LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết quả, số liệu nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khoa học Tác giả Dương Văn Q Bình LỜI CẢM ƠN Trong trình học tập nghiên cứu để hồn thành luận văn, tơi nhận quan tâm giúp đỡ nhiều quan, tập thể, nhà khoa học bạn bè đồng nghiệp Trước tiên xin trân trọng cảm ơn đến Ban Giám Hiệu, Khoa Nuôi trồng Thủy sản, Ban điều hành dự án SRV2701, Phòng Đào tạo Đại học – Sau Đại học quý thầy cô trực tiếp giảng dạy năm học vừa qua Đặc biệt tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến cơ, PGS-TS Đỗ Thị Hịa tận tình hướng dẫn, động viên khích lệ cho tơi lời khuyên quý báu suốt thời gian thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn tới quý thầy cô Bộ môn Bệnh học Thủy sản, toàn thể anh chị em Trại sản xuất giống cá biển Bộ môn Hải Sản, Khoa Nuôi trồng Thủy sản; em sinh viên lớp 49 Bệnh học giúp đỡ thời gian thực đề tài Cuối cùng, lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè động viên giúp đỡ nhiều suốt thời gian học tập nghiên cứu thực đề tài Tác giả Dương Văn Quý Bình MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 11 1.1 Đặc điểm sinh học cá chim vây vàng 11 1.1.1 Vị trì phân loại 11 1.1.3 Sinh thái phân bố cá chim vây vàng 12 1.2 Tình hình sản xuất giống ni cá CVV giới Việt Nam 14 1.2.1 Tình hình giới 14 1.2.2 Tình hình Việt Nam 15 1.4 Tổng quan loại bệnh khác cá cơng bố có dấu hiệu chẩn đoán xuất hạt đốm trắng nội tạng cá bệnh 21 1.4.1 Những nghiên cứu thông báo giới 21 1.4.2 Những loại bệnh cá có xuất đốm trắng nội tạng phát công bố Việt Nam 26 Chương 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .31 2.1 Đối tượng, thời gian địa nghiên cứu 31 2.2 Phương pháp nghiên cứu .31 2.2.1 Số mẫu phương pháp thu: .31 2.2.2 Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu: 32 2.2.3 Phương pháp nghiên cứu vi khuẩn 32 2.2.4 Phương pháp mô bệnh học (Histopathology method) 36 c Nhuộm tiêu mô bệnh học 37 ** Nhuộm Hematoxyline Eosin: 37 ** Nhuộm tiêu mô bệnh học theo phương pháp Ziehl-Neelsen 38 2.2.5 Thí nghiệm cảm nhiễm ngược với chủng vi khuẩn phân lập từ cá bệnh 38 .40 Bảng 2.1 Cảm nhiễm ngược chủng VK1 vào cá CVV khỏe mật độ vi khuẩn khác 41 2.2.6 Phương pháp nghiên cứu ký sinh trùng 42 2.2.7 Kỹ thuật kính hiển vi điện tử (KHVĐT) 42 2.3 Phương pháp xử lý số liệu .42 Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 43 3.1 Các dấu hiệu bệnh đốm trắng nội tạng cá chim vây vàng (Trachinotus blochii) nuôi Vũng Ngán, vịnh Nha Trang 43 3.3 Nghiên cứu tác nhân gây bệnh đốm trắng nội tạng cá chim vây vàng nuôi Vũng ngán vịnh Nha Trang, Khánh Hòa 53 3.3.1 Tác nhân virus 53 3.3.2 Tác nhân ký sinh trùng 53 3.3.3 Tác nhân vi khuẩn 54 3.3.3.1 Phát vi khuẩn tiêu phết 54 3.3.3.2 Kết phân lập vi khuẩn từ cá bệnh 56 3.3.3.3 Chụp vi khuẩn kháng acid mô cá CVV bị bệnh kính hiển vi iđện tử truyền qua (TEM) 58 3.3.3.4 Kết cảm nhiễm ngược chủng vi khuẩn phân lập vào cá CVV khỏe .59 3.3.3.5 Định dang vi khuẩn phản ứng sinh hóa truyền thống 64 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Ý KIẾN 66 Kết luận 66 Đề xuất ý kiến .66 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO .67 DANH MỤC VIẾT TẮT ctv: cộng tác viên KIA: Kligle Iron Agar VK1: chủng vi khuẩn phân lập từ môi trường Ogawa VK2: Chủng vi khuẩn phân lập từ môi trường tổng hợp CVV: cá chim vây vàng DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Xác định chẩn đoán tượng nhiễm vi khuẩn Nocardia spp cá nuôi số quốc gia châu Á (Labrie &ctv, 2008) 18 Bảng 3.1 Các dấu hiệu bệnh u sần dị dạng cá chim vây vàng quan sát mắt thường (n=47 cá bệnh) 44 Bảng 3.2 Một số đặc điểm loại vi khuẩn phân lập từ cá CVV 59 Bảng 3.3 Các đặc điểm sinh hóa VK1 phân lập từ cá CVV (Nha Trang) 65 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Ảnh cá chim vây vàng Hình 1.2: Bản đồ phân bố cá chim vây vàng giới Hình 1.3: Cá hồng đỏ (Lutjanus erythopterus) bị bệnh nhiễm trùng hệ thống vi khuẩn Nocardia spp 11 Hình 1.4: A vi khuẩn N seriolae bắt mầu Gram (+) dạng sợi phân nhánh nhuộm Gram; B vi khuẩn N seriolae bắt mầu hồng nhuộm ZiehlNeelsen.