63 thấp (2 bản sao). Độ lệch chuẩn số bản sao ban đầu của các mẫu thấp cho thấy khả năng định lượng chính xác với độ lặp lại thí nghiệm cao. Kết quả kiểm tra 10 mẫu tôm thu từ thực tế khác qua Real - time PCR như sau: Hình 4.16 thể hiện các đường biểu diễn tín hiệu huỳnh quang của 10 mẫu tôm thu thực tế vượt qua đường baseline subtracted, cho thấy 10 mẫu này đều dương tính với WSSV. Tất cả 10 mẫu này đều nhiễm WSSV nhẹ, thể hiện qua số chu kỳ ngưỡng lên khá muộn từ chu kỳ 34 đến 42. Số lượng bản sao ban đầu của WSSV được định lượng dựa trên đường chuẩn ở Hình 4.17. Hình 4.16 Đồ thị biểu diễn mối quan hệ giữa nồng độ huỳnh quang và số chu kỳ của 10 mẫu tôm thu thực tế tiếp theo : 9 : 11 : 12 : 15 ▲: các chuẩn : đối chứng âm : 2 : 3 : 4 : 5 : 7 : 8 64 Phản ứng Real - time PCR này hoạt động tốt thể hiện qua hiệu quả phản ứng Real - time PCR đạt khá cao: 90,5%. Log số bản sao ban đầu và chu kỳ ngưỡng tuyến tính với nhau qua hệ số tương quan r 2 bằng 1. Số bản sao ban đầu của 10 mẫu tôm sú được thể hiện ở Bảng 4.9 sau: Bảng 4.9 cho thấy các mẫu tôm này đều nhiễm WSSV ở mức độ rất nhẹ từ 1 đến 13 bản sao. Chu kỳ ngưỡng của mẫu 3 lên sớm nhất: 34,82 tương ứng với số bản sao cao nhất gần 13 bản sao. Các mẫu 5, 12 nhiễm WSSV rất nhẹ có chu kỳ ngưỡng lên khá muộn (41, 42 chu kỳ) với số bản sao ban đầu chỉ 1 bản sao. Kết quả kiểm tra 10 mẫu tôm thu từ thực tế còn lại theo Hình 4.18. Hình 4.17 Đồ thị biểu diễn đƣờng chuẩn của 10 mẫu tôm thu thực tế tiếp theo Bảng 4.9 Số bản sao ban đầu của 10 mẫu tôm thu thực tế tiếp theo Mẫu thực tế Chu kỳ ngưỡng Số bản sao ban đầu 2 38,46 1,19 3 34,82 1,25.10 1 4 37,11 2,84 5 40,90 2,48.10 -1 7 38,38 1,25 8 35,69 7,10 9 36,21 5,08 11 36,94 3,18 12 41,47 1,71.10 -1 15 36,79 3,49 65 Hình 4.18 thể hiện các đường biểu diễn tín hiệu huỳnh quang của mẫu 16, 17, 24 nằm dưới baseline subtracted cho thấy 3 mẫu âm tính với virus gây bệnh đốm trắng, các đường biểu diễn tín hiệu huỳnh quang của các mẫu 19, 20, 21, 27, 28, 29, 30 vượt qua đường baseline subtracted cho thấy 7 mẫu tôm này đều nhiễm WSSV. Các mẫu dương tính này có chu kỳ ngưỡng lên khá muộn từ chu kỳ 35 đến 41. Số bản sao ban đầu của các mẫu tôm được định lượng qua đồ thị biểu diễn đường chuẩn ở Hình 4.19. Bảng 4.9. Số bản sao ban đầu của 10 mẫu tôm thu thực tế Mẫu thực tế Chu kỳ ngưỡng Số bản sao ban đầu 2 38,46 1,19 3 34,82 1,25.10 1 4 37,11 2,84 5 40,90 2,48.10 -1 7 