Nghiên cứu chế tạo vacxin vô hoạt nhũ dầu nhị giá phòng bệnh newcastle và viêm phế quản truyền nhiễm ở gà

71 1.8K 12
Nghiên cứu chế tạo vacxin vô hoạt nhũ dầu nhị giá phòng bệnh newcastle và viêm phế quản truyền nhiễm ở gà

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

i LỜI CẢM ƠN Được phân công Viện Công nghệ sinh học & Môi trường, Trường Đại học Nha Trang, với chấp thuận ban lãnh đạo Phân viện Thú y miền Trung, phép thực tập Phân viện từ ngày 20/02/2012 đến ngày 02/06/2012 Trong q trình thực tập, ngồi cố gắng thân, nhận giúp đỡ tận tình hết lịng khoa học Tiến sĩ Nguyễn Văn Duy Thạc sĩ Đỗ Văn Khiên, cán Bộ môn Siêu vi trùng Tôi xin cảm ơn ban lãnh đạo Phân viện Thú y miền Trung, thầy cô Viện Công nghệ Sinh học & Mơi trường, tồn thể cán cơng nhân viên công tác Phân viện tạo điều kiện giúp đỡ tơi hồn thành đợt thực tập Tơi gởi lời cảm ơn đến gia đình động viên tạo điều kiện cho hồn thành khóa luận Mặc dù có nhiều cố gắng kiến thức, lực, kinh nghiệm nghiên cứu thân nhiều hạn chế nên khơng thể khơng tránh khỏi thiếu sót Kính mong nhận nhiều ý kiến đóng góp thầy cô giáo bạn bè đồng nghiệp Nha Trang, tháng 06 năm 2012 Sinh viên Phạm Văn Vị ii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG viii MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN CÁC VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Virus Newcastle 1.1.1 Hình thái tính trạng lý, hóa 1.1.2 Cấu trúc hệ gen 1.1.3 Protein 1.1.4 Sức đề kháng .4 1.1.5 Đặc tính ni cấy 1.1.6 Độc lực 1.1.7 Sự nhân lên 1.1.8 Tính gây bệnh 1.1.9 Cơ chế sinh bệnh 1.2 Virus viêm phế quản truyền nhiễm gà (IBV) 1.2.1 Hình thái tính trạng lý, hóa 1.2.2 Cấu trúc hệ gen 1.2.3 Protein 1.2.4 Sức đề kháng 10 1.2.5 Đặc tính ni cấy 11 iii 1.2.6 Độc lực 12 1.2.7 Sự nhân lên 13 1.2.8 Tính gây bệnh 13 1.2.9 Cơ chế sinh bệnh 13 1.3 Tình hình nghiên cứu sản xuất vacxin 14 1.3.1 Trên giới 14 1.3.2 Ở Việt Nam 15 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Vật liệu 17 2.1.1 Giống Virus 17 2.1.2 Động vật thí nghiệm 17 2.1.3 Mơi trường hóa chất 17 2.1.4 Thiết bị chuyên dụng 18 2.2 Phương pháp 18 2.2.1 Thử nghiệm HA (Haemagglutination Test) 18 2.2.2 Tiêm vào xoang niệu mô 19 2.2.3 Giám định đặc tính sinh học virus Newcastle 19 2.2.3.1 Tiêm truyền giống virus Newcastle gà mẫn cảm 19 2.2.3.2 Xác định số EID50, MDT 19 2.2.3.3 Xác định số LD50 21 2.2.3.4 Xác định số ICPI 22 2.2.3.5 Xác định số IVPI 22 2.2.4 Giám định đặc tính sinh học IBV 23 iv 2.2.4.1 Tiêm truyền giống virus viêm phế quản truyền nhiễm gà mẫn cảm 23 2.2.4.2 Xác định số EID50 23 2.2.5 Nhân giống thu hoạch virus Newcastle IBV trứng gà có phơi24 2.2.6 Xác định virus chuẩn độ virus Newcastle IBV nước trứng thu 25 2.2.7 Xác định hiệu giá kháng thể kháng virus Newcastle IBV huyết gà tiêm vacxin nhũ dầu 25 2.2.8 Vô hoạt virus 26 2.2.9 Kiểm tra vô hoạt 26 2.2.10 Sản xuất vacxin 26 2.2.11 Kiểm tra chất lượng vacxin 28 2.2.11.1 Vô trùng 28 2.2.11.2 Tiêu chuẩn vật lý 28 2.2.11.3 Chỉ tiêu an toàn vacxin gà 28 2.2.11.4 Hiệu lực 28 2.2.12 Xử lý số liệu 29 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 3.1 Giám định đặc tính sinh học virus Newcastle 30 3.1.1 Ổn định giống virus PV1 phôi gà 30 3.1.2 Tiêm truyền giống virus PV1 gà mẫn cảm 31 3.1.3 Chuẩn độ giống virus PV1 phôi gà 32 3.1.4 Chuẩn độ giống virus PV1 gà 34 3.1.4.1 Xác định số LD50 34 v 3.1.4.2 Tiêm não gà ngày tuổi 35 3.2 Giám định đặc tính sinh học IBV 37 3.2.1 Ổn định giống virus MV phôi gà 37 3.2.2 Tiêm truyền giống virus MV gà mẫn cảm 38 3.2.3 Chuẩn độ giống virus MV phôi gà 39 3.3 Nhân giống kiểm tra tiêu chuẩn giống 41 3.3.1 Với giống virus Newcastle cường độc 41 3.3.2 Với giống virus IB cường độc 41 3.4 Chuẩn độ virus phôi gà 43 3.5 Kiểm tra giống virus (PV1 MV) sau vô hoạt 43 3.6 Sản xuất vacxin 45 3.7 Kiểm tra vô trùng vacxin 45 3.8 Kiểm tra tiêu vật lý, an toàn vacxin 45 3.9 Kiểm tra hiệu lực vacxin gà tháng tuổi 47 3.9.1 Theo dõi biến động hàm lượng kháng thể kháng virus Newcastle IB gà tháng tuổi chưa miễn dịch sở 47 3.9.2 Theo dõi biến động hàm lượng kháng thể kháng virus Newcastle IB gà tháng tuổi miễn dịch sở 51 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO 61 vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT BPL Betapropiolactone CEK Chick Embryo Kidney CEL Chick Embryo Liver CK Chick Kidney CPE Cytopathic Effect CRD Chronic Respiratory Disease EID50 Embryo Infective Dose 50% FAO Food and Agriculture Organization HA Haemagglutination Test HI Haemagglutination Inhibition Test HN Haemagglutinin - Neuraminidaza IB Infectious Bronchitis IBV Infectinous Bronchitis Virus ICPI Intracerebral Pathogenicity Index IVPI Intravenous Pathogenicity Index LD50 Lethalis Dose 50% MDa Megadalton MDT Mean Dead Time NP Nucleoprotein vii ORF Open Reading Frame PBS Phosphate Buffered Saline PMV-1 Paramyxovirus-1 RNP Ribonucleoprotein viii DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Chỉ số độc lực số chủng virus Newcastle Bảng 2.1 Xác định số EID50 20 Bảng 2.2 Xác định số LD50 21 Bảng 2.3 Xác định số ICPI 22 Bảng 2.4 Xác định số IVPI 23 Bảng 2.5 Xác định số EID50 24 Bảng 3.1 Kết tiêm truyền giống PV1 phôi gà 30 Bảng 3.2 Kết tiêm truyền giống PV1 gà mẫn cảm 31 Bảng 3.3 Kết xác định số EID50 (log10) giống PV1 lần 33 Bảng 3.4 Kết xác định số LD50 (log10) giống PV1 lần 34 Bảng 3.5 Kết xác định số ICPI giống virus PV1 36 Bảng 3.6 Kết xác định số IVPI chủng virus PV1 37 Bảng 3.7 Kết tiêm truyền giống MV phôi gà 37 Bảng 3.8 Kết tiêm truyền giống MV gà mẫn cảm 39 Bảng 3.9 Kết xác định số EID50 (log10) giống MV lần 40 Bảng 3.10 Kết kiểm tra virus sau vô hoạt phôi gà 44 Bảng 3.11 Kết sản xuất vacxin 45 Bảng 3.12 Kết kiểm tra vô trùng vacxin 45 Bảng 3.13 Kết kiểm tra tính ổn định vacxin 46 Bảng 3.14 Kết kiểm tra an tồn lơ vacxin nhũ dầu gà 46 Bảng 3.15 Biến động hiệu giá kháng thể kháng virus Newcastle gà tháng tuổi chưa miễn dịch sở newcastle 48 Bảng 3.16 Biến động hiệu giá kháng thể kháng virus IB gà tháng tuổi chưa miễn dịch sở IB 50 Bảng 3.17 Biến động hiệu giá kháng thể kháng virus Newcastle gà tháng tuổi miễn dịch sở newcastle 52 Bảng 3.18 Biến động hiệu giá kháng thể kháng virus IB gà tháng tuổi miễn dịch sở IB 54 ix DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hình ảnh NDV chụp kính hiển vi điện tử Hình 1.2 Hình ảnh IBV chụp kính hiển vi điện tử .8 Hình 2.1 Tóm tắt quy trình sản xuất vacxin nhị giá ND & IB nhũ dầu .27 Hình 3.1 Bệnh tích virus cường độc Newcastle gây phơi gà 42 Hình 3.2 Bệnh tích virus cường độc IB gây phơi gà .42 Hình 3.3 