu đã chứng tỏ chúng ta hoàn toàn có thể tạo đợc cây hoa lily. Các kết quả nghiên cứu cho thấy, các đối tợng thực vật có bộ gen lớn hoặc là mức tối đa bội lớn nh cây hoa cúc, hoa đồng tìên sẽ khó tạo đợc cây chuyển gen hơn là các loài có bộ gen hay mức tối đa bội thấp hơn (Elomaa et al, 1993; Robinson & Froozabady 1993). Hiện cha có lý giải cho hiện tợng trên tuy nhiên, có thể do các bộ gen nhỏ hơn thì khả năng các gen lạ có thể đợc cài vào vùng hoạt động cao hơn. (Elomaa et al 1993; Robinson & Froozabady 1993). Sự không thành công trong biểu hiện các gen đợc chuyển có thể là kết quả của sự đông đặc của DNA (Eady et al. 1995a) hoặc sự metyl hoá (Torres et al 1993) đã không cho phép các gen đợc cài biểu hiện, chính vì vậy việc nghiên cứu chuyển các gen chọn lọc hoặc gen chỉ thị trớc khi nghiên cứu chuyển các gen có tình trạng mong muốn cho cây hoa lily là cấn thiết và có tính gợi mở cho các nghiên cứu tiếp theo. Mục tiêu của đề tài là xây dựng đợc những khâu cơ bản trong hệ thống kỹ thuật chuyển gen kháng thuốc trừ cỏ cho cây hoa Lily nhờ vi khuẩn Agrobecterium tumefaciens. Để đạt đợc mục tiêu đề ra ở trên chúng tôi cần hòan thành các yêu cầu sau: 1. Xây dựng hệ thống tái sinh hoàn chỉnh cho cây lily 2. Xác định ngỡng gây chết của PPT đối với mẫu vảy củ, lát cắt thân và đỉnh sinh trởng của cây hoa lily. 3. Bớc đầu thử nghiệm chuyển gen bar - kháng thuốc trừ cỏ vào cây hoa lily thông qua vi khuẩn Agrobecterium tumefaciens. 2 Phần II Tổng quan tài liệu 2.1 Giới thiệu chung về cây hoa lily 2.1.1 Nguồn gốc Cây hoa lily có nguồn gốc từ Trung Quốc, Nhật Bản, Nam Triều Tiên, California (Mỹ) và một số nơi khác. 2.1.2 Vị trí phân loại thực vật Trong hệ thống phân loại thực vật cây hoa lily đợc xếp vào nhóm cây một lá mầm (Monocotyledones), phân lớp hành (Lilidae), bộ hành (Liliales), họ hành (liliaceae), chi lilium (theo Dơng Đức Tiến, Võ Văn Chi, 1978). Cây hoa lily là cây thân thảo, thân dạng hành có vảy. Thân thờng mọc đơn có lá. Lá luôn có hình mũi mác hay hình vạch ít khi rộng, hình tim và mọc xung quanh thân. Hoa lỡng tính, kích thớc lớn mọc ở nách lá hay ở ngọn, có rất nhiêu màu sắc khác nhau. Hoa có thể mọc riêng lẻ hay thành cụm gồm nhiều hoa, bao hoa 6 mảnh dạng cánh, nhị 6, bầu hình trụ, đầu nhụy hình đầu, chia 5 thùy. Quả nang có 3 góc và 3 nang, quả nang có nhiều hạt. 2.1.3. Giống . 2.1.3.1 - Các nhóm giống trồng trọt Công tác tạo giống, cải tiến giống hoa lyli đợc thực hiện trên 100 năm nay do đó nên giống rất phong phú. Trên thị trờng và trong trồng trọt thờng thấy 3 nhóm: dòng lyli thơm, dòng á châu lai, dòng lyli phơng đông lai. a. Dòng lyli thơm lai (the longi florum hybrids) Gồm các giống đợc sinh ra từ lyli thơm và lyli Đài Loanvà các giống tạp giao của chúng, cây cao tứ 120 - 140cm, một số có thể đến 200cm, lá hẹp dài hoặc hình kim sẻ ra, gắn vào thân, không có cuống lá. Nụ rất to dài từ 12 - 18cm, khi vơn ra thì hơi trúc xuống, nằm ngang ra, chếch lên hoặc đứng