(1000X) 11 Hình 1.5: Biến đổi mô bệnh học nội tạng cá chim vây vàng (Trachinotus blochii) bị bệnh Nocardiosis (Nguồn Labrie, 2008) 12 Hình 1.6: Lồi cá Larimichthys crocea bị bệnh Nocardiosis với hạt trắng lách, thận cá bệnh 15 Hình 1.7: Cá lóc (Ophiocephalus argus ) bị nhiễm bệnh Nocardiosis bộc lộ hạt trắng thận cá bệnh 15 Hình 1.8: Mang bết dính hạt trắng xuất loại cá vàng (Seriola) 16 Hình 1.9: Các hạt trắng xuất lách loại cá đuôi vàng (Seriola) 16 Hình 1.10: Hình dạng vi khuẩn Hafnia alvei - trực khuẩn G(-) (ảnh bên trái), có biểu ký sinh đại thực bào (ảnh bên phải) 20 Hình 1.11: Vi khuẩn Clostridium trực khuẩn G(+),có nội bào tử (A); có tiên mao (C); có xâm nhập nội bào (B) 21 Hình 2.1: Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu đề tài 24 Hình 2.2: Sơ đồ khối mơ tả bước thực nghiên cứu tác nhân vi khuẩn từ cá bệnh 27 Hình 2.3: Quy trình nghiên cứu mô bệnh học cá xương 30 Hình 2.4 Sơ đồ bố trí thí nghiệm cảm nhiễm ngược lên cá chim vây vàng khỏe đợt I 32 Hình 3.1: Cá bị bệnh xuất nốt phồng rộp da, sau thời gian nốt phồng vỡ tạo thương tổn nhỏ mẫu nâu xám 37 Hình 3.2: Bệnh lý bộc lộ mang cá CVV bị bệnh đốm trắng nội tạng 37 Hình 3.3: Hình ảnh khối u cột sống lộ diện bóc phần 38 Hình 3.4 Khối u cột sống cá bệnh bị dị dạng (a); Trên thể cá bệnh lúc xuất nhiều dấu hiệu khác bệnh: u cột sống, nốt phồng rộp da thương tổn mang (b) 38 Hình 3.5 Các dấu hiệu gặp nội tạng cá CVV bị bệnh: 39 Hình 3.6 Hình ảnh cá chim vây vàng bị bệnh chết lồng nuôi Vũng Ngán vịnh Nha Trang 39 Hình 3.7: Biến đổi mô bệnh học tổ chức gan cá CVV bị bệnh đốm trắng nội tạng 41 Hình 3.8: Các biến đổi mơ bệnh học lách cá CVV bị bệnh đốm trắng nội tạng 41 Hình 3.9: Biến đổi mơ bệnh học thận cá chim vây vàng bị bệnh đốm trắng nội tạng 42 Hình 3.10 : Biến đổi mơ bệnh học vị trí xương xuất khối u (với H &E) 42 Hình 3.11 : Các biến đổi mô bệnh học tổ chức mang cá CVV bị bệnh 43 Hình 12 : Đặc điểm mô bệnh học điểm bị phồng rộp thương tổn cá chim vây vàng bệnh đốm trắng nội tạng 43 Hình 3.13: Các thương tổn dạng hạt nhuộm phương pháp Ziehl- Neelsen (độ phóng đại 400x ) Các vật chất kháng acid bắt mầu hồng bên vùng thương 44 Hình 14 Một trực khuẩn dạng sợi mảnh, phân nhánh, Gram (+) có mầu hồng Fuchsin nhuộm phương pháp Ziehl-Neelsen phát tiêu phết mô nội tạng cá CVV bị bệnh 47 Hình 3.15 Hình dạng khuẩn lạc tế bào loại vi khuẩn phân lập từ cá CVV bị bệnh 45 Hình 3.16 Vi khuẩn dạng sợi dài, chẻ nhánh, có đốt tìm thấy mô thận cá CVV bị bệnh đốm trắng nội tạng (Ảnh chụp kính hiển vi điện tử -TEM): 50 Hình 3.17 Tỷ lệ chết tích lũy cá cảm nhiễm đợt 52 Hình 3.18: Dấu hiệu bộc lộ cá thí nghiệm sau tiêm chủng VK1 vào ổ bụng (0,1ml/cá ) với liều 106 tế bào/ml 12 ngày 53 Hình 3.19 Tỷ lệ chết tích lũy cá bị cảm nhiễm chủng VK1 huyền dịch có mật độ vi khuẩn khác 54 Hình 3.20: Kết phản ứng sinh hóa ủ nhiệt độ 26oC ngày 55 MỞ ĐẦU Cá chim vây vàng (Trachinotus blochii), có giá trị dinh dưỡng cao, tốc độ sinh trưởng nhanh năm đầu, thích hợp cho nuôi tăng sản [3] Cá chim vây vàng (CVV) đối tượng nuôi đem lại lợi nhuận cao cho nhiều nước khu vực Trung Quốc, Indonesia, Đài Loan, Nhật Bản… Năm 2006, loài cá nhập vào Việt Nam từ Trung Quốc nhà khoa học Trường cao đẳng thủy sản Bắc Ninh Từ năm 