Biến động hiệu giá kháng thể kháng virus Newcastle gà chưa miễn dịch sở 49 Hình 3.4 Biến động hiệu giá kháng thể kháng virus IB gà chưa miễn dịch sở 51 Hình 3.5 Biến động hiệu giá kháng thể kháng virus newcastle gà miễn dịch sở 53 Hình 3.6 Biến động hiệu giá kháng thể kháng virus IB gà miễn dịch sở .55 Hình 3.7 Biến động hiệu giá kháng thể kháng virus Newcastle gà chưa có miễn dịch sở gà miễn dịch sở tiêm vacxin lô 56 Hình 3.8 Biến động hiệu giá kháng thể kháng virus IB gà chưa có miễn dịch sở gà miễn dịch sở tiêm vacxin lô 56 MỞ ĐẦU Ở Việt Nam nay, chăn nuôi theo phương thức công nghiệp bước dần thay phương thức chăn nuôi nhỏ lẻ theo quy mô hộ gia đình Ni gia cầm ni gà nghề quan tâm hàng đầu, thời gian nuôi ngắn thu sản phẩm nhanh Một khâu quan trọng để đảm bảo chăn nuôi gà phát triển mạnh có lãi bảo vệ cho đàn gà tránh khỏi dịch bệnh Đồng thời với việc phát triển nghề chăn nuôi gà theo phương thức công nghiệp, bệnh truyền nhiễm nguy hiểm gà nảy sinh, gây thiệt hại cho ngành chăn nuôi, bệnh: Bệnh Newcastle, bệnh Gumboro, bệnh Viêm phế quản truyền nhiễm, bệnh hơ hấp mãn tính (CRD), bệnh tụ huyết trùng…đặc biệt bệnh Newcastle bệnh Viêm phế quản truyền nhiễm người chăn nuôi quan tâm nhiều Bệnh Newcastle hay gọi bệnh gà rù bệnh truyền nhiễm nguy hiểm cấp tính, lây lan rộng lồi gà loại virus thuộc nhóm Paramyxovirus gây (Bear & Hanson, 1980) Đặc điểm gà ủ rũ, hoạt động, bỏ ăn, lơng xù khốt áo tơi, chuồng có nhiều bãi phân trắng; gà sốt cao 42 - 430C, chảy nước mũi, khó thở, rối loạn tiêu hóa; có triệu chứng thần kinh Ngồi ra, bệnh tích điển hình niêm mạc dày tuyến xuất huyết lấm chấm màu đỏ, niêm mạc ruột xuất huyết; niêm mạc miệng hầu, khí quản xuất huyết[2] Bệnh viêm phế quản truyền nhiễm gà virus thuộc nhóm Coronavirus gây ra, bệnh truyền nhiễm cấp tính, dễ lây lan tiếp xúc với triệu chứng đặc trưng đường hô hấp ho, chảy nước mũi, viêm hầu họng dịch thẩm xuất tích tụ nhiều niêm mạc khí phế quản làm vật khó thở, hắt có tiếng ran khí quản Bệnh tích điển hình niêm mạc mũi, khí quản, phế quản lịng phế nang xung huyết, chứa dịch Ngồi ra, bệnh ảnh hưởng lớn đến sản lượng chất lượng trứng đàn gà đẻ[1],[2] 48 theo dõi từ 21 ngày đến 42 ngày sau tiêm vacxin lượng kháng thể gà tiêm vacxin tăng liên tiếp đạt cao vào thời điểm 42 ngày, lượng kháng thể trung bình lơ vacxin dao động từ 7,0 log2 đến 7,2 log2, sau lượng kháng thể giảm dần theo thời gian Bảng 3.15 Biến động hiệu giá kháng thể kháng virus Newcastle gà tháng tuổi chưa miễn dịch sở newcastle Hiệu giá kháng thể HI trung bình theo thời gian Ngày 14 21 28 35 42 49 56 63 70 77 84 91 Lô vacxin 2,4 4,8 6,6 6,8 7,1 7,2 7,0 6,4 6,2 6,0 5,2 5,0 4,2 3,0 4,8 6,6 7,0 7,0 7,2 6,8 6,6 6,4 6,2 5,4 5,2 4,6 Đ/C 1,0 1,0 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1,0 1,0 1,2 1,2 1,2 Chúng nhận thấy thời điểm 91 ngày tuổi sau sử dụng vacxin lượng kháng thể chống bệnh Newcastle gà đủ bảo hộ (từ 4,2 log2 đến 4,6 log2) Theo quy định OIE, 2009 Asian mẫu huyết có hiệu giá kháng thể (bằng phương pháp HI) đạt từ log2 trở lên đủ bảo hộ chống bệnh Newcastle[9] Trong đó, nghiên cứu Trần Thị Lan Hương (2001) cho hiệu giá kháng thể kháng virus Newcastle huyết gà đạt từ log2 - log2 trở lên gà bảo hộ chống lại bệnh Newcastle[5] Như gà tháng