thẳng. Hoa có hình loa kèn, hoa trắng tinh khiết và có vị thơm nồng. Lyli thơm từ khi bứng trồng đến khi ra hoa khoảng 12 - 14 tuần, tuỳ theo giống và nhiệt độ không khí có biến động nhất định. Thời gian xử lý lạnh để phá ngủ với lyli thơm nói chung từ 4 - 6 tuần nhng có thay đổi ít nhiều tuỳ theo giống và thời tiết lúc thu hoạch củ. Các giống trong nớc thờng thấy là: Hoàng hậu tuyết(Snow Queen), White 3 Fox, Avita, Lilium formolongi. Vụ đông xuân ở Quảng Đông trồng rất nhiều dòng lai của giống này. b. Dòng á châu lai(the asistic hybrids) Là nhóm giống đợc chọn ra từ một số bố mẹ của lyli Châu á hoặc từ các dòng lai của chúng . các bố mẹ đó là: quyển đau xuyên bách hợp, quyển đau đại toả, hoa kèn triều tiên, sơn đan cây cao từ 80- 160(cm) lá hẹp dài hình kim sẻ ra, gắn vào thân. nụ hoa thuộc loại nhỏ nhất dài 5,5-12,5(cm) nụ hoa vờn ra theo các hớng lến, vơn ra ngoài và rũ xuống, hình dáng hoa cong cuộn lại, hình cái bát rất ít có hình hoa kèn, màu sắc rất phong phú chủ yếu là màu vàng, màu cam, hoa không thơm, từ khi trồng đến khi ra hoa từ 8-16 tuần, giống và nhiệt độ không khí ảnh hởng đến thời gian sinh trởng , thời gian xử lý lạnh phải ủ với củ giống từ 6-8 tuần, giống và thời gian vụ thu hoạch ủ giống ảnh hởng rất lớn đến thời gian xử lý lạnh phá ngủ. các giống thờng trồng ở Trung Quốc là: trung tâm nớc(novar center) màu vàng, giống sa mạc(cordclia) màu vàng, pollyauma màu vàng, Elite màu cam, Brunello màu đỏ cam c- Dòng lai phơng đông(the oriental hybrids) gồm các giống thiên hơng, lộc tử(con hơu) các giống có nguồn gốc từ hoa kèn Nhật Bản và các giống thuộc dòng lai giữa các giống trên với hoa kèn Hồ báo cây cao 60-240cm, lá tơng đối to, hình trứng hoặc hình kim sẻ rộng, lá có cuống rõ và khác với dòng loài hoa kèn thơm và lai á châu. Độ lớn của nụ thuộc loại hoa lớn nhất đờng kính từ 15-20 cm, nụ đa số mọc thẳng rất ít nằm ngang. Hoa có hình cái bát hoặc hình sao, màu sắc hoa rất phong phú mầu đỏ, phấn hồng, và màu sắc trắng là chính, hoa có mùi thơm nồng. từ khi trồng đến khi ra hoa 12-20 tuần thay đổi tuỳ theo giống và thời vụ. tính khác nhau và thời tính vụ thu hoạch cũng ảnh hởng lớn tới thời gian sử lý lạnh phải ngủ nói chung khoảng 4-8 tuần. các giống trong nớc thờng thấy là: stargazer(sao hoàng tộc), giống nguyên soái(Acafulco), Sorbonne, Merostar, Siberiamaqssa, starfighter, và tiber hiện nay trên thế giới đang mở rộng diện trong các giống dòng lai thơm và lai á châu (L/A)và dòng lai thơm với phơng đông (L/O) để dung hoà u điểm của hai giống 4 2.1.3.2- Các giống trồng trọt chủ yếu a-Dòng lai loa kèn thơm Avito: trồng vào vụ đông xuân cây có thể cao 120cm, thân cứng, lá dài hẹp, màu xanh đậm, lá phía trên ngắn, thẳng lên trên hình dáng đẹp. Nụ to vừa dài 13-15 cm đẫy, mập nằm ngang hoặc chếch lêu trên. Hoa hình loa kèn, mở to, đẹp mắt, cánh hoa xếp chặt, đầu cánh hơi cong ra ngoài, màu trắng trang nhã, là loại hoa cắt tốt, tính chống chịu kém, nhiệt độ hơi cao nụ teo lại, tỷ lệ bài dục cao, thời gian sinh trởng ngắn lại, cuống hoa ngắn. SnowQueen cây cao 60-115 cm cây tơng đối cứng, lá dài hẹp, màu xanh đậm, lá phía trên cuộn lại, nụ hoa dài 13-15 cm, nằm ngang hoặc hơi cong xuống, ngoại hình đẹp, hoa nở miệng to, dáng đẹp, cánh hoa xếp tơng đối tha,cánh ngoài cuộn ngợc lại cánh phía trong hơi cong, màu trắng là loại hoa cắt tơn đối đẹp. tính chống chịu tơng đối yếu White fox cây cao, trồng vào vụ đông thân cao tới 130 cm thân rất cứng lá dài hẹp, màu xanh đậm hơi trúc xuống nụ tovừa 13-15 cm, nằm ngang hơi rủ xuống, nụ to đẫy mập, ngoại hình đẹp,hoa hình loa kèn, miệng to, hình dáng đẹp, cánh hoa xếp tớng đối khít cánh ngoài cánh trong đều cong ra ngoài màu trắng, đẹp, là giống làm hoa cắt rất tốt, là giống rất đợc a chuộng , tính chịu nóng kém, nhiệt độ caonụ hoa nhiều, tỷ lệ bài dục cao, phẩm chất hoa kém, giôngs này tơng đối mẫn cảm với ánh sáng yếu. Lilium formolougi là giống mới nhập vào nớc năm nay và phát triển rất mạnh có đặc sắc là giống cắt cành trồng bằng cây con. cây cao to 100-180 cm trồng vào vụ đông có thể cao tới trên 2m , thân rất cứng, lá có nhiều dạng, từ hình kim sẻ dọc đến hình trứng, màu lá từ màu xanh xám đến xanh đậm, nụ tơng đối to từ 13-16 cm, đa số thẳng đứng, rất ít nằm ngang nụ to mập, dáng đẹp, hoa hình loa kèn, miệng không to cánh hoa xếp đầy, cánh nghiêng ra ngoài rất ít gặp cong cuộn, có khả năng chịu nắng là giống cắt cành tốt. giống này là giống lai giữa hoa kèn thơm với hoa kèn Đài loan, qua chọn lọc bồi dỡng đến nay đã hình thành một nhóm nhiều giống, chia ra loại hình trồng bằng cây con, loại hình trồng bằng củ và loại hình kiêm dụng, các giống thờng thấy là : Ngân hà , Bạch phong, bạch mã, tuyết sơn Dòng loa kèn chịu nhiệt là dòng do trung tâm nghiên cứu khoa học viện nông nghiệp trọng khải tạo ra mới đây có thể trồng vào vụ hè thu ở khu vực hoa nam, tỷ lệ ra hoa và phẩm chất hoa cắt đều cao. 5 b-Dòng lai loa kèn châu á Nove cento: là giống trồng trong nớc nhiều năm, sinh trởng khoẻ chống bệnh mạnh không mẫn cảm với ánh sáng khả năng thích ứng rộng cây không cao khoảng 110 cm nhiệt độ, ánh sáng ảnh hớng lớn đến chiều cao cây, nhiệt độ quá cao, quá thấp, ánh sáng mạnh đều ức chế phát triển chiều cao. Là giống tốt trồng trong chậu và cắt cành, thân cành rất cứng, lá dài hẹp, lá phía trên ngắn, nằm ngang, màu xanh đâm. Nụ to và ngắn dài 7,5-8,4 cm nhiều nụ có một số nhánh thứ hai củ nhỏ dễ ra hoa, hoa hình sao, tơng đối nhỏ, cánh hoa ngẵn và dầy hơi cong ngợc lại, xếp khít nhau. Hoa màu vàng kim đều hoa đẹp, thời gian sinh tr- ởng ngắn. Ơ vùng đồng bằng Chu Giang trồng vào vụ xuân 7-10 tuần ra hoa. -Cordelia: trồng vào vụ đông xuân cây cao 110 cm, thân cành cứng, có góc cạnh, lá hình kim xẻ, nằm ngang hơi rủ xuống, lá xanh bóng, hơi bị cháy. nụ dài 8,5- 10 cm tơng đối nhiều nụ có cành cấp hai tơng đối rõ. hoa hình sao, miệng rộng, cánh dầy,phía giữa và dới rộng , phía trên tơng đối dài hơi cong ngợc