2009, cá CVV thử nghiệm nuôi cho đẻ nhân tạo Trường Đại học Nha Trang Cơng trình thử nghiệm bước đầu thu thành công sinh sản nhân tạo ni thương phẩm lồi cá lồng biển đặt Vịnh Nha Trang Con giống cá CVV cung cấp cho nhiều nông hộ nuôi thương phẩm tỉnh Nam Trung Phú Yên, Ninh Thuận đối tượng cá biển nhận quan tâm nhiều người dân nuôi trồng thủy sản ven biển Tuy nhiên, bệnh tác hại bệnh vấn đề gây khó khăn cho nghề ni cá biển nói chung, đặc biệt cá CVV, đối tượng nuôi Việt Nam Vào tháng năm 2010, cá CVV cỡ 6-10cm nuôi lồng Vịnh Nha Trang xuất dạng bệnh lạ với dấu hiệu đặc trưng: nốt phồng rộp nhỏ da, sau vỡ tạo nên điểm thương tổn nhỏ màu nâu Mang cá bệnh tiết nhiều dịch nhày với vùng thương tổn hạt nhỏ màu trắng đục Một số khối u xuất cột sống, khối u lớn làm cột sống bị cong, gây dị dạng cho cá bệnh Giải phẫu ổ bụng quan sát hạt trắng nhỏ xuất số nội tạng như: thận, lách gan cá bệnh Khi cá CVV bị bệnh gây chết nhiều cá lồng nuôi, tỷ lệ chết số lồng lên tới 50% sau 15 ngày phát bệnh Cho đến năm 2010, chưa có nghiên cứu bệnh cá CVV Việt Nam công bố Do vậy, nghiên cứu bệnh cá CVV để tìm tác nhân gây bệnh yêu cầu thực tiễn Để hồn thành chương trình đào tạo thạc sỹ ngành Nuôi trồng Thủy sản, Trường Đại học Nha Trang, Khoa Nuôi trồng Thủy sản cho phép thực đề tài luận văn cao học: “ Nghiên cứu bệnh đốm trắng nôi tạng cá chim vây vàng (Trachinotus blochii Lacepède, 1801), nuôi lồng Vũng Ngán, Nha Trang,Khánh Hòa” Mục tiêu đề tài: Xác định tác nhân gây bệnh đốm trắng nội tạng cá chim vây vàng Nội dung đề tài: Mô tả dấu hiệu cá CVV bị bệnh đốm trắng nội tạng Đặc điểm mô bệnh học cá CVV bị bệnh đốm trắng nội tạng Xác định tác nhân gây bệnh đốm trắng nội tạng cá CVV Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài  Ý nghĩa khoa học: Cung cấp tư liệu bệnh cá CVV nuôi bổ sung vào danh mục bệnh cá biển nuôi Việt Nam  Ý nghĩa thực tiễn: Kết đề tài làm sở cho đề xuất phòng trị bệnh đốm trắng nội tạng cá CVV ni Nha Trang, Khánh Hịa Mặc dù cố gắng nhiều nghiên cứu bệnh cá biển lĩnh vực với thân, luận văn khơng tránh khỏi sai sót định Kính mong nhận đóng góp ý kiến lượng thứ quý Thầy Cô, anh chị bạn đồng nghiêp Học viên thực Dương Văn Q Bình 10 Thí nghiệm kéo dài 14 ngày, cá nghiệm thức tiêm huyền dịch VK1 (106 tế bào/ml) bắt đầu chết vào ngày thứ 12 kể từ tiêm chết 100% vào ngày thứ 14 Trong đó, khơng có cá bị chết suốt thời gian thí nghiệm 14 ngày nghiệm thức tiêm chủng VK2 nghiệm thức đối chứng Những cá hấp hối chết nghiệm thức tiêm chủng VK1 bộc lộ dấu hiệu giống cá bị bệnh tự nhiên: xuất nốt phồng từ da, bụng cá phình to cứng Mang, gan, thận, lách nội tạng khác xuất hạt trắng Tuy nhiên cá xuất dấu hiệu u cột sống Các tiêu phết mô cá hấp hối thể nhiễm nặng loại vi khuẩn dùng để tiêm vào cá khỏe Từ kết thí nghiệm cảm nhiễm đợt 1, chúng tơi nhận đinh rằng, tác nhân gây bệnh đốm trắng nội tạng cá CVV nuôi Nha Trang vi khuẩn VK1, lồi vi khuẩn dạng sợi, dài khơng đồng nhất, từ đến hàng chục µm, tế bào phân nhánh nhiều, có đốt, Gram (+) kháng aicd, mọc chậm môi trường Ogawa không mọc mơi trường dinh dưỡng thơng thường Cá thí nghiệm chết tượng cảm nhiễm hệ thống loài vi khuẩn 61 A C B E D Hình 3.18: Dấu hiệu bộc lộ cá thí nghiệm sau tiêm chủng VK1 vào ổ bụng (0,1ml/cá ) với liều 106 tế bào/ml 12 ngày: A Cá đối chứng có da nội tạng bình thường: B sau tiêm VK1 ngày, nốt phồng từ da cá bắt đầu xuất hiện, sang đến ngày thứ 10, bụng cá phình to cứng C & D: Gan, lách nội tạng cá bị cảm nhiễm VK1 tăng thể tích xuất nhiều đốm trắng nhỏ E Vi khuẩn VK1 phân lập từ cá bị bệnh thí nghiệm cảm nhiễm (Nhuộm Ziehlb Cảm nhiễm đợt II để xác định động lực vi khuẩn VK1 Neelsen) b Cảm nhiễm đợt 