8  CHƢƠNG II. CÔNG NGHỆ NUÔI CẤY MÔ VÀ TẾ BÀO THỰC VẬT – NHÂN GIỐNG IN VITRO c              1. Giới thiệu sơ lƣợc về công nghệ nuôi cấy mô và tế bào thực vật 1.1. Giới thiệu in vitro      vô trùng.    ta dùng         1.2. Lịch sử phát triển của kỹ thuật nuôi cấy mô và tế bào thực vật     n không thành công. 9                                .      nay.             bào    1.3. Tầm quan trọng của kỹ thuật nuôi cấy mô và tế bào thực vật     1.3.1. Về mặt lý luận sinh học cơ bản                  là   mình.  và chính xác th          c quy               10         1.3.2. Về mặt thực tiễn sản xuất và nhân nhanh các   o                  2. Các bƣớc nhân giống in vitro 2.1. Chọn lựa và khử trùng mẫu cấy  in vitro     gân, 2.2. Tạo thể nhân giống in vitro  in vitroin vitro  in vitro      3  Hình 2.1. Nhân giống cây trồng bằng phương pháp nuôi cấy mô 11  2.3. Nhân giống in vitro                     in vitro   Hình 2.2. Các bước nhân giống in vitro 2.4. Tái sinh cây in vitro hoàn chỉnh                  in vitro ánh s in vitro. 2.5. Chuyển cây con in vitro ra vườn ươm       ,         in vitro và ex vitro. Cây in vitro  12         -         3. Các yếu tố ảnh hƣởng đến quá trình nuôi cấy mô thực vật 3.1. Ảnh hưởng của mẫu cấy  in vitro:               l  thì Solanaceae, Begoniaceae, Crassulaceae, Gesneriaceae và Cruciferae l                       in vitro         nh cây Kalanchoe farinacea  in vivo in vitro,   y     in vitro           và phân chia t  nho (Pinus vinifera), táo tây (Malus sylvestris), Cryptomeria japonica).                 13            Lunaria annua), cây báo xuân (Primula obconica).   bào in vitro         in vitro h                       in vitro       lãnh sam (Pseudotsuga menziesii) in vitro     in vitro        in vitro                          Các                  14                   Amaryllidaceae   3.2. Ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy      thay ùy óa                 Khoáng đa lƣợng:    Khoáng vi lƣợng:  in vitro                      cho  Carbon và nguồn năng lƣợng: in vitro                      Vitamin: thông   in vitro  15    (B6) và myo-inositol. Các chất điều hòa sinh trƣởng thực vật: có 5 nhóm c      c            -3-acetic acid  -D, 2,4,5-T và phenoxyaxetic                     -        in                              nh.        16    Hình 2.3. Công thức của một số chất điều hòa sinh trưởng thực vật  , , Các hợp chất hữu cơ không xác định:                             Amino acid và các nguồn cung cấp nitrogen khác:  cid     - glutamine, L-asparine và adenine. Than hoạt tính:                  17     Yếu tố làm đặc môi trƣờng:        trong          - 100 o   o                                4. Nuôi cấy mô tạo ra cây hoàn chỉnh 4.1. Nuôi cấy nốt đơn thân           ý:                   [...]... 4.3 Nuôi cấy đỉnh sinh trưởng Nhiễm virus là một trong những nguyên nhân gây ảnh hưởng rất lớn đến sự sinh trưởng và phát triển của thực vật Đặc biệt, virus có thể chuyển sang các thế hệ kế tiếp trong quá trình thực vật sinh sản hữu tính và cả trong quá trình nhân giống vô tính in vitro Trong đỉnh sinh trưởng của thực vật có một sự cạnh tranh giữa sự sinh sản của virus và sự phân chia tế bào của mô. .. môi trường đặc Nuôi cấy trên môi trường đặc chủ yếu trên những thiết bị nuôi có kích thước nhỏ nên môi trường nuôi cấy không đủ đáp ứng cho sự phát triển lâu dài của mẫu cấy Hơn nữa, khi nuôi cấy trên môi trường đặc, môi trường bị lãng phí do cây không hấp thu hết các chất dinh dưỡng ở ph n đáy của bình nuôi cấy Các hệ thống nuôi cấy lỏng trên máy lắc ban đ u dựa trên mô hình nuôi cấy vi sinh vật và. .. của môi trường nuôi cấy như nồng độ đường, muối khoáng, vitamin hay các chất điều hòa sinh trưởng thực vật mà các nhà nuôi cấy mô vẫn thường quan tâm Trong vi nhân giống quang tự dưỡng, đường không được sử dụng trong môi trường nuôi cấy Nói đúng hơn là không sử dụng các cơ chất hữu cơ bao gồm cả các chất điều hòa tăng trưởng thực vật, vitamin, amino acid, ngoại trừ các chất khoáng được cho vào môi... của phƣơng pháp nuôi cấy mô và tế bào thực vật Phương pháp nuôi cấy mô và tế bào thực vật có những ưu điểm vượt trội so với phương pháp truyền thống:  Có khả năng tái sinh cây con từ các vùng mô và cơ quan khác nhau của cây như: trục thân, lóng thân, phiến lá, cuống lá, hoa, chồi phát hoa, hạt phấn, mà ngoài tự nhiên không thể thực hiện được  Có thể sản xuất được số lượng lớn cây giống trong một... sinh để tạo ra các tế bào con Ở vùng mô phân sinh, trong suốt quá trình phân chia của tế bào, khả năng sinh tổng hợp nucleic acid được tận dụng để phân chia tế bào sẽ gây bất lợi cho sự tăng sinh của virus Để có được nhiều đỉnh sinh trưởng sạch bệnh virus làm nguồn mẫu cho nuôi cấy in vitro, trước tiên phải tiến hành tạo chồi bất định, sau đó thu đỉnh sinh trưởng từ các chồi bất định này Nếu đỉnh sinh... khí vào để hạn chế sự tương tác bất lợi của mẫu cấy, hạn chế sự tổn thương của mẫu Vì thế, hệ thống bioreactor được sử dụng rộng rãi với nhiều mục đích khác nhau như: nuôi cấy chồi và phôi thực vật, chồi hoa thu hải đường, củ khoai tây bi in vitro, hoa lily, một số cây thân gỗ và đặc biệt là nuôi cấy thu nhận các hợp chất có hoạt tính sinh học như nuôi cấy rễ nhân sâm 19  Hình 2.4 Hệ thống nuôi cấy. .. vitro, rút ngắn thời gian nuôi cấy và làm hạ giá thành cây in vitro Phương pháp mới này chú trọng đến các tác nhân vật lý của môi trường nuôi cấy (ion, sự khuyết tán khí hòa tan) và các yếu tố ảnh hưởng đến sự phát triển của cây con trong bình nuôi cấy (cường độ ánh sáng, thời gian chiếu sáng, thành ph n không khí, ẩm độ, nhiệt độ và tốc độ luân chuyển của không khí trong bình nuôi cấy, …) thay vì chỉ nghiên... trên máy lắc ban đ u dựa trên mô hình nuôi cấy vi sinh vật và tế bào động vật nhằm phục vụ trong nghiên cứu nuôi cấy tế bào và thu nhận các hợp chất thứ cấp Mẫu cấy trong môi trường lỏng có khả năng tăng trưởng nhanh hơn so với môi trường đặc Có thể do mẫu cấy được tiếp xúc hoàn toàn trong môi trường nên hấp thu đều các chất dinh dưỡng từ môi trường Ngày nay, hệ thống bioreactor với cấu trúc của các... chọn tạo giống đơn bội Sử dụng phương pháp này, các nhà chọn giống lúa đã rút ngắn rất nhiều thời gian và cũng giảm bớt các chi phí về lao động, không gian c n thiết để tạo ra các dòng thu n 5 Một số hệ thống nuôi cấy mới 5.1 Nuôi cấy lỏng có sục khí – Bioreactor Hiện nay, h u hết các hệ thống vi nhân giống được thực hiện trên những hệ thống bình nuôi cấy khác nhau nhưng đều có điểm chung là mẫu cấy đều... được thực hiện thành công trên một số đối tượng như: cây măng tây, khoai tây, lê, hoa hồng, cà chua, dưa chuột, cà tím,… 4.2 Nuôi cấy chồi bên Về nguyên tắc, phương pháp này giống như phương pháp nuôi cấy nốt đơn thân Điểm khác nhau là trong phương pháp nuôi cấy nốt đơn thân có sự kéo dài chồi, thân và thường không c n đến cytokinin để phát triển Trong phương pháp nhân chồi bên, chồi được cô lập trên môi . 8  CHƢƠNG II. CÔNG NGHỆ NUÔI CẤY MÔ VÀ TẾ BÀO THỰC VẬT – NHÂN GIỐNG IN VITRO c  .    1. Giới thiệu sơ lƣợc về công nghệ nuôi cấy mô và tế bào thực vật 1.1. Giới thiệu  in vitro   . nhân giống in vitro   in vitro  in vitro   in vitro