TR NG Đ I H C CÔNG NGHI P TP HÔỒ CHÍ MINHƯỜ Ạ Ọ Ệ VI N CÔNG NGH SINH H C – TH C PH MỆ Ệ Ọ Ự Ẩ B MÔN SINH H C PHÂN TỘ Ọ Ử ĐềỒ tài: Tách chiềết DNA th c v t ự ậ NHÓM 7 GVHD: TrầỒn HồỒng B o Quyềnả 1. LÝ DO CH N ĐỀỒ TÀIỌ  Tách chiềết DNA là rầết cầỒn thiềết b i trong cồng ngh di truyềỒn : kĩ thu t DNA tái t h p, ở ệ ậ ổ ợ chuy n gen, k thu t phần tích acid nucleic đềỒu s d ng đềến DNA.ể ỹ ậ ử ụ  Tách chiềết DNA th c v t l i càng có vai trò l n trong vi c t o ra nh ng giồếng cầy ự ậ ạ ớ ệ ạ ữ trồỒng chuy n gen có năng suầết, giá tr dinh d ng và d c tính cao…ể ị ữơ ựợ  Phần lo i và xác đ nh đ c m c đ đa d ng c a quầỒn th th c v t…ạ ị ựơ ứ ộ ạ ủ ể ự ậ 2. Nguyền tăếc k thu t chung:ỹ ậ 2.1.Quy trình tách DNA • Phá v thành xenlulose, gi i phóng các tp bền trong tềế bào.ỡ ả • Phá v màng nhần gi i phóng DNA đồỒng th i dùng hóa chầết đ b o v DNA.ỡ ả ờ ể ả ệ • Lo i b protềin và các t p chầết ra kh i DNA.ạ ỏ ạ ỏ • Thu hồỒi DNA. • Hòa tan DNA 3. ng d ng: Trích ly và khuềếch đ i DNA t b t nghỨ ụ ạ ừ ộ ệ. 3.1. Vai trò c a cầy ngh trong cu c sồếngủ ệ ộ  Ngh là m t gia v tồết.ệ ộ ị  Là m t cầy có nhiềỒu chầết dinh d ng nh protein, chầết béo, chầết s …ộ ữơ ư ơ  nhiềỒu d c tính khác nh kháng viềm, kháng sinh. Đ c bi t là curcumin có tác d ng chồếng ung th ựơ ư ặ ệ ụ ư 3.2. VAI TRÒ TÁCH DNA TRONG NGHIỀN C U.Ứ Tách và cồ l p DNA dùng trong ph n ng khuềếch đ i nh n d ng loài ngh t đó xác đ nh đ tinh ậ ả ứ ạ ậ ạ ệ ừ ị ộ khiềết và ồ nhi m c a b t ngh vì:ễ ủ ộ ệ  B t ngh gi có hàm l ng curcumin thầếp.ộ ệ ả ựơ  L n nhiềỒu t p chầết đ c có h i cho s c kh e con ng i ẫ ạ ộ ạ ứ ỏ ừơ 3.2. V T LI U - QUY TRÌNH Ậ Ệ 3.2.1. V T LI U .Ậ Ệ  B t m u Curcuma longa( ngh vàng).ộ ẫ ệ  B t m u Curcuma zedoaria(ngh đen).ộ ẫ ệ  B t ngh mua t th tr ngộ ệ ừ ị ừơ . 3.2. Quy trình tách DNA t b t nghừ ộ ệ (Quá trình tách chiềết DNA t b t ngh đ c l p l i 2 lầỒn) ừ ộ ệ ựơ ặ ạ Cần n ng m i m u 2gặ ỗ ẫ 3.2.1.QUÁ TRÌNH CHIỀếT TÁCH DNA LÂỒN 1Ớ 3.2.1.1. Phá v màng nhần gi i phóng DNA đồỒng th i dùng hóa chầết đ b o v DNAỡ ả ờ ể ả ệ : Hòa tan b t v i 10ml đ m CTAB 3% có ch a β- mercaptoethanol 0,3%.ộ ớ ệ ứ 3.2.1.2. Lo i b protềin và các t p chầết ra kh i DNAạ ỏ ạ ỏ :  trong 2h 60 đ sau đó lăếc đềỒu.Ủ ở ộ  Thềm 3ml dung d ch gồỒm phenol: cloroform: isoamylalcohol (25:24:1) và 7ml dung d ch ị ị cloroform : isoamylalcohol (24:1).  Kềết h p v i ngh ch đ o trong 15 phút.ợ ớ ị ả  Ly tầm 8,000.g trong 15 phut 4ở 0 C.  