lại. Gốc cành có một ít đốm nhỏ màu nâu, từ gốc cành kéo dài đến giữa cành có vết đốm màu vàng cam . cánh hoa xếp tha, tách rời nhau, thời gian sinh trởng ngắn. ở đồng bằng Chu Giang trồng vào vụ đông xuân từ 10-14 tuần ra hoa không mẫn cảm với ánh sáng yếu . Pollyanna: quảng đông thờng gọi là ly ly vàng. dáng cây dáng hoa màu sắc hoa rất giống Cordelia nhng có rất nhiều tính trạng hơn cordelia là một giống trong dòng lai châu á màu vàng đợc a chuộng nhất, có diện tích trồng lớn nhát. giống này sinh trởng khoẻ cây cao đến 120 cm lá xanh tơi hơi hớng lên trên. nụ tơng đối to , ít nhánh thứ hai chống bệnh cháy lá và bệnh muội tro mạnh. thời gian sinh trởng tơng đối ngắn. ở vùng đồng bằng Chu Giang trồng vào vụ đông xuân. sau 10-12 tuần ra hoa có sức chịu nóng nhất định. Elite: cây có thế sinh trởng khoẻ, cao 110-120 cm , thân cành cứng, lá dài, hình kim, màu xanh tối, mọc ngang, nụ màu cam, dài 8-10 cm, không có cuống cấp hai. hoa hình cốc nông, hình sao, tơng đối to, cánh hoa tơng đối dày, xếp khít nhau, cánh hoa màu đỏ cam, ở gốc có một ít đốm đen nhỏ thời gian sinh trởng ngắn. ở đồng bằng chu Giang trồng vào vụ đông xuân sau 10-13 tuần ra hoa. giống này ở vùng ấm và nnơi không khí bị ô nhiễm bệnh mụi tro rất nặng, có thể dẫn đến huỷ diệt. rất mẫn cảm với ánh sáng yếu. Brunello: cây sinh trởng khoẻ, cao 110 cm thân to cứng, lá dài hình kím sẻ màu xanh đậm, bóng. nụ dài và to màu cam, dài 8,5-11 cm có nhánh cấp hai. hoa hình sao to, cánh dày phía ngọn hơi cong, xếp khít nhau, cánh màu đỏ quýt sáng, đều, 6 không có đốm, vệt. thời gian sính trởng ngắn, ở vùng đồng bằng Chu Giang gieo trồng vào vụ đông xuân sau 9-11 tuần ra hoa, dòng màu cam của giống này có tính chống chịu mạnh không mẫn cảm với ánh sáng yếu là giống tốt. cảm nhiễm bệnh muội tro nhẹ. dòng lai á châu, ngoài các giống màu vàng, màu camcòn có màu đỏ, màu phấn hồng, màu trắng và nhiều màu nh giống: Amarono, Phanro nhng ở trung quốc ít thấy . c- Dòng lai phơng đông. Stargazer(loa kèn lửa, hoàng tộc) cây cao 60-100 cm , thân to, cứng, lá hình kim sẻ, hình trứng dài 9-10 cm, rộng 3 cm lá chếch lên trên, nụ hoa to, dài từ 11-13 cm, mập, thẳng, dáng đẹp. hoa hình sao, đẹp, cánh hoa xếp tơng đối khít, cánh trong cánh ngoài cong ra phía ngoài, mép lá lợn sóng từ giữa cánh trở lên có giọt nh giọt sữa nổi lên , ,màu cánh đỏ, có viền trắng hẹp. đây là giống cắt cành và trồng trong chậu tốt, đợc trồng rộng rãi ở phía nam trung quốc, là m,ột trong những giống chủ lực ở trung quốc. tính chống chịu khá, không mẫn cảm với ánh sáng yếu.Cần lu ý hiện tợng khô đầu lá. ở Hoa nam thời gian sinh trởng từ 90-110 ngày. Akapulco: cây cao to, 100-120 cm thân cành cứng lá dài hình kim, ngọn lá kéo dài,mọc ngang. Thân vơn dài nhanh, khoảng cách các lá tha. nụ hoa to mập dài 13-15 cm. Hoa hình sao hoặc hình cốc nông, đẹp, đầu ngọn cánh hơi cong ra ngoài, mép lợn sóng. Từ giữa cánh trở lên có giọt lmàu đỏ nổi lên cánh hoa màu đỏ sáng đều đặn. Đây