38,38 1,25 8 35,69 7,10 9 36,21 5,08 11 36,94 3,18 12 41,47 1,71.10 -1 15 36,79 3,49 Hình 4.18 Đồ thị biểu diễn mối quan hệ giữa nồng độ huỳnh quang và số chu kỳ của 10 mẫu tôm thu thực tế còn lại : 27 : 28 : 29 : 30 ▲: các chuẩn : đối chứng âm : 16 : 17 : 19 : 20 : 21 : 24 66 Hiệu quả của phản ứng Real - time PCR đạt 90,5% thể hiện ở Hình 4.19. Hệ số tương quan r 2 bằng 1 chứng tỏ mối quan hệ giữa log số bản sao ban đầu và số chu kỳ ngưỡng rất tuyến tính với nhau theo phương trình Y = - 3,573 X + 38,745. Số chu kỳ ngưỡng và số bản sao ban đầu thể hiện ở Bảng 4.10. Bảng 4.10 thể hiện 7 mẫu 19, 20, 21, 27, 28, 29, 30 nhiễm WSSV từ rất nhẹ đến nhẹ, với số bản sao tương ứng là 3, 8, 2, 1, 1, 1, 12. Các mẫu còn lại 16, 17, 24 cho kết quả âm tính với WSSV. Từ kết quả kiểm tra qua Real - time PCR của 30 mẫu thực tế cho thấy có 22 trong số 30 mẫu tôm thu từ thực tế bị nhiễm WSSV, chiếm tỷ lệ 73,33%, từ kết quả này có thể cho thấy tỷ lệ nhiễm WSSV trên tôm nuôi thực tế là khá cao. Trong số 18 mẫu tôm giống thu từ hai tỉnh Bạc Liêu và Bến Tre, có 14/ 18 mẫu bị nhiễm WSSV, chiếm tỷ lệ 77,77%. Theo Nguyễn Văn Hảo (2004), kết quả phân tích tỷ lệ tôm giống nhiễm WSSV bằng Nested PCR ở các tỉnh Đồng Bằng Sông Cửu Long trong giai đoạn từ 30 Hình 4.19 Đồ thị biểu diễn đƣờng chuẩn của 10 mẫu tôm thu thực tế còn lại Bảng 4.10 Số chu kỳ ngƣỡng và số bản sao ban đầu của 10 mẫu tôm thu thực tế còn lại Mẫu thực tế Chu kỳ ngưỡng Số bản sao 19 37,37 2,43 20 35,65 7,36 21 37,89 1,74 27 40,51 3,2.10 -1 28 40,97 2,38.10 -1 29 39,82 5,01.10 -1 30 35,02 1,11.10 1 16 N/A N/A 17 N/A N/A 24 N/A N/A 67 đến 60 ngày tuổi là 37,77%, so với kết quả kiểm tra qua Real - time PCR, thì tỷ lệ này thấp hơn một nửa. Điều này có thể là do phương pháp Real - time PCR nhạy hơn phương pháp Nested PCR đã sử dụng hoặc có thể là do số lượng mẫu thu còn quá ít, chưa đủ để đại diện cho tỷ lệ nhiễm WSSV của tôm sú giống trong khu vực thu mẫu. Đối với mẫu tôm nuôi thương phẩm, có 6/ 9 mẫu (chiếm 66,66%) dương tính với WSSV qua Real - time PCR, và mẫu tôm bố mẹ, có 2/ 3 mẫu thu bị nhiễm WSSV. So với kết quả thu được của Nguyễn Văn Hảo (2004), tỷ lệ nhiễm WSSV qua kiểm tra Nested PCR ở các tỉnh Đồng Bằng Sông Cửu Long trên tôm nuôi lớn hơn 60 ngày tuổi và tôm bố mẹ là: 18,24% và 11,11%. Kết quả này có thể do khả năng phát hiện WSSV của Real – time PCR cao hơn các phương pháp khác và do số lượng mẫu thu quá