C¸c ph ¬ng ph¸p C¸c ph ¬ng ph¸p xÐt nghiÖm HIV xÐt nghiÖm HIV Nguyen Thi Nhu Ha Nguyen Thi Nhu Ha XÐt nghiÖm ph¸t hiÖn sµng läc XÐt nghiÖm ph¸t hiÖn sµng läc - C¸c kü thuËt ELISA - C¸c kü thuËt ELISA + HIV Uniform II plus O + HIV Uniform II plus O + Genscreen HIV 1/2 version 2 + Genscreen HIV 1/2 version 2 + Murex HIV 1/2 + Murex HIV 1/2 - C¸c xÐt nghiÖm nhanh - C¸c xÐt nghiÖm nhanh + SFD HIV 1/2 PA + SFD HIV 1/2 PA + Determine HIV 1/2 + Determine HIV 1/2 + Multispot HIV-1/HIV-2 + Multispot HIV-1/HIV-2 + Genie II HIV 1/2 + Genie II HIV 1/2 Kỹ thuật SFD HIV 1/2 PA Kỹ thuật SFD HIV 1/2 PA Những hạt gelatin đ ợc gắn với các thành phần kháng nguyên của Những hạt gelatin đ ợc gắn với các thành phần kháng nguyên của virut HIV(gp41, p24 của HIV1 và gp36 của HIV2) sẽ tạo ng ng virut HIV(gp41, p24 của HIV1 và gp36 của HIV2) sẽ tạo ng ng kết khi có sự hiện diện của kháng thể đặc hiệu trong huyết thanh kết khi có sự hiện diện của kháng thể đặc hiệu trong huyết thanh (hoặc huyết t ơng) bệnh nhân cho phép phát hiện đồng thời kháng (hoặc huyết t ơng) bệnh nhân cho phép phát hiện đồng thời kháng thể của virut HIV 1 và 2 thể của virut HIV 1 và 2 Trong phản ứng ng ng kết, mẫu thử đ ợc tiến hành đồng thời trên Trong phản ứng ng ng kết, mẫu thử đ ợc tiến hành đồng thời trên hai giếng: với hạt gelatin không gắn kháng nguyên (giếng chứng hai giếng: với hạt gelatin không gắn kháng nguyên (giếng chứng âm) và các hạt gelatin có gắn kháng nguyên (giếng phản ứng) âm) và các hạt gelatin có gắn kháng nguyên (giếng phản ứng) Không có phản ứng ng ng kết khi các hạt gelatin tự động lắng Không có phản ứng ng ng kết khi các hạt gelatin tự động lắng xuống, gom lại thành nút nhỏ d ới đáy giếng xuống, gom lại thành nút nhỏ d ới đáy giếng Có phản ứng ng ng kết khi các hạt gelatin kết hợp tạo thành một Có phản ứng ng ng kết khi các hạt gelatin kết hợp tạo thành một mạng liên kết phủ đều trên giếng mạng liên kết phủ đều trên giếng Điều kiện để đọc kết quả Điều kiện để đọc kết quả * Không có sự ng ng kết ở các giếng chứng âm. Trong tr ờng hợp có * Không có sự ng ng kết ở các giếng chứng âm. Trong tr ờng hợp có hiện t ợng ng ng kết ở các giếng chứng âm phải sử lý huyết thanh hiện t ợng ng ng kết ở các giếng chứng âm phải sử lý huyết thanh bằng cách cho hấp phụ các yếu tố làm ng ng kết ngẫu nhiên trong bằng cách cho hấp phụ các yếu tố làm ng ng kết ngẫu nhiên trong huyết thanh thử nghiệm với các hạt gelatine không gắn kháng huyết thanh thử nghiệm với các hạt gelatine không gắn kháng nguyên và làm lại phản ứng nguyên và làm lại phản ứng Đọc và biện luận kết quả Đọc và biện luận kết quả Mẫu âm tính: không có sự ng ng kết ở cả hai giếng chứng âm và Mẫu âm tính: không có sự ng ng kết ở cả hai giếng chứng âm và giếng phản ứng giếng phản ứng Mẫu nghi ngờ: không có sự ng ng kết ở giếng chứng âm, có sự ng Mẫu nghi ngờ: không có sự ng ng kết ở giếng chứng âm, có sự ng ng kết không rõ ràng ở giếng phản ứng ng kết không rõ ràng ở giếng phản ứng Mẫu d ơng tính: không có ng ng kết ở giếng chứng âm, có ng