Đang tải... (xem toàn văn)
Chương iii Li trích định lượng và khảo sát cấu trúc hóa học Rotenon
PHƯƠNG PHáP NGHIÊN cứu Và KẾT oủa 3.1 Chuẩn bi mẫu xác đỉnh ẩm đô mẫu : a) Chuẩn bì mẫu : Mẫu Derris elliptica Bemh huyện thu hái xã Bà Điểm (Ấp Trung Lân) Hóc Mơn TP Hồ Chí Minh Rẽ thân, lá, riềng trải thống nhiệt độ phịng nhiều ngày (thường xuyên trở mẫu), sau xay thành bột Cân mẫu bột toàn 316,2 gam mẫu bột rễ, 2529,6 gam mẫu thân 2424.2 gam mẫu Nhu vay, wong mau cay Derris elliptica Benih phần rễ chiếm %, phần thân chiếm 48 % phần 46 % b) Xác định ẩm độ mẫu - Cân hép petri (m’ gam) cân mẫu chứa hộp petri (mạ gam) sấy 105 °C mẫu thí nghiệm đến khối lượng khơng đổi (m; gam) Am độ mẫu tính theo cơng thức : H% = maa m,- m x 100 Két qua thi nghiém : Với mẫu thí nghiệm (cân 10,000 gam/mau) thu kết sau : Ẩm độ mẫu rể 5,70 % , mẫu thân 5,80 % mẫu 5.90 % 3.2 Định lượng Rotenon rễ, than ki phương pháp AFINOR : a) Nguyên tắc + Ngâm chiết m gam bột mẫu rễ (thân, lá) có ẩm độ H% với dung môi cloroform 24 lắc tiếp tục bình crlen lút, nút kín Lọc (loại bã), Thu bồi CHCH với dung môi CCI,, đun sơi áp suất từ địch cloroform, bịa tan cin lọc Làm lạnh dịch phức rotenon - CCI¿ (với hỗn hợp nước đá NaC]), lọc rửa tỉnh thể với dung mơi CC; lạnh Sấy tính thể 45 °C rỗi kết tỉnh lại etanol 95° Lọc, sấy cân m` gam Rotenon se Hàm lượng b% rotenon mẫu (có độ ẩm H% ) : mỉ x m 10 100 — H b) Kết thí nghiệm ; Thực thí nghiệm cho mẫu, mẫu rễ dùng 40gam/mau, mẫu thân dùng 100 gan⁄mẫu Tiến bành định lượng rotenon theo phương pháp nêu trên, cân sắn phẩm rotenon (m' gam) thu kết sau : BANG IIL1 : HAM LUGNG ROTENON G RE THAN LA TRONG CÂY HO DERRIS Hàm lượng % D, elliptica D malaccensis D chinensis Ré 6,8 7,0 6,8 Than 3.4 3,3 3.2 La 2.6 2,6 2.4 -3Ñ8- 3.3 Lv trích rotenon từ rễ Derris elliptica Benth : a} DO tan cua rotenon dung môi hữu cơ: Nhằm xác định dung môi tốt cho q trình ly trích rotenon, chúng tơi tiền bành thử độ tan rotenon dung niôi hữu nhiệt độ phịng thí nghiệm thu bảng kết sau : Bang 11.2: BO TAN CUA Dung Bé ROTENON tan (mg/ml) TRONG Dung DUNG MOI méi Độ tan ( mø /mi } Míc› CO 80 CHC 330 AcOH 22 E10 EtOH MeOH AcOAm 18 iso - PrOH C,H, 88 PhMe 72 CS 16 CGI, Tuy cloroform aceton cho độ tan cao (330 mg/ml 30 mg/m)), lại hịa tan nhựa nhiều gây khó khăn cho q trình tách rotenon từ cao rong đó, toluen benzen có độ tan tương ứng 72 85 ømg/mi lại khó hịa tan nhựa nên khơng gây trở ngại cho q trình tách rotenon từ cao dịch trích b) Quy ly trích rotenan ti rễ Derris elliptica Benth : Qua kết xác định độ tan rotenon, chọn tolien tiến hành ly trích rotenon quy trình lv trích sau dung mơi Lược đồ ly trích Rotenon Mẫu (bột rể) - Trích soxhlet với tolten 10°C,8 gid - Lọc Ba Dich toluen - Loai toluen áp suất Can - Hòa tan với CCI, Cặn Rotenoid | - Loc Dịch phức Rotenon — CCl, - Loai CCly - Két tinh - Loc Rotenon thd - Kết tình với EtOH 95” Rotenon tink c) Kết ly trich rotenon : Mẫu bột rễ Derris tiến hành ly trích theo quy trình nêu Với m gam mẫu bột rễ có ẩm độ H% thu hiệu suất trích Iy a% tính theo cơng thức : a% = m m ' X to" —— 100 — a 40 - m' gam sản phẩm rotenon, BANG IIL3 : HIEUSUAT TRICH LY ROTENON TU RE mauré | m(gam) m` ( gam ) a% H=5.7% mau Rotenon Trich ly l 50 2.7583 5,85 50 2,7347 5,80 50 2/7111 5,75 a % 3,50 I = I » — Q oO S c% i Như tỷ lệ (%) ly trích rẻ Derris elliptica Benth la: 38 68 xX {oC = - 85,3 % yer Rotenoii thu có dạng tinh thể khơng màu, có dung điểm 163°C (EtOH), cd wae nghiệm đương tính với cấc phần ứng định tính rotenomr: Phần ứng Đutham Hovard : Dùng 0.5 mg rotenon vừa ly trích để mặt Kính thêm giọt HạSO; đẫm vào hạt NaNO: đặc : mầu ngã sang 2, Phan ting Jones va Smith: 2ml aceton đậm thêm đặc : màu vào 2ml nước xanh tím đậm xuất màu vàng cam rơ, Thêm tim: Kết dương tính Hoa tan 0.5 mg rotenon via ly trich † mi HNO;: đậm xuất hiệ tì đặc Kiểm hoa vdi NH,OH : Kết dương tính, Sốc ký lợp mỏng : Triển khai sắc ký lớp mỏng silicagel: HE DUNG LY | THUOC THU HIEN MAU | :MeOH:H202 CeHo:Me Hơi ¡ l› (4:2:1) CHC 1;:MeOH € TRỊ SỐ R; 0.49 vết‘ có màu xám Hot i [2 (3:1) -4]- 0.68 tro vết7 có màu xám tro Hình 1C : Sắc ký lớp mỏng rotenon Với hệ dung ly CạH, : MeOH (4:2: 1), : HO Hình ID: Sắc ký lớp mồng rotenon với hệ dung ly CHC]; : MeOH @: Ì) 118, detector UV/VIS 280 nm, cét Partisil ODS Sum (250 mm x 4.6 mm), pha động MeOH :H;O (65:35), tốc độ dòng 0.8ml/phút, với chất chuẩn Rotenon Merck, Kết định lượng cho thấy hàm lượng sẵn phẩm Rotenon : 96.389 +0.054%, 3.4 Khảo sát cấu trúc hóa học rolenon : c >- bh Cy oN ~¬ CDs, © an — — = = os == ~ tt c" & ân Đo điểm tan chảy khối maquenne ; lỐ kad a) Dung điểm - bì Phân tích C, HH: Sự phân tích nguyễn tố carbon hydro với máy phân tích ný } Lý thuyết : Azav = 29 ñ Zi Ae „ Tử + m "9 10a] Bal Se Hạco“ Tế oa be H O OCH3 Rotenon =: 922 cho cdc anit cực MeOH) ho =3 + A + +> ( * Ww = nm ⁄ ~l Aunax 293 ^ Phố hấp thụ từ ngoại với máy UVIKON Gay ngoại;+ Phổ tửtửngoại €) ) H:3,62 % ( xem kết qua phân tích C„ H) ; C:70,04 % : 394.41) Tính cho Casfb;Oa( % H:5,50 ; C+ 69,50 % : = sau động cho kết đại san : \ CHROMATOPAC a a a CH=I - T77 TT TT TT TY T7 ni th TT ee ` ° 12.438 9295 512 13.899 ro ta ~ 2701134 ps ALCULATION REPORT vvà TIME 16 224 i ng nh ; Tnhh HH mm mm TT HH nh HH ni ng na 123,109 a 13.851 TOTAL 36 se +* ee 12.438 #* AREA A 8; 327 FOTAL - CHROMATOGRAY ec ALCLLATION REPORT vào TIME 10.229 No.=8 19.229 ( 3 REPORT a HEIGHT TDNG 97446 ORT CONC 2129 No =9 ene 2334226 San s~ 92738 2688690 98120 te 2162 3.235 94.7839 1.98 } XẠM 169 CHROMATOGRAMS? ROTEL COL ss me MRO 3EE^ Sidu 33037 MR 3547 91779 TDN OG 00 GO 6:59:45 eens CONC NAME 94.9989 mae r2 1.9726 108 4, Foe | Sime ... (65:35), tốc độ dòng 0.8ml/phút, với chất chuẩn Rotenon Merck, Kết định lượng cho thấy hàm lượng sẵn phẩm Rotenon : 96.389 +0.054%, 3.4 Khảo sát cấu trúc hóa học rolenon : c >- bh Cy oN ~ơ CDs, â an... ti rễ Derris elliptica Benth : Qua kết xác định độ tan rotenon, chọn tolien tiến hành ly trích rotenon quy trình lv trích sau dung mơi Lược đồ ly trích Rotenon Mẫu (bột rể) - Trích soxhlet với... -3Đ8- 3.3 Lv trích rotenon từ rễ Derris elliptica Benth : a} DO tan cua rotenon dung môi hữu cơ: Nhằm xác định dung môi tốt cho q trình ly trích rotenon, chúng tơi tiền bành thử độ tan rotenon dung