ít. Cho nên cần tiến hành kiểm tra với số lượng mẫu lớn hơn để có được tỷ lệ nhiễm WSSV chính xác của các giai đoạn tôm sú nuôi. Tuy nhiên, tỷ lệ tôm bố mẹ, tôm giống và tôm thương phẩm bị nhiễm WSSV khá cao, cho nên cần có biện pháp kiểm tra chẩn đoán nhanh, chính xác trong quá trình sản xuất giống, kiểm tra giống trước khi thả nuôi và trong quá trình nuôi để giảm thiểu rủi ro cho người nuôi tôm và đạt được kết quả tốt nhất mà theo các kết quả thí nghiệm trên thì phương pháp Real – time PCR cho kết quả tốt và thích hợp nhất. 4.6. Kết quả theo dõi tình trạng thu hoạch của các ao nuôi tôm đã đƣợc thu mẫu kiểm tra Trong số 30 mẫu tôm thu từ thực tế, tình trạng thu hoạch các ao nuôi tôm của 23 mẫu được ghi nhận qua Bảng 4.11. 68 Bảng 4.11 cho thấy tất cả các mẫu tôm giống qua kiểm tra Real - time PCR về WSSV với kết quả dương tính đều phải tháo bỏ ao nuôi. Các mẫu tôm giống cho kết quả âm tính với Real – time PCR cho kết quả thu hoạch tốt. Do vậy, tôm giống thả nuôi sạch bệnh là một trong những yêu cầu cấp thiết để quyết định yếu tố thành công Mẫu Giai đoạn tôm nuôi Kết quả xét nghiệm qua Real – time PCR Tình trạng thu hoạch 1 Tôm giống 34 ngày + Tháo bỏ ao tôm 2 Tôm giống 31 ngày + Tháo bỏ ao tôm 3 Tôm giống 31 ngày + Tháo bỏ ao tôm 4 Tôm giống 31 ngày + Tháo bỏ ao tôm 5 Tôm giống 31 ngày + Tháo bỏ ao tôm 6 Tôm giống 31 ngày - Thu hoạch tốt 7 Tôm giống 31 ngày + Tháo bỏ ao tôm 8 Tôm nuôi thương phẩm (73 ngày) + Tháo bỏ ao tôm 9 Tôm nuôi thương phẩm (43 ngày) + Tháo bỏ ao tôm 10 Tôm giống 36 ngày - Thu hoạch tốt 11 Tôm giống 34 ngày + Tháo bỏ ao tôm 12 Tôm giống 31 ngày + Tháo bỏ ao tôm 13 Tôm giống 31 ngày - Thu hoạch tốt 14 Tôm giống 31 ngày - Thu hoạch tốt 15 Tôm nuôi thương phẩm (62 ngày) + Tháo bỏ ao tôm 16 Tôm nuôi thương phẩm (98 ngày) - Thu hoạch tốt 17 Tôm nuôi thương phẩm (132 ngày) - Thu hoạch sớm 18 Tôm giống 33 ngày ++ Tháo bỏ ao tôm 22 Tôm nuôi thương phẩm (135 ngày) ++++ Thu hoạch sớm 24 Tôm bố mẹ - Duy trì nuôi 26 Tôm bố mẹ + Loại bỏ 27 Tôm bố mẹ + Loại bỏ 30 Tôm nuôi thương phẩm (120 ngày) + Thu hoạch sớm Bảng 4.11 Bảng kết quả theo dõi tình trạng thu hoạch của các ao nuôi tôm đã đƣợc thu mẫu kiểm tra +: nhiễm WSSV rất nhẹ ++: nhiễm WSSV nhẹ ++++: nhiễm WSSV nặng -: không nhiễm WSSV 69 của các hộ nuôi tôm. Kết quả thu hoạch của các ao nuôi thương phẩm có thu mẫu để kiểm tra WSSV bằng Real – time PCR cũng cho kết quả tương tự, tất