ng Mẫu d ơng tính: không có ng ng kết ở giếng chứng âm, có ng ng kết rõ ở giếng phản ứng kết rõ ở giếng phản ứng Ưu điểm của kỹ thuật SFD Ưu điểm của kỹ thuật SFD -Dễ thực hiện -Dễ thực hiện -Thao tác đơn giản -Thao tác đơn giản -Có thể làm hàng loạt -Có thể làm hàng loạt -Cho kết quả sau 2 giờ và đọc bằng mắt th ờng -Cho kết quả sau 2 giờ và đọc bằng mắt th ờng -Sinh phẩm có tính đặc hiệu cao -Sinh phẩm có tính đặc hiệu cao -Tỷ lệ d ơng tính giả t ơng đối thấp hơn so với kỹ thuật ELISA -Tỷ lệ d ơng tính giả t ơng đối thấp hơn so với kỹ thuật ELISA Genscreen HIV1/2 version 2 Genscreen HIV1/2 version 2 - Là kỹ thuật ELISA sandwich với hai giai đoạn - Là kỹ thuật ELISA sandwich với hai giai đoạn - Sử dụng giếng microplate có gắn kháng nguyên tinh - Sử dụng giếng microplate có gắn kháng nguyên tinh chế là các protein tái tổ hợp và tổng hợp của Gp160, chế là các protein tái tổ hợp và tổng hợp của Gp160, p25 và gp36 của HIV1 và HIV2 p25 và gp36 của HIV1 và HIV2 - Nếu trong mẫu thử có kháng thể kháng HIV1/HIV2, - Nếu trong mẫu thử có kháng thể kháng HIV1/HIV2, kháng thể này sẽ gắn đặc hiệu với các kháng nguyên kháng thể này sẽ gắn đặc hiệu với các kháng nguyên cố định trên giếng cố định trên giếng - Cộng hợp đ ợc cho vào ở giai đoạn hai là kháng nguyên - Cộng hợp đ ợc cho vào ở giai đoạn hai là kháng nguyên đánh dấu bằng men Peroxidase đánh dấu bằng men Peroxidase - Phức hợp Kháng nguyên-Kháng thể-Cộng hợp sẽ đ ợc - Phức hợp Kháng nguyên-Kháng thể-Cộng hợp sẽ đ ợc phát hiện bằng phản ứng hiện màu với cơ chất phát hiện bằng phản ứng hiện màu với cơ chất Các u điểm của thử nghiệm ELISA Các u điểm của thử nghiệm ELISA - C - C ho phép thực hiện đồng thời nhiều mẫu. Có thể dùng máy tự động ho phép thực hiện đồng thời nhiều mẫu. Có thể dùng máy tự động giảm bớt thao tác cho ng ời làm xét nghiệm, tránh sai sót và lây giảm bớt thao tác cho ng ời làm xét nghiệm, tránh sai sót và lây nhiễm. nhiễm. - Đọc kết quả bằng máy không phụ thuộc vào chủ quan của ng ời làm - Đọc kết quả bằng máy không phụ thuộc vào chủ quan của ng ời làm xét nghiệm. xét nghiệm. - Có thể l u các kết quả và các thông số kỹ thuật thuận lợi cho việc - Có thể l u các kết quả và các thông số kỹ thuật thuận lợi cho việc kiểm tra đánh giá chất l ợng xét nghiệm. kiểm tra đánh giá chất l ợng xét nghiệm. - Giá thành xét nghiệm t ơng đối rẻ. - Giá thành xét nghiệm t ơng đối rẻ. Các hạn chế của thử nghiệm ELISA Các hạn chế của thử nghiệm ELISA - Cần có sự đầu t cho trang thiết bị ban đầu và bảo hành bảo d ỡng - Cần có sự đầu t cho trang thiết bị ban đầu và bảo hành bảo d ỡng máy móc. máy móc. - Các sinh phẩm phải bảo quản ở nhiệt độ lạnh. - Các sinh phẩm phải bảo quản ở nhiệt độ lạnh. - Nhân viên xét nghiệm phải đ ợc đào tạo và có kinh nghiệm. - Nhân viên xét nghiệm phải đ ợc đào tạo và có kinh nghiệm. - Thời gian thực hiện xét nghiệm lâu. - Thời gian thực hiện xét nghiệm lâu. - Nếu số l ợng mẫu ít thì rất tốn kém do phải làm nhiều chứng. - Nếu số l ợng mẫu ít thì rất tốn kém do phải làm nhiều chứng. D D