Chương ĐÁNH GIÁ VÀ SỬ DỤNG NGUỒN GEN Vai trò nguồn gen cải tiến giống trồng khẳng định, nhiên thu thập, bảo tồn sử dụng nguồn gen nước phát triển cịn hạn chế Nguồn gen sử dụng có hiệu cần có thơng tin đầy đủ xác, giúp nhà chọn giống lựa chọn, sử dụng chương trình tạo giống Đánh giá nguồn gen thực tất giai đoạn thu thập bảo tồn nguồn gen thực vật Mỗi mẫu nguồn gen thu thập bao gồm nhiều loại : loài hoang dại, giống địa, giống địa phương, giống giao phấn tự nhiên, giống thương mại (giống thuần, giống thu phấn tự giống lai), dòng, biến dị, dòng đơn bội, đột biến tự nhiên Để nhận biết, phân biệt cần có đánh giá cách hệ thống, chi tiết đặc điểm hình thái, sinh lý, thực vật học, nông sinh học, suất, khả chống chịu nguồn gen 5.1 NHÂN TĂNG SỐ LƯỢNG HẠT Bước qúa trình đánh giá nhân để tăng số lượng hạt, nhân tăng lượng hạt để phòng rủi ro nguồn gen, đặc biệt mẫu nguồn gen khơng có khả thích nghi mẫu nguồn gen mẫn cảm với sâu bệnh, lẫn giới thay đổi di truyền so với di truyền gốc chọn lọc người hay chọn lọc tự nhiên Trong trình nhân tăng số lượng hạt thu thập thêm thơng tin nguồn gen thu thập bổ sung thông tin ban đầu (passport data) mà q trình thu thập cịn thiếu giai đoạn sinh trưởng phát triển nguồn gen, tính trạng số lượng hay chất lượng cần thiết cho nghiên cứu nguồn gen Nguyên lý điểm kỹ thuật quan trọng cần áp dụng trình nhân tăng số hạt 5.1.1 Kỹ thuật nhân để giữ nguyên tính xác thực di truyền nguồn gen Xác định thời vụ nhân hạt: thời vụ nhân hạt nên chon thời vụ thích hợp nguồn gen Những yêu cầu ngoại cảnh nguồn gen khác nhiệt độ, độ ẩm , ánh sang, xạ, lượng mưa…Ngay loài trồng giống khác nhau, giai đoạn sinh trưởng khác yêu cầu môi trường khác Những yếu tố môi trường quan trọng cần quan xác định thời vụ gieo trồng nhân hạt nhiệt độ, ánh sáng, độ ẩm, lượng mưa Môi trường thuận lợi giúp cho nguồn gen sinh trưởng tốt, hạn chế đột biến, biến dị tự nhiên, sâu bệnh hại Chọn đất nhân hạt: đất chọn dự độ màu mỡ, thuận lợi tưới tiêu, độ pH phù hợp với loài giống cụ thể Ví dụ độ pH đất nhiệt độ tối ưu cho sinh trưởng số loài trồng sau: Bảng 5-1: Yêu cầu đất nhân hạt nguồn gen số loài TT Loài trồng Lúa (Oryza sativa L.) Đậu tương (Glycine max (L.) Merr) Cà chua (Lycopersicum esculentum L.) Cà tím (Solanummelogenla L ) Ớt ngọt(Capsicum annum L.) Ngơ ( Zea mays L.) Ngô đường (Zea mays var Saccharata) Dưa chuột (Cucumis sativus) Dưa hấu (Citrullus lunatus) Yêu cầu pH đất trồng Nhiệt độ tối ưu (oC) 6,0 – 7,0 18 - 30 5,8 - 6,5 20 - 30 5,5- 6,8 21 - 25 5,5 - 6,5 21- 29 6,5 – 7,5 18 - 27 6,0 – 7,0 20 -27 5,8 - 6,5 23 - 30 5,8 - 6,8 18-24 6,0 - 7,0 21-30 http://www.ebook.edu.vn 163 10 11 Bắp cải (Brassica oleracea) – 6,5 10 - 25 Su hào (Brassica canlorapa Pasq > 7,0 19 - 22 Brassica oleracea var caulorapa) 12 Su lơ (Brassica oleracea var botryis L ) 6,0 – 7,0 15 - 18 13 Cải củ (Raphanus sativus L) 6,0 – 6,5 18 – 25 14 Bí xanh (C pepo) 5,5 - 7,5 25 - 27 15 Mướp đắng (Momordica carantia) 6,0 – 6,7 24 – 27 16 Rau giền (Amaranthus spp.) 5,3 – 6,4 15 – 25 17 Hành (Allium cepa) 6,0 – 7,0 13 - 18 18 Carrot ( Daucus carota var sativus ) 5,5 –6,5 18 - 26 19 Khoai tây (Solanum tuberosum L.) 5,5 - 7,5 18 - 22 Cách ly: Cách ly không gian cách ly thời gian áp dụng nhân hạt nguồn gen Khi diện tích nhân khơng lớn áp dụng cách ly vật chắn bao cách ly Vệ sinh đồng ruộng, vệ sinh dụng cụ phương tiện canh tác, thu hoạch, chế biến để tránh lẫn giới khâu kỹ thuật quan trọng nhân hạt nguồn gen Đồng ruộng nhân hạt cần làm đất trước để diệt cỏ dại, sâu bệnh hạt vụ trước Những loài giao phấn quần thể phải đủ lớn tránh cận phối làm thay đổi nguồn gen, thả côn trùng vào khu vực sản xuất tăng suất nhân hạt 5.1.2 Bố trí thí nghiệm nhân hạt + Nhân hạt nguồn gen, số vật liệu lớn áp dụng thí nghiệm khơng lặp lại, số lần lặp lại + Diện tích ô thí nghiệm tùy thuộc vào khả quan nghiên cứu, lượng hạt gốc ban đầu nhu cầu lượng hạt để định diện tích nhân hạt + Kỹ thuật canh tác tối ưu với loài trồng + Chi tiết phương pháp thí nghiệm đánh giá nguồn gen phần 5.4 5.1.3 Các tiêu theo dõi + Lượng mẫu theo dõi nên theo dõi ≥ 30 cá thể mẫu nguồn gen + Chỉ tiêu theo dõi đơn giản ban đầu : - Đặc điểm quan trọng nhận biết nguồn gen - Đặc điểm hình thái - Đặc điểm nơng sinh học - Năng suất yếu tố tạo thành suất cá thể - Chống chịu sâu, bệnh - Một số tiêu chất lượng 5.2 HỆ THỐNG HĨA THƠNG TIN Nguồn gen cần phải đánh giá cách hệ thống để nhận biết đặc điểm sinh trưởng, phát triển, sinh lý hình thái tính trạng đặc thù chống chịu điều kiện bất thuận, chống chịu bệnh Để q trình đánh giá có sở xác cần hệ thống lại thơng tin có trước thực đánh giá Hệ thống hóa thông tin cần chuẩn bị tiêu bảng mơ tả, chun gia có chun mơn xây dựng mô tả sử dụng mô tả mẫu IPGRI, mô tả đảm bảo thuận tiện cho quản lý trao đổi nguồn gen Nhìn chung mơ tả bao gồm bốn phần sau: http://www.ebook.edu.vn 164 + Số liệu thu thập ban đầu (Passport data): bao gồm tồn thơng tin thời gian thu thập mẫu thông tin nguồn cung cấp mẫu Thơng tin có lợi cho tồn trình quản lý, bảo tồn sử dụng nguồn gen Ngồi thơng tin nguồn gen cần có thơng tin mơi trường khí hậu, đất đai, chế độ canh tác, địa phương, độ cao thu thập Thông tin địa điểm thu thập nguồn gen, khu vực thuộc làng/bản, xã, huyện, tỉnh, kinh độ, vĩ độ Loại mẫu nguồn gen thu thập, dòng, quần thể, giống địa phương, hoang dại, giống mới, điều kiện trồng trọt, điều kiện sinh thái… + Mô tả đặc điểm (Characterization) bao gồm đặc điểm di truyền cao nhìn thấy mắt tất mơi trường Mơ tả mơ tả chuẩn, so sánh với thông tin thu thập để nhận biết lâu dài mẫu nguồn gen Mơ tả bao gồm tất đặc điểm ví dụ số hạt, dạng bông, màu sắc đặc điểm hình thái khác 5.3 CÁC LOẠI THÍ NGHIỆM ĐÁNH GIÁ NGUỒN GEN 5.3.1 Đánh giá Đánh giá (Preliminary evaluation) bao gồm ghi nhận đặc điểm nông sinh học, sinh lý như đẻ nhánh thời gian hoa, thời gian chin mức giới hạn để cung cấp liệu cho nhà tạo giống Các nhóm đặc điểm quan trọng sau: (a) Số liệu địa điểm đánh giá: quan đánh giá, người đánh giá… (b) Số liệu trồng trọt: phương pháp nhân giống hạt, giâm hay ghép, tập tính, mật độ … (c) Đặc điểm lá: dạng lá, số lá, kích thước lá… (d) Đặc điểm hoa: xắp xếp hoa,vị trí hoa màu sắc, cấu tạo hoa, nhị, nhụy (e) Đặc điểm quả: thời gian hoa đến đậu quả, số dạng, suất, chiều dài quả, rộng quả, đường kính quả… (g) Đặc điểm hạt: kích thước hạt, màu sắc , khối lượng 5.3.2 Đánh giá mô tả đặc điểm chi tiết Đánh giá mô tả đặc điểm chi tiết (Further characterization and evaluation): bao gồm ghi nhận đặc điểm nơng học tiềm năng, đánh giá nhiều tính trạng ý nghĩa, rộng đánh giá chi tiết tiếp cận đa mô tả, điều kiện kiểm tra đặc thù Các đặc điểm phương pháp thu thập số liệu chia làm loại đặc điểm quan sát đặc điểm khơng thể quan sát Đặc điểm quan sát nhận biết nó, chúng biểu điều kiện gieo trồng bình thường trồng yêu cầu điều kiện đặc thù để biểu Chúng điều khiển đơn đa gen di truyền Đặc điểm bao gồm hình thái, sinh lý, hoa, suất, chất lượng thích nghi Đặc điểm khơng quan sát được: đặc điểm thường bị biến động môi trường đa gen, chúng phản ứng mạnh mơi trường khả thích nghi suất Có loại xác định đặc điểm bao chùm đặc điểm số lượng chất lượng W R Dillon M Goldstein, 1984 tóm tắt bảng 5-2 Một số thực tế cần xem xét