tuổi chưa miễn dịch sở với bệnh newcastle tiêm số lô vacxin nhũ dầu sản xuất sau tháng lượng kháng thể đủ bảo hộ chống lại bệnh newcastle Điều chứng minh phương pháp công cường độc virus ND với liều 105 EID50 / gà Kết cho thấy, gà lơ thí nghiệm khơng có biểu bệnh gà lô đối chứng không tiêm vacxin vô hoạt nhũ dầu, phát bệnh chết sau ngày Kết kiểm tra hàm lượng 49 kháng thể newcastle gà lô đối chứng không tiêm vacxin, theo dõi tháng phản ứng HI cho thấy lần kiểm tra lượng kháng thể trung bình gà đối chứng dao động từ log2 đến 1,2 log2 Có chênh lệch rõ rệt hiệu giá kháng thể newcastle gà thí nghiệm tiêm vacxin gà đối chứng không tiêm vacxin (P < 0,05) Kết theo dõi biến động hiệu giá kháng thể kháng virus Newcastle gà chưa miễn dịch sở thời điểm thể biểu đồ Hình 3.3 Hình 3.3 Biến động hiệu giá kháng thể kháng virus Newcastle gà chưa miễn dịch sở Đường biểu diễn hiệu giá kháng thể (log2) gà tiêm lô vacxin có khác rõ rệt so với gà đối chứng Kết theo dõi biến động hàm lượng kháng thể kháng virus IB gà tháng tuổi chưa miễn dịch sở Cũng phương pháp HI tiếp tục kiểm tra lượng kháng thể kháng virus IB gà tháng tuổi chưa có miễn dịch sở với bệnh viêm phế quản truyền nhiễm tiêm số lô vacxin nhũ dầu nói Kết kiểm tra hiệu giá kháng thể IB mẫu huyết gà thể Bảng 3.16 50 Bảng 3.16 Biến động hiệu giá kháng thể kháng virus IB gà tháng tuổi chưa miễn dịch sở IB Ngày Hiệu giá kháng thể HI trung bình theo thời gian 14 21 28 35 42 49 56 63 70 77 84 91 Lô vacxin 3,0 5,2 6,4 6,8 6,8 7,2 6,8 6,6 6,2 6,2 5,8 5,2 5,0 2,8 5,2 6,4 6,6 6,8 7,0 6,8 6,6 6,4 6,2 6,0 5,6 5,2 Đ/C 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 0,8 1,2 1,2 Kết Bảng 3.16 cho thấy: Lượng kháng thể kháng virus IB gà tiêm vacxin vô hoạt nhũ dầu thời điểm ngày thấp chưa đủ bảo hộ chống lại virus IB Theo khuyến cáo OIE (2008) Asian mẫu huyết có hiệu giá kháng thể IB kiểm tra phương pháp HI phải đạt tối thiểu từ 1/20 (4,4 log2) trở lên có khả bảo hộ bệnh IB[11] Điều Thayer cs (1987)[10]; Trần Thị Liên cs (2008) xác nhận[1] Kết kiểm tra lượng kháng thể huyết gà ngày thứ 14 sau tiêm vacxin nhận thấy gà tiêm số lơ vacxin có kháng thể đủ bảo hộ Từ 21 ngày đến 42 ngày sau tiêm vacxin lượng kháng thể gà tăng mạnh, đạt cao thời điểm 42 ngày sau tiêm vacxin trung bình đạt 7,2 log2 Tiếp tục kiểm tra hiệu giá kháng thể gà đến 91 ngày, nhận thấy lượng kháng thể có xu hướng giảm dần Ở thời điểm 91 ngày, lượng kháng thể gà tiêm vacxin đạt bảo hộ dao động từ 5,0 log2 đến 5,2 log2 Trong lượng kháng thể IB gà lô đối chứng không tiêm vacxin vô hoạt nhũ dầu lần kiểm tra dao động từ 0,8 log2 đến 1,2 log2 Các mẫu huyết thu thập từ gà thí nghiệm đối chứng kiểm tra lại phản ứng ELISA hãng Idexx Kết cho thấy, mẫu huyết thu thập từ gà tiêm vacxin từ ngày thứ 14 trở cho S/P > 0,2 số S/P mẫu huyết dao động từ 0,3 đến 6,3 tức đương đương với 51 độ pha loãng huyết gà tiêm vacxin tính tốn theo cơng thức nhà sản xuất kit Idexx ngưỡng 1/ 553 đến 1/2174839 Trái lại gà đối chứng số S/P < 0,2 tức mẫu huyết hồn tồn âm tính với phương pháp ELISA Hiệu giá kháng thể IB gà chưa tiêm số lô vacxin nhũ dầu biểu diễn biểu đồ Hình 3.4 Hình 3.4 Biến động hiệu giá kháng thể kháng virus IB gà chưa miễn dịch sở Biểu đồ Hình 3.4 cho thấy đường biểu diễn hiệu giá kháng