Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật I II III IV V VI Cơ sở nuôi cấy mô tế bào thực vật Nhân giống vơ tính in vitro Nuôi cấy giao tử,tạo đơn bội invitro Nuôi cấy tế bào trần Thụ phấn nuôi cấy phôi in virto Ưu nhược điểm nuôi cấy mô tế bào thực vật Nuôi cấy mô tế bào thực vật : khái niệm chung cho nguyên liệu thực vật hồn tồn vi sinh vật ni mt dinh dưỡng nhân tạo điều kiện vô trùng I.Cơ sở ni cấy mơ tế bào thực vật • Tính toàn tế bào thực vật: từ dạng tế bào thể thực vật(lá,thân,hoa…)cũng có khả phát triển thành thể hồn chỉnh • Sự phân hóa tb: chuyển hóa tb phôi sinh thành tb mô chuyên biệt,đảm nhận chức khác • Sự phản phân hóa tb: điều kiện cần thiết thích hợp,các tb,cơ quan lại trở dạng phơi sinh phân chia mạnh mẽ Phân hóa tế bào Tế bào phân hóa có Tế bào phơi sinh Tế bào dãn Phân hóa tế bào chức riêng biệt  Quy trình nhân giống vơ tính in vitro II.Nhân giống vơ tính in vitro Nhân giống lồi ốngNhâm giống intrên nghiệm vitro Vô trùng điều kiện vô trùng mt nhân tạo vàmẫu cấy Tạo in vitro Chuẩn bị mẹ Chuyển vườn ươm • Ưu điểm: nhân giống quy mô công nghiệp nhân nhanh với hệ số nhân giống cao sản phẩm giống đồng nhất,sạch bệnh tiết kiệm thời gian,thu hoạch lớn • Nhược điểm: tính bất định mặt di truyền nhiễm mẫu tạo độc tố hóa thủy tinh thể III.Nuôi cấy giao tử,tạo đơn bội invitro 1.Tạo đơn bội nuôi cấy bao phấn Nguyên lý: hình thành đơn bội từ hạt phấn sinh sản đơn tính đực theo phương thức Sinh Sản Đơn Tính Đực Trực Tiếp Gián Tiếp Hỗn Hợp Sơ đồ tạo đơn bội từ nuôi cấy bao phấn Khử trùng bề mặt Tách bao phấn Hoa Loại bỏ nhị Nhuộm acetoarmine để xác định GĐPT hạt phấn Nuôi cấy mt đặc Phát triển phôi Cây đơn bội Nuôi cấy mt lỏng • Ưu điểm Mơi trường ni cấy đơn giản Tạo giống trồng bệnh, có phẩm chất di truyền đồng Phát sinh phôi dễ dàng Thuận lợi cho việc nghiên cứu di truyền • Nhược điểm Hiệu suất tạo đơn bội không cao Khó sàng lọc đơn bội Khi ni cấy bao phấn thường gặp tượng bạch tạng IV.Nuôi cấy tế bào trần Phương pháp để tách nuôi cấy 1.Tách tế bào trần • Khử trùng mẫu • Ngâm mẫu dung dịch thẩm thấu để tế bào co nguyên sinh chất • Tách lớp mặt • Ngâm mẫu hỗn hợp enzym • Tinh tế bào trần • Ni cấy tế bào trần mơi trường thích hợp 2.Tạo đơn bội ni cấy nỗn chưa thụ tinh Ngun lý: ni cấy noãn chưa thụ tinh phát triển thành đơn bội sinh sản đơn tính Theo phương pháp • Ni cấy nỗn chưa thụ tinh tách rời • Ni cấy lúc nhiều nỗn phần lõi bắp Gặp khó khăn việc tách tb nỗn dễ làm tổn thương mơ 2.Tái sinh từ protoblast: • Tạo vách tế bào: đưa tb trần vào mt tái sinh sau 1-2 tuần • Phát triển mơ sẹo vào tạo hồn chỉnh: chuyển tb sang mt đặc tạo mô sẹo tái sinh chồi  hồn chỉnh Sơ đồ ni cấy tế bào trần Ứng dụng nuôi cấy tế bào trần chọn tạo giống • Dung hợp tế bào trần: kết hợp hai hay nhiều tế bào trần tạo khối tế bào trần, nhân chúng kết hợp tồn riêng rẽ  tạo khối mô sẹo phôi soma, ứng dụng tạo lai tế bào soma, xáy theo đường: tự phát hay cảm ứng • Chọn dịng tb: Bằng biện pháp bỏ thành cellulose đưa thể thực vật trạng thái tế bào riêng rẽ với kích thước không lớn nhiều so với thể vi sinh vật cho phép tiến hành kỹ thuật chọn dòng vi sinh vật thực vật bậc cao V.Thụ phấn ni cấy phơi in virto • Thụ phấn tự nhiên: Hạt phấn chín rơi vào núm nhụynảy mầm,tạo ống phấn Hai tinh tử 1n tới noãnthụ tinh kép (tạo phôi + hợp bào nội nhũ tam bội) • Bất hợp giao tử trước thụ tinh: hạt phấn lạ rơi vào núm nhụy  nhụy tạo chất ức chế ngăn cản phát triển làm biến dạng ống phấn,ngăn thụ tinh • Bất hợp giao tử sau thụ tinh: hạt phấn lạ rơi vào núm nhụy  thụ phấn diễn hạt không phát triển (do nội nhũ phôi hình thành chế ức chế phát triển phôi) 1.Thụ phấn in vitro Để khắc phục tượng bất hợp giao tử lai xa Quá trình thụ phấn • Khử trùng nhụy hoa,tách bầu chứa nỗn ni cấy mt vơ trùng • Đặt hạt phấn trực tiếp lên đầu nhụy thụ phấn thành công,phôi phát triển mt ni cấy • Ni cấy phơi in vitro Cứu phơi thụ phấn in vitro,có thụ tinh tạo thành hợp tự phôi không phát triển Phôi non tách nuôi cấy mt thích hợp để phát triển bình thường VI.Ưu nhược điểm nuôi cấy mô tế bào thực vật Ưu điểm • Có thể nhân giống trồng quy mơ lớn,kể đối tượng khó nhân giống • Tiết kiệm vật liệu giống • Cho sản phẩm đồng mặt di truyền • Nhân nhanh giống quý,hữu ích giữ đặc tính di tuyền mong muốn,giống bệnh • Giúp loại trừ tính bất thụ hữu tính, tạo lai hữu thụ; Giúp chuyển đặc tính có lợi vào trồng, địi hỏi phương tiện phức tạp • Khơng cần hiểu biết xác liên hệ gen, tốn kém, nhanh trực tiếp Nhược điểm • Đầu tư thiết bị tốn kém,chi phí đào tạo cán kĩ thuật cao dẫn đến giá thành cao • Tính bất định mặt di truyền,một số trường không đồng xảy biến dị soma • Sự nhiểm bệnh vi khuẩn ... sở nuôi cấy mơ tế bào thực vật Nhân giống vơ tính in vitro Nuôi cấy giao tử,tạo đơn bội invitro Nuôi cấy tế bào trần Thụ phấn nuôi cấy phôi in virto Ưu nhược điểm nuôi cấy mô tế bào thực vật Nuôi. .. Nuôi cấy mô tế bào thực vật : khái niệm chung cho nguyên liệu thực vật hồn tồn vi sinh vật ni mt dinh dưỡng nhân tạo điều kiện vô trùng I.Cơ sở ni cấy mơ tế bào thực vật • Tính tồn tế bào thực vật: ... đặc tạo mô sẹo tái sinh chồi  hồn chỉnh Sơ đồ ni cấy tế bào trần Ứng dụng nuôi cấy tế bào trần chọn tạo giống • Dung hợp tế bào trần: kết hợp hai hay nhiều tế bào trần tạo khối tế bào trần,