trình đánh giá nguồn gen: phải áp dụng nguyên lý phương pháp linh hoạt, yếu tố ảnh hưởng đến đánh giá nhân hạt, trì quần thể giao phấn, trơi dạt di truyền, kích thước quần thể, môi trường tối ưu cho nhân http://www.ebook.edu.vn 165 đánh giá nguồn gen, phương pháp thí nghiệm đồng ruộng Những vấn đề phải đảm bảo tiêu chuẩn đánh giá nguồn gen xác Bảng 5-2: Các phương thức xác định số liệu nguồn gen (W R Dillon and M Goldstein, 1984) Mức Cơ sở quan sát Ví dụ Bản chất Đo đếm trực tiếp Chiều cao, ngày hoa, khối lượng củ , số hoa Tỷ lệ Sự tổ hợp hai phép đo trước tiếp Hệ số thu hoạch , % protein, dầu đường Thứ tự Ký hiệu mức, đơi chủ quan, gía trị Sự mẫn cảm với côn trùng, liên quan với mức tiêu chuẩn so sánh bệnh, dạng lá, dạng hạt, chất lượng chế biến Mô tả Ký hiệu tính trạng tính trạng chất Màu hoa, hạt , dạng hat lượng, phân loại 5.4 PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM ĐÁNH GIÁ NGUỒN GEN IPGRI, 2001 hướng dẫn cho thiết kế phân tích đánh giá nguồn gen, theo hướng dẫn số mẫu nguồn gen cho thí nghiệm đánh giá vài trăm mẫu, mẫu bố trí hàng ô Nhà nghiên cứu nên lựa chọn bố trí nguồn gen thí nghiệm theo nhóm thời gian sinh trưởng, nhóm nguồn gen Đối chứng cho thí nghiệm nghiên cứu nguồn gen đối chứng chuẩn có tính trạng tương ứng với nguồn gen để đối chiếu so sánh Đối chứng lặp lại theo tần suất khoảng số mẫu nguồn gen, gợi ý IPGRI mẫu nguồn gen có 01 đối chứng Chọn địa điểm thí nghiệm yêu cầu quan trọng đánh giá nguồn gen, điểm thí nghiệm đồng ruộng bình thường, khơng có điều kiện bất thuận hay canh tranh đặc thù Thí nghiệm nên lặp lại số năm, có kiểu gen tương tác với môi trường, lặp lại qua năm đánh giá xác Thí nghiệm đánh giá nhà có mái che áp dụng để đánh giá số tính trạng đặc thù chống bệnh Bố trí thí nghiệm sử dụng RCB, lattice alpha design, thu thập phân tích số liệu tương tự thí nghệm nơng nghiệp khác Các chương trình thống kê thường sử dụng MSTAT, SAS, P-LUS 5.4.1 Cơng thức thí nghiệm đánh giá nguồn gen Cơng thức thí nghiệm, nhân tố mức biến động cần hiểu rõ thí nghiệm đánh giá nguồn gen Nhân tố thí nghiệm yếu tố cần đánh giá thí nghiệm: ví vụ đánh giá 24 mẫu nguồn gen, mẫu nguồn gen nhân tố, thí nghiệm 01 nhân tố 24 mức, mẫu nguồn gen 24 mẫu cơng thức thí nghiệm Nhưng thí nghiệm đánh giá 24 mẫu nguồn gen thời vụ khác năm, trường hợp phải xác định nhân tố, nhân tố nguồn gen với 24 mức nhân tố thời vụ với mức Cơng thức thí nghiệm phối hợp mẫu nguồn gen thời vụ để riêng rẽ, số công thức 24 x =72 cơng thức thí nghiệm Khi thí nghiệm đánh giá 24 mẫu nguồn gen thời vụ mức đạm, thí nghiệm thí nghiệm nhân tố, nhân tố có 24 mức, nhân tố có mức Số cơng thức thí nghiệm 24 x x = 216 cơng thức thí nghiệm http://www.ebook.edu.vn 166 Thí nghiệm đánh giá nguồn gen thường áp dụng thí nghiệm 01 nhân tố mẫu nguồn gen, nhiên đơi có nghiên cứu đặc thù cho sở liệu hay sử dụng nguồn gen người ta thực thí nghiệm 02 nhân tố 5.4.2 Số lượng mẫu nguồn gen thí nghiệm đánh giá Cơng thức thí nghiệm đánh giá mẫu nguồn gen, giai đoạn đầu số lượng mẫu thí nghiệm lớn, lên đến hàng trăm, mẫu nguồn gen lại nhỏ hàng hay ô Có thể đưa tất mẫu nguồn gen vào thí nghiệm điểm (một khu hay ruộng thí nghiệm), trường hợp có lợi cho việc so sánh nguồn gen có Đơi phải chia thành vài điểm (ruộng thí nghiệm khác nhau) loài yêu cầu điều kiện ngoại cảnh khác nhau, sinh trưởng khác Khi đánh giá nguồn gen theo nhóm (nhóm ngắn ngày, nhóm dài ngày, nhóm cảm quang, nhóm trồng cạn, nhóm trồng nước ) 5.4.3 Đối chứng Bên cạnh mẫu nguồn gen đánh giá, thường có một vài dịng chuẩn làm đối chứng (check or control) Đối chứng phương pháp bố trí đối chứng thí nghiệm đánh giá nguồn gen phụ thuộc vào mục đích đánh giá Ví dụ đánh giá tính chống bệnh nên có đối chứng (1) đối chứng chống, (2) đối chứng chịu (3) đối chứng chuẩn nhiễm bệnh Đối chứng lặp lại với tần suất khác phù hợp với loại bố trí thí nghiệm Như phương pháp bố trí thí nghiệm gia tố (Augment design) thường có 01 lặp lại mẫu nguồn gen đánh giá, lặp lại một hàng đối chứng Một số thí nghiệm lại khơng cần đối chứng xen kẽ mà đối chứng trồng thành hàng bảo vệ, trường hợp áp dụng đánh giá ảnh hưởng môi trường chung đến mẫu nguồn gen 5.4.4 Chọn điểm thí nghiệm Chọn điểm thí nghiệm ngun lý đất tốt, nước cách ly với khu vực sản xuất khác Khi mục đích đánh giá tiềm mẫu nguồn gen khác nhau, thí nghiệm thực mơi trường lý tưởng Ví dụ đánh giá khả cho suất đánh giá điều kiện tối ưu Những đánh giá phản ứng mẫu nguồn gen với điều kiện bất thuận lại cần đánh giá nhiều điểm, nhiều năm để xác định tương tác kiểu gen môi trường, cần chọn số điểm có điều kiện bất thận mức bất thuận khác Thí nghiệm thực qua nhiều điểm, nhiều năm có lợi cho phân tích, đánh giá nguồn gen đánh giá trồng Khi đánh giá số tính trạng quan trọng cần độ xác cao thực bố trí điều kiện nhân tạo nhà kính, nhà lưới đánh giá khả chống bệnh 5.4.5 Kỹ thuật bố trí thí nghiệm Ơ thí nghiệm đánh giá nguồn gen thường nhỏ, có chi 01 hàng, đánh giá chậu cơng thức có có vài Thí nghiệm thường khơng có hàng bảo vệ khơng có cạnh tranh có hàng Ngẫu nhiên trường hợp hạn chế, bố trí mẫu nguồn gen có kiểu hình gần tương tư với nhau, tránh cạnh tranh hàng Diện tích nhỏ, đơi hàng bố trí lặp lại cần thiết đánh giá nguồn gen + Bố trí thí nghiệm RCBD (Randomzed complete block design ) Thiết kế thí nghiệm ngẫu nhiên để bố trí mẫu nguồn gen vào như bố trí khối hàn tồn ngẫu nhiên (RCBD) thí nghiệm đồng ruộng, khối ln ln cắt ngang với http://www.ebook.edu.vn 167 chiều biến động môi trường, ngẫu nhiên theo khối Bố trí RCBD thường khối tương ứng với lần lặp lại Tuy nhiên phương pháp bố trí khác khối khơng tương ứng với lần lặp lại Mục đích khối làm giảm bớt sai số thí nghiệm mơi trường khơng đồng nhất, mẫu nguồn gen có hội điều kiện môi trường để đánh giá, so sánh đảm bảo độ tin cậy cao Đặc biệt khối có ý nghĩa với thí nghiệm đánh giá nguồn gen diện tích ô thí nghiệm nhỏ Số khối thường nhỏ số khối, ví dụ khối có mẫu nguồn gen số khối ,3 khối Hình 5-1 : Bố trí thí nghiệm đánh giá nguồn gen lúa địa phương trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội (Nguồn: Vũ Văn Liết cộng 2004) + Bố trí khối ngầu nhiên khơng hoàn chỉnh (Incomplete Block Design) Trong trường hợp số mẫu nguồn gen lớn, ruộng thí nghiệm khơng đồng bố trí khối ngẫu nhiên khơng hồn chỉnh (Incomplete Block Design) Phương pháp bố trí thí nghiệm phổ biến bố trí RCBD nghiên cứu nguồn gen, thí nghiệm nguồn gen ln ln có số lượng mẫu lớn, không đồng sức sống đặc điểm khác Hình 5-2: Bố trí khối ngẫu nhiên khơng hồn chỉnh với mẫu nguốn gen A, B, C, D,E,F Phương pháp bố trí thí nghiệm thêm đối chứng, đối chứng bố trí xen kẽ khối, hình sau: Hình 5-3 : Bố trí khối ngẫu nhiên khơng hồn chỉnh với mẫu nguốn gen A, B, C, D,E,F đối chứng Hai trường hợp điều kiện số ô số mẫu nguồn gen, nhiên thí nghiệm nguồn gen thường không đảm bảo vậy, số khối khơng ngang mẫu nguồn gen bị chết, Ví dụ mẫu nguồn gen B bị http://www.ebook.edu.vn 168 Hình 5-4: Bố trí khối ngẫu nhiên khơng hồn chỉnh với mẫu nguốn gen A, B, C, D,E,F đối chứng mẫu B bị toàn Như khối I, III VI có ơ, khối cịn lại có thí nghiệm, phân tích thống kê (balance analysis) không thực trường hợp mà phải dụng (unbalance analysis) Trường hợp thí nghiệm khơng