ĐỀ TÀI PENICCILIUM ROQUEFOTI GVHD: K.S. PHẠM MINH NHỰT NHÓM 7 TRẦN THUỴ KIM BÌNH TRƯƠNG THỊ TRÚC HÀ PHẠM NGÔ ÁNH THƯ HUỲNH THỊ DIỆU HIỀN MỤC LỤC Lời nói đầu Phần I Tổng Quan Về Penicillium Roqueforti I. Lịch sử phát hiện .4 II. Phân loại khoa học 4 III. Đặc điểm nhận dạng 6 IV. Đặc điểm sinh hoá .9 Phần II Các Phương Pháp Xác Định I. Phương pháp truyền thống .8 II. Các phương pháp hiện đại 1. Phương pháp PCR .22 2. Phương pháp RAPD .25 Phần III: Kết Luận 2 LỜI NÓI ĐẦU Trong những năm gần đây với sự tiến bộ của khoa học kỹ thuật, quá trình định danh cho nhiều loài vi sinh vật cũng như dễ dàng hơn với thiết bị hiện đại hơn. Nhiểu loại vi sinh có lợi, hại đều được biết đến rõ ràng hơn. Trong những năm vi sinh học phát triển một loài sinh độc tố nhưng có ít trong đó có loại nấm mốc Peniccilium roqueforti được xác định từ trong sản phẩm phomat xanh vốn quen thuộc với dân châu Âu. Penicilium roqueforti được các nhà khoa học tìm hướng đi mới ngoài việc sử dụng để sản xuất phomat xanh. 3 PHẦN I : TỔNG QUAN TÀI LIỆU I. LỊCH SỬ PHÁT HIỆN Đầu tiên được mô tả bởi Thom vào năm 1906, Penicillium roqueforti thoạt đầu là một loài hỗn tạp của nấm xanh sinh bào tử. Chúng được chia thành các nhóm loài khác nhau dựa trên sự khác biệt về kiểu hình, và sau đó chúng được kết hợp thành một loài bởi Raper và Thom. Nhóm Pencillium được phân loại lại vào năm 1996 dựa vào sự khác nhau của dãy DNA ribosom và đặc tính chuyển hoá thứ cấp. Trước đây được chia thành hai loại khác nhau – một là được dùng cho phomat ( Penicillium roqueforti var. roqueforti) và một là tạo patulin. II. PHÂN LOẠI KHOA HỌC Giới: Nấm Ngành: Ascomycota Lớp: Eurotiomycetes Bộ: Eurotiales Họ: Trichocomaceae Giống: Penicillium Loài: Penicillium roqueforti 4 Charles Thom (1872-1956) Hình ảnh được phóng đại vài trăm triệu lần dưới kính hiển vi điện tử (Penicillium roqueforti var. carneum), Penicillium roqueforti được phân loại thành ba loài là Pencillium roqueforti, Penicillium carneum và Penicillium paneum. III. ĐẶC ĐIỂM 1. Đặc điểm hình thái 5 Hình ảnh Penicilium roqueforti Penicilium roqueforti là loại mốc có màu xanh, có cuốn đính bào từ, sinh bào tử, sinh sản hữu tính, hình sợi, thuộc ngành nấm nang. 6 Qúa trình hợp giao tử (A – F) ; Toàn giao (Hologamy)(G – J); Tiếp xúc giữa 2 giao tử (K– L); Tự giao (autogamy)(M – N: sinh sản ở nấm mốc. 2. Đặcđiểm bào tử Bào tử của nấm mốc Penicilium roqueforti : hình cầu gần như hình tròn, bề mặt tròn nhẵn(kích thước 3,5- 5,5 µm), không có màng tế bào. Cuống dài 100-200 x 4-5,5,…. Khuẩn lạc Penicilium roqueforti 7 Bào tử Penicilium roqueforti 3. Môi trường sống Đặc điểm trên môi tổng hợp: Penicillium roqueforti chỉ là một loài của Penicillium mà nó có thể phát triển trên môi trường chứa 0-5% acid acetic, ở nồng độ rượu cao, và ở nồng độ oxy thấp (nói rõ trong phần sau). Khuẩn lạc trên môi trường Czapek thạch và MEA 25 o C phát triển rất nhanh chóng, đường kính đạt 4-5 cm, trong vòng 14 ngày, các bào tử có các cuống mọc dày đặc, mượt, Màu xanh xanh, sau đó trở nên tối hơn. Dịch tươi do loài này tiết ra trong như giọt pha lê. Mùi không rõ nét. Sau đó môi trường thay đổi màu sắc từ màu xanh sang xanh đậm. Cuống bào tử đính kích thích 100-200 x 4,0-6,5 μm. Hạt bào tử đính trong cột lỏng lẻo,hình cầu, màu xanh lục, nhẵn-tường, chủ yếu là từ 4-6 mm, có khi đến 8mm. Phân bố trong tự nhiên: Roqueforti Penicillium là một loại nấm hoại sinh phổ biến , nó thì tồn tại khắp nơi trong tự nhiên và có thể được phân lập từ đất, các chất hữu cơ phân hủy và các bộ phận của cây Ngoài ra, chúng được tìm thấy trong ẩm ướt, hầm tối, đến 8 Hình ảnh P.roqueforti vườn đất và tán lá, mà còn trong phòng tắm, nước, đường ống, con dấu cao su, ngưỡng cửa sổ, thảm, nệm và đồ nội thất… 4. Tốc độ phát triển Tốc độ phát triển nhanh trên các môi trường và đạt kích thước sau: CYA: 34- 55mm, MEA: 35-56 mm, YES: 47-74 mm. Khuẩn lạc của Penicilium roqueforti phát triển rất tốt trên môi trường acid acetic : 0,5%, và cũng phát triển tốt trên CREA thích hợp trên môi trường acid. IV. ĐẶC TÍNH SINH HOÁ 1. Sinh hợp chất thứ cấp 1.1. Penicilium roqueforti là loài sinh ra hợp chất thứ cấp marcfortines và fumigaclvine A. Những tư liệu về những hợp chất này tạm thời chưa được rộng nên khó khăn trong việc lấy nó làm tư liệu. 9 Marcfortines từ Penicilium roqueforti 1.2. Độc tố PR và eremofortin C Là chất chuyển hóa thông thường của Penicilium roqueforti. Các cấu trúc hóa học của hai hợp chất liên quan chặt chẽ với nhau và khác nhau chỉ bởi một aldehyde và một nhóm acohol tại vị trí C-12 . Định tính, định lượng độc tính enzyme: Các hoạt động tối đa các enzym trong các môi trường đã được tìm thấy vừa xảy ra vào ngày 13 tính từ khi bắt đầu thí nghiệm, trong đó tương ứng cực đại của PR trong vật chứa độc tố. Enzyme này được phân lập và tinh chế từ các môi trường và vừa khuẩn ty thể của nấm tương ứng thông qua một thao tác liên quan đến amoni sulfat và fractionation DEAE-cellulose sắc ký. Sản lượng đã được 33,3 và 21,6% cho các enzym có hoạt tính trung. Độ pH tối ưu cho enzym khi pH 5,6. Khi nó xúc tác sự chuyển đổi ở 30 ° C và phân rã với thời gian phản ứng khi ở nhiệt độ cao. Ở 100 ° C, hoạt động của enzyme đã hoàn toàn bị mất. Các K. và Vmax của các enzym như được xác định ở 30 ° C là 0,02 mM và 4.0, umol / phút mỗi mg, tương ứng. Trọng lượng phân tử của enzyme đã được ước tính bằng cách lọc ,áp suất sắc ký lỏng thu được là I-250 protein đến 40.000. Độc tố PR và eremofortin C (EC) là chất chuyển hóa thứ cấp của nấm Penicillium roqueforti, những độc tố này gây nguy hiểm cho những người sử dụng sản phẩm phomat bị nhiễm penicilium roqueforti. Hình: phân tích chất độc bằng phương pháp HPLC . sự hoạt động của độc tính trong Penicilium roqueforti. 10 123doc.vn