cả các ao nuôi bị nhiễm WSSV đều bị tháo bỏ hoặc thu hoạch sớm và các ao nuôi không bị nhiễm WSSV cho kết quả thu hoạch tốt hoặc bị thu hoạch sớm. Điều này có thể là do quá trình quản lý ao nuôi kém dẫn đến hiện tượng lây nhiễm WSSV từ bên ngoài vào trong ao và cũng có thể do các yếu tố khác. Do vậy, quy trình quản lý ao nuôi tốt cũng góp phần đáng kể vào sự thành công của vụ nuôi. Tôm bố mẹ bị nhiễm WSSV cũng không cho kết quả sản xuất giống tốt (bị loại bỏ), mặt khác, có thể lây nhiễm WSSV sang tôm giống. Vì vậy, tôm bố mẹ sạch bệnh là yếu tố cần thiết để tạo ra tôm giống sạch bệnh và quyết định yếu tố thành công trong sản xuất giống. Từ các kết quả trên cho thấy các ao thả nuôi tôm giống cho kết quả dương tính qua kiểm tra bằng Real – time đều bị tháo bỏ, các ao nuôi tôm thương phẩm bị nhiễm WSSV đều bị thu hoạch sớm, các ao nuôi tôm thương phẩm không bị nhiễm WSSV có thể cho kết quả thu hoạch tốt hoặc có thể bị thu hoạch sớm tùy thuộc vào quá trình quản lý ao nuôi, và tôm bố mẹ bị nhiễm WSSV thì cho kết quả sản xuất giống kém. 70 Phần 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1. Kết luận Sau khi thực hiện đề tài, qua 6 thí nghiệm đã tiến hành, tôi nhận thấy: Ly trích bằng SDS, NaOH, sốc nhiệt kết hợp với Instagene Matrix sẽ thu được ADN của WSSV tinh sạch thích hợp cho tiến hành Real – time PCR và Non Stop Nested PCR. Real - time PCR có thể ứng dụng để kiểm tra mầm bệnh WSSV trên tôm sú với khả năng phát hiện (1 bản sao) cao hơn các phương pháp khác. Hơn nữa, Real - time PCR còn cho phép định lượng số bản sao của virus gây bệnh đốm trắng mà các phương pháp khác không có khả năng thực hiện. Phương pháp Real - time PCR có khả năng định lượng chính xác số lượng bản sao của WSSV với độ lặp lại cao. Độ nhạy của phương pháp Real - time PCR cao hơn 10 lần so với Non Stop Nested PCR. Tỷ lệ nhiễm WSSV trên tôm sú ở các giai đoạn nuôi qua kiểm tra bằng Real – time PCR có thể cao hơn rất nhiều so với tỷ lệ nhiễm được công bố qua xác định bằng các phương pháp khác. Các ao thả nuôi tôm giống cho kết quả dương tính qua kiểm tra bằng Real – time đều bị tháo bỏ, các ao nuôi tôm thương phẩm bị nhiễm WSSV đều bị thu hoạch sớm, các ao nuôi tôm thương phẩm không bị nhiễm WSSV có thể cho kết quả thu hoạch tốt hoặc có thể bị thu hoạch sớm tùy thuộc vào quá trình quản lý ao nuôi, và tôm bố mẹ bị nhiễm WSSV thì cho kết quả sản xuất giống kém. 5.2. Đề nghị