thể IB gà tiêm vacxin nhũ dầu có gia tăng khác biệt so với hiệu giá kháng thể IB gà lô đối chứng không tiêm vacxin (P < 0,05) 3.9.2 Theo dõi biến động hàm lượng kháng thể kháng virus Newcastle IB gà tháng tuổi miễn dịch sở Chúng tơi tiếp tục thí nghiệm kiểm tra hiệu lực lô vacxin gà tháng tuổi miễn dịch sở vacxin Newcastle vacxin viêm phế quản truyền nhiễm thời điểm ngày tuổi lặp lại vào lúc 14 ngày tuổi Trước tiêm vacxin nhũ dầu cho gà tháng tuổi, tồn mẫu huyết gà thí nghiệm đối chứng kiểm tra phản ứng HI kháng thể newcastle IB Kết kiểm tra mẫu huyết gà trước tiêm 52 vacxin phản ứng HI cho thấy, hiệu giá kháng thể Newcastle trung bình 4,5 log2 kháng thể IB trung bình 5,6 log2 Để đánh giá hiệu lực vacxin nhũ dầu gà miễn dịch sở tiến hành tiêm cho gà thí nghiệm liều vacxin (0,3 ml vacxin/ gà) Gà sau tiêm vacxin lấy máu định kỳ để kiểm tra hiệu giá kháng thể kháng virus Newcastle IB theo thời gian phản ứng HI Kết theo dõi biến động hàm lượng kháng thể kháng virus Newcastle gà tháng tuổi miễn dịch sở Kết kiểm tra hiệu giá kháng thể kháng virus newcastle gà thí nghiệm tiêm 01 liều vacxin gà đối chứng theo thời điểm lấy máu thể Bảng 3.17 Bảng 3.17 Biến động hiệu giá kháng thể kháng virus Newcastle gà tháng tuổi miễn dịch sở newcastle Ngày Lơ vacxin Hiệu giá kháng thể HI trung bình theo thời gian 14 21 28 35 42 49 56 63 70 77 84 91 3,3 5,5 7,2 7,9 7,9 8,2 7,6 7,3 7,1 6,8 6,3 5,8 5,4 3,2 5,2 7,0 7,4 7,6 8,0 7,9 7,5 7,2 6,7 6,4 6,3 5,6 Đ/C 4,5 4,0 3,8 3,6 3,2 2,8 2,6 2,4 2,2 2,2 2,0 1,8 1,8 Số liệu Bảng 3.17 cho thấy, thời điểm ngày sau tiêm vacxin kết kiểm tra lượng kháng thể giảm rõ rệt lô vacxin tiêm cho gà dao động từ 3,2 log2 đến 3,3 log2 lượng kháng thể gà đối chứng 4,5 log2 Sở dĩ có tượng đưa lượng kháng nguyên vào thể, kháng thể đặc hiệu có sẵn máu gà phải trung hòa lượng kháng nguyên định mà hiệu giá kháng thể gà tiêm vacxin vòng tuần bị giảm (Trần Thị Lan Hương, 2001) 53 Từ tuần thứ trở lượng kháng thể tăng gà tiêm số lô vacxin đạt đỉnh điểm vào thời điểm 42 ngày tuổi, hiệu giá kháng thể trung bình dao động từ 8,0 log2 đến 8,2 log2 Ở thời điểm kiểm tra đến 91 ngày sau sử dụng vacxin, nhận thấy lượng kháng thể cao tất gà thí nghiệm tiêm vacxin, kháng thể newcastle dao động từ 5,4 log2 đến 5,6 log2 Trái lại, gà lô đối chứng thời điểm kiểm tra lượng kháng thể trung bình giảm dần theo thời gian đến thời điểm 91 ngày 1,8 log2 Kết nghiên cứu phù hợp với công bố Box cs (1975) Cũng phương pháp công cường độc virus ND với liều 105 EID50 /gà, gà lơ thí nghiệm khơng có biểu bệnh gà lô đối chứng không tiêm vacxin vô hoạt nhũ dầu, phát bệnh chết sau ngày Biểu đồ diễn biến hiệu giá kháng thể newcastle thời điểm kiểm tra gà tiêm số lô vacxin vô hoạt nhũ dầu chúng tơi sản xuất (biểu đồ hình 3.5) Hình 3.5 Biến động hiệu giá kháng thể kháng virus newcastle gà miễn dịch sở Biểu đồ Hình 3.5 cho thấy mức độ biến động hiệu giá kháng thể newcastle gà tiêm số lô vacxin nhũ dầu, thời điểm kiểm tra, lượng kháng thể gà tiêm lơ vacxin khơng có sai khác (P > 0,05) 54 Trong hiệu giá kháng thể gà lơ đối chứng có sai khác nhiều so với gà tiêm vacxin (P < 0,05) Kết theo dõi biến động hàm lượng kháng thể kháng virus IB gà tháng tuổi miễn dịch sở Chúng tiếp tục kiểm tra biến động hiệu giá kháng