là giống hoa cắt tốt , nụ và hoa có dáng đẹp, màu sắc đẹp, đợc trồng nhiều ở phía bắc Trung Quốc nhiệt độ thấp dễ làm nụ biến hình. ở Hoa nam trồng vào vụ thu đông thời gian sinh trởng 80-90 ngày. Siberia: cây cao 100-110 cm, thân cành cứng lá hình kim sẻ, mọc ngang hoặc trúc xuống, nụ hoa to mập, đẹp mắt dài 12-14 cm. Hoa hình sao cánh cong lật ra ngoài, mép cánh lợn sóng cánh hoa đẹp màu trắng. Giống này tính chống chịu mạnh là loại giống hoa cắt cành rất quý, giá cao. Sorbone: cây cao 80-100 cm, thân cành cứng, lá dài hẹp hình kim dài 12-13 cm, rộng 3,3-3,5 cm, hớng lên phía trên, nụ hoa to dài12-13 cm, mập đẹp. Hoa hình chén nông, miệng rộng, cánh trong, ngoài mọc ngang hoặc hơi cong ra ngoài, từ giữa cánh trở xuống có giọt sữa màu đỏ, cánh hoa màu phấn hồng, mép cánh có vệt trắng hẹp.(bản dịch hoa lily) 7 2.1.4 Đặc tính sinh vật học hoa ly ly Đặc trng hình thái. Ly ly là cây thân thảo lâu năm, thân cao từ 50-200 cm. Phần dới đất là thân vẩy, màu trắng hoặc màu hồng nhạt, phía ngoài không có màng bao bọc, nên gọi là thân vẩy trần (không vỏ, thân vẩy là củ giống để trồng.) Bộ phận trên mặt đất là thân, lá ,và hoa,quả, là phần thơng phẩm của lyli. Rễ lyli có hai tầng, rễ mọc ở gốc của thân vẩy gọi là rễ gốc, to, mềm, có ngay trên củ giống hoặc mọc ra ngay sau khi trồng. Rễ mọc ở nơi tiếp giáp giữa củ và thân trên mặt đất gọi là rễ thân. Đa số giống sản xuất những thân vẩy( củ) mọc ra từ rễ này làm thực liệu để nhân giống. Lá lyli thờng mọc chéo nhau , hình dài, hình trứngkhông có cuống hoặc cuống rất ngắn, một số ít giống ở nách lá có mầm, có thể dùng nhân giống. Hoa lyli to mọc riêng rẽ mọc thành chùm hoặc thành cụm trên đỉnh ngọn thân.Mỗi củ chỉ có một cành hoa, mầm thân của lyli bị rụng đi, hoặc sau khi ngắt ngọn không thể mọc ra thân mới, cũngkhông thể hình thành cành hoa khác. Nếu muốn cắt hoa thì không đợc bấm ngọn, hoa có hình loa kèn, hình phễu, hình sao, hình cái chén nông. Màu sắc hoa rất phong phú, đẹp có màu trắng, màu vàng lục, màu phấn hồng, màu cam, màu đỏ, màu tím và nhiều màu. Màu cánh thờng là đơn sắc, hoặc có đốm màu nâu, màu tím một số ít có hơng thơm. Cánh hoa sáu cái, hai vòng, mỗi vòng ba cái, nhị đực sáu cái, vòi nhỏ dài, túi phấn to có màu tím, ,màu vàng ở giữa có trục hoa nhỏ đầu phình to. lạnh càng dài thì ra hoa càng sớm.(bản dịch hoa lily) 2.1.5 Giá trị kinh tế và giá trị sử dụng. Loa kèn có hoa to màu sắc phong phú, hơng thơm - là loại hoa đợc thế giới a thích, lả loại hoa có lợng lu thông lớn trên thị trờng thế giới, sản lợng đứng hàng thứ 4 thứ 5 của hoa cắt. Loa kèn tợng trng cho sự tốt lành, đoàn kết, mỹ mãn nên càng đợc ngời Trung Quốc a chuộng và trở thành loại hoa phát triển mạnh, sản lợng và giá trị ngày càng cao.