2, cảm nhiễm với chủng VK1 nồng độ khác Các khuẩn lạc chủng vi khuẩn VK1, đưa vào nước muối sinh lý vô trùng để tạo huyền dịch với mật độ vi khuẩn khác nhau, là: 104, 105, 106, 107 108 tb/ml Cá CVV với kích cỡ từ 8-10cm đưa từ trại thực nghiệm cá biển Ba Làng sở thí nghiệm để bố trí cảm nhiễm 0,1ml huyền dịch nói tiêm vào ổ bụng cá vị trí gốc vây bụng Mỗi nghiệm thức bố trí 10 cá xơ 120 lít Thí nghiệm thực thời gian thời tiết xấu, trời mưa tầm tã suốt ngày đêm, Nhiệt độ dao động 24- 26oC pH: 7,4 – 7.8 Độ mặn: 28 – 30 o/oo Kết 62 cảm nhiễm trình bày biểu đồ sau Tỷ lệ chết tích lũy cá thí nghiệm thể hình 3.18 120 tỷ lệ chết tích lũy 100 80 NT1 NT2 NT3 60 NT4 NT5 ĐC 40 20 10 11 12 13 ngày thí nghiệm Hình 3.19 Tỷ lệ chết tích lũy cá bị cảm nhiễm chủng VK1 huyền dịch có mật độ vi khuẩn khác (Trong 104 tb/ml (NT1), 105tb/ml (NT2), 106tb/ml(NT3), 107tb/ml (NT4), 108 tb/ml (NT5) nghiệm thức đối chứng tiêm 0,1ml nước muối sinh lý vô trùng vào ổ bụng) Kết cảm nhiễm ngược hình 3.18, lần chứng tỏ rằng, cá CVV bắt đầu chết ngày thứ sau bị tiêm 0,1ml chủng VK1 liều cao (NT3, NT4, NT5 NT6) chết vào ngày thứ nghiệm thức tiêm với liều thấp (NT1: 104 tb/ml) Cá nghiệm thức tiêm vi khuẩn đợt thứ chết 100% vào ngày thứ 7, 9, 10, 11 thứ 12 tương ứng với liều tiêm tăng dần, cá lô đối chứng sống 100% kết thúc thí nghiệm Từ kết chúng tơi tính liều gây chết 50% ngày thứ LD50=3,2 x 104 tb/ml So với đợt thí nghiệm thứ nhất, tượng cá chết đợt thứ xảy sớm hơn, điều liên quan tới điều kiện khí hậu, thời 63 tiết, đặc biệt nhiệt độ Đợt thí nghiệm thứ trùng với thời gian mưa to kéo dài Nha Trang, nhiệt độ nước thấp (24-260C), yếu tố mơi trường bất lợi làm cho cá thí nghiệm mẫn cảm với chủng vi khuẩn cảm nhiễm Cá bị bệnh nghiệm thức bị cảm nhiễm chủng VK1 bộc lộ dấu hiệu bên bên ổ bụng giống cá bị bệnh ngồi lồng ni, nhiên khơng có cá bộc lộ khối u cột sống Mặc dù vậy, cá bị bệnh tự nhiên, đốm trắng dạng hạt phát bề mặt khối u cột sống (hình 3.3) Do vậy, chúng tơi cho khối u cột sống hình thành dạng bệnh mãn tính, cịn cảm nhiễm nhân tạo, số lượng vi khuẩn không nhỏ đưa vào thể cá, cá bệnh có bệnh lý diễn biến nhanh, làm cá chết trước xuất khối u Tuy nhiên, vấn đề cần nghiên cứu Tóm lại: Sau đợt cảm nhiễm ngược chủng VK1 vào cá khỏe, cho phép kết luận rằng, VK1 chủng vi khuẩn có độc lực cao, tác nhân gây bệnh đốm trắng nội tạng cá CVV nuôi Nha Trang 3.3.3.5 Định dang vi khuẩn phản ứng sinh hóa truyền thống Chủng vi khuẩn VK1 dã kiểm tra đặc điểm sinh hóa phương pháp truyền thống Vi khuẩn cấy vào môi trường O/F, KIA, mannitol, glucose, galactose, arabinose, sucrose, mantolse, mannose có bổ sung thêm 2% NaCL 2% nấm men (thích hợp với loại vi khuẩn kháng acid) Ngoài phản ứng Oxydase, Catalase thực Các phản ứng sinh hóa ủ 26oC đọc kết sau ngày Hình 3.20: Kết phản ứng sinh hóa ủ nhiệt độ 26oC ngày 64 Kết thu từ phản ứng sinh hóa tra hệ thống phân loại Bergey so sánh với cơng trình cơng bố tác giả trước để bước đầu định danh loại vi khuẩn gây bệnh đốm trắng nội tạng cá CVV nuôi Nha Trang Bảng 3.3: Các đặc điểm sinh hóa VK1 phân lập từ cá CVV (Nha Trang) Phản ứng sinh hóa Gram Nhuộm Ziehl-Neelsen Đặc điểm khuẩn lạc Đặc điểm tế bào vi khuẩn Nha Trang Chen & ctv Wang & ctv (2010) (2000) (2007) + + + Màu hồng Màu hồng Màu hồng Trắng kem, Trắng kem, Trắng kem, khô nhăn khô nhăn khô nhăn nheo bề nheo bề nheo bề mặt mặt mặt Sợi mảnh, Sợi mảnh, Sợi mảnh, phân đốt, phân phân đốt, phân đốt, nhánh phân nhánh phân nhánh kháng acid kháng acid kháng acid Cytochrom Oxydase _ _ _ Catalase + + + O/F _ _ Glucose _ _ _ Sucrose + Lactose _ _ _ Mannitol _ _ _ Maltose _ _ _ Mannose _ _ _ Galactose _ _ _ Khả sinh _ _ _ Khả sinh