Nên sử dụng phương pháp Real – time PCR để kiểm tra phát hiện virus gây bệnh đốm trắng (WSSV) trên tôm sú thay cho các phương pháp khác. Không thả nuôi tôm giống bị nhiễm WSSV. Không sử dụng tôm bố mẹ bị nhiễm WSSV để sản xuất tôm giống. Kiểm tra tôm nuôi thương phẩm định kỳ trong quá trình nuôi để có biện pháp xử lý thích hợp. 71 Do thời gian thực hiện đề tài hạn hẹp, nếu có điều kiện, tôi đề nghị thực hiện tiếp một số nghiên cứu như sau: Kiểm tra đánh giá tỷ lệ nhiễm WSSV bằng phương pháp Real – time PCR ở các giai đoạn tôm nuôi. Phát triển kỹ thuật Real - time PCR để phát hiện và định lượng các loại virus khác gây bệnh trên tôm sú. Tiến hành nghiên cứu nhằm sản xuất ra tôm giống sạch bệnh để giảm rủi ro cho người nuôi tôm. 72 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT 1. Trần Minh Anh, 1989. Đặc điểm sinh học và kỹ thuật nuôi tôm he. Nhà xuất bản Thành Phố Hồ Chí Minh. 394 trang. 2. Trần Thị Minh Tâm và Đái Duy Ban, 1999. Bệnh thường gặp ở tôm – Phương pháp chẩn đoán và phòng trị. Nhà Xuất Bản Nông nghiệp Hà Nội. 144 trang. 3. Nguyễn Văn Chung, 2000. Cơ sở sinh học và kỹ thuật sản xuất giống nhân tạo tôm sú. Nhà xuất bản Nông nghiệp. 71 trang. 4. Trần Thị Hoàng Dung, 2000. Ứng dụng phương pháp Nested PCR điều tra bệnh WSSV trên tôm sú ở một số tỉnh phía Nam. Khóa luận tốt nghiệp Kỹ sư Thủy sản, Đại học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh, Việt Nam. 56 trang. 5. Hồ Huỳnh Thùy Dương, 2002. Sinh học phân tử. Nhà xuất bản Giáo dục. 301 trang. 6. Nguyễn Văn Hảo, 2000. Một số vấn đề về kỹ thuật nuôi tôm sú công nghiệp. Nhà xuất bản Nông nghiệp. 210 trang. 7. Nguyễn Văn Hảo, 2004. Một số bệnh thường gặp trên tôm sú (Penaeus monodon) – Các phương pháp chẩn đoán và biện pháp phòng trị. Nhà xuất bản Nông nghiệp. 223 trang. 8. Trần Thị Việt Ngân, 2002. Hỏi và đáp về kỹ thuật nuôi tôm sú. Nhà xuất bản Nông nghiệp Tp. Hồ Chí Minh. 192 trang. 9. Báo cáo tại hội thảo bệnh tôm sú tại Hải Phòng, ngày 28 – 29/2/2004. Tổng quan bệnh virus đốm trắng ở tôm he (Penaeus). Tạp chí thông tin KHCN và Kinh Tế Thủy Sản, số 4 – 2004. 42 trang. 10. Hội thảo về bệnh tôm nuôi ở các tỉnh phía Nam, 2004. Bệnh đốm trắng của tôm sú và biện pháp phòng trị. Tạp chí Thủy sản, số 3 – 2004. 44 trang. 11. Bộ Thủy Sản, 1996. Nguồn lợi thủy sản Việt Nam. Nhà xuất bản Nông nghiệp Hà Nội. 616 trang. 