(bản dịch hoa lily) Hoa tơi là một sản phẩm hàng hóa đặc biệt của ngành Nông Nghiệp. Hiện nay trồng hoa đã trở thành một ngành sản xuất phát triển khắp thế giới. Trong đó 8 hoa loa kèn đóng góp một phần không nhỏ. Với u thế rất phong phú về hình dạng, màu sắc, hơng thơm. Hoa loa ken có giá trị kinh tế cao trong sản xuất lẫn mặt tinh thần. Bên cạnh giá trị phong phú về tinh thần thì hoa loa kèn còn đợc sử dụng để tách chiết và tinh chế dầu thơm phục vụ cho một số ngành công nghiệp, mỹ phẩm, bánh kẹo. Đối với y học, loài này cũng có một giá trị nhất định. Loài hoa bách hợp L.browniFEbrown có tác dụng chữa bệnh, có thể sử dụng làm thuốc. Với giá trị nh vậy hoa loa kèn hứa hẹn mang lại một nguồn doanh thu lớn cho ngành sẩn xuất, kinh doanh mặt hàng này. Hiện nay, trên thị trờng Việt Nam, các loại hoa loa kèn đang đợc bán phổ biến từ 10.000 đến 15.000 đồng/cành (theo điều tra của thời báo kinh tế). Nh vậy đầu t vốn vào phát triển kinh doanh mặt hàng này sẽ đem lại cho sản xuất lợi nhuận rất cao. 2.1.6 Bệnh và cách phòng trừ: a, Phòng trừ sâu bệnh ở trung Quốc các bệnh thờng thấy là: bệnh muội tro, sâu thờng thấy là rệp b, Phòng trừ bệnh Trọng điểm là bệnh khô lá và muội tro Với bệnh khô lá: sau khi trồng 30 ngày đã bắt đầu có bệnh, bệnh tập trung ở phần giữa lá và đỉnh ngọn làm cho lá biến nâu, sau khi khô thì cuộn lại biến thành màu nâu đen. Nụ bị hại thời kỳ đầu biến thành màu nâu vàng đến màu nâu đen rồi bị rụng, có thể áp dụng các biện pháp để phòng hoặc giảm bệnh. Trong thời gian ra nụ dùng lới cản quang che bớt ánh sáng, hạ bớt nhiệt độ và khống chế độ ẩm, dùng tay tách các lá bị bệnh cho nụ lộ ra để giảm bệnh lây sang nụ. Với bệnh muội tro thì phun thuốc phòng: bách khuẩn thanh, Dithan đồng thời quạt thông gió . 2.2. CHUYểN GEN ở THựC VậT 2.2.1. Chuyển gen ở thực vật và những lợi ích đối với cải tạo giống cây trồng Vào những năm đầu của thập kỉ 80, các nhà khoa học khám phá ra việc chuyển gen hay còn gọi là biến nạp gen vào thực vật để tạo ra đặc tính di truyền mới nh kháng bệnh hay vật gây hại. Nhiều kỹ thuật chuyển gen ra đời, đợc hoàn thiện và áp dụng rộng rãi nh: bắn gen trực tiếp, thông qua Agrobacterium, nhờ vào xung điện hoặc hoá 9 học. Trong đó, 2 phơng pháp đầu tỏ ra hữu hiệu hơn cả. Vào năm 1983, cây biến nạp gen đầu tiên ra đời đó là cây thuốc lá kháng kháng sinh. Năm 1985, một số cây chuyển gen kháng sâu, bệnh virus và bệnh nấm lần lầu tiên đợc đa ra thử nghiệm ngoài đồng ruộng. Đến nay, sự biến nạp gen vào cây trồng không còn là vấn đề phải tranh cãi nữa mà đã trở thành kỹ thuật thông dụng trong tạo giống cây trồng. Đã có hơn 50 loại gen đợc chuyển vào cây trồng và ít nhất khoảng 400 loài đã đợc kiểm tra ngoài đồng ruộng. Đối với các loài cây rau, chuyển gen đã thành công ở cà chua, cà rốt, khoai tây, rau diếp, cần tây, súp lơ, da chuột, dâu tây, cải xanh, cải bắp, măng tây, ở các cây trồng ngũ cốc nh lúa nớc, lúa mạch, lúa mỳ, ngô và cả những cây công nghiệp nh cây bông việc nghiên cứu chuyển gen cũng đã thu đợc nhiều kết quả khả quan [1]. Những cây trồng đợc chuyển gen vẫn giống cây trồng truyền thống nhng chúng có thêm một số đặc điểm đợc cải thiện. Vì vậy ứng dụng kỹ thuật chuyển