etermine HIV 1/2 etermine HIV 1/2 Là kỹ thuật miễn dịch sắc ký Là kỹ thuật miễn dịch sắc ký Mẫu thử (huyết thanh, huyết t ơng, máu toàn phần) đ ợc nhỏ Mẫu thử (huyết thanh, huyết t ơng, máu toàn phần) đ ợc nhỏ vào vùng nhỏ mẫu nằm ở phía d ới của băng giấy. Huyết thanh vào vùng nhỏ mẫu nằm ở phía d ới của băng giấy. Huyết thanh hoặc huyết t ơng sẽ đi qua vùng cộng hợp là các kháng nguyên hoặc huyết t ơng sẽ đi qua vùng cộng hợp là các kháng nguyên virut HIV1/2 đ ợc gắn với Selenium colloid nằm ở phía trên. virut HIV1/2 đ ợc gắn với Selenium colloid nằm ở phía trên. Các hỗn hợp này tiếp tục dịch chuyển theo màng lên phía trên Các hỗn hợp này tiếp tục dịch chuyển theo màng lên phía trên đi qua vị trí có gắn các kháng nguyên virut là các peptit tái tổ đi qua vị trí có gắn các kháng nguyên virut là các peptit tái tổ hợp. Nếu trong mẫu thử có các kháng thể đặc hiệu với HIV sẽ hợp. Nếu trong mẫu thử có các kháng thể đặc hiệu với HIV sẽ cho phản ứng kết hợp kháng nguyên-kháng thể-cộng hợp và cho phản ứng kết hợp kháng nguyên-kháng thể-cộng hợp và xuất hiện một vạch màu đỏ ở vùng thử nghiệm. Hỗn hợp các xuất hiện một vạch màu đỏ ở vùng thử nghiệm. Hỗn hợp các chất tiếp tục dịch chuyển lên phía trên mang theo các cộng chất tiếp tục dịch chuyển lên phía trên mang theo các cộng hợp có gắn kháng nguyên và sẽ cho phản ứng với các kháng hợp có gắn kháng nguyên và sẽ cho phản ứng với các kháng thể đơn dòng kháng HIV 1/2 đ ợc cố định sẵn ở vị trí kiểm thể đơn dòng kháng HIV 1/2 đ ợc cố định sẵn ở vị trí kiểm chứng và tạo thành một vạch đỏ ở vùng này. chứng và tạo thành một vạch đỏ ở vùng này. [...]... có thể bảo quản ở nhiệt độ thờng * Xử dụng trong các trờng hợp cần kiểm tra HIV gấp và luôn phải đ ợc kiểm chứng với các kỹ thuật khác Sơ đồ xét nghiệm áp dụng cho chẩn đoán các trờng hợp nhiễm HIV Thử nghiệm I Âm tính Kết luận: ÂM TíNH Dơng tính Tiếp tục làm thử nghiệm II Âm tính Kết luận: ÂM TíNH Dơng tính Tiếp tục làm thử nghiệm III Âm tính Kết luận: ÂM TíNH Dơng tính Kết luận: DƯƠNG TíNH ... khi vạch thử nghiệm và kiểm chứng đều xuất hiện màu đỏ - Âm tính: chỉ vạch kiểm chứng có màu đỏ - Khi ở vùng kiểm chứng không xuất hiện vạch màu cần tiến hành làm lại phản ứng đồng thời kiểm tra chất lợng sinh phẩm có còn đủ điều kiện sử dụng không Ưu điểm của kỹ thuật Determine Đơn giản, cho kết quả nhanh, dễ đọc bằng mắt thờng Sinh phẩm có thể bảo quản ở nhiệt độ thờng * Xử dụng trong các trờng hợp . ợng xét nghiệm. kiểm tra đánh giá chất l ợng xét nghiệm. - Giá thành xét nghiệm t ơng đối rẻ. - Giá thành xét nghiệm t ơng đối rẻ. Các hạn chế của thử nghiệm ELISA Các hạn chế của thử nghiệm. Determine HIV 1/2 + Multispot HIV- 1 /HIV- 2 + Multispot HIV- 1 /HIV- 2 + Genie II HIV 1/2 + Genie II HIV 1/2 Kỹ thuật SFD HIV 1/2 PA Kỹ thuật SFD HIV 1/2 PA Những hạt gelatin đ ợc gắn với các thành. đồ xét nghiệm Sơ đồ xét nghiệm áp dụng cho chẩn đoán các tr ờng hợp nhiễm HIV áp dụng cho chẩn đoán các tr ờng hợp nhiễm HIV Thử nghiệm I Âm tính Kết luận: ÂM TíNH D ơng tính Tiếp tục làm thử nghiệm