H2S _ _ _ Khả di động _ _ _ Mặc dù số phản ứng sinh hóa khác chưa thực được, với phản ứng thực hiện, cho thấy chủng vi khuẩn VK1 phân lập từ cá CVV nuôi Nha Trang thuộc giống vi khuẩn Nocardia (nhóm 22: Nocardioform Actinomycetes) hệ thống phân loại Bergey (1994) Mặc khác, đặc điểm sinh hóa phát VK1 gần giống với loài Nocardia seriolae công bố Chen & ctv (2000) Wang & ctv (2007) phân lập từ cá đuôi vàng (Seriola quinqueradiata) Nocardia seriolae Labrie (2008) phân lập từ cá chim vây vàng (Trachinotus blochii) nuôi quốc gia châu Á 65 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Ý KIẾN Kết luận Các dấu hiệu có ý nghĩa chẩn đốn cá CVV bị bệnh đốm trắng nội tạng có dấu hiệu bên ngồi xuất nốt phồng rộp da, bệnh nặng tạo thàng vết lở loét, mang bị hoại tử xuất đốm trắng Trên thể xuất khối u dọc xương sống Các đốm trắng dạng hạt xuất nhiều nội tạng lách, gan, thận khoang bụng cá Biến đổi mô bệnh học đặc trưng nội tạng cá CVV bị bệnh đốm trắng nội tạng có nhiều thương tổn dạng u hạt nhiều tế bào máu công bao vây xung quanh vị trí thương tổn Tác nhân gây bệnh đốm trắng nôi tạng cá CVV nuôi Vịnh Nha Trang loại trực khuẩn Gram dương dạng sợi mảnh, phân nhánh, phân đốt kháng acid Bằng phản ứng sinh hóa xác định chúng thuộc loài Nocardia sp tương tự loài Nocardia seriolae Đề xuất ý kiến Do chủng vi khuẩn thuộc loại khó ni cấy mơi trường tổng hợp làm phản ứng sinh hóa khó khăn Vì vậy, nên nghiên cứu tiến hành định danh vi khuẩn kỹ thuât phân tích gen Tác nhân gây bệnh đốm trắng nội tạng cá CVV vi khuẩn có khả cảm nhiễm hệ thống Vì vậy, cần tiến hành làm kháng sinh đồ với chủng vi khuẩn từ đưa phướng pháp trị bệnh kháng sinh 66 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt: Từ Thanh Dung, 2004; xác định vi khuẩn gây bệnh trắng gan cá tra (Pangasius hypophthalmus) Tạp chí khoa học Đại học Cần Thơ 2004: 137-142 Nguyễn văn Dũng, 2009: Ảnh hưởng mật độ nuôi đến chất lượng môi trường nước, tốc dộ tăng trưởng, bệnh hiệu kinh tế cá tra nuôi thâm canh ao đất xã Châu Bình, Huyện Giồng Trơm, tình Bến Tre Luận văn cao học chuyên ngành nuôi trồng thủy sản, 45 trang Nguyễn Kim Độ, Thái Bá Hồ, Ngô Trọng Lư, 2004 Kỹ thuật ni số lồi cá Trong cuốn: Kỹ thuật nuôi cá lồng biển, tập (Ngô Trọng Lư chủ biên), trang 33- 108 Nhà xuất Nơng Nghiệp, TP Hồ Chí Minh Đồng Thanh Hà, 2008, nghiên cứu xác định tác nhân gây bệnh “mủ gan thận” cá tra (pangasius hypophthalmus) nuôi Bến Tre Tạp chí Thủy Sản 2008 Đỗ Thị Hòa, Bùi Quang Tề, Nguyễn Hữu Dũng, Nguyễn Thị Muội, 2004 Giáo trình bệnh học thủy sản Nhà xuất Nơng Nghiệp 2004 Đỗ Thị Hịa, Trần Vĩ Hích, Nguyễn Thị Thùy Giang, Phan Văn Út Nguyễn Thị Nguyệt Huệ, 2008: Các bệnh thường gặp cá biển ni Khánh Hịa Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Thủy sản, số 2/2008, trang 16-24 Hà Ký, Bùi Quang Tề, 2007 Ký sinh trùng cá nước Việt Nam Nhà xuất khoa học kỹ thuật 2007 Lý Thị Thanh Loan, 2007 Bước đầu phát Clostridium sp cảm nhiễm cá tra (Pangasius hypophthalmus) nuôi ĐBSCL Việt Nam Trung tâm quốc gia quan trắc, cảnh báo mơi trường phịng ngừa dịch bệnh thủy sản khu vực Nam - Viện nghiên cứu NTTS II Trần Thị Minh Tâm, 2003 Nghiên cứu tác nhân gây bệnh hoại tử quan nội tạng cá tra (Pangasius hypophthalmus) Tuyển tập nghề cá sông Cửu Long (số đặc biệt) 67 10 Trần Thị Minh Tâm, 2003 Nghiên cứu bệnh đốm trắng cá tra (Pangasius hypophthalmus) nuôi công nghiệp Báo cáo tổng kết đề tài SUFA tài trợ– Viên nghiên cứu NTTS II 11 Nguyễn Quốc Thịnh, Từ Thanh Dung, Ferguson H.W, 2004 Nghiên cứu mô bệnh học cá tra (Pangasius hypophthalmus) bị bệnh trắng gan Tạp chí khoa học Đại học Cần Thơ 2004: 120-125 12 Nguyễn Hữu Thịnh, 2007 Phân lập khảo sát