cân đối khối xảy nhiều dạng khác nhau, ví dụ trường hợp sau khối V VI bị hai ô cịn có số liệu, minh họa hình 5-5 Hình 5-5: Bố trí khối ngẫu nhiên khơng hồn chỉnh với mẫu nguốn gen A, B, C, D,E,F đối chứng khối V khối VI thí nghiệm Những ví dụ ví dụ điển hình cho thí nghiệm đánh gá nguồn gen, linh hoạt thiết kế thí nghiệm phù hợp với trường hợp đặc thù vì: o Đối chứng lặp lại khác so với mẫu thí nghiệm đánh giá o Bộ mẫu khác số lần lặp lại o Khối khác kích thước Những thí nghiệm khơng khó khăn phân tích số liệu với chương trình thống kê + Phương pháp bố trí mạng lưới (Lattice) alpha để đánh giá số lượng lớn nguồn gen khối nhỏ Một phương pháp khác khối ngẫu nhiên khơng hồn chỉnh lattice design, phương pháp bố trí hữu ích với nhà nghiên cứu nguồn gen quản lý ngân hàng gen thực vật Phương pháp lattice trường hợp đặc thù ngẫu nhiên khơng hồn chỉnh, xem xét mạng lưới ô vuông (square lattice), số mẫu nguồn gen phù hợp cho 9, 16,25,144 900 Trong phương pháp số khối cố định bậc số mẫu nguồn gen, ví dụ 900 mẫu thí nghiệm số khối 30 ô khối Minh họa số mẫu đưa vào thí nghiệm ( A, B., C, D, E , F , G, H, I ) lặp lại lần (hầu hết thí nghiệm nguồn gen) hình sau: Hình 5-6 : Lattice x http://www.ebook.edu.vn 169 Thí nghiệm bố trí lần lặp lại chia thành khối, khối chứa mẫu nguồn gen, khơng thiết mẫu có mặt khối, mẫu phải có mặt lần lặp lại 01 lần Trong trường hợp bố trí có đối chứng Z, đối chứng bố trí trước làm ngẫu nhiên sơ đồ sau: Hình 5-7 : Lattice x có đối chứng Z Khi có số lượng lớn mẫu nguồn gen rõ ràng cần bố trí lattice hiệu Tuy nhiên phương pháp cịn cứng nhắc khơng linh hoạt, số mẫu cần phải đủ theo mức mạng lưới, số mẫu khơng ngang khó bố trí Để khắc phục nhược điểm này, phương pháp thiết kế Alpha (Alpha Design) Phương pháp phù hợp linh hoạt với số mẫu lớn, số lần lặp lại số khối kích thước khối khác Hình 5-8: Bố trí alpha design với 18 mẫu nguồn gen 01 đối chứng Z Ví dụ với 18 mẫu nguồn gen, lần nhắc lại 36 thí nghiệm Chúng ta giả sử ruộng thí nghiệm khơng đồng nhất, cần khối chứa mẫu = 24 mẫu Như 12 mẫu cần khối x mẫu = 12 Tổng số khối + = 10 lần lặp lại phải chứa khối Nếu khối bố trí 01 đối chứng đảm bảo so sánh môi trường khác theo biến động ruộng thí nghiệm + Bố trí thí nghiệm tăng tiến sơ đồ có chỉnh lý (Augmented Designs) Phương pháp phù hợp để nghiên cứu hàng trăm, chí hàng nghìn mẫu nguồn gen thí nghiệm Một số lượng hạn chế vật liệu gieo, đủ cho lần không lặp lại Một số trung bình bên ngồi điều chỉnh sai số thí nghiệm cho biến động mơi trường điểm thí nghiệm Phương pháp điều chỉnh bố trí ô đối chứng lặp lại Lặp lại đối chứng để xác định hệ số biến động đại diện cho mẫu nguồn gen khơng thể bố trí lặp lại, chúng điều chỉnh so với đối chứng liền kề Một ví dụ bố trí thí nghiệm với 45 ô thí nghiệm, 15 đối chứng, 1/3 diện tích thí nghiệm giống đối chứng, thí nghiệm đánh giá 30 mẫu nguồn gen Các đối chứng giúp cho điều chỉnh biến động giá trị trung bình qua mơi trường Nếu có kích thước x tổng diện tích thí nghiệm 225 m2 Diện tích đối chứng chiếm khoảng 15 – 20% diện tích thí nghiệm lớn số mẫu đánh giá la 1.000 mẫu nguồn gen http://www.ebook.edu.vn 170 Ví dụ 45 chia thành khối, khối có ơ, khối sử dụng đối chứng đối chứng xắp xếp gọi kiểu ô vuông la tinh Khi phân tích số liệu, số liệu đối chứng cung cấp hệ số điều chỉnh xác định xác mẫu nguồn gen kiểm tra Hình 5-9 : Một sơ đồ xắp xếp ô vuông x có 13 đối chứng Đối chứng sở phản ánh so sánh mẫu nguồn gen, chúng cho phép suy luận chắn mẫu nguồn gen mơi trường khác có nhiều đối chứng nhận biết phân tích Những phương pháp thí nghiệm thảo luận mong muốn thí nghiệm khơng lặp lại số hay toàn mẫu nguồn gen Phương pháp bố trí thí nghiệm cho phép loại bỏ hạn chế xắp xếp thí nghiệm phương pháp thí nghiệm truyền thống Sử dụng hai đối chứng Z1 Z để điều chỉnh mẫu nguồn gen thí nghiệm khơng lặp lại số lượng lớn Ví dụ thí nghiệm lớn chương trình tạo giống trồng trường Đại học Cambrridge, Vương quốc Anh năm 1986 thực thí nghiệm 1.560 dịng lúa mỳ mùa đơng, với diện tích ruộng thí nghiệm đến ha, kích thước thí nghiệm 1,5 x 4,5 m Thí nghiệm có 16% diện tích đối chứng 5.4.6 Thu thập thơng tin thí nghiệm nguồn gen + Các mức theo dõi đánh giá: Theo dõi đánh giá thí nghiệm nguồn gen có mức theo dõi cá thể, theo dõi đánh giá thí nghiệm theo dõi đánh giá tồn thí nghiệm Theo dõi đánh giá cây: theo dõi đặc điểm quan trọng nhiều thí nghiệm đánh giá tài nguyên di truyền, chúng vật liệu không đồng di truyền, biến động trong mẫu nguồn gen Những tính trạng theo dõi cá thể chiều cao cây, số quả, số nhánh, số lá, độ lớn hạt, quả, số cây, số hạt bông…Số cá thể theo dõi nguồn gen ≥ 30, phân tích số liệu cá thể cho thông tin đầy đủ độ tin số liệu nguồn gen Theo dõi ô: nguồn gen trồng ô nhỏ trồng chậu, số tiêu theo dõi đánh giá ô suất, thời gian sinh trưởng, mức độ chống chịu, mức độ biến động quần thể… http://www.ebook.edu.vn 171 Theo dõi đánh giá toàn thí nghiệm: cung cấp thơng tin chi tiết mơi trường thí nghiệm đất đai, thời vụ gieo trồng, lượng mưa, xạ… Nếu thí nghiệm có lặp lại, thu thập phân tích giá trị trung bình chung mẫu nguồn gen Quyết định thu thập thông tin nào? mức tùy thuộc vào điều kiện u cầu lồi trồng, nhìn chung thu thập đầy đủ thông tin tốt + Lập sổ theo dõi đánh giá nguồn gen Xác định tiêu theo dõi mức, dựa tiêu xác định tần suất theo dõi, lượng mẫu theo dõi cho tiêu để thiết lập sổ theo dõi Mẫu nguồn gen khác tiêu theo dõi khác Ngoài sổ theo dõi số liệu cần có thêm sổ nhật ký thí nghiệm, ghi chép tất diễn biến thí nghiệm, cơng việc thực hàng ngày + Các tiêu theo dõi a) Mức cá thể Theo dõi mức cá thể thơng tin quan trọng thí nghiệm đánh giá nguồn gen Khi số lượng mẫu lớn tiêu theo dõi giảm đi, số lượng đánh giá chi tiết tiêu theo dõi chi tiết Để khơng thiếu sót tính trạng quan trọng phân tiêu theo dõi thành nhóm tính trạng: Nhóm 1: Các đặc điểm hình thái, sinh học Nhóm : Đặc điểm nơng học Nhóm 3: Năng suất yếu tố tạo thành suất Nhóm 4: Đặc điểm chống chịu sâu bệnh đồng ruộng Nhóm 5: Chống chịu bất thuận Nhóm 6: Một số tính trạng chất lượng Mỗi nhóm lại bao gồm nhiều tính trạng cần theo dõi Nhóm 1: Đặc điểm hình thái + Dạng + Chiều cao + Số nhánh/khóm + Số cành/cây + Số quả/cây, số hạt/bơng + Số + Dạng + Kích thước + Góc + Màu sắc thân + Dạng hoa + Cấu tạo hoa + Màu sắc hoa + Dạng + Cấu tạo + Màu sắc + Kích thước + Phương thức thụ phấn + Nhóm 2: Đặc điểm nơng học + Mùa vụ + Các giai đoạn sinh trưởng phát triển + Ngày chín http://www.ebook.edu.vn 172 Kết cho thấy sử dụng marker phân tử để nghiên cứu phân loai nguồn gen thu độ xác cao Sau thu thập nguồn gen cần phân loại cho bảo tồn sử dụng, với bảo tồn hạt ngân hàng gen Frankel, 1973; Hawkes, 1983 phân làm hai loại nguồn gen (Base collections ) nguồn gen hoạt động (Active collections ), nguồn gen sử dụng (Working collections) không loại hệ thống bảo tồn di truyền 5.6 TỔNG HỢP KẾT QUẢ VÀ TÀI LIỆU HĨA Nguồn gen tài liệu hóa bổ sung đầy đủ thơng tin sau thí nghiệm đánh giá nguồn gen, bước tài liệu hóa đưa vào sở liệu có ý nghĩa quan nhằm cung cấp đầy đủ thống tin cho: o Quản lý nguồn gen bảo tồn o Nghiên cứu bảo tồn o Tình trạng nguồn gen o Cung cấp cho người sử dụng o Sử dụng trao đổi nguồn gen 5.7 SỬ DỤNG NGUỒN GEN THỰC VẬT