Chuy n phầỒn d ch trền sang ồếng oakridge s ch sau đó thềm isopropanol l nh v i th tích ể ị ạ ạ ớ ể băỒng 2/3 th tích m uể ẫ 3.1.2.3.Thu hồỒi DNA và RNA.  m u -20Ủ ẫ ở 0 C trong 2h đ t a DNA.ể ủ  R a t a DNA băỒng ethanol 70%.ử ủ  Làm khồ kềết t a và hòa tan trong n c cầết vồ trùng 2 lầỒn.ủ ứơ 3.2.2.QUÁ TRÌNH LO I B RNA VÀ CHIỀếT TÁCHẠ Ỏ DNA LÂỒN 2Ớ  Thềm 10µ/ml RNAase và 37ủ ở 0 C trong 1h.  Thềmphenol:cloroform:isoamylalcohol (25:24:1) trong 15 phút,tiềếp theo đem ly tầm ủ 1,000.g trong 15 phút 4ở 0 C .g n DNA và l p l i tách chiềết DNA m t lầỒn n a.ạ ặ ạ ộ ữ 3.2.2.1. Lo i b t p chầết lầỒn 2ạ ỏ ạ  Lầếy phầỒn d ch ch a DNA và thềm cloroform : isoamylalcohol (24:1).ị ứ  Ly tầm 10,000.g 4ở 0 C.  lầếy phầỒn d ch n c và thềm ethanol 100% và gi -20ị ướ ữ ở 0 C trong 2h đ t a DNA.ể ủ  R a t a băỒng cồỒn 70% đ lo i b muồếi rồỒi hòa tan trong n c cầết vồ trùng 2 lầỒn.ử ủ ể ạ ỏ ướ  Thềm 200µl- 500µl PEG 8000 30% vào DNA m u và gi nhi t đ phòng trong 30 ẫ ữ ở ệ ộ phút.  Ly tầm 14,000.g trong 15 phút. 3.2.2.2. Thu hồỒi và b o qu n DNA.ả ả  L c lầếy t a rồỒi r a băỒng cồỒn 80%,làm khồ t a và hòa tan trong đ m Tris – EDTA ọ ủ ử ủ ệ (10:1)  b o qu n m u -20ả ả ẫ ở 0 C. 3.3. Kềết qu tách DNAả  Đo quang ph c a các m u DNA t i 260 và 280 nm cho m t t l hầếp th (A260 ổ ủ ẫ ạ ộ ỷ ệ ụ \ A280) c a 1,82 -1,91 ch đ tinh khiềết cao.ủ ỉ ộ  The DNA c a t ng DNA đ c phần l p t b t ngh sầếy khồ cũng đ c ki m tra ủ ổ ượ ậ ừ ộ ệ ượ ể băỒng đi n di gel agarose. Agarose gel đi n c a m u DNA cho thầếy băng DNA rõ ệ ệ ủ ẫ nét ,d thầếy , tr ng l ng phần t kho ng 22.000 bp ễ ọ ượ ử ả [...]... zedoaria, Mẫu 3-th ị trường mẫu 1, Mẫu 4-Thị trường mẫu 2 Mẫu 5-th ị trường mẫu 3 Các mũi tền cho biềế C zedoaria băng c ụ th ể t 4 KỀế LUẬN T Tách chiềế DNA thành cồng có độ tinh khiềế và độ tinh sạch cao sẽ t t quyềế định thành cồng trong các bứơc tiềế theo của cồng nghệ di t p truyềỒ n  Đặc biệt tách chiềế DNA thực vật thành cồng đã tạo đựơc những t giồế g cầy mà cồng nghệ di truyềỒ truyềỒ thồế . ra nh ng giồếng cầy ự ậ ạ ớ ệ ạ ữ trồỒng chuy n gen có năng suầết, giá tr dinh d ng và d c tính cao ể ị ữơ ựợ  Phần lo i và xác đ nh đ c m c đ đa d ng c a quầỒn th th c v t…ạ ị ựơ ứ ộ ạ ủ ể ự. 260 và 280 nm cho m t t l hầếp th (A260 ổ ủ ẫ ạ ộ ỷ ệ ụ A280) c a 1,82 -1,91 ch đ tinh khiềết cao. ủ ỉ ộ  The DNA c a t ng DNA đ c phần l p t b t ngh sầếy khồ cũng đ c ki m tra ủ ổ ượ ậ ừ ộ. m u nghiền c u ệ ẫ ứ 4. KỀếT LU NẬ  Tách chiềết DNA thành cồng có đ tinh khiềết và đ tinh s ch cao s ộ ộ ạ ẽ quyềết đ nh thành cồng trong các b c tiềếp theo c a cồng ngh di ị ứơ ủ ệ truyềỒn. 