đặc điểm kháng kháng sinh Edwardsiella ictaluri gây bệnh gan thận mủ cá tra (Pangasius hypophthalmus) ni thâm canh Tạp chí KHKT Nơng Lâm nghiệp số 1&2/2007 13 Nguyễn Thị Thương, 2009: Nghiên cứu dịch tễ học bệnh gan thận có mủ cá tra nuôi thương phẩm ao đất Bến Tre Luận văn cao học chuyên ngành nuôi trồng thủy sản, 52 trang 68 Tài liệu tiếng anh 14 Brandsen, M.P., Carson, J., Munday, B.L., Handingler, J.H., Carter, C.G and Nowak, B F 2000 Nocardiosis in tank reared Atlantic salmon, Salmo salar L J Fish Dis 23: 83-85 15 Chen, S.C., 1992 In vitro susceptibility of Nocardia to several commonly used disinfectants Journal of Fish Diseases 16, 345–348 16 Chen, S.C., Lee, J.L., Lai, C.C., Gu, Y.W., Wang, C.T., Chang, H.Y, Tsai, K.H., 2000 Nocardiosis in sea bass, Lateolabrax japonicus, in Taiwan Journal of Fish Diseases 23, 299–307 17 Chen, S.C., Tung, M.C., 1991 An epizootic in large mouth bass, Micropterus salmoides, Lacepede caused by Nocardia asteroids in freshwater pond in southern Taiwan Journal of Chinese Society of Veterinary Science 17, 15–22 18 Chen, S.C., Tung, M.C., Tsai, W.C., 1989 An epizootic in Formosa snake-head fish, C maculata Lacepede, caused by Nocardia asteroides in fresh water pond in southern Taiwan COA Fisheries Series Reports on Fish Diseases Research (IX) Republic of China, vol 15, pp 95–105 19 Chen, S.C., Wang, P.C., 1993 In vitro activity of antimicrobial agents to Nocardia Journal of Fish Diseases 16, 269–272 20 Chen, S-C 1992 Study on the pathogenicity of Nocardia asteroides to Formosa snakehead, Channa maculate (Lacepede) and Largemouth bass, Micropterus salmoides (Lacepede) J Fish Dis 15: 47-53 21 Cheng, S.C 1990 Reports on the artificial propagation of pompano (Trachinotus blochii) Fish World 4: 140-146 22 Edward J Noga, M.S., D.V.M Fish disease (diagnosis and treatmet) 23 Ferguson H.W, Turbull J.F, Shinn A.P, Thompson K, Dung T T and Crumlish M, 2001 Bacillary necrosis in farmed Pangasius hypophthalmus from the Mekong delta, Viet Nam Journal of fish disease 24, 509-513 69 24 Friedman, C.S., Hedrick, R.P., 1991 Pacific oyster nocardiosis: isolation of the bacterium and induction of laboratory infections Journal of Invertebrate Pathology 57, 109–120 25 Ho JS, CL Lin, SN Chen 2000 Species of Caligus Muller, 1785 (Copepoda: Caligidae) parasitic on marine fishes of Taiwan Syst Parasitol 46: 159-179 26 Hsiang Pin Lan1, Michael C Cremer, Jesse Chappell John Hawke, Tim O’Keefe “Growth Performance of Pompano (Trachinotus blochii) Fed Fishmeal and Soy Based Diets in Offshore OCAT Ocean Cages” Results of the 2007 OCAT Cage Feeding Trial in Hainan, China 27 Isik, K., Chun, Hah, Y.C and Goodfellow, M 1999 Nocardia salmonicida nom rev., a fish pathogen Int J Syst Bacteriol 2: 833-837 28 Itano, T and Hidemasa, K 2002 Drug susceptibility of recent isolates of Nocardia seriolae from cultured fish Fish Pathol 37: 152-154 29 Itano, T., Kawakami, H., Kono, T., Sakai, M., 2006b Live vaccine trials against nocardiosis in yellowtail Seriola quinqueradiata Aquaculture 261, 1175–1180 30 Juniyanto N M., Akbar S and Zakimin, 2008 Breeding and seed production of silver pompano (Trachinotus blochii Lacepede, 1801) at the Mariculture Development Center of Batam Aquaculture Áia Magazine, Vol XIII No April – June 2008, 46 – 48 31 Kariya, T., Kubota, S., Nakamura, Y and Kira, K 1968 Nocardial infection in cultured yellowtail, Seriolae quinqueradiata and S purpurascens I Bacteriological study Fish 32 Kei Yuasa, Edy Barkat Kholidin, Novita Panigoro, Kishio Hatai, 2003 First isolation of Edwardsiella ictaluri from cultured striped catfish Pangasius hypophthalmus in