Nguồn gen thực vật tài sản nhân loại liên quan đến sống người, sử dụng vào nhiều mục tiêu khác Một số tài nguyên di truyền sử dụng đáp ứng cho nhu cầu cón người, số chưa sử dụng có tiềm sử dụng tương lai Những lĩnh vực cần sử dụng tài nguyên di truyền thực vật chính: 5.7.1 Nghiên cứu bản: Sử dụng nguồn gen cho nghiên cứu chủ yếu lĩnh vực nghiên cứu di truyền, thực vật học, nghiên cứu ưu lai, tính chống chịu, hóa sinh, sinh học phân tử, cơng nghệ di truyền, cơng nghệ tế bào mơi trường Ví dụ nghiên cứu di truyền Arabidopsis thaliana W.A Rensink and C Robin Buell,2004 nghiên cứu di truyền Arabidopsis thaliana cho người hiểu biết loài trồng 5.7.2 Sử dụng chương trình tạo giống với mục tiêu khác Nguồn gen sử chương trình lai, chuyển gen, cải tiến giống, tạo giống thích nghi, tạo giống chống chịu Nguồn gen sử dụng chương trình tạo giống có phạm vi rộng, tất quốc gia, ví dụ Trung Quốc 13 Viện nghiên cứu nhận 21,1% mẫu nguồn gen cho chương trình cải tiến giống trồng, 1281 giống tạo nhờ sử dụng 1487 mẫu nguồn gen (số chiếm 0,8% tổng lượng mẫu nguồn gen có Trung Quốc) Kết nghiên cứu sử dụng nguồn gen cho thấy trồng có giá trị kinh tế mẫu nguồn gen sử dụng nhiều hiệu cao Mặc dù ngày Trung Quốc khoảng 85% trồng sử dụng giống cải tiến tất trồng cải tiến giống lai điều có có liên quan đến sử dụng nguồn gen 5.7.3 Sử dụng thu thập mẫu nguồn gen hạt nhân Cải tiến, đánh giá sử dụng nguồn gen thực vật công việc nguyên lý hoạt động thu thập nghiên cứu bảo tồn nuồn tài nguyên di truyền thực vật Frankel http://www.ebook.edu.vn 180 Brown (1984) phát triển nguyên lý thu thập nguồn gen hạt nhân Brown năm 1989 phát triển thành lý thuyết, sở quan trọng sử dụng nguồn tài nguyên di truyền thực vật Những lý thuyết kỹ thuật thu thập nguồn gen hạt nhân đực trình bày chương (thu thập nguồn gen thực vật) Mục tiêu thu thập nguồn gen hạt nhân phục vụ bảo tồn sử dụng nguồn gen cho nhiều mục đích, có ba mục đích thu thập nguồn gen hạt nhân: + Giúp cho quan lý nguồn tài nguyên di truyền thực vật + Lưu giữ trồng mục tiêu lúa, ngô, khoai, sắn, số rau, ăn , thuốc dài hạn + Giúp nhà nghiên cứu tiếp cận tồn nguồn gen thơng qua số lượng tối thiểu nguồn gen 5.7.4 Phân nhóm nguồn gen cho chương trình cải tiến giống Trước chương trình sử dụng nguồn gen cho cải tiến giống trồng sử dụng nguồn gen thực vật Nghiên cứu đánh giá nguồn gen để xác định nguồn gen sử dụng cho mục đích khác nhau, sau đánh giá phân thành nhóm nguồn gen cịn gọi nguồn gen hoạt động Nghiên cứu phân nhóm nguồn gen theo nhiều hình thức, phân nhóm theo chương trình tạo giống, phân nhóm theo nguồn gốc xuất xứ, phân nhóm theo hệ thống phân loại thực vật Việc phân nhóm phụ thuộc vào chương trình quốc tế, quốc gia quan nghiên cứu 1) Phân nhóm theo chương trình tạo giống Nhóm nguồn gen trực tiếp sử dụng Nhóm nguồn gen cho chương trình tạo giống suất Nhóm nguồn gen cho chương trình tào giống chống chịu điều kiện bất thuận Nhóm nguồn gen cho chương trình phát triển giống chống chịu sâu bệnh Nhóm nguồn gen cho chương trình tạo giống chất lượng 2) Phân nhóm theo nguồn gốc xuất xứ nguồn gen Nguồn gen hoang dại Nguồn gen giống trồng địa phương Nguồn gen chương trình trao đổi nguồn gen Quốc tế 3) Phân nhóm theo hệ thống phân loại thực vật Nguồn gen họ hòa thảo Nguồn gen họ bầu bí Nguồn gen họ thập tự Nguồn gen họ cam quýt… Mỗi nhóm nguồn gen lại phân thành nhóm nhỏ phục vụ cho chương trình tạo giống cụ thể Sau phân nhóm hình thành danh mục nguồn gen cung cấp cho nhà chọn giống lựa chọn sử dụng chương trình phát triển giống trồng 5.7.5 Phân phối sử dụng nguồn gen Phân phối nguồn gen cung cấp mẫu nguồn gen đại diện mẫu hạt ngân hàng gen, mẫu mô, phanạ nhân giống sinh dưỡng hay DNA theo yêu cầu người sử dụng, nhìn chung phân phối nguồn gen phân phối từ nguồn gen hoạt động Một mục đích bảo tồn ngân hàng gen phục vụ cung cấp vật liệu cho cải tiến giống trồng thong qua chương trình chọn giống hoạt động nghiên cứu liên quan để tránh làm đa dạng nông trại môi trường sống tự nhiên đáp ứng nhu cầu nông dân cộng đồng Đây đóng góp trực tiếp nguồn tài nguyên di truyền thực vật để cải thiện sinh kế nông dân nghèo bảo vệ môi trường http://www.ebook.edu.vn 181 Trước sử dụng nguồn gen dựa chủ yếu vào tự nhiên, ngày việc sử dụng nguồn gen gắn liền với bảo tồn nguồn gen Các ngân hàng gen phải liên kết với người sử dụng, nhà tạo giống, nhà nghiên cứu, nơng dân nhóm khác Phân phối nguồn gen đảm bảo đến địa tốt Các điều kiện mơi trường q trình vận chuyển ảnh hưởng đến chất lượng nguồn gen từ ngân hàng đến nơi sử dụng Bởi phân phối nguồn gen nước, vùng hay tồn cầu có khoảng cách thời gian vận chuyển khác Khi phân phối nguồn gen cần có kỹ thuật đóng gói, bảo quản phù hợp cho nơi nhận khác để đảm bảo chất lượng nguồn gen a) Phân phối nguồn gen nước Bước 1: Xác định mẫu nguồn gen phân phối Bước cần có cơng tác chuẩn bị phân phối nguồn gen, công tác chuẩn bị đảm bảo phân phối đầy đủ, xác nâng cao hiệu sử dụng nguồn gen chương trình tạo giống quốc gia hay địa phương Những điểm lưu ý chuẩn bị phân phối nguồn gen gồm: + Kiểm tra sở liệu để định số lượng phân phối + Chỉ phân phối số lượng tối thiểu 1/4 đến 1/6 lượng mẫu nhân chu kỳ, cịn lại trì cho nhu cầu khác + Nếu lượng khơng cịn đủ phân phối cần thông báo lại nơi phân phối tiến hành nhân hạt sau phân phối + Kiểm tra thông tin thu thập thông tin khác cung cấp cho người sử dụng Bước 2: Chuẩn bị mẫu cho phân phối + Đăng ký ghi nhận thông tin người nhận mẫu + Chuẩn bị danh sách mẫu nguồn gen phân phối + Kiểm tra yêu cầu cho vận chuyển nguồn gen đến nơi nhận + Đóng gói dán nhãn cho mẫu nguồn gen + Cập nhật thông tin vào sở liệu Nếu mẫu nguồn gen lạnh cần luyện thích nghi trước vận chuyển cách đưa khỏi kho lạnh từ ngày hôm trước sử dụng vận chuyển lạnh Mở dụng cụ chứa nhanh chóng xắp xếp nguồn gen dựa nhãn túi đựng hạt Sử dụng phương pháp lấy mẫu ngẫu nhiên để đảm bảo mẫu cung cấp đại diện cho mẫu nguồn gen, số lượng hạt cung cấp khuyến nghị từ 50 – 100 hạt cho mẫu cung cấp, phụ thuộc vào hệ thống tạo giống loài trồng (cây giao phấn cần nhiều tự thụ phấn cần hơn) Sau lấy mẫu đưa mẫu vào bao bì dán kín để chuyển đến nơi nhận để tránh hút ẩm hư hỏng nguồn gen Để đảm bảo an tồn khơng nhầm lẫn ngồi nhãn bên ngồi túi cần có nhãn số hiệu nguồn gen đặt túi Bước 3: Chuẩn bị danh sách thông tin cho nguồn gen phân phối để gửi theo mẫu nguồn gen Danh sách thông tin bao gồm thông tin chi tiết thu thập số mẫu, nhận biết, địa phương đặc điểm thông tin khác nơi nhận đề nghị Bước 4: Gửi mẫu nguồn gen đến nơi nhận Đóng gói chung thơng tin số mẫu hộp theo tiêu chuẩn, gửi theo phương tiện vận chuyển khác nhau, hộp cần có đầy đủ thơng tin, người nhận, địa thơng tin an tồn hàng hóa Gửi vận chuyển nguồn gen theo phương tiện nhanh để tránh hư hỏng sức sống nguồn gen Công việc ghi nhận thông tin gửi nguồn gen vào sở liệu b) Phân phối nguồn gen nước khác http://www.ebook.edu.vn 182 Trao đổi nguồn gen Quốc tế cần tuân thủ theo quy định luật trao đổi xuất nguồn gen Xử lý làm trước thực bước đóng gói nguồn gen chuyển theo đề nghị quốc gia nhập nguồn gen Kiểm dịch nguồn gen thực nơi xuất nơi nhập nguồn gen theo tiêu chuẩn luật pháp Quốc tế Kiểm dịch cần có chứng kiểm dịch đảm bảo thủ tục pháp lý kết