thể kháng virus IB huyết gà tiêm lô vacxin nhũ dầu phương pháp HI Kết kiểm tra hiệu giá kháng thể kháng virus IB gà thí nghiệm tiêm 01 liều vacxin gà đối chứng thể Bảng 3.18 Bảng 3.18 Biến động hiệu giá kháng thể kháng virus IB gà tháng tuổi miễn dịch sở IB Ngày Hiệu giá kháng thể HI trung bình theo thời gian 14 21 28 35 42 49 56 63 70 77 84 91 2,8 5,6 6,8 7,4 7,8 7,8 7,4 7,4 7,0 6,8 6,4 6,4 6,1 3,0 5,4 6,9 7,6 7,9 8,0 7,8 7,6 7,4 6,8 6,6 6,2 6,0 Đ/C 5,6 5,4 5,4 4,8 4,6 4,4 4,0 3,8 3,4 3,4 3,2 3,0 3,0 Lô vacxin Kết Bảng 3.18 cho thấy: Lượng kháng thể gà sau tiêm vacxin vô hoạt nhũ dầu nhị giá phòng bệnh Newcastle IB tăng mạnh từ ngày thứ 14 đến ngày thứ 42, hiệu giá kháng thể IB đạt cao thời điểm 42 ngày sau sử dụng vacxin (trung bình từ 7,8 log2 đến 8,0 log2) Ở thời điểm lượng kháng thể gà lô đối chứng xuống thấp tới ngưỡng bảo hộ (4,4 log2) thực tế có số gà lô đối chứng, lượng kháng thể xuống mức bảo hộ Kết kiểm tra mẫu huyết gà tiêm vacxin thời điểm tiếp theo, nhận thấy lượng kháng thể gà tiêm vacxin bắt đầu giảm dần theo thời gian Ở thời điểm 91 ngày sau tiêm vacxin, hiệu giá kháng thể trung bình huyết gà tiêm số lơ vacxin nói cao (từ 6,0 log2 đến 6,1 log2) nằm ngưỡng bảo hộ chống lại bệnh viêm phế quản truyền 55 nhiễm Trong thời điểm lượng kháng thể gà đối chứng không tiêm vacxin xuống thấp không đủ bảo hộ (3 log2) Các mẫu huyết thu thập từ gà thí nghiệm đối chứng kiểm tra lại phản ứng ELISA Kết cho thấy, mẫu huyết thu thập từ gà tiêm vacxin từ ngày thứ 14 trở cho S/P > 0,2, số S/P mẫu huyết dao động từ 0,45 đến 8,23 Trái lại, gà đối chứng theo dõi đến thời điểm 56 ngày số S/P < 0,2 tức kháng thể khơng cịn khả bảo hộ Tổng hợp kết theo dõi biến động hiệu giá kháng thể kháng virus IB gà tiêm vacxin thời điểm kiểm tra thể biểu đồ hình 3.6 Biểu đồ cho thấy biến động kháng thể kháng virus IB gà tiêm vacxin thời điểm kiểm tra, lượng kháng thể gà tiêm lơ vacxin khơng có sai khác (P > 0,05) Trong hiệu giá kháng thể gà lơ đối chứng có sai khác nhiều so với gà tiêm vacxin (P < 0,05) Hình 3.6 Biến động hiệu giá kháng thể kháng virus IB gà miễn dịch sở 56 Tổng hợp kết theo dõi biến động hiệu giá kháng thể kháng virus Newcastle gà chưa có miễn dịch sở gà miễn dịch sở tiêm vacxin vô hoạt nhũ dầu lô thể biểu đồ hình 3.7 Hình 3.7 Biến động hiệu giá kháng thể kháng virus Newcastle gà chưa có miễn dịch sở gà miễn dịch sở tiêm vacxin lô Hình 3.8 Biến động hiệu giá kháng thể kháng virus IB gà chưa có miễn dịch sở gà miễn dịch sở tiêm vacxin lơ 57 Biểu đồ Hình 3.7 cho thấy có chênh lệch đáng kể hiệu giá kháng thể newcastle gà miễn dịch sở gà chưa miễn dịch sở tiêm vacxin lô (P < 0,05) Biểu đồ Hình 3.8 cho thấy có chênh lệnh rõ rệt hiệu giá kháng thể kháng virus IB gà miễn dịch sở tiêm vacxin lô gà chưa miễn dịch sở tiêm vacxin lô (P < 0,05) từ thời điểm 28 ngày đến 91 ngày sau tiêm vacxin lô Kết kiểm tra hiệu lực lơ vacxin vơ hoạt nhị giá phịng bệnh Newcastle - IB gà tháng tuổi tiêm vacxin, nhận thấy hiệu giá kháng thể newcastle đạt cao vào thời điểm 42 ngày (8,2 log2) gà miễn dịch sở So sánh với kết nghiên cứu Edison cs (1982) vacxin vơ hoạt đơn giá phịng bệnh newcastle hãng Intervet công bố hiệu giá kháng thể newcastle đạt đỉnh điểm vào tuần tuổi (11 log2) nghiên cứu gà tiêm