Indonesia Fish pathology, 38 (4), 181-183, 2003.12 33 Kubota, S., Kariya, T., Nakamura, Y., Kira, K., 1968 Nocardial infection in cultured yellow tail, Seriola quinqueradiata and S purpurescens II Histological study Fish Pathology 3, 24–33 70 34 Kudo, T., Hatai, K., Seino, A., 1988 A Nocardia seriolae sp nov causing nocardiosis of cultured fish International Journal of Systematic Bacteriology 38, 173–178 35 Kumamoto, H., Horita, Y., Hatai, K., Kubota, S., Isoda, M., Yasumoto, S and Yasunaga, N 1985 Studies n fish nocardiosis I Comparison in the histopathology of both yellowtails, Seriola quinqueradiata experimentally inoculated and those naturally infected with Nocardia kampachi Bull Nippon Vet Zootech Coll 34:110-118 36 Kusuda, R, Nakagawa, A, 1978 Nocardia infection of culture yellowtall Fish Pathology 13, 25-31 37 Kusuda, R., Taki, H and Takeuchi, T 1974 Studies on infection of cultured yellowtail-II, characteristics of Nocardia kampachi isolated from a gill tuberculosis of yellowtail Bull Jap Soc Scientific Fisheries 40:369-373 (In Japanese with English abstract) 38 Labrie, L., Ng, J., Tan, Z., Komar, C., Ho, E and Grisez, L 2008 Nocardial infections in fish: an emerging problem in both freshwater and marine aquaculture systems in Asia, pp 297-312 39 Lan P H., Cremer C M., Chappell J., Hawke J., O’Keefe T Growth performance of Pompano (Tranchinotus blochii) fed fishmeal and soy based diets in offshore OCAT ocean cages Result of the 2007 OCAT cage feefing trial in Hainam, China U.S Soybean Export Council, 12125 Woodcrest Executive Drive Suite 140, St Louis, MO 40 Lavinia EM 1977 The biology and control of Caligus sp An ectoparasite of the adult milkfish Chanos chanos Forskal SEAFDEC Res Rep 1977: 12-13 41 Lee Seong Wei, Najiah Musa, Wee Wendy “Bacteria associated with golden pompano (Trachinotus blochii) broodstock from commercial hatchery in Malaysia with emphasis on their antibiotic and heavy metal resistances” Front Agric China 2010, application in the identification of Nocardia seriolae by polymerase chain reaction Aquaculture Res 33: 1195-1197 71 42 Lin CL, JS Ho, SN Chen 1994 Two species of Caligus (Copepoda: Caligidae) parasitic on black sea bream (Acanthopagrus schlegeli) cultured in Taiwan Fish Pathol 29: 253-264 43 Lin CL, JS Ho, SN Chen 1996 Two species of Caligidae (Copepoda) parasitic on cultured rabbit fish (Siganus fuscescens) in Taiwan Fish Pathol 31: 129-139 44 Lin CL, JS Ho, SN Chen 1997 Development of Caligus multispinosus Shen, a caligid copepod parasitic on black sea bream (Acanthopagrus schlegeli) cultured in Taiwan J Nat Hist 31: 1483-1500 45 Lin CL, JS Ho 1993 Life history of Caligus epidemicus Hewitt, parasitic on the tilapia (Oreochromis mossambica) cultured in salt water In GA Boxshall, D Defaye, eds Pathogens of wild and farmed fish: sea lice Chichester, UK: Ellis Horwood, pp 5-15 46 Lin CL, JS Ho 1998 Two new species of ergasilid copepods parasitic on fishes cultured in brackish water in Taiwan Proc Biol Soc Wash 111: 15-27 47 Liu Chung Ping, Ji Yang Lin and Kuo Kau Lee (2003): Virulence of Photobacterium damsela Subsp Piscicida in Cultured cobia Rachycentron canadum In Basic Microbiol.42 (2003) 6, 499-507 48 Loan Thi Thanh Ly, Du Ngoc Nguyen, Vo Hong Phuoc and Cuong Van Doan (2007): Hemorrhage Disease of cultured Tra Catfish (Pangasianodon hypophthalmus) in Mekong Delta (Viet Nam) In SEAFDEC International Workshop on Emerging fish diseases in Asia P 215-224 49 M Crumlish, T T Dung, J F Turnbull, N T N Ngoc and H W Ferguson, 2002 Identification of Edwardsiella ictaluri from diseased freshwater catfish Pangasius hypophthalmus cultured in Mekong delta, Viet Nam Journal of fish diseases 2002, 25, 733-736 50 Novita Panigoro, Melira Bahnan, Edy Barkat and Kei Yuasa, 2005 Pathogenicity of Edwardsiella ictaluri to diffirent kinds of fish World aquaculture society Bali conference, 2005 www.google.com keyword: Edwardsiella icctaluri 72 51 OIE, 2000 Bacterial kidney disease (Renibacterium salmoninarum) OIE aquatic animal disease card, september 2000 52 OIE, 2000 Piscirickettsiosis (Piscirickettsia salmoninarum) OIE aquatic animal disease card, september 2000 53 Pathol 3: 16-23.Kono, T., Ooyama, T., Chen, S.-C and Sakai, M 2002 Sequencing of 16S-23S rRNA internal transcribed spacer and its 54 Salonius, K., Siderakis, C.W., MacKinnon, A.M., 2005 Use of Arthobacter davidanieli as a live vaccine a gainst Renibacterium salmoninarum and Piscirickettsia salmonis in Salmonids In: Middyng, P.J (Ed), Progress n Fish Vaccinology, Dev Biol Basel, Karger, vol 121, pp 189-197 55 Shimahara, Y., Yasuda, H., Nakamura, A., Itami, T., 2005 Detection of antibody responses against Nocardia seriolae by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and a preliminary vaccine trial in yellowtail Seriolae quinqueradiata Bulletin of The European Association of Fish Pathologists 25, 270-275 56 Tonguthai K , S Chinabut, T Somsiri., P Chanratchakool Kanchanakhan 1999: Diagnostic procedures for finfish diseases and S Aquatic Animal Health Research Institute 57 Wang , G.L., Xu, Y.J., Jin S J.L., Zhu S.P., 2007 Nocardiosis in snakehead, Ophiocephalus argus Cantor Aquaculture 271: 54–60 58 Wang, G.L., Yuan, S.P., Jin, S., 2005 Nocardiosis in large yellow croaker, Larimichthys crocea (Richardson) Journal of Fish Diseases 28, 339–345 59 Whitman K.A and N.G MacNair 2004: Finfish and Shellfish Bacteriology Manual Techniques and Procedures Lowa State Press, 258pp 60 Wu Z, J Pan.1997 A study on lice disease in cultured grouper Epinephelus sp I description of the pathogen Caligus nanhaiensis n.sp Trop Oceanol./Redai Haiyang 16: 60-65 61 Zhang, J.L., Liu, Z.H., 2001 Taxonomy of the Nocardiofor mactinomycetes Acta Microbiologica Sinica (in Chinese) 41,513–517 73 PHỤ LỤC BẢNG 1: Kết dõi tỷ lệ chết cá chim vây vàng cảm nhiễm đợt với hai chủng vi khuẩn VK1 VK2 Số cá chết ngày thí nghiệm Ngày thí nghiệm ĐC VK1 VK2 12-Oct 0 13-Oct 0 14-Oct 0 15-Oct 0 16-Oct 0 17-Oct 0 18-Oct 0 19-Oct 0 20-Oct 0 21-Oct 0 22-Oct 0 23-Oct 24-Oct 25-Oct VK1 chủng vi khuẩn phân lập môi trường Ogawa VK2 chủng vi khuẩn phân lập môi trường tổng hợp (TSA) Điều kiên thí nhiệm Nhiệt độ 28-29oC pH: 7,8 – 8,0 Độ mặn 300/00 74 Bảng 2: Kết dõi tỷ lệ chết cá chim vây vàng cảm nhiễm đợt với nồng độ khác chủng vi khuẩn VK1 Ngày thí nghiệm 10-Nov 11-Nov 12-Nov 13-Nov 14-Nov 15-Nov 16-Nov 17-Nov 18-Nov 19-Nov 20-Nov 21-Nov 22-Nov NĐ NĐ 0 0 0 1 NĐ 0 0 1 1 NĐ 0 0 1 1 NĐ 0 0 0 3 0 0 0 đôi chứng 0 0 0 0 0 NĐ 4: 104tế bào/ ml; NĐ 5: 105tế bào/ ml; NĐ 6: 106tế bào/ ml; NĐ 7: 107tế bào/ ml NĐ 8: 108tế bào/ ml; ĐC NaCl 0,85% Điều kiện thí nghiệm Nhiệt độ: 24- 26oC pH: 7,4 – 7.8 Độ mặn: 28 – 30 o/oo 75 ... Nghiên cứu bệnh đốm trắng nôi tạng cá chim vây vàng (Trachinotus blochii Lacepède, 1801), nuôi lồng Vũng Ngán, Nha Trang ,Khánh Hòa? ?? Mục tiêu đề tài: Xác định tác nhân gây bệnh đốm trắng nội tạng. .. 3.1 Các dấu hiệu bệnh đốm trắng nội tạng cá chim vây vàng (Trachinotus blochii) nuôi Vũng Ngán, vịnh Nha Trang 43 3.3 Nghiên cứu tác nhân gây bệnh đốm trắng nội tạng cá chim vây vàng nuôi. .. thận cá bị bệnh e Hình Hình ảnh cá chim vây vàng bị bệnh chết lồng nuôi Vũng Ngán vịnh Nha Trang 47 3.2 Kết nghiên cứu mô bệnh học cá chim vây vàng bị bệnh đốm trắng nội tạng Có cá bệnh cá khỏe