kiểm dịch Tuy nhiên kiểm dịch nơi nhập quan trọng để ngăn ngừa dịch hại quy định cấm nhập vào nước Các bước chuẩn bị mẫu nguồn gen cho xuất tương tự phân phối nước Thông tin phản hồi từ nơi sử dụng nguồn gen: nhận phản hồi từ nơi sử dụng nguồn gen cần thiết, thông thường thông tin phản hồi khoảng tháng lần Những thông tin giúp cho nhận biết thiếu khuyết dịch vụ cung cấp nguồn gen, bên cạnh nhận thêm thông tin đặc điểm, tính trạng nguồn gen khả chống chịu dịch hại nơi nhập nguồn gen Sau nhận phản hồi thông tin cập nhật vào sở liệu nguồn gen tác động lợi ích nguồn gen 5.7.6 Sử dụng nguồn gen hoang dại họ hàng hoang dại a) Đặc điểm nguồn gen hoang dại Nguồn gen hoang dại họ hàng hoang dại trồng có đặc điểm tính trạng q khả chống chịu điều kiện bất thuận, sâu bệnh số có chất lượng tốt sản phẩm chứa hợp chất hữu đặc thù sử dụng cho mục đích làm thuốc hay chế biến Nhận biết tính trạng allel có lợi sử dụng trực tiếp làm vật liệu cho chọn tạo giống trồng cần thiết Tóm lại đặc điểm quan trọng nguồn gen hoang dại là: + Khả thích nghi cao mà trồng khơng có + Sinh trưởng, phát triển mạnh + Chống chịu tốt với dịch dại, cỏ dại, sâu bệnh + Số lượng biến dị lớn + Một số lồi tích lũy hợp chất hữu sử dụng cho làm thuốc + Nguồn gen hoang dại thường có suất thấp + Sản phẩm đa số nguồn gen hoang dại khơng có khả sử dụng trực tiếp + Hạt có ngủ nghỉ bảo thủ di truyền cao b)Sử dụng nguồn gen hoang dại Nguồn hang dại tự nhiên họ hang hoang dại trồng có nhiều lồi đa bội đa bội chuối, mía cam quýt… không sử dụng để phân loại mà sử dụng tái tổ hợp tạo giống trồng đa bội mức đa bội khác ví dụ giống chuối AAA AAB Nguồn gen hoang dại có tầm quan trọng đặc biệt thu hút nước Trung tâm nghiên cứu thu thập, bảo tồn sử dụng ngày rộng rãi Theo báo báo IRRI năm 2000 Viện nghiên cứu lúa Quốc tế nhận 700 mẫu giống nguồn gen lúa (O sativa) 84 mẫu lúa hoang dại, đưa tổng mẫu nguồn gen lúa bảo tồn IRRI lên 24.700 mẫu có 2400 mẫu giống lúa hoang dại thu thập từ 22 nước Châu Á Hàng năm IRRI cung cấp mẫu nguồn gen, có nguồn gen lúa dại đến quốc gia cho chương trình tạo giống thu thành công lớn Năm 1999 Việt Nam nhận 17 mẫu nguồn gen cho lai có 20 dòng đưa vào khảo nghiệm Quốc gia Trung Quốc có dự án thu thập, bảo tồn sử dụng nguồn gen lúa dại nhằm đánh giá nhận biết tiềm nguồn gen lúa dại suất, chất lượng, chống chịu…dựa di truyền phân tử phục vụ cho chương trình tạo giống lúa Trung Quốc http://www.ebook.edu.vn 183 Khoai tây hoang dại thu thập bảo tồn 11.845 mẫu nguồn gen khoai tây hoang dại từ nước phục vụ bảo tồn, nghiên cứu sử dụng chọn tạo giống khoai tây cho hệ thống sinh thái sản xuất khoai tây khác Châu Âu, đặc biệt chống chịu lạnh sương muối Theo nghiên cứu Vega, S.E cộng giống khoai tây cải tiến khả chống chịu sương muối số loài họ hoàng hoang dại có khả chống chịu với sương muối chịu lạnh sử dụng chương trình tạo giống Sử dụng nguồn gen hoang dại có hướng chủ yếu :(1) sử dụng trực tiếp cho sản xuất có nhu cầu người (2) sử dụng để lai chuyển gen cho tính trạng đặc biệt; (3) Sử dụng làm vật liệu nghiên cứu di truyền nghiên cứu đa dạng sinh học Sử dụng trực tiếp : Rất nhiều hoang dại sử dụng trực tiếp, nhiều thuốc, gia vị Ác ti sô (Cynara scolymus L.), bạc hà mọc hoang dại (Mentlia arvensis L.), củ mài ( Dioscorea persimilis Prain et Burkill), dành dành (Gardenia jasminoides Ellis) vừa làm thuốc vừa cho phẩm màu chế biến thực phẩm, diếp cá (Houttuynia cordata Thumb.) vừa rau có tác dụng làm thuốc, húng chanh (Coleus amboinicus Lour.), hương nhu ( Ocimum sanctum L.) Tuy nhiên khai thác mức mà nguồn gen hoang dại bị cạn kiệt, bảo tồn cho sử dụng bền vững nguồn gen hoang dại quan tâm toàn cầu Sử dụng cho lai chuyển gen, đặc biệt gen chống chịu chất lượng đặc thù Khi lai chuyển gen với trồng thường gặp khó khăn lai xa sai khác di truyền sinh lý hai bố mẹ Ngày cơng nghệ sinh học phát triển khắc phục cứu phơi Phơi khơng có sức sống tách đưa vào nuôi cấy môi trường phù hợp Ví dụ lai cà chua trồng (Lycopersicon esculentum) với cà chua dại (L Perruvianum), (Thomas Pratt,1981) Lai cỏ linh lăng (cỏ họ đậu làm thức ăn gia súc) Medicago sativa với M rupestris (McCoy, 1985) Ưu lai nhận lai lạc, loài Arachis hypogaea loài tự bất hợp A paraguariensis A appressipila hai chống bệnh đốm thông qua sử dụng cứu phối thành công ( Rao cộng sự,2003) Lai cải dầu ( Brassica napus ) hạt cải trắng (Sinapsis alba ); thu nhiều tính trạng mong muốn chống chịu sâu hại chủ yếu họ cải (Brasicca), chống chịu nhiệt độ cao khô hạn bên cạnh chống chịu tách ( Brown cộng sự, 1997, Momotaz cs, 1998) Nuôi cấy phôi chứng minh cơng cụ hữu ích khắc phục tự bất hợp giao tử loài phụ khác Gần chuyển gen chống bệnh thối nhũn khoai tây dại (Solanum pinnatisectum ) vào khoai tây trồng (Solanum tuberosum ) thành công thực lai cứu phơi (Ramon hanneman,2002) Sử dụng tính trạng đặc biệt nguồn gen hoang dại chương trình tạo giống trồng tính trạng bất dục đực CMS, TGMS PGMS loài hoang dại chuyển vào trồng phục vụ phát triển giống ưu lai bất dục hoang dại lúa WA sử dụng tạo giống lúa lai dòng, ba dạng bất dục CMS ngơ tìm thấy tự nhiên T, C S, dạng bất dục T sử dụng tạo khoảng 70% giống ngô lai Mỹ đến năm 1970 Khush Brar, 2002 cho biết loài lúa hoang dại nguồn dự trữ quan trọng gen có lợi cho chống chịu sâu, bệnh, điều kiện bất thuận sinh học phi sinh học Các loài dại nguồn dự trữ gen bất dục đực tế bào chất (CMS) Mặc dù vậy, có khó khăn chuyển gen từ lúa dại vào lúa trồng (Brar Khush, 1997), khó khăn khó lai sai khác số nhiễm sắc thể gen Công cụ công nghệ sinh học cứu phôi lai tế bào trần vượt qua khó khăn Kỹ http://www.ebook.edu.vn 184 thuật phân tử ngày xác định xác gen chuyển gen vào lúa trồng, thành công minh họa bảng 5-5 Bảng 5-5: Kết chuyển gen từ lồi lúa dại Oryza vào lúa trồng Tính trạng Loài Donor Oryza Loài dại Genome Mẫu nguồn gen số A Đã chuyển vào Oryza sativa Bệnh còi cọc O nivara AA 101508 Benẹh bạc O longistaminata AA - O officinalis CC 100896 O minuta BBCC 101141 O latifolia CCDD 100914 O australiensis EE 100882 O brachyantha FF 101232 Bệnh đạo ôn O minuta BBCC 101141 Chống chịu rầy nâu O officinalis CC 100896 O minuta BBCC 101141 O latifolia CCDD 100914 O australiensis EE 100882 Chống chịu rầy lưng trắng O officinalis CC 100896 Bât dục đực CMS O sativaf spontanea AA - O perennis AA 104823 O glumaepatula AA 100969 O rufipogon AA 105908 O rufipogon AA 105909 Chống bệnh tungro B Đánh giá xác đinh gen chống chịu Sâu đục thân O longistaminata AA - Bệnh khô vằn O minuta BBCC 101141 Khả kéo dài lóng O rufipogon AA CB751 Chống chịu chua phèn O glaberrima AA many O glaberrima AA many Cạnh tranh với cỏ dại Source: Brar Khush, 2002 (cải tiến) Theo Khush lai lúa trồng lúa dại có gen AA thực phương pháp lai bình thường, lai lúa trồng lồi họ hàng hoang dại thường khó khơng có khả lai tạo phơi bình thường, trường hợp phải thực cứu phơi để lai dịng ưu tú giống với mẫu nguồn gen hoang dại có genome BBCC, CC, CCDD, EE, FF, GG, HHJJ HHKK thành công Một số gen kháng bệnh chuyển vào lúa trồng thành công gen kháng virus vàng lùn từ loài O nivara vào giống IR 28, IR 29 , IR 30, IR 32, IR 34 IR 36 Lúa dại có genome AA nguồn bất dục đực CMS quan trọng, sử dụng tạo giốg lúa lai thương mại Lin Yuan (1980) cơng bố sử dụng dịng bất dục đực CMS hoang dại (O sativa L f spontanea) chứa gen bất dục WA (wild abortive), khoảng 95% dòng bất dục thương mại CMS Trung Quốc sử dụng nguồn bất dục Gần phát http://www.ebook.edu.vn 185 nguồn bất dục CMS loài dại O perennis chuyển gen thành công vào lúa indica (Dalmacio cs, 1995) tạo dòng bất dục IR66707A Bảng 5-6 : Ví dụ chuyển số gen quan trọng vào lúa trồng Gen chuyển Phương pháp chuyển Tính trạng có lợi Tài liệu tham khảo bar Vi tiêm, bắn gen Chống chịu thuốc trừ cỏ Cao et al., 1992 (microprojectile/bombardment) bar PEG Chống chịu thuốc trừ cỏ Datta et al., 1992 Coat protein Chích điện (Electroporation) Chống chịu virus sọc Coat protein Bắn hạt Chống chịu virus tungro Sivamani et al., 1999 Chitinase PEG-mediated Chống chịu khô van cryIA(b) Chích điện (Electroporation) Chống chịu sâu đục Fujimoto et al., 1993 thân cryIA(b) Bắn hạt Chống chịu sâu đục Wunn et al., 1996; thân Ghareyazie et al., 1997 cryIA(c) Bắn hạt Chống chịu sâu đục Nayak et al., 1997 thân cry1A(b), cryIA(c) Vi khuẩn Agrobacterium Chống chịu sâu đục Cheng et al., 1998 thân cry1A(b), cryIA(c) Bắn hạt Chống chịu sâu đục Tu et al., 2000 thân cry1A(c), cry2A, gna Bắn hạt Chống chịu sâu đục Maqbool et al., 1998, thân, rầy nâu 2001 CpTi PEG-mediated Chống chịu sâu đục Xu et al., 1996 thân gna Bắn hạt Hoạt động trừ sâu đục Rao et al., 1998 thân Corn cystatin Chích điện (CC) (Electroporation) Hoạt động trừ Sitophilus zeamais Hayakawa et al., 1992 Lin et al., 1995; Datta et al., 2001 sâu Irie et al., 1996 Xa21 Bắn hạt Chống bệnh bác Tu et al., 1998; Zhang et al., 1998 codA Chích điện (Electroporation) Tăng khả chịu Sakamoto and Murata, măn 1998 Soybean ferritin Vi khuẩn Agrobacterium Tăng hàm lượng sắt Goto et al., 1999; Lucca hạt et al., 2001 psy Bắn hạt Tích lũy Phytoene Burkhardt et al., 1997 nội nhũ psy, crt1, lcy Vi khuẩn Agrobacterium Tích lũy tiền vitamin A Ye et al., 2000 Source: Khush and Brar, 2002 (modified) Nguồn gen hoang dại sử dụng nghiên cứu di truyền, đa dang sinh học: ngày nhiều nghiên cứu sử dụng maker phân tử để nhận biết tính trạng di truyền lồi hoang dại phục vụ cho chuyển gen vào trồng, nhận biết mức độ đa dạng di truyền Mía http://www.ebook.edu.vn 186 trồng có cấu trúc genome phức tạp chúng lai hai loài S officinarum loài dại S spontaneum Sự lai tạo hàng trăm NST gần 20 NTS lồi dại góp phần tăng sức sống, khả chống chịu bất thuận chống chịu bệnh Nhưng chúng tạo khó khăn cho nhà tạo giống nghiên cứu di truyền, nhờ di truyền phân tử nhận biết đóng góp lồi dại vào tính trạng mục tiêu 5.7.7 Sử dụng nguồn gen trồng địa phương a) Đặc điểm nguồn gen địa phương Nguồn gen trồng địa phương phân làm loại nguồn gen trồng địa (landrace) nguồn gen giống địa phương người chọn lọc hay nhập nội từ nơi khác đến (local cultivar) Cả hai loại nguồn gen có đặc điểm thích nghi cao với điều kiện địa phương, có chất lượng phù hợp với thị hiếu tiêu dùng địa phương Hầu hết giống địa phương có suất thấp, cao chịu điều kiện nghèo dinh dưỡng điều kiện thâm canh thấp Tuy nhiên giống địa phương quần thể phức tạp canh tác, trao đổi hạt giống cộng đồng cộng đồng, kinh nghiệm chọn lọc, để giống giao phấn Chính giống địa phương đa dạng di truyền vật liệu quý cho chương trình cải tiến giống trồng b) Sử dụng nguồn gen địa phương + Sử dụng trực tiếp: Giống địa phương giữ vai trò quan sản xuất nông nghiệp quốc gia vùng, đặc biệt vùng có điều kiện khó khăn Sử dụng trực tiếp giống trồng địa phương có chọn lọc phục tráng, cải tiến khơng chọn lọc Sử dụng trực tiếp nguồn gen trồng địa phương điển hình Trung Quốc với 178 trồng trồng trọt 12.722.000 ha, ước tính chiếm 0,9% tổng diện tích gieo trồng trồng mục tiêu Ví dụ giống lúa mỳ Xiaohongmai có khả chịu hạn trồng vùng giáp Mông cổ hàng trăm năm, giống lúa địa phương Zhubao Yabao trồng Hải Nam 30 năm Khảo sát Trung Quốc cho thấy gần 66 giống lúa địa phương chủ yếu Trung Quốc sử dụng trồng trọt khoảng 77,5% diện tích lúa địa phương Trung Quốc Ở Việt Nam sử dụng nhiều giống trồng địa phương cho mục tiêu khác Nhóm giống trồng địa phương sử dụng trực tiếp nhiều thuốc, rau gia vị, ăn Nhóm lương thực vùng có điều kiện khó khăn, giống cải tiến hay giống lai khơng thích nghi giống địa phương chiếm ưu tỉnh miền núi Việt Nam Cây làm thuốc thực phẩm: gấc ( Momordiaca cochnchinensis (Lour.) Speng., gừng ( Zingiber officinable Rose), Hoàng tinh (Maranta arundinacea L.) Cây rau gia vị : Thì (Anethum graveolens L.), húng quế (Ocimum basilicum) , tía tơ (Perilla L.), kinh giới (Origanum majorana L.) Các trồng đặc sản lúa tám thơm, nếp hoa vàng, nhãn lồng Hưng Yên, bưởi Đoan Hùng, bưởi phúc trạch… + Sử dụng làm vật liệu cho chương trình tạo giống khác Chọn lọc trực tiếp giống địa phương để tạo giống có suất cao chống chịu thực tất trồng lúa, ngô…các nhà nghiên cứu CIMMYT cho tái tổ hợp – hệ quần thể ngô địa phương để tạo kiều hình thích nghi chung đưa tiếp cận thỏa hiệp tạo quần thể tổng hợp từ quần thể địa phương giống cải tiến thích nghi Các giống ngô địa phương http://www.ebook.edu.vn 187 sử dụng chọn lọc tự phối tạo dịng cho chương trình phát triển ngô ưu lai Ở Việt Nam có thành cơng chọn lọc trực tiếp các giống địa phương giống lúa tép lai chịu mặn chọn lọc từ giống lúa chiêm Hải Phòng, giống lúa nếp TK90 chọ lọc từ giống lúa nếp địa phương Hịa Bình, giống đậu tương AK02 chọn cá thể từ giống đậu tương vàng Mường Khương Giống địa phương sử dụng rộng rãi vào chương trình lai tạo giống giới mà điển hình cách mạng xanh năm 1960 Viện nghiên cứu lúa Quốc tế lai tạo thành công giống lúa cải tiến thấp IR8 từ giống lúa địa phương giống bán lùn Trung Quốc Dee-geo-woo-gen (DGWG) với giống cao Peta Indonesia Việt Nam thành công sử dụng nguồn gen lúa địa phương lai tạo giống cải tiến ví dụ: giống lúa CRƠ1 lai ( BG90-2 chiêm ba lá) x tẻ tép, giống lúa M6 tạo lai bầu Hải Phòng với giống 1548, giống lúa OM2718 tạo từ lai Thần Nông đỏ IR48 Các mẫu nguồn gen lúa mỳ địa (Triticum aestivum L subsp aestivum) USDAARS thu thập mẫu nguồn gen hạt quốc gia (NSGC), đánh giá khả chống bệnh giống lúa mỳ địa qua 25 năm Phân tích khả chống bệnh 10.759 mẫu nguồn gen với bệnh nấm cựa gà nấm Tilletia tritici (Bjerk.) Wint Và T laevis Kühn, 8.167 với bệnh cựa gà lùn (DB) nấm T controversa Kühn Các giống lúa mỳ địa có nguồn gốc địa sinh thái, mối quan hệ với màu sắc râu hạt mẫu nguồn gen, vùng biến động kiểu hình có tần xuất chống bệnh cao bệnh cựa gà mở rộng từ Serbia Montenegro qua Macedonia, Turkey, Iran, nguồn gen tỉnh Kosovo Serbia Montenegro có tần suất chống bệnh cao (36%) tỉnh Bakhtaran Iran (40.8%), Khả chống bệnh cựa gà lùn tập trung nguồn gen thu thập từ Iran, Serbia Montenegro có tần suất cao (58%) Các nhà chọn giống ICARDA Viện nghiên cứu giới yêu cầu vật liệu di truyền từ ngân hàng gen lúa mỳ, vật liệu có tính trạng chống chịu với bất thuận sinh học phi sinh học Hàng nghìn mẫu nguồn gen đánh giá khả chịu hạn chống chịu bệnh Những gen có lợi đưa vào chương trình tạo giống, gen từ loài họ hàng hoang dại chuyển vào genome giống cải tiến Ví dụ bắt đầu năm 1994/1995 gen từ tổ tiên lúa mỳ lưỡng bội hoang dại (Triticum urartu, T baeoticum, Aegilops speltoides and Ae tauschii ) tam bội (T dicoccoides) tạo biến dị suất cao Các dạng lục bội tạo lai lai giống lúa mỳ địa ‘Haurani’ với mẫu nguồn gen hoang dại (Ae Tauschii) lai lúa mỳ cứng với lúa mỳ dại (Triticum spp.), lai trở lại với giống có tính trạng hình thái mong muốn nhận nhiều gié, thấp cây, chín sớm đẻ nhánh khỏe chịu hạn Giống lúa mỳ cứng chống bệnh gỉ sắt lai lúa mỳ cứng với loài dại Triticum spp Ae Speltoides, tạo giống chống bệnh rỉ sắt lai lúa mỳ cứng địa với loài dại T baeoticum Ae speltoides Ngồi giống địa phương cịn sử dụng chương trình chọn giống đột biến, ni cấy mô tạo biến dị xô ma, chuyển gen điển hình chuyển gen kháng bệnh 5.7.8 Sử dụng nguồn gen tạo thành nguồn gen trồng giới a) Đặc điểm nguồn gen tạo thành trồng giới: Nguồn gen trồng tạo thành trồng giới đa dạng bao gồm nguồn gen hoang dại giống địa phương quốc gia khác, nguồn gen giống tạo thành, dòng thuần, dòng bất dục, dòng tự bất hợp, dòng ưu Nguồn gen trồng giới có số lượng vơ lớn đa dạng đáp ứng cho nhiều mục tiêu tạo giống quốc gia http://www.ebook.edu.vn 188 b) Sử dụng Nguồn gen trồng tạo thành trồng giới Nguồn gen trồng trồng tạo thành trồng giới có bảo tồn Quốc gia, Viện Trung tâm nghiên cứu quốc tế, Nguồn gen đánh giá sử dụng mạng lưới bảo tồn đánh giá nguồn gen quốc tế, số lượng sử dụng hàng năm lớn Ví dụ sử dụng nguồn gen lúa từ Viện nghiên cứu lúa Quốc tế IRRI cho thấy năm 1999 có 287 dòng thử nghiệm mạng lưới đánh giá nguồn gen, chọn làm bố mẹ chương trình lai tạo giống 27 nước, 13 giống thử nghiệm 519 dòng đưa vào đánh giá suất nước bảng sau: Bảng 5-7: Sử dụng nguồn gen lúa nước năm 1999 Nước Số lượng Sử dụng để lai Số giống đưa vào thử nghiệm suất Bangladesh 18 Cambodia 42 Trung Quốc 61 30 Ai Cập 37 37 Ấn Độ 42 72 Triều Tiên 25 Myanmar 66 123 Nepal 10 35 Pakítan 61 Philippines 10 Thái Lan 15 57 Việt Nam 17 20 Thổ Nhĩ Kỳ 12 Tổng số 287 519 Nguồn gen vật liệu từ Trung tâm nghiên cứu quốc tế IRRI, CIMMYT, CIP…đã sử dụng chương trình chọn giống trồng Việt Nam Nguồn vật liệu chọn lọc sử dụng trực tiếp làm vật liệu cho chương trình tạo giống khác Ví dụ giống lúa từ năm 1960 sử dụng nguồn gen từ IRRI tạo nhiều giống lúa có suất cao chống chịu giống lúa VN10 chọn từ tổ hợp lai A4 x Rumani 45 công nhận quốc gia từ năm 1984, giống DT10 DT11 chọn tạo từ vật liệu giống lúa C4-63 công nhận giống từ năm 1990 Giống lúa chọn lọc trực tiếp từ vật liệu di truyền IRRI IR 17494, Xi23, C70, C71… Các giống trồng khác : giống ngơ Việt Nam có sử dụng nguồn gen nước ngồi VM1 từ Mê hi cơ, LVN24, LVN25…, giống khoai lang VX-37, giống khoai tây KT-2,giống sắn KM60, KM94; Giống lạc MD7,MD9 ; giống đậu tương AK03, AK05, HL92, giống đậu xanh 044, DX92-1, giống cà chua HP5, hồng lan…Như nguồn gen thực vật Quốc tế có đóng góp quan trọng chương trình tạo giống trồng Việt Nam http://www.ebook.edu.vn 189 Câu hỏi ôn tập chương Kỹ thuật nhân tăng số hạt đổi hạt nguồn gen Thí nghiệm đánh giá nguồn gen Phương pháp bố trí thí nghiệm đánh giá nguồn gen Phương pháp thí nghiệm nguồn gen khơng bố trí lặp lại Thu thập số liệu đánh giá nguồn gen Những phân tích thống kê quan trọng đánh giá nguồn gen Ứng dụng công nghệ sinh học đánh giá nguồn gen Sử dụng nguồn gen thực vật Sử dụng nguồn gen hoang dại 10 Sử dụng nguồn gen giống địa phương 11 Sử dụng nguồn gen giới http://www.ebook.edu.vn 190 TÀI LIỆU THAM KHẢO Abdul Ghani Yunus Mohd Shukor Nordin Mohd Said Saad T.C Yap T.C Yapan, 2001, Establishment and management of field genebank, IPGRI Regional Office for Asia, The Pacific and Oceania, UPM Campus, Sedang, 43400 Selangor Darul Ehsan, Malaysia, ISBN 92-90043-464-3, pp 64 - 81 A.B Damania, J Valkoun, G Willcox, C.O Qualset ,1997, The Origins of Agriculture and Crop Domestication, Proceedings of the Harlan Symposium, pp 1322 International Center for Agricultural Research in the Dry Areas (ICARDA) , International Plant Genetic Resources Institute (IPGRI) , Food and Agriculture Organization of the United Nations (FAO) , Genetic Resources Conservation Program, Division of Agriculture and Natural Resources, University of California (UC/GRCP) , Published jointly by ICARDA, IPGRI, FAO and UC/GRCP Ari Kornfeld, 1996-2000, Natural Perspective Appendix Plant Classification Ayad, W.G., T Hodgkin, A Jaradat and V.R Rao, editors 1997 Molecular genetic techniques for plant genetic resources Report of an IPGRI workshop, 9-11 October 1995, Rome, Italy International Plant Genetic Resources Institute, Rome, Italy ISBN 92-9043-315-9 ,IPGRI, Via delle Sette Chiese 142,00145 Rome,Italy Brad Fraleigb,2006 Global overview of crop genetic resources, The Role of Biotechnology in exploring and protecting agricultural genetic resources, FAO Bradley, V.L., Johnson, R.C., 2001, Managing the U.S safflower collection In Proceedings of the Vth International Safflower Conference, Williston, North Dakota, Sidney, Montana, USA 2001 p 143-147 Bart Panis Maurizio Lambardi, 2006, Status of Cryopreservation technologies in plant ( Forest tree and crops) The Role of Biotechnology in exploring and protecting agricultural genetic resources, FAO Carl Linnaeus,1996-2006, plantexplosers, National Science Teachers Association C.Epinat-Le Signora, S Doussea, J Lorgeoub, J.-B Denisc, R Bonhommed, P Caroloe and A Charcosset, 2001, Interpretation of Genotype x Environment Interactions for Early Maize Hybrids over 12 Years ,Crop Science 41:663-669 (2001) 10 CIAT ( International Center for Tropical Agriculture ,2005 – 2006,CIAT Annual Report, Conservation and Use of Tropical Genetic Resources 11 CIP,2006, DivA-GIS Annapurna 12 Consultative Group on International Agricultural Research (CGIAR), 1996, Plant Genetic resources, Report in 25 Years of Food and Agriculture Improvement in Developing Countries 13 Del Rio, A., Bamberg, J.B 2004 Geographical parameters and proximity to related species predict genetic variation in the inbred potato species solanum verrucosum schlechtd Crop Science 44:1170-1177 14 D.I.Javis , L Myer, H.Klemlck, L Guarino, M Smale, A.H.D.Brown, M.Sadiki, B,Sthalt and T.Hodgkin,2000, A training guide for In Situ conservation on Farm, IPGRI, Rome Italy 15 Đặng Huy Huỳnh cộng sự, 2005, Báo cáo trạng môi trường Việt Nam 2005, chuyên đề đa dạng sinh học 16 Florent Engelmann ,1998, in vitro conservation of horticulture genetic resource, International Plant Genetic Resorce, IPGRI, Via delle Sette Chiese 142, 0145 Rome, Italy http://www.ebook.edu.vn 191 17 F Engelmann J.M.M.Engels,2002, Technologies and Strategies for ex situ conservation, IPGRI, Rome, Italy 18 Gao Weidong, Jiahe Fang Diansheng Zheng Yu Li Xin-xiong Lu Ramanatha V Rao T Hodgkin Zhang Zongwen, 2006, Utilization of germplasm conserved in Chinese national genebanks - a survey, PGR newsletter, No 123, p1-8 19 IPGRI, 2006, Diversity for well-being, Fact sheet, Background information, http://ipgri-pa.grinfo.net/Factsheets.php?itemid 1214 20 IPGRI, 2001, Design and analysis of evaluation trails of genetic resources collections, IPGRRI Via dei Tre Denari 472/a 00057 Maccarese , Rome Italy, ISN 92-9043-505-4 21 IPGRI INIBAP, 2005, Annual report 2005, pp28-32 22 Jack R Harlan 1992 Crops & Man ASA, CSA, Madison, WI 23 Jules Janick, 2005 ,History of Horticulture, Department of Horticulture and Landscape Architecture Purdue University, USA 24 Judd, W S., C S Campbell, E A Kellogg, and P F Stevens 2002 Plant Systematics: A Phylogenetic Approach Second Edition Sinauer Associates, Inc., Sunderland, MA 25 J Michael Bonmana,*, Harold E Bockelmana, Blair J Goatesa, Don E Oberta, Patrick E McGuireb, Calvin O Qualsetb and Robert J Hijmansc, 2006, Geographic Distribution of Common and Dwarf Bunt Resistance in Landraces of Triticum aestivum subsp Aestivum, 2006 Crop Science Society of America,, 677 S Segoe Rd., Madison, WI 53711 USA 26 John Porter Henning Hogh-Jensen,2002, Biodiversity ecological pasture production, Ecological Agriculture, KVL University 27 Kevin Conrad , 2006, Woody Landscape Plant Germplasm Repository , Collecion, Maintence and evaluation, U.S National Arboretum ,11601 Old Pond , Glenn Dale, Maryland 20769 28 Kevin Parris, 2002, Sustainable agriculture depends on biodiversity, OECD 29 Kevin Parris, 2001, Agriculture and Biodiversity, developing indicators for policy analysis, Proceeding from an OECD expert meeting, Zurich, Switzerland 30 Ken Muldrew, 1999, Cryobiology - A Short Course, Dept of Physiology & Biophysics, and Dept of Surgery, University of Calgary, Alberta, Canada 31 Khusha and Brar, 2002, Biotechnology for rice breeding: progress and impact, Sustainable rice production for food security ,Proceedings of the 20th Session of the International Rice Commission,Bangkok, Thailand, 23-26 July 2002 32 L Guarino, N Maxted E.A.Chiwona, 2005, a methodological model for ecogeographic surveys of crops, IPGRI, technical Bulletin No9 33 Mohd Said Saad and V Ramanatha Rao, 2001, Establishment and management of field genebank, IPGRI Regional Office for Asia, The Pacific and Oceania, UPM Campus, Sedang, 43400 Selangor Darul Ehsan, Malaysia, ISBN 92-90043-464-3 34 Mohd Khalid Mohd Zin, 2001, Establishment and management of field genebank, IPGRI Regional Office for Asia, The Pacific and Oceania, UPM Campus, Sedang, 43400 Selangor Darul Ehsan, Malaysia, ISBN 92-90043-464-3, pp97 35 Missouri Botanical Garden's VAST (VAScular Tropicos),1995-2006 The Origin of Garden Plant and the FSU Contribution, All Rights Reserved, P.O Box 299, St Louis, MO 63166-0299,(314) 577-5100 36 M.C.de Vicente and M.S Andersson, 2006, DNA bank- providing novel options for genebanks, IPGRI http://www.ebook.edu.vn 192 37 M.T Jackson, B.R.Lu, G.C.Loresto S Appa Rao, 2000, Rice genetic resources: onservation, safe delivery and use, IRRI program report 38 N Kameswara Rao, 2004, Plant Genetic Resources : Advancing conservation and use through biotechnology, African Journal of biotechnology Vol 3(2) pp136-145 39 NorAiniAb Shukor, 2001, Establishment and management of field genebank, IPGRI Regional Office for Asia, The Pacific and Oceania, UPM Campus, Sedang, 43400 Selangor Darul Ehsan, Malaysia, ISBN 92-90043-464-3, pp 110 40 N Kameswara Rao, Jean Hanson, M Ehsan Dulloo, Kakoli Ghosh, David Nowell and Michael Larinde, 2006, Manual of seed handling in Genbanks, Bioversity International IPGRI, Rome, Italy 41 Nguyễn Thị Ngọc Huệ, Hà Đình Tuấn, Bhuwon Sthapit, 2002, Bảo tồn đa dạng sinh học Nông nghiệp đồng ruộng Việt Nam, nxb Nông nghiệp 42 N.Kameswara Rao,2004, Plant genetic resource: Advancing conservation and use through biotechnology, African Journal of biotechnology Vol.3 43 Paul Barden, 1996-2004, Old garden rose and beyond magazine, US 44 Paul Gepts,2006, Plant Genetic Resources Conservation and Utilization, Crop Sci 46:2278-2292 45 R.K Arora, 1991, Plant Genetic Resources Conservation and Management Concepts and Approaches, Published by the International Board for Plant Genetic Resources, egional Office for South and Southeast Asia, c/o NBPGR, Pusa Campus, New Delhi 110 012, India 46 R.S Paroda, R.K Arora, 1991, Plant Genetic Resources Conservation and Management Concepts and Approaches, Published by the International Board for Plant Genetic Resources, egional Office for South and Southeast Asia, c/o NBPGR, Pusa Campus, New Delhi 110 012, India 47 R.H Ellis, T.D Hong and E.H Roberts, 1985, Handbooks for Genebanks: No , IBPGR 48 Serge Gudin,2000, Rose : Gemetic and Breeding, John Willy &Son,Inc, pp2 161169 49 Salma Idris and Mohd Said Saad,2001, Establishment and management of field genebank, IPGRI Regional Office for Asia, The Pacific and Oceania, UPM Campus, Sedang, 43400 Selangor Darul Ehsan, Malaysia, ISBN 92-90043-464-3, pp82 50 S Eberhart, Chair, R Johnson, S Kresovich, W Lamboy, R Schnell, C Sperling, 1994, National Plant Germplasm System General Guideline and procedures IPGRRI 51 S A Mohammadi and B M Prasanna,2003, Analysis of Genetic Diversity in Crop Plants—Salient Statistical Tools and Considerations, Crop Science 43:1235-1248 (2003) 52 T.A Thomas and P.N Mathur,1991 , Plant Genetic Resources Conservation and Management Concepts and Approaches, Published by the International Board for Plant Genetic Resources, egional Office for South and Southeast Asia, c/o NBPGR, Pusa Campus, New Delhi 110 012, India 53 Th.J.L.van Hintum, A.H.D Brown, and C Spillane T.Hodgkin, 2000, Core collections of plant genetic resources, IPGRI Technical Bulletins,IPGRI Via delle Sette Chiese, 00145 Rome, Italy 54 Trung tâm tài nguyên thực vật, 2007, giống lúa địa phương phổ bên số vùng sinh thái, nxb Nông nghiệp http://www.ebook.edu.vn 193 55 USDA,2006, Đa dạng di truyền thay đổi, Nation forest genetic laboratory, USDA, Genetic resource conservation programme, University of California 56 Vũ Đình Hịa, Nguyễn Văn Hoan, Vũ Văn Liết, 2005, Giáo trình chọn giống trồng, nxb Nông nghiệp tr 15-30 57 Valerie C Pence, Jorge A Sandoval, Victor M.Villaobos A and Florent Engelmann, 2002, In vitro collecting techniques for germplasm conservation, IPGRI, Rome , Italy 58 V Holubec,1997, The Origins of Agriculture and Crop Domestication, Proceedings of the Harlan Symposium, pp 255 59 Vega, S.E., Del Rio, A.H., Bamberg, J.B., Palta, J.P 2004 Evidence for the upregulation of stearoyl-acp delta desaturase gene expression during cold acclimation American Journal of Potato Research 81:125-135 60 Wanda W Collins; Calvin O Qualset, 1999, Biodiversity in Agroecosystems, CRC press LLC,Lewis Publishers, USA 61 Yong-Bi Fu,* Gordon G Rowland, Scott D Duguid, and Ken W Richards, 2003, Plant genetic resource, RAPD Analysis of 54 North American Flax Cultivars, Crop Sci 43:1510-1515 62 M.T Jackson, B.R.Lu, G.C.Loresto S Appa Rao, 2000, Rice genetic resources: onservation, safe delivery and use, IRRI program report http://www.ebook.edu.vn 194 ... sativus L) 6,0 – 6 ,5 18 – 25 14 Bí xanh (C pepo) 5, 5 - 7 ,5 25 - 27 15 Mướp đắng (Momordica carantia) 6,0 – 6,7 24 – 27 16 Rau giền (Amaranthus spp .) 5, 3 – 6,4 15 – 25 17 Hành (Allium cepa) 6,0 –... 23 ,5 27,0 19,9 28 ,5 17 ,5 21,0 34,0 26,0 18 ,5 15, 0 21 ,5 35, 0 38 ,5 29 ,5 21,0 26,0 28,0 22,9 23,0 23 ,5 20,0 21 ,5 26,0 31,0 21,0 18 ,5 22,0 18 ,5 19,0 17 ,5 18,6 26,0 38 ,5 22 ,5 23 ,5 24,2 26 ,5 23 ,5 27 ,5. .. 31,0 21,0 18 ,5 22,0 18 ,5 19,0 17 ,5 18,6 26,0 38 ,5 22 ,5 23 ,5 26 ,5 23 ,5 27 ,5 31 ,5 29 ,5 16,0 23,0 26 ,5 18 ,5 21,0 34,3 30 ,5 16,0 28,8 22,0 29,0 41,8 28,0 16,0 31,0 23,2 19 ,5 28 ,5 37 ,5 23,0 19,0 26,7