vacxin lặp lại mũi trước cách mũi sau tuần gà thương phẩm Broiler Trong nghiên cứu khác Fancon cs (2005) vacxin vô hoạt nhũ dầu newcastle đạt hiệu giá kháng thể newcastle cao sau tuần (11,4 log2) gà sau tiêm vacxin lặp lại Kết nghiên cứu hiệu giá kháng thể newcastle thấp 2,8 log2 - 3,2 log2 thời điểm so với vacxin đơn giá nước ngồi, song vacxin chúng tơi sản xuất vacxin nhị giá phòng bệnh newcastle viêm phế quản truyền nhiễm việc hiệu giá kháng thể newcastle đạt cao 8,2 log2 hoàn tồn chấp nhận gà thí nghiệm tiêm vacxin lần Ở thời điểm 91 ngày sau tiêm vacxin tiến hành công cường độc newcastle cho gà với liều 106 EID50 Kết cho thấy, tồn gà thí nghiệm khỏe mạnh bình thường khơng có gà bị chết Trong đó, tồn gà đối chứng phát bệnh chết Về độ dài miễn dịch vacxin, kiểm tra biến động kháng thể newcastle IB gà tháng tuổi tiêm mũi vacxin, sau 58 tháng hiệu giá kháng thể newcastle IB đạt ngưỡng bảo hộ gà miễn dịch sở gà chưa miễn dịch sở Điều phù hợp với kết nghiên cứu công bố năm 2010, gà tiêm 02 mũi vacxin vô hoạt nhũ dầu Newcastle - IB bảo hộ bệnh Newcastle IB thời gian tháng kể từ ngày tiêm mũi vacxin Nếu so sánh với kết công bố hãng Intervet vacxin newcastle vô hoạt nhũ dầu đơn giá gà tháng tuổi sử dụng có lặp lại mũi thứ sau mũi tuần độ dài miễn dịch loại vacxin đơn 12 tháng song khả bảo hộ thử thách cường độc 10 tháng, điều Fancon cs (2005) xác nhận vacxin loại Vì lơ vacxin vơ hoạt nhũ chúng tơi sản xuất hồn tồn đáp ứng u cầu phòng bệnh cho gà tháng tuổi gà đẻ thương phẩm 59 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Đặc tính sinh học giống virus Newcastle cường độc PV1 Hiệu giá HA trung bình dao động từ 8,5 - 9,5 Thời gian chết phôi trung bình từ 42 - 44 Bệnh tích phơi gà ( +++) ổn định từ đời - Virus có khả gây chết gần 100% gà mẫn cảm tháng tuổi sau ngày với triệu chứng đặc trưng bệnh Newcastle Chỉ số EID50 trung bình 107,92 /0,2 ml/phơi Chỉ số MDT trung bình 56 Chỉ số LD50 trung bình 107,41/0,5 ml/gà Chỉ số ICPI trung bình 1,88 Chỉ số IVPI 2,56 Đặc tính sinh học giống virus viêm phế quản truyền nhiễm cường độc MV Hiệu giá HA trung bình dao động từ 7,5 - Thời gian chết phơi trung bình từ 55 - 56 Bệnh tích phơi gà: xung huyết, cịi cọc, co quắp, chân ôm chặt lấy đầu, màng nhung niệu dày ổn định từ đời - Virus có khả gây chết 100% gà tháng tuối sau tuần với triệu chứng điển hình bệnh viêm phế quản truyền nhiễm 60 Chỉ số EID50 trung bình 107,64/0,2 ml/phơi Sản xuất vacxin Giống virus Newcastle IB dùng để sản xuất vacxin vô hoạt nhũ dầu ổn định phôi gà 10 ngày tuổi, có hiệu giá virus đạt: với Newcastle 109,6 EID50/ ml nước trứng; với IB 108,4 EID50/ ml nước trứng phù hợp để sản xuất vacxin vô hoạt nhũ dầu Nồng độ formol thích hợp để vơ hoạt hoàn toàn virus Newcastle - IB 0,2% Đã sản xuất 02 lô vacxin vô hoạt nhũ dầu đạt tiêu chuẩn vô trùng, vật lý Các lô vacxin vô hoạt nhũ dầu phòng bệnh Newcastle viêm phế quản truyền nhiễm đạt tiêu an toàn gà tháng tuổi với liều gấp đôi liều quy định (0,6 ml vacxin /gà) Cả lô vacxin đạt tiêu chuẩn hiệu lực bệnh Newcastle viêm phế quản truyền nhiễm gà tháng tuổi (đã có miễn dịch sở chưa có miễn dịch sở) tiêm với 01 liều miễn dịch sau tháng vacxin bảo hộ với bệnh Newcastle viêm phế quản truyền nhiễm Kiến nghị Lựa chọn giống virus cường độc Newcastle viêm phế quản truyền nhiễm để làm vacxin vô hoạt phòng bệnh cho gà Cho phép tiến hành gửi mẫu để kiểm nghiệm vacxin Tiếp tục theo dõi biến động kháng thể sau tiêm vacxin mũi Tiếp tục hoàn thiện triển khai tiêm thử nghiệm diện hẹp 61 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1] Trần Thị Liên, Nguyễn Hồng Minh, 2008 Nghiên cứu, sản xuất thử nghiệm vacxin nhược độc đơng khơ phịng bệnh viêm phế quản truyền nhiễm gà Tạp chí KHKT Thú y, : - 14 [2] Nguyễn Vĩnh Phước, Hồ Đình Chúc, Nguyễn Văn Hanh Đặng Thế Vinh (1978) Giáo trình bệnh truyền nhiễm gia súc Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội, trang 387 - 398; 421 - 425 [3] Phạm Hồng Sơn, Phan Văn Chinh, Nguyễn Thị Thanh, Phạm Quang Trung (2002) Giáo trình vi sinh vật học thú y Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội, trang 118 - 141; 179 - 182 [4] Nguyễn Như Thanh, Nguyễn Bá Hiên, Trần Thị Lan Hương (1997) Giáo trình vi sinh vật thú y Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội, trang 227 - 240 [5] Trần Thị Lan Hương, 2001: Một số yếu tố ảnh hưởng đến đáp ứng miễn dịch chống bệnh Newcastle đàn gà công nghiệp Luận án Tiến sĩ Nông nghiệp Hà Nội - 2001 Tiếng Anh [6] Abreu J T et al (2010) Molecular studies of the Brazilian infectious bronchitis virus isolates Rev Bras Cienc Avic., Campinas, v 12, n [7] Alexander D J: (2003) Newcastle disease In Saif Y M Et al (editors) Disease of poultry 11th edition Iowa State Press/A Blackwell Publishing company, pp 64 - 87 [8] Cavanagh D And Naqi S A (1997) Diseases of poultry, 10th ed., MosbyWolfe, London, pp:511 - 526; 541 - 569 [9] OIE Terrestrial Manual 2009: Newcastle Disease Chapter 2.3.14:576-589 62 [10] Thayer, S.G., Nersessian, B.N., Rivetz, B And Fletcher, O J 1987: Comparision of serological tests for antibodies agaisnt Newcastle disease virus and infectious bronchitis virus using Immunocomb solid - phase immunoassay, and the hemagglutination - inhibition assay Avian Dieseases 31:459 - 463 [11] Asean standard requirements for Infectious Bronchitis vaccine, Inactivated in Asean standards for animal vaccines, second edition Livestock Publication Series No.2A, p.20 - 21 http://www.aseansec.org/agr_pub/ls2.doc Website [12] http://avian-influenza.cirad.fr/research/virology [13].http://www.cfsph.iastate.edu/HPAI/resources/Additional%20Resources/OIEM anual2_1_15.pdf [14] http://www.infectious-bronchitis.com/ibv-protein-structure.asp [15].http://www.oie.int/international-standard-setting/terrestrial-manual/accessonline/ ... Trứng gà có phơi 10 ngày tuổi thu từ gà chưa sử dụng vacxin phòng bệnh Newcastle vacxin phòng bệnh Viêm phế quản truyền nhiễm (IB) Gà chưa sử dụng vacxin phòng bệnh Newcastle, Viêm phế quản truyền. .. virus phôi gà - Vô hoạt kiểm tra tiêu vô hoạt hai giống virus NDV IBV - Chế tạo vacxin vơ hoạt nhũ dầu nhị giá phịng bệnh Newcastle viêm phế quản truyền nhiễm gà với chất bổ trợ nhũ dầu - Kiểm... loại vacxin đa giá vơ hoạt dùng phịng bệnh cho gà Để đáp ứng yêu cầu đợt thực tập tốt nghiệp cuối khóa tơi tiến hành nghiên cứu đề tài ? ?Nghiên cứu chế tạo vacxin vô hoạt nhũ dầu nhị giá phòng bệnh

Ngày đăng: 14/08/2014, 14:34

Từ khóa liên quan

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan