Đang tải... (xem toàn văn)
Thực nghiệm đề tài khảo sát thành phần hóa học của cây bá bệnh
3.NGHIÊN CỨU VÀ THỰC NGHIỆM 3.1 Nguyên liệu Chúng tiến hành khảo sát bá bệnh (Eurycoma Longifolia Jack) mua hiệu thuốc dân tộc thành phố Hệ Chí Minh (đường Hải Thượng Lãn Ơng, quận 5) Cây phơi sấy 60°C đến khối lượng không đổi dùng để làm thực nghiệm 3.2 Điều chế loại cao: 1.65 kg khô nghiền nhỏ trích phương pháp đun hồn lưu, sau đem quay dich trích áp suất ta thu cao metanol thô (61g) Cho phan cao thơ hịa tan vào nước chiết với dung mơi eter dầu hỏa, acetat et butanol, cô quay thu hồi dung môi ta thu loại cao tương ứng: cao eter dầu hỏa, cao acetat etyÌ, cao butanol dịch nước Sơ đề ly trích loại cao Cây khơ xay nhuyễn (1.65 kg ) -Đun hồn lưu MeOH -Loc -Cơ quay thu hồi dụng môi Cao thô MeQH -Héa tan | lit H,O -Chiết với eter đầu hỏa, AcOEL, BuOH L Cao eter dau héa - C6 quay thu hdi dung mdi [I Cao AcOEt 19 Cao BuOH L Địch nước 3.3 Kết biện luận: Thực sắc ký cột cao chioroform silica gel pha thường với dụng môi giải ly eter dầu hỏa, acetat etyl, metanol, kết hợp với sắc ký cột ngược pha (ODS-RP18) sắc ký mông pha thường, ngược pha (RP18) sắc ký bấn mồng điều chế, cô lập hợp chất NH1, NH2, NHS, NH4, NHS Bằng kết phổ nghiệm kết hợp với tài liệu tham kháo nhận danh hợp chất la 25-O-metylpiscidol A, trucallan-724-đien-3-on, epi-sapeline, quassin L8-hidroxiqguassin Sau phần biện luận để xác định cấu trúc hợp chất trên, 3.3.1 Chất NHI Nhận định ban đầu cấu trúc NHI dựa phổ 'ÍC-NMR DEPT suy đốn NHÍ thuộc nhóm chat triterpen Tín hiệu phổ 2C cho biết NHI có 31 carbon, Phổ DEPT 90 135 cho thấy xuất nhóm metyl (CHạ), nhóm CH¡, nhóm CHÍ carbon tif cap Tín hiệu cộng hưởng phổ 'H có điện proton thuộc nhóm metyl triterpen xuất Ở trường cao (bang 1) Tham khảo tài liệu nghiên cứu thành phần hóa học bá bệnh trích từ cao metanol chloroform cho thấy hợp chất thuộc khung sườn tirucaHan Phân nhóm carbonyl (ốc giải phổ BCLNMR cia NHÍ thấy hợp chất có 216.9 ppm), nối đơi tam hốn ứng với độ dịch chuyển hóa học hai carbon xuất vị trí 117.9 ppm 145.9 ppm có ba ppm Từ đó, so carbon nối với oxy xuất tai vi tri 68.7 ppm; 76.4 ppm, 79.8 sánh độ địch chuyển hóa học carbon NHI với số đại diện chất piscidinol A triterpen có đặc điểm thấy NH1 giống với hợp 20 (36) (bảng số liệu) Vậy NHÍ hợp chất triterpen khung trrucalian tương tự hợp chất piscidinol A Tổng hợp tín hiệu nhận từ phổ !H-NMR cho thấy có tín hiệu proton cia hai nhóm hydroxy vi tri 2.67 ppm (1H, d, J = 9.5 Hz) va 3.51 ppm (1H, d, J = 1.5 H2), nhóm metoxy 3.25 ppm (3H, s) Mặt khác, so sánh độ dịch chuyển hóa học vị trí C-23 ~ C-27 gitfa NUE va piscidinol A (36) cho thay tin hiéu cha C25 cla NHI da dich chuyén vé phia truéng thdp (5c 79.8 ppm) so vdi C25 cia 39 (Sc 74.3 ppm) Suy dodn, nhé6m metoxy gan trén carbon 25, hai nhóm hydroxy cịn lại gắn hai carbon 23 24, 32 QOH NH 16 29 OH 57 78 OR R=H R= Me 39 RHE ny, “28 A Kết luận: NHI có cấu trúc hợp chat triterpen c6 cdu tric metyl eter piscidinol A, 25-O-metylpiscidinol A Theo tài liệu, hợp chất lập trước Phellodendron chinense có tên pheHochin Ứng mở vòng cpoxy hợp chất Trong nghiên cứu này, NHI NHỊ từ điều chế từ phần niloticin (37) phan ứng metanol giải hợp chất thiên nhiên cô lập từ bá bệnh q trình chúng tơi khơng loại trừ khả tạo thành ly trích dung mơi metanol 2Ì 3.3.2 Chất NH2 Các tín hiệu cộng hưởng nhận từ phổ ''C-NMR, DEPT 90 DEPT 135 cho thấy NH2 có 30 carbon, nhóm CH;, nhóm CH;, nhóm CH carbon tứ cấp Phổ 'H-NMR cho thấy xuất proton metyl hợp chất triterpen trường cao (bảng 2) Suy đoán, NH2 hợp chất triterpen NHI So sánh phổ `H ''C NH2 với phổ NHI vừa xác định cấu trúc cho thấy phổ NH2 giống NHỊ, độ dịch chuyển hóa học carbon vòng A, B,C, D NH2 giống với độ dịch chuyển hóa học carbon NHI (xem bảng l) Vậy, sườn carbon NH2 tirucallan, có bốn vịng giống NHI ⁄⁄ DG % Tuy nhién, phé 'H va ?C NH2 so với NHI có số điểm khác nhau, nhánh (xem bảng đặc biệt tín hiệu ứng với carbon hydro mạch 1) Phổ C-NMR ctia NH2, khơng cịn diện carbon nối với carbon có độ dịch oxy, thay vào xuất thêm nối đơi tam hốn hai chuyển hoá học 125.2 ppm 131.0 ppm mũi đơi Tín hiệu cộng hưởng nhận 'H-NMR có xuất trường cao vị tri 0.88 ppm (d, J = 5.5 Hz, H;-21) Suy ra, nối đơi 22 nằm vị trí carbon 24 25 Sự suy luận hoàn toàn phù hợp với độ dịch chuyển hóa học proton đính carbon 26, 27 dịch phía trường thấp [ồn 1.68 ppm (Hạ-26, s); 1.60 ppm (H:-27, s)] so sánh với NHI Kết luận: NH2 có cấu trúc hợp chất triterpen khung tirucallan với nhóm carbonyl; hai nối đơi, nối vịng B vị trí 7, nối nằm nhánh vị trí 24, 25 Do đó, NH2 xác định tirucaHan-7,24-dien-3on Hợp chất này, theo biết chưa công bố từ bá bệnh ss1471111] loo 21 NH2 23 22 24 26 Bang Bảng số liệu phố ÍC-NMR (125MH2) 'H-NMR (500 MH2) hợp chất NHÍ NH2 CDCH 8uQ) ppm opin i 10 i 12 13 14 15 16 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 -OCH, | -OH-23 -OH-24 NH2 NHI Vị trí 38.6 35.0 ! 2.22 (mỳ; 1.46 (m) 38.6 | 2.75 (ddd, J = 5.5; 14.5;/35.0 14.8 Hz}, 1.98 (m) 216.9 216.9 479 479 52.4 1.72 (, = 10.0 Hz) 52.4 244 244 | 2.16Gn) 117.8 117.9 | 5.30 (q, = 6.5 H2) 146.1 145.9 48.5 12.26 (m) 48.5 35.1 34.9 18.3 1.56 (m) 18.3 34.1 1.43 (m) 34.0 43.5 43.6 512 512 33.7 1.48 (mỳ 33.8 28.2 28.5 53.0 1.52 (m) §3.8 220 22.0 | 0.82(s) 12.8 1.02 (3) 12.8 36.0 1.37 Gn) 33.7 176 1093(d.1=6G,5 Hz) 18.9 25.0 1.78 (m) 39.9 36.2 l4l(ql= 7.8 Hz) 68.7 1252 Hz) 764 | 3.13(d,)=9.5 131.0 79.8 21.6 21.6 24.6 21.5 27.4 49.3 1.23 (s) 1.12 (s) 1.05 1.12 1.02 3.25 3.51 2.67 (s) (s) (s) (s) (¢, J = 1.5 Hz) (4,3) = 9.5 Hz) ơn) ppm orn 25.7 18.3 24.6 216 27.4 | 2.24 (mì, 146 (m) | 2.75 (ddd, J = 5.5; 15.0; 15.0 Hz), 1.98 (m) 1.73 4, $=10.0 Hz} | 2.09 (m) | 5.30 (q, J = 6.5 Hz) 12.26 (m) 10.81 @) 1.00 (s) | 0.88 (d, }=5.5 Hz) J = 7.0 Hz) | 5.104, | 1.68 (s) 1.60 () 1.05 (s) ].13 @) 1.00 (s) Piscidinel A (37) 8c ppm 38.5 34,9 217.0 478 52.3 24.3 1179 145.7 48.4 35.0 18.3 34.0 43.5 51.2 33.8 28.4 53.8 22.0 12.7 33.7 18.9 40.5 69.7 75.1 74.3 26.2 273 24.5 21.5 273 3.3.3 Chất NH3 Phổ 'H-NMR NH3 có tín hiệu proton nhóm metyl triterpen xuất trường cao ( nhóm metyl 0.72 (3H, s, H-I§); 0.79 (3H, s, H-19); 0.85 (3H, s, H-28); 0.98 (3H, s, H-29); 1.00 (3H, s, H-30); 1.31 (3H, s, H26); 1.32 (3H, s, H-27)), có Từ cho thấy NH3 proton néi déi 84 5.27 (1H, dd, J=3;5, H-7) hợp chất triterpen có khung tirucallan NHI NH2 Ngồi ra, tín hiệu phổ 'H-NMR bốn proton carbon oxigen héa 54 3.91 (1H, dd, J= 5311.5, H-21a), cho thấy NH3 có diện 3.23 (1H, dd, J=4;11.5, H-3), 3.40 (1H, dd, J=2.5;11.5, H-21b), 3.95 (1H, m, H-23) Các tín hiéu cong huéng nhn dugc tiv phd “C-NMR, DEPT 90 va DEPT 135 cho thấy NH3 có 30 carbon, nhóm CH;, nhém CH, nhém CH va carbon tif cap Phổ !'C-NMR NH3 khơng cịn tín hiệu nhóm ceton, thay vào tín hiệu nhóm carbinol õc 79.3 (C-3) Ngồi ra, phổ '$C-NMR NH3 cịn có tín hiệu carbon oxigen hóa õc 74.2 (C-25), 70.1 (C-21) 86.5 (C-24) Từ suy luận dựa theo tài liệu tham khảo””Ì xác định NH3 chất epi-sapeline 25 26 o 25 723 2l is H # “7 z3 @OH ` 22 š 70 NH3 26 Bảng Bảng số liệu phổ 'ÍC-NMR (125MHz) 'H-NMR (500 MHz) hợp chat NH3 CDCI, Vị trí ] NH3 dc ppm epi-sapeline dn(J) ppm 37.2 3c ppm 37.3 27.7 79.3 39.0 39.0 50.7 50.7 24.0 118.1 27.7 3.23 dd (4; 11.5) 79.3 24.0 5.3 dd (0.2;3.5) 118.1 145.5 145.5 48.9 48.9 10 35.0 35.0 11 18.0 18.0 12 13 33.1 43.4 33.1 43.4 14 51.3 51.3 15 33.9 33.9 16 17 27.6 44.8 27.5 44.8 18 22.3 0.72 s 22.3 19 13.1 0.79 s 13.1 20 37.5 3.91 dd (5; 2.5 ); 37.5 70.1 70.1 3.39 dd (2.5;11.5) 22 36.5 23 64.6 3.95m 36.5 64.6 24 86.5 29d(1.0) 86.5 25 74.2 26 23.8 1.315 24.0 27 28.6 1.32 s 28.5 29 14.7 0.98 s 14.7 30 27.3 1.00 s 27.3 74.6 27 3.3.4 Chất NH4 Phổ 'H-NMR NH4 có tín hiệu bốn nhóm rmet trường cao 1.88 (3H, s, H-18); 1.18 3H, s, H-19), 1.12 3H, d, J=7, H-28); 1.58 (3H, s, H-30), proton oleln 5.31 (1H, d, J=2.5Hz, H-3), proton € oxigen hóa vịng lacton 4.28 (1H, dd, J=1;3 Hz, H-7), hai nhóm metoxi 3.67 @H, s, 12- OCH3), va 3.6 (3H, s, 2-OCH;) Các tín hiệu phổ °C cho thấy NH4 có chứa 22 carbon, có nhóm CH¡, nhóm CHạ, nhóm CH, có hai mũi liên kết C=C 148.2 (C-2) 116.4 (C-3), hai mũi carbon nối đôi 148.3 (C-12) 137.5 (C-13), hai 197.8 (C-1) 191 (C-11) hai mũi nhóm C=O bất bão hịa, ngồi cịn có mũi 82.1 C oxigen hóa (C-7), tín hiệu vị trí 169.1 C nhóm lacton (C-16) So với tài liệu tham khảo cho thấy NH4 quassin!?”), HạcO 3.3.1.4 Chất NH5 Phổ 'H -NMR NHŠ có tín hiệu ba nhóm metyl trường cao 1.17 (3H, s, H-19), 64 1.13 (3H, d, J=7, H-28); 1.62 (3H, s, H-30), mũi proton olefin 5.33 (1H, d, J= 2Hz, H-3) , mét proton gan véi carbon oxigen héa vòng lacton 54 4.32 ppm (1H, dd, J=2;5, H-7), hai proton carbinol 8, 4.53 (1H, d, J=14.5Hz, H-18) va 4.31 (1H, d, J=14.5Hz, H-18) , mũi õ„; 10.29 (s) mũi cua proton nhóm hydroxyl (18-OH), ngồi NHŠ cịn có tín hiệu hai nhóm - OCH; 3.68 (3H, s, 2-OCH3) va 3.63 (3H, s, 12-OCH;) Từ tín hiệu phổ '”C cho thấy NH5 có chứa 22 carbon, phổ DEPT có tín hiệu nhém CH; , nhóm CH¡;, C tứ cấp, liên kết C=C 147.0 (C-2) 115.6 (C-3), liên kết C=C đ 138.1 (C-12) 146.7(C-13), có hai tín hiệu nhóm C=O bat bão hòa õc 196.9 (C-1) 190.8 (C-11), nhóm C=O lacton õc 168.2 (C-16) So sánh với phổ chất quassin, NH5 có vị trí khác biệt C-1§ có õc 58.8 cho thấy tín hiệu carbon liên kết với nhóm OH nv œ So với tài liệu tham khảo !'Ï cho thấy NH§ chất 18- hidroxiquassin 29 Bảng Bảng số liệu phổ 'ÌC-NMR (125MN?) 'H-NMR (500 MHz) hợp chất NH4 va NHS CDCI, Vi trí : NH4 NH5 Quassin 5c ppm dn(J) ppm dc ppm 196.9 197.8 147.0 148.2 1156 | 5.33 d (2) 116.3 |30.1 2.49 m 31.6 42.2 2.09dt(2.5;14) | 43.1 24.9 1.88 m 25.8 81.1 4.32dd (2;5) 81.9 37.0 36.9 45.4 3.05 s 45.8 44.9 46.3 190.8 191.0 138.1 137.6 147.9 146.7 2.81dd(7;11.5) | 46.5 42.3 (7311.5) |31.6 3.11dd(7;18.5) (18.5; 12); | 31.0 (7.5; 19) 169.1 168.2 4,53d(14.5);4.3 | 15.3 58.8 dy(J) ppm dc ppm 197.8 148.2 116.4 | 5.31 d (2.5) 31.2 2.49ddq (2.5;7.9) 43.3 2.09dt (3314) 25.9 1.81 m 82.1 4.28 dd(1;3) 10 11 12 13 14 I5 37.1 46.7 46.3 191.0 137.5 148.2 45.9 31.7 l6 18 169.1 15.4 12.8 19 22.4 28 19.5 30 OCH,(2) | 59.4 OCH;(12) | 55.0 2.99 s 2.39dd 2.61dd 3.02 dd 1.88 s 1.18 s 1.12d 1.58 s 3.61 s 3.678 1d (14.5) 11.8 21.2 18.4 57.7 54.0 L1I7s 1.13d (7) 1,62 s 3.68 s 3.63 s 10.29 s OH-18 30 12.7 22.2 19.4 59.3 54.9 3.4 Thực nghiệm: 3.4.1 Các điều kiện thí nghiệm 3.4.1.1.Dung môi: Oo CHCH: chưng cất lại, nhiệt độ 61-62°C MeOH ching cat lai, nhiét dé 64°C ° Acetat etyl (Trung Quốc) ° Eter dầu ( Trung