gen ở thực vật nhằm cải tạo giống cây trồng đã đem lại nhiều lợi ích rõ rệt trong phát triển sản xuất nông nghiệp và phục vụ đời sống con ngời. Có thể điểm những lợi ích đó nh: - Tăng sản lợng - Giảm chi phí sản xuất - Tăng lợi nhuận nông nghiệp - Cải thiện môi trờng Ngày nay, các nhà khoa học đang hớng tới tạo những cây chuyển gen thế hệ thứ 2 có đặc điểm tăng giá trị dinh dỡng hoặc có những tính trạng thích hợp cho công nghiệp chế biến. Những lợi ích này hớng trực tiếp hơn vào ngời tiêu dùng nh: - Lúa gạo giàu vitamin A và sắt - Khoai tây tăng hàm lợng tinh bột - Vacxin ăn đợc ở ngô và khoai tây - Những giống ngô trồng đợc trong điều kiện nghèo dinh dỡng - Dầu ăn có lợi cho sức khoẻ từ đậu nành và cải dầu [no1] 2.2.2. Những thành tựu chuyển gen ở thực vật trên thế giới và trong nớc Trên thế giới, diện tích trồng cây chuyển gen tăng từ 1,7 triệu ha năm 1996 lên 11 triệu năm 1997, 27,8 triệu năm 1998, 39,9 triệu năm 1999 và tới hơn 44 triệu năm 2000. Các quốc gia trồng cây chuyển gen gồm có Achentina, úc, Bungary, Canada, Trung Quốc, Pháp, Đức, Mexico, Rumani, Tây Ban Nha, Nam Phi, Urgoay và Mỹ [9]. Hiện 10 [...]... tạo cho cây tạo cho cây có khả năng kháng đợc PPT Gen bar thờng đợc chuyển kèm cùng với các gen hữu dụng khác nh gen kháng sâu với vai trò vừa nh một gen chọn lọc vừa nh một gen hữu dụng tạo đồng thời tính kháng thuốc trừ cỏ cho cây Thuốc trừ cỏ tác động lên sự quang hợp của cây bằng cách ức chế enzim quang hợp, làm ngừng trệ quá trình quang hợp làm cho cây bị chết Hiện nay thuốc trừ cỏ phổ biến, có hiệu... các nguồn gen có giá trị nh gen CryIA(b), CryIA(c), gen ức chế tryspin để trừ sâu, gen Xa21 chống bạc lá vi khuẩn, gen chịu lạnh, gen protein giàu tryptopha; (2) Thiết kế các vector mang gen chuyển và thử nghiệm thành công các kỹ thuật chuyển gen: gián tiếp thông qua vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens, trực tiếp bằng súng bắn gen Đến nay, nhiều dòng lúa chuyển gen Xa21, CryIA(c), đu đủ chuyển gen chín... và kháng virus đốm vòng đã đợc tạo ra Các dòng cây chuyển gen này sẽ đợc đa vào phân tích phân tử; (3) Chuẩn bị thiết bị để tiến hành các kỹ thuật sinh học phân tử phục vụ vi c đánh giá theo dõi cây chuyển gen nh PCR, lai Southern, RFLP, AFPD Nh vậy, có thể tiến hành chuyển gen và đa kỹ thuật này vào công vi c tạo giống cây trồng ở Vi t Nam [1] 2.3 Nghiên cứu tái sinh và chuyển gen trên cây hoa lily. .. chịu thuốc diệt cỏ đợc trồng tại úc, Canada và Mỹ - Kháng bệnh virus Đang nghiên cứu các gen kháng bệnh virus của thực vật Ngoài ra đang nghiên cứu khả năng kháng virus bằng biến nạp gen từ động vật Đu đủ đợc chuyển gen của virus mã hoá cho protein vỏ của virus đốm vòng Protein này tạo cho cây khả năng tự bảo vệ chống lại bệnh đốm vòng Một gen từ nguồn bệnh đã đợc sử dụng để kháng lại chính nó Cây khoai... VậT LIệU Và PHƯƠNG PHáP NGHIÊN CứU A ĐốI TƯợNG HOA LILY Vật liệu: - Oriental Sberia - hoa trắng Phơng pháp nghiên cứu Sử dụng phơng pháp nghiên cứu nuôi cấy mô hiện hành Lily Siberia Phơng pháp chuyển gen bằng vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens Phơng pháp nuôi cấy vi khuẩn Nguồn vi khuẩn: Vi khuẩn đợc lu giữ trong tủ lạnh -200C ữ -800C Môi trờng nuôi cấy khuẩn AB Để pha 1 lít môi trờng AB cần hấp tiệt... lại chính nó Cây khoai tây đã đợc chuyển gen giúp kháng virus gây xoăn lá, cây bí chuyển gen giúp kháng virus gây bệnh - Kháng các loài gây hại Chuyển gen độc tố từ Bacillus thuringiensis (BT) để tạo giống chịu côn trùng có hại Cây bông chuyển gen Bt kháng sâu đục quả và ăn lá, đợc trồng phổ biến ở nhiều nớc nh Trung quốc, Nam phi, Achentina, Các cây bông, lúa mang gen chuyển này có khả năng chống chịu... EPSPS từ vi khuẩn Salmonella typhimurium và Escherichia coli có hoạt tính tổng hợp rất cao chuyển vào cây làm tăng hoạt tính của enzim lên trên 20 lần và cây chiệu đợc nồng độ thuốc diệt cỏ cao hơn 4 lần (Monica A.Huges, 1995)[19] Đây là hớng nghiên cứu hiện đang đợc nghiên cứu rộng rãi theo thống kê từ năm 1986 đến 1993 tổng cộng đã có 214 thử nghiệm chuyển gen kháng thuốc trừ cỏ cho 5 loại cây điển... đợc hàng trăm cây chuyển gen khác nhau sử dụng pCAMBIA2301 bao gồm gen rol B dới sự điều khiển của Lat 52 promoter để chống lại sự phát triển của phấn hoa Gen gus đã đợc biểu hiện rất mạnh trong các cây chuyển gen Các phân tích về gen của những cây này đang đợc tiến hành 2.4 kỹ thuật chuyển gen vào thực vật 2.4.1 khái niệm về chuyển gen kỹ thuật chuyển gen là kỹ thuật đa một hay nhiều gen lạ đã đợc... Để chuyển gen bền vững, huyền phù tế bào của Lilium longiflorum đợc bắn với plasmid bao gồm cucumber mosaic virus (CMV) replicase đợc điều khiển bởi Act/ promoter và gen bar đợc điều khiển bởi CaMV promoter, 10 cây tái sinh đã đợc phân tích bởi PCR, 2 trong 10 cây đã đợc khẳng định chuyển gen nhờ lai Southern, 2 cây chuyển gen đợc chuyển độc lập trong đó có 1 cây mang gen bar một cây mang cả hai gen. .. 2.4.5 Chuyển gen qua trung gian là các virus vector: Do virus có kích thớc nhỏ, cấu trúc đơn giản chỉ gồm vỏ protein và lõi DNA hoặc RNA lại có khả năng xâm nhiễm tự nhiên vào các vật chủ nên ngời ta đã nghĩ đến vi c sử dụng chúng làm vector chuyển gen Có hai loại virus thờng đợc sử dụng làm vector chuyển gen là: - Gemini virus: có phổ ký chủ động (có cả cây hòa thảo) - Caulimosaic virus: virus hại cây . đợc cỏ mà lại không gây ảnh hởng đến cây thì vi c nghiên cứu chuyển gen kháng thuốc trừ cỏ PPT vào cây hoa lily là đòi hỏi của sản xuất , xuất Hoa lily thuộc Liliaceae là một trong những loài hoa. cho cây lily 2. Xác định ngỡng gây chết của PPT đối với mẫu vảy củ, lát cắt thân và đỉnh sinh trởng của cây hoa lily. 3. Bớc đầu thử nghiệm chuyển gen bar - kháng thuốc trừ cỏ vào cây hoa lily thông. cho các nghiên cứu tiếp theo. Mục tiêu của đề tài là xây dựng đợc những khâu cơ bản trong hệ thống kỹ thuật chuyển gen kháng thuốc trừ cỏ cho cây hoa Lily nhờ vi khuẩn Agrobecterium tumefaciens. Để