Đang tải... (xem toàn văn)
Vi khuẩn E. coli
[...]... phân số 3, chọn 2 khuẩn lạc hồng rời rạc trên môi trường MAC, 2 khuẩn lạc trắng trên SMAC, multiplex – PCR phát hiện 100% E coli mang gen ehxA nhưng không có gen stx Tóm lại, nhóm khuẩn lạc (gồm 6 – 10 khuẩn lạc) có mang gen độc lực thì chưa chắc từng khuẩn lạc riêng lẻ đều mang gen độc lực đó Cho nên chọn từng khuẩn lạc để nghiên cứu là công vi c cần thiết để xác định serotype của mỗi khuẩn lạc phân... 3.3.2 Nuôi cấy và phân lập E coli 3.3.2.1 Môi trường nuôi cấy Môi trường tăng sinh Do số lượng E .coli nhóm STEC, đặc biệt là E coli gây bệnh hiện diện trong thực phẩm rất ít, cho nên trước khi phân lập chúng tôi sử dụng môi trường tăng sinh pepton đệm có bổ sung kháng sinh cefixime (0,0125mg/L) và vancomycin (8mg/L) (FDA, 2002) để ức chế các vi khuẩn gram dương và vi khuẩn sống hoại sinh khác Môi... Chọn khuẩn lạc E coli Trên từng loại môi trường MAC, SMAC, CT - SMAC, chọn ngẫu nhiên 6 – 10 khuẩn lạc rời rạc đại diện cho mỗi nhóm hình thái: o Khuẩn lạc hồng trên môi trường MAC được kí hiệu HM o Khuẩn lạc hồng hoặc trắng trên môi trường SMAC được kí hiệu lần lượt là HS hoặc TS o Khuẩn lạc trắng hoặc hồng trên môi trường CT - SMAC kí hiệu lần lượt là TCT hoặc HCT Dùng que cấy chạm nhẹ trên từng khuẩn. .. phần khuẩn lạc còn lại của mỗi nhóm, gom chung vào 1 eppendorf chứa sẵn 0,4 – 0,5 ml nước cất khử ion vô trùng (3) Thử sinh hóa Sử dụng nghiệm pháp IMViC (FAO, 1992) cho từng khuẩn lạc riêng lẻ thuộc nhóm đó để xác định E coli 3.3.3 Li trích DNA Theo Cebula và ctv (1995), kết hợp với ý kiến của Cerna (2003) và Botteldoorn (2003), vi c ly trích DNA được thực hiện như sau: thu khoảng 6 -10 khuẩn lạc E coli. .. hồng Trên môi trường SMAC và CT - SMAC, E coli không lên men đường sorbitol nên cho khuẩn lạc màu trắng, những dòng E coli lên men sorbitol cho khuẩn lạc màu hồng Vi c tầm soát E coli nhóm STEC trên phân, bệnh phẩm trên thạch SMAC, CT SMAC là công cụ ban đầu phát hiện serotype O157 thuộc nhóm STEC 3.3.2.2 Qui trình phân lập, định tính (1) Nuôi cấy và phân lập E coli hiện diện trong phân với số lượng lớn,... nguyên nhân của sự vắng mặt những dòng E coli mang gen độc lực được phân lập từ thịt bò có thể do: Số mẫu khảo sát còn ít nên chưa đủ để phát hiện các gen độc lực Khuẩn lạc trắng trên môi trường CT - SMAC có thể không phải là khuẩn lạc điển hình của E coli O157:H7 Theo Fujisawa và ctv (2002), trên môi trường CT SMAC, vi khuẩn hiếu khí Pseudomonas spp cũng có khuẩn lạc không màu, cũng không lên men... sau: (1) E coli trên môi trường thạch MAC chỉ xuất hiện 1 loại khuẩn lạc hồng (HM), trên môi trường thạch SMAC xuất hiện 2 loại khuẩn lạc trắng (TS) và hồng (HS), trên môi trường thạch CT - SMAC cũng xuất hiện 2 loại khuẩn lạc trắng (TCT) và hồng (HCT) (2) Nhóm khuẩn lạc có mang gen độc lực thì chưa chắc từng khuẩn lạc riêng lẻ có mang gen độc lực đó (3) 100% mẫu phân tiêu chảy đều có E coli mang gen... (37oC/24h) Chọn 6 - 10 khuẩn lạc Chọn 6 - 10 khuẩn lạc theo đỏ hồng từng nhóm riêng: trắng hoặc đỏ hồng hoặc cả hai Cấy từng khuẩn lạc được chọn vào từng ống thạch nghiêng NA (37oC/24h) Thu tất cả phần còn lại của những khuẩn lạc đã Thử IMViC (+/-;+;-;-) chọn theo từng nhóm riêng và mỗi nhóm cho vào mỗi eppendorf chứa sẵn 0,4 - 0,5 ml H2O cất khử ion 2 lần Ly trích DNA (DNA nhóm khuẩn lạc) (-) Multiplex... trường phân lập chúng tôi chỉ chọn 2 khuẩn lạc riêng lẻ nhưng có kiểu hình giống nhau để xác định gen độc lực (li trích DNA từ gốc khuẩn lạc riêng lẻ đã nhân và giữ gốc trên thạch NA), kết quả được trình bày ở bảng 4.2 Kết quả ở bảng 4.2 cho thấy: (1) Ở mẫu số 1, chọn 2 khuẩn lạc hồng rời rạc (khuẩn lạc được đánh số thứ tự số 6 – HM6 và khuẩn lạc số 8 – HM8 trong nhóm khuẩn lạc HM) trên thạch MAC, multiplex... PCR, Trong y khoa và thú y, PCR được sử dụng để chẩn đoán các mầm bệnh virus, vi khuẩn, protozoa lẫn ký sinh trùng đa bào Trong nông nghiệp và công nghiệp thực phẩm, sử dụng PCR để phát hiện gen halothan, gen thụ thể estrogen, gen thụ thể prolactin … trong công tác chọn giống vật nuôi, phát hiện các vi khuẩn gây ngộ độc thực phẩm : E coli, Salmonella, Staphylococcus aureus, Campylobacter, 17 Phần 3 NỘI