Đang tải... (xem toàn văn)
Xác định được môi trường tối ưu của vi khuẩn Bacillus subtilis và Lactobacillus acidophilus để sản xuất chế phẩm sinh học sử dụng trong chăn nuôi thú y và nuôi trồng thủy sản.
BÁO CÁO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP “XÁC ĐỊNH MÔI TRƯỜNG TỐI ƯU ĐỂ THU SINH KHỐI VÀ ENZYME CỦA VI KHUẨN Bacillus subtilis, Lactobacillus acidophilus. THỬ NGHIỆM SẢN XUẤT CHẾ PHẨM SINH HỌC” GVHD: CN. TÔ MINH CHÂU TS. LÂM THỊ THU HƯƠNG SVTH: NGUYỄN ĐỨC DUY ANH NỘI DUNG BÁO CÁO 1. Đặt vấn đề 2. Vật liệu và phương pháp thí nghiệm 3. Kết quả và thảo luận 4. Kết luận và đề nghị ĐẶT VẤN ĐỀ Giải pháp ? Sử dụng chế phẩm sinh học (probiotic): B. subtilis, L. acidophilus… Chất hóa học, chất kháng sinh Tồn dư trong thịt giảm phẩm chất thịt Gây kháng thuốc và rối loạn hệ vi sinh vật đường ruột MỤC ĐÍCH Xác định được môi trường tối ưu của vi khuẩn Bacillus subtilis và Lactobacillus acidophilus để sản xuất chế phẩm sinh học. YÊU CẦU Đối với Bacillus subtilis Nuôi cấy Bacillus subtilis trên nhiều loại môi trường khác nhau tìm môi trường tối ưu để vi khuẩn sản sinh enzyme amylase và protease. Sản xuất chế phẩm chứa Bacillus subtilis . Kiểm tra chất lượng của chế phẩm vừa sản xuất và sau thời gian bảo quản. Đối với Lactobacillus acidophilus Phân lập từ chế phẩm Antibio. Tìm môi trường nhân giống thích hợp cho sinh khối và độ chua cao nhất. Sản xuất chế phẩm chứa vi khuẩn L.acidophilus. Kiểm tra chất lượng của chế phẩm vừa sản xuất và sau thời gian bảo quản. YÊU CẦU Giống vi khuẩn Bacillus subtilis ATCC - 6633 Lactobacillus acidophilus được phân lập từ chế phẩm Antibio do Hàn Quốc sản xuất. Thiết bị - dụng cụ Hóa chất Môi trường nuôi cấy: tăng sinh, nhân giống cấp 1, cấp 2, môi trường sản xuất VẬT LIỆU THÍ NGHIỆM PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM Giống gốc Bacillus subtilis Môi trường NB Tăng sinh Nomura Fragie rỉ đường + 2% tinh bộtEdwards pepton - gelatin 5 % giống 48 giờ, t phòng Kiểm tra Hoạt tính amylase Số lượng vi khuẩn có trong 1ml Hoạt tính protease Chọn môi trường tối ưu nhất 10 % giống Môi trường A Môi trường B Môi trường D Môi trường C Môi trường E Môi trường NB Sơ đồ bố trí thí nghiệm đối với Bacillus subtilis Nhuộm Gram, kiểm tra độ thuần PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM Môi trường A Môi trường B Môi trường D Môi trường C Môi trường E Chọn môi trường tối ưu nhất Sản xuất chế phẩm chứa Bacillus subtilis Bảo quản, kiểm tra PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM Nước 60 – 65 % so với nguyên liệu Môi trường nhân giống cấp 2 tối ưu Khoáng hỗn hợp Hấp khử trùng 121 0 C trong 20 - 25 phút Đổ lên khay Làm nguội đến 37 o C Nuôi 72 giờ ở nhiệt độ phòng Giống Bacillus subtilis 10% Sấy khô 40 - 45 o C Đánh tơi Xay mịn Sơ đồ quy trình sản xuất chế phẩm chứa Bacillus subtilis [...]...PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM Xay mịn Chế phẩm chứa Bacillus subtilis Đóng gói, kiểm tra và bảo quản PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM Sơ đồ bố trí thí nghiệm đối với Lactobacillus acidophilus Chế phẩm Antibio (chứa L acidophilus) Phân lập MRSA Chọn khuẩn lạc điển hình MRSB tăng sinh (24 giờ /37oC) Kiểm tra sinh hóa Xác định Lactobacillus acidophilus PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM Xác định Lactobacillus acidophilus Môi trường sữa... Lactobacillus acidophilus Môi trường sữa đậu nành Môi trường sữa đặc có đường 24 giờ, t phòng Kiểm tra Số lượng vi khuẩn có trong 1ml Độ chua Therne Chọn ra môi trường thích hợp Sản xuất chế phẩm chứa L acidophilus Kiểm tra, đóng gói và bảo quản KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Kết quả về khả năng tăng sinh khối và enzyme của B subtilis trên môi trường nhân giống cấp 1 Môi Trường Edward Fragie Nomura peptongelatin rỉ... 3 3 80a 80a 80a 80a 40b SD 0 0 0 0 0 Cv % 0 0 0 0 0 Enzyme Lặp lại (n) Amylase X (W0/ml) Protease XX (Hđp/ml) KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Vi khuẩn Bacillus subtilis trên môi trường A và B A B KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Kiểm tra số lượng vi khuẩn B subtilis trên môi trường A KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Kết quả số lượng B subtilis, hoạt độ enzyme sau khi sản xuất chế phẩm Số lượng : 58,9 × 1010 cfu/g Hoạt độ amylase:... LUẬN Kết quả về khả năng tăng sinh khối và enzyme của B subtilis trên môi trường nhân giống cấp 2 Môi Trường A B C D E 3 3 3 3 3 X (×1010 cfu/g) 345,67a 155,33b 11,368c 12,74c SD 126,595 55,229 1,362 13,26c 1,623 36,62 35,55 11,98 12,24 20,56 Lặp lại C V% 2,619 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Khả năng sinh enzyme amylase và protease của B subtilis trên môi trường nhân giống cấp 2 Môi trường A B C D E 3 3 3 3 3 160a... KẾT LUẬN Đối với Bacillus subtilis Môi trường nhân giống cấp 1: rỉ đường có bổ sung 2 % tinh bột Môi trường nhân giống cấp 2: môi trường A Chế phẩm chứa Bacillus subtilis có số lượng tế bào là 589 × 109 cfu/g Hoạt độ amylase là 160 (Wo/ml) và protease là 80 (Hđp/ml) Sau thời gian bảo quản ở nhiệt độ thường chúng tôi nhận thấy số lượng tế bào giảm nhưng hoạt độ enzyme amylase và protease không... protease: 80 Hđp/ml Kết quả kiểm tra chế phẩm chứa Bacillus subtilis sau thời gian bảo quản Chế độ bảo quản Thời điểm kiểm tra (ngày) Số lượng tế bào (×109 cfu/g) Nhiệt độ thường 10 20 30 118 88,9 68,9 Hoạt độ amylase Hoạt độ protease (W0/ml) (Hđp/ml) 160 160 160 80 80 80 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Vi khuẩn L acidophilus trên môi trường MRSA KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Các phản ứng sinh hóa của L acidophilus Phản ứng Kết... QUẢ VÀ THẢO LUẬN Khả năng sinh enzyme amylase và protease của B.subtilis trên môi trường cấp 1 Môi trường Edward Fragie Nomura peptongelatin rỉ đường + 2% tinh bột SD Cv% 3 8a 0 0 3 16b 0 0 3 26,67c 9,2376 34,63 3 10,67a 4,6188 43,28 3 265dd 256 0 0 Lặp lại (n) X (Hđp/ml) SD Cv% 3 8a 0 0 3 13,33b 4,6188 34,64 3 16b 0 0 3 32c0 0 3 128dd 128 0 0 Enzyme Amylase Protease Lặp lại (n) X (W0/ml) X KẾT QUẢ VÀ... LUẬN Đối với Lactobacillus acidophilus Sữa đặc có đường cao nhất ở nồng độ 25% sữa Số lượng vi khuẩn: 21,96 × 109 cfu/ml Hàm lượng acid lactic : 1,1093g/ 100ml Sữa đậu nành: môi trường NB15 Số lượng vi khuẩn: 73,1 × 109 cfu/ml Hàm lượng acid lactic : 1,6g/100ml Chế phẩm chứa L acidophilus có số lượng tế bào: 38 × 106 cfu/g Sau thời gian bảo quản số lượng tế bào giảm nhanh vào 10 ngày... sau thời gian bảo quản ĐỀ NGHỊ Chiết xuất ra enzyme tinh khiết Cần khảo sát thêm khi nuôi cấy B subtilis ở từng thời điểm khác nhau: 24, 36 giờ Khảo sát khả năng sinh enzyme lipase của B subtilis Cần phân lập thêm nhiều chủng L.acidophilus Sản xuất trên dây chuyền khép kín hạ giá thành Chế phẩm chứa B subtilis và L acidophilus Cảm ơn quý Thầy, Cô và các bạn !!! ... 1024 Xác định hoạt độ amylase theo phương pháp Wolhgemuth Đối chứng (+) có enzyme: dung dịch không có màu xanh Đối chứng (-) không có enzyme: dung dịch có màu xanh KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 1 2 1 4 1 8 1 16 1 32 1 64 1 128 1 1 1 256 512 1024 Xác định hoạt độ protease theo phương pháp Gross + Fuld Đối chứng (+) có enzyme: dung dịch trong Đối chứng (-) không có enzyme: dung dịch đục có kết tủa trắng KẾT QUẢ VÀ . “XÁC ĐỊNH MÔI TRƯỜNG TỐI ƯU ĐỂ THU SINH KHỐI VÀ ENZYME CỦA VI KHUẨN Bacillus subtilis, Lactobacillus acidophilus. THỬ NGHIỆM SẢN XUẤT CHẾ PHẨM SINH HỌC”. trường tối ưu để vi khuẩn sản sinh enzyme amylase và protease. Sản xuất chế phẩm chứa Bacillus subtilis . Kiểm tra chất lượng của chế phẩm vừa sản xuất