Quốc) chưng cất nhiệt độ từ 60-00°C, oO n-Butanol ( Trung Quốc) 3.4.1.2.Phương pháp sắc ký: S Sắc ký mồng nhôm loại silica gel pha thường (Merck, Kielselgel 60 F2s„, 250m), °o Thuốc thử H;ạSO¿ đậm đặc, nóng: load ° Sắc ký cột bấp phụ silica gel pha thường (Merck, Kielselgel 60, 40 6Qum), siica gel pha ngược RPus ( Merck, RP-18 Fosas } 3.4.1.3.Máy nhổ: © NMR hiệu Bruker Avance 500 (SDOMH¿ cho 'H-NMR va 125MHz cho BC.NMR) ° Viện Khoa Học Công Nghệ Việt Nam, Hà Nội Dung môi chạy phể (với TMS nội chuẩn): CDCh, 3.4.2 Điều chế loại cao 1.65 kg khơ nghiền nhỏ trích phương pháp đun hồn lưu, sau đem quay dịch trích áp suất ta thu cao metanol thé (61g) Cho phần cao thơ hịa tan vào nước chiết với dung môi eter đầu hỏa, acetat etyl butanol, cô quay thu hổi dung môi ta thu loại cao tưững ứng: cao eter dau hóa, cao acetat etyl, cao butanol dịch nước 31 3.4.3 Khảo sát cao chioroform Cao chloroform (23.8 g) dude sac ky cét trén silicagel pha thường với hệ dung mơi lúc đầu chioroform sau tang dan d6 phan cực với hệ CHCH IMeOH thu 13 phân đoạn Tiến hành sắc ký móng 13 phân đoạn thấy phân đoạn 1, 2, 4, 5,8 cho vết tách tương đối rõ ràng Sau tiến hành khảo sát phân đoạn này, 3.4.3.1, Khảo sát phân đoạn 2: Sắc ký cột phân đoạn A2 với dung môi CHCI;100% thu phân đoạn E1-E8, sau tiếp tục sắc ký cột phân đoạn E2 dung môi CHCH 100% 12 phân đoạn ELI-EL12, tiến hành sắc ký cột EL2 phân đoạn 11-19, cũ cạn dung môi phân đoạn J8 xuất tỉnh thể màu trắng Rứa, kết tính lại cter dầu hóa: aceat etyl(9:1) thu NHI Sơ đề cô lập chất NHỈ Phân đoạn À2 (2.5%) Sắc ký cội siHca gel dung mdi CHC]; 100% § phân đoạn EI-E§ phân đoạn E1(1,9g) Sắc ký cội silica gel dụng mơi CHCI; 100% § phân đoạn ELI-EL12 * Phân đoạn EL2 (1.526) SKC, silica gel CHC] : eter đầu w (5:5) dude phan doan (11 - 19) Phan doan JS (2.82) eee ¥ Rửa, kết tính lại eter đầu hỏa:acetat etyl (9:1) NHI (90 mg) tLi 3.4,3.2.Khao sat phân đoạn 1: 85% c ký cội cao Chloroform (23,8 g) silica gel pha thường với hệ dung 3œ ¡ lúc đầu = 95 : thu 13 phân đoạn, ký hiệu A1 ~ A13 Sau tiếp tục sắc ký cột phân đoạn A4 sHica gel pha thường, hệ dung môi CHCI]; : eter đầu(5 : 5) thu 29 phân đoạn, ký hiệu EI ~ E29, từ phân đoạn E6 đến phân đoạn E10 hiển thị vết giống nên gộp chung lại E6, Sắc ký cột phân đoạn E6 hệ dung môi eter dầu hỗa: acetat etyl (6:4) thu 13 phân đoạn ŒEL,1-EL 13) Cô cạn dung môi, phân doan EL4 xuất tinh thể màu trắng Rửa kết tỉnh lại CHCH thu chất NH2 Sơ đỗ cô lập chất NH2 Cao CHCh (23,8 ø) ¥ Sắc ký cột silica gel với nhiều hệ dụng ly có độ phân cực tăng dẫn 13 phan doan (AI-Ai3) Ỳ Phan doan Al (5.22) SKC, silica gel CHC) : eter đầu (5:5) 29 phân đoạn (EI — E29) Phân đoạn E6 (2.8g) SKC, silica gel eter dau: acetat ety! (6:4) thu 13 phân đoạn (ELI-EL13) NH2 (26 mg) 3.4.3.3 Khao sát phân đoạn 8: Sắc ký cột phân đoạn A8 với dung môi CHC1;:MeOH (98:2), sau tăng dân độ phân cực thu 28 phân đoạn, sắc ký mồng thấy phân đoạn từ 18 đến 22 cho vết giống nên gộp chung thành phân đoạn 22, sau sắc ký cột phân đoạn 22 với hệ dung môi CHCH;:MeOH (99:1) thu § phân đoạn Cơ cạn dụng mơi phân đoạn B5 thấy xuất tình thể mau tring, rửa kết tỉnh chloroform thu NH3 Sơ để cô lập chất NH3 Phân đoạn À8 (4.53) Sắc ký cột silica gel với hệ dụng mơi CHCÌ;:MeOH (98:2) thu 28 phân đoạn Phân đoạn 22 (152mg) Sắc ký cội silica gel với hệ dung môi CHCI,:MeQH (98:1) thu c Đ phõn Ơ | on (B1-B8) Phõn đoạn B5 (32 mg) Riva va két tinh lai wong CHCI, Chat NH3 (15 mg) 3.4.3.4 Khảo sát phân đoạn Sắc ký cột phân đoạn A4 với hệ dung môi CHCI; :MeOH (95:5) thu 13 phân đoạn KI-K13, sau tiếp tục sắc ký cột phân đoạn K3 silica gel pha đảo với hệ dung môi CHC]; : MeOH : HO (14:6:1) 11 phân đoạn KI- K11, cô cạn dung môi phân đoạn K6 thu tỉnh thể màu trắng, rửa kết tinh lại CHC]; thu NH4 Sơ đồ cô lập chất NH4 Phân đoạn A4 (5.2g) Sắc ký cột silica gel CHCI]; (95:5) thu 13 phân đoạn K1-K13 Phân đoạn K3 (2.8 g) Sắc ký cột silica gel pha đảo hệ CHCI;: MeOH: HạO (14:6:1) thu K6 Phân đoạn K6 (14mg) | Rửa, kết tình CHC); NH4 (10 mg) 35 3.4.3.5 Khảo sát phân đoạn Š : Sắc ký cột phân đoạn A5 với hệ dung môi CHC]; :MeOH (95:5) thu 12 phân đoạn KI-K12, sau tiếp tục sắc ký cột phân đoạn K5 silica gel pha đảo với hệ dung môi CHC]; : MeOH : HO (14:6:1) phan đoạn K1- K8, cô cạn dung môi phân đoạn K5 thu tỉnh thể màu trắng, rửa kết tinh lại tong CHC]; thu NH5 Sơ đồ cô lập chất NH5 Phân đoạn À5 (3.4g) Sắc ký cột silica gel CHCI; (95:5) thu 12 phân đoạn K1-K12 Phân đoạn KŠ (1.8 g) Sắc ký cột silica gel pha đảo hệ CHC1;: MeOH: HO (14:6:1) thu phân đoạn + K1-K8 Phân đoạn K5 (25mg) Rửa, kết tỉnh CHC]› Ỳ NHS (12mg) 36 ...3.NGHIÊN CỨU VÀ THỰC NGHIỆM 3.1 Nguyên liệu Chúng tiến hành khảo sát bá bệnh (Eurycoma Longifolia Jack) mua hiệu thuốc dân tộc thành phố Hệ Chí Minh (đường Hải Thượng Lãn Ơng, quận 5) Cây phơi sấy... có điện proton thuộc nhóm metyl triterpen xuất Ở trường cao (bang 1) Tham khảo tài liệu nghiên cứu thành phần hóa học bá bệnh trích từ cao metanol chloroform cho thấy hợp chất thuộc khung sườn... với độ dịch chuyển hóa học hai carbon xuất vị trí 117.9 ppm 145.9 ppm có ba ppm Từ đó, so carbon nối với oxy xuất tai vi tri 68.7 ppm; 76.4 ppm, 79.8 sánh độ địch chuyển hóa học carbon NHI với