12. Bộ Thủy Sản, 2003. Tuyển tập báo cáo khoa học về nuôi trồng thủy sản tại hội nghị khoa học toàn quốc lần thứ 2 (24 – 25/11/2003). Nhà xuất bản Nông nghiệp Hà Nội. 683 trang. [...]... 1 0-5 1 0-6 1 0-7 1 0-8 Chu kỳ ngưỡng lần 1 20, 53 23, 86 27,40 30 ,37 33 , 93 37 ,32 41,76 N/A Real - time PCR Chu kỳ ngưỡng lần 2 21,06 24 ,38 27,78 30 ,91 34 ,8 36 ,96 41,08 N/A Chu kỳ ngưỡng trung bình 20,80 24,12 27,59 30 ,64 34 ,37 37 ,14 41,42 N/A 633 bp 221bp (-) MK (+) 1 0-1 1 0-2 1 0 -3 1 0-4 1 0-5 1 0-6 1 0-7 1 0-8 Hình B.6 Non Stop Nested PCR trên mẫu tôm nhiễm WSSV ở nồng độ pha loãng từ 1 0-1 đến 1 0-8 lặp lại lần... N/A N/A N/A 78 : 1 : 2 : 3 : 4 : 5 : 6 : 7 : 8 : 9 : 10 : 11 : 12 : đối chứng âm : các chuẩn Hình B .3 Đồ thị biểu diễn mối quan hệ giữa nồng độ huỳnh quang và số chu kỳ của 12 mẫu tôm sú thử nghiệm Real - time PCR lần 2 Hình B.4 Đồ thị biểu diễn đƣờng chuẩn của 12 mẫu tôm sú thử nghiệm Real - time PCR lần 2 79 Bảng B .3 Kết quả thử nghiệm Real - time PCR trên 12 mẫu tôm sú lần 2 Type A02... : 1 0-1 : 1 0-2 : 1 0 -3 : 1 0-4 : 1 0-5 : 1 0-6 : 1 0-7 : 1 0-8 : đối chứng âm Hình B.5 Đồ thị biểu diễn mối quan hệ giữa nồng độ huỳnh quang và số chu kỳ của mẫu nhiễm WSSV pha loãng từ 1 0-1 đến 1 0-8 lặp lại lần 2 83 Bảng B.10 Kết quả tính chu kỳ ngƣỡng ở các nồng độ từ 1 0-1 đến 1 0-8 của mẫu nhiễm WSSV sau hai lần thử nghiệm Real - time PCR qua phần mềm excel Nồng độ 1 0-1 1 0-2 1 0 -3 1 0-4 1 0-5 1 0-6 ... N/A 21 ,34 24,65 28,05 31 ,18 35 ,01 39 ,51 16 ,30 33 ,76 32 , 63 37,40 20,19 19 ,34 18,75 18,65 35 ,20 37 ,94 35 ,35 N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A Bảng B.4 Kết quả xử lý qua phần mềm excel của 12 mẫu tôm lặp lại 2 lần Mẫu Ct lần 1 Ct lần 2 Ct trung bình 1 2 3 4 5 6 7 8 9 17, 03 33, 88 33 ,05 37 ,98 20 ,37 19,72 18,9 18,96 38 ,15 16 ,3 33, 76 32 , 63 37,4 20,19 19 ,34 18,75 18,65 35 ,2... sốc nhiệt và ly trích sử dụng SDS, NaOH, sốc nhiệt kết hợp với Instagene Matrix Well A2 A4 A6 A8 A10 A12 C2 C4 C6 C8 C10 C12 E6 Identifier 1 0-1 I 1 0-2 I 1 0 -3 I 1 0-4 I 1 0-5 I 1 0-6 I 1 0-1 S 1 0-2 S 1 0 -3 S 1 0-4 S 1 0-5 S 1 0-6 S (-) Ct 16,9 20,6 23, 7 27,1 30 ,6 34 ,8 20,6 23, 8 27,5 31 ,6 34 ,9 37 ,8 N/A I: quy trình ly trích 2 S: quy trình ly trích 1 Bảng B.2 Kết quả thử nghiệm Real - time PCR trên 12 mẫu tôm sú lần 1 Type... std std 100 100 100 1 0-1 1 0-1 1 0-1 1 0-2 1 0-2 1 0-2 1 0 -3 1 0 -3 1 0 -3 Rep 1 2 3 4 5 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 Ct Log SQ SQ SQ Mean SQ SD Ct Ct Mean SD 22,57 25,47 28,97 32 ,33 35 ,79 19,19 18,81 18 ,34 21,75 21,84 22,14 25,76 25,65 25,58 29,21 29,46 29,15 5,000 4,000 3, 000 2,000 1,000 5,952 6,068 6,207 5,1 83 5,158 5,067 3, 982 4,0 13 4, 035 2,944 2,870 2,9 63 1,00E+05 1,00E+04 1,00E+ 03 1,00E+02 1,00E+01... 19 93 Cải tiến kỹ thuật nuôi tôm tại Việt Nam Nhà xuất bản Nông nghiệp 87 trang 18 Phạm Hùng Vân, 2002 Cẩm nang các kỹ thuật PCR và RT -PCR phát hiện các tác nhân virus thường gây bệnh trên tôm sú Penaeus monodon Công ty Thương Mại và Dịch Vụ Nam Khoa 29 trang TIẾNG NƢỚC NGOÀI 19 Applied Biosystems, 2004 Real - time PCR Vs traditional PCR 15 pages 20 Bio - Rad, 2004 iCycler iQTM Multi - Color Real - time. .. 73 ngày Tôm thương phẩm 43 ngày Tôm giống 36 ngày Tôm giống 34 ngày Tôm giống 31 ngày Tôm giống 31 ngày Tôm giống 31 ngày Tôm thương phẩm 62 ngày Tôm thương phẩm 98 ngày + + + + + + - Bến Tre Tôm thương phẩm 132 ngày - Bến Tre Tôm giống 33 ngày + Bạc Liêu Bạc Liêu Bạc Liêu Bạc Liêu Bạc Liêu Bạc Liêu Bạc Liêu Bạc Liêu Bạc Liêu Bạc Liêu Bạc Liêu Bạc Liêu Tôm giống 30 ngày Tôm giống 33 ngày Tôm giống 33 ... PTN(+) 10 PTN (-) 12 PTN (-) 13 PTN (-) 14 PTN (-) 15 PTN 16 TT 17 TT 18 TT 19 TT 20 TT 21 TT 22 TT 23 TT 24 TT 25 TT 26 TT 27 TT 28 TT 29 TT 30 TT 31 TT 32 TT 33 TT 34 TT 35 TT 36 TT 37 TT 38 TT 39 TT 40 TT 41 TT 42 TT 43 TT 44 TT 45 PTN (-) 46 PTN (-) 47 PTN (-) 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 13 14 15 0,082 0,0 73 0,102 0,049 0,057... 0,059.101 0,49.101 0,01 0,665.105 0, 73. 105 1,97.105 1,42.105 4 ,36 10 11 38 ,46 36 ,62 37 ,94 35 ,35 38 ,20 35 ,99 0 ,37 0,90 1,23E+00 5,69E+00 1,26E+00 4,43E+00 1,19E+00 6,94E+00 0,05 1,77 12 36 ,06 39 ,51 37 ,79 2,44 3, 45E+00 6,48E+00 4,12E-01 4,29 Độ lệch chuẩn của Ct SQ trung bình SQ lần 1 SQ lần 2 80 Bảng B.5 Kết quả thử nghiệm Real - time PCR trên 3 mẫu tôm sú Type A01 A 03 A05 A07 A09 B04 B06 B02 Standard . mẫu tôm sú thử nghiệm Real - time PCR lần 2 : 8 : 9 : 10 : 11 : 12 : đối chứng âm : các chuẩn : 1 : 2 : 3 : 4 : 5 : 6 : 7 Hình B .3 Đồ. sau: Kiểm tra đánh giá tỷ lệ nhiễm WSSV bằng phương pháp Real – time PCR ở các giai đoạn tôm nuôi. Phát triển kỹ thuật Real - time PCR để phát hiện và định lượng các loại virus khác gây bệnh. độ huỳnh quang và số chu kỳ của mẫu nhiễm WSSV pha loãng từ 10 -1 đến 10 -8 lặp lại lần 2 : 10 -1 : 10 -2 : 10 -3 : 10 -4 : 10 -5 